人脂肪组织来源的干细胞在骨组织工程中的应用

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人脂肪干细胞在骨组织工程中应用的研究进展

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人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定

中国组织工程研究第19卷第32期 2015–08–06出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research August 6, 2015 Vol.19, No.32ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 5155www.CRTER .org肖建红，女，1980年生，四川省绵阳市人，羌族，2012年中山大学毕业，博士，主治医师，主要从事造血干细胞抑制、干细胞与组织工程，以及免疫性血小板减少性紫癜的临床研究和基础研究。

通讯作者：张阳春，硕士，主治医师，中山大学附属第一医院东院下肢骨科，广东省广州市 510700中图分类号:R394.2 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2015)32-05155-07 稿件接受：2015-07-01 Xiao Jian-hong, M.D., Attending physician, Department of Internal Medicine, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaCorresponding author: Zhang Yang-chun, Master, Attending physician, Department of Lower limbs Orthopedics, Eastern Branch of the First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University, Guangzhou 51000, Guangdong Province, ChinaAccepted: 2015-07-01人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定肖建红1，张阳春2，张常然1，杨兴2(中山大学附属第一医院东院，1普通内科，2下肢骨科，广东省广州市 510700)文章亮点：1 实验通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。

脂肪间充质干细胞的免疫学特性及其在组织工程中的应用

多向分化潜能，且来源广泛、取材方便、损伤小、增殖迅速、表型稳定，尤其是具有低免疫原性，其在
异源性组织工程中的研究已得到人们的广泛关注。
激分子为Ｔ细胞活化提供第二信号。
ＭＨＣ是编码主要组织相容性抗原的基因组，这些基因彼此连锁在一起，具有控制异体移植排斥反应、免疫应答和某些补体组分生成等功能，因而
分化的多能干细胞，它可以从多个部位获得，如：骨
及神经细胞等多种细胞分化。例如，在ＡＤＳＣｓ的基础培养基中加入胰岛素、转化生长因子一Ｂ（ｔｒａｎｓｆｏｒ．
ｕｒｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－Ｂ，ＴＧＦ — ｐ）、干扰素和抗坏血酸，可以诱导其向软骨细胞分化。
以大鼠ＡＤＳＣｓ为例介绍其分离培养和分化如
原性的重要因素。江丽等对大鼠ＡＤＳＣｓ进行表
２０１２—０９— ０６接收
面标志检测时发现ＭＨＣ — Ｉ类分子和ＭＨＣ． Ⅱ类分
作者单位：安徽医科大学口腔医学院，安徽医科大学附属１５腔医院牙周黏膜科，安徽省Ｅｌ腔疾病研究中心实验室，合肥
ＭＨＣ成为移植排斥反应的关键基因。与ＭＨＣ抗原递呈功能密切相关的主要是ＭＨＣ．Ｉ类分子和
目前，由于异体细胞移植可能产生移植物抗宿主病，使得干细胞移植、组织工程仅局限于个体化治

脂肪干细胞实验报告

一、实验背景随着生物科技的发展，干细胞研究已成为医学领域的前沿课题。

脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells，ASCs）作为一种易于获取、增殖能力强、多能性的干细胞，在组织工程、再生医学等领域具有广阔的应用前景。

本研究旨在探讨脂肪干细胞的分离、培养、鉴定及其在组织工程中的应用。

二、实验目的1. 探讨脂肪干细胞的分离、培养及鉴定方法。

2. 研究脂肪干细胞在组织工程中的应用。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：脂肪组织、DMEM/F12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、二甲基亚砜（DMSO）、青霉素、链霉素、抗生素、鼠抗人CD105抗体、鼠抗人CD34抗体、鼠抗人CD29抗体、鼠抗人CD44抗体、鼠抗人CD45抗体等。

2. 实验仪器：超净工作台、倒置显微镜、细胞培养箱、离心机、酶标仪、流式细胞仪等。

四、实验方法1. 脂肪干细胞的分离与培养（1）将脂肪组织剪成1mm×1mm×1mm的小块，用DMEM/F12培养基清洗3次，去除多余脂肪。

（2）加入0.25%胰蛋白酶消化脂肪组织，37℃水浴消化30分钟，1000r/min离心5分钟，弃上清。

（3）加入DMEM/F12培养基重悬细胞，吹打均匀，接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。

2. 脂肪干细胞的鉴定（1）采用免疫荧光染色法检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。

（2）采用流式细胞术检测脂肪干细胞表面标志物CD105、CD34、CD29、CD44、CD45的表达。

3. 脂肪干细胞在组织工程中的应用（1）将脂肪干细胞接种于生物降解支架材料上，构建组织工程化脂肪组织。

（2）将组织工程化脂肪组织植入小鼠皮下，观察其成活情况。

五、实验结果1. 脂肪干细胞的分离与培养成功分离出脂肪干细胞，细胞呈梭形，生长旺盛。

2. 脂肪干细胞的鉴定免疫荧光染色和流式细胞术结果显示，脂肪干细胞表达CD105、CD34、CD29、CD44，不表达CD45。

脂肪干细胞在组织工程中的研究进展

的热点。
１引言
组织工程的兴起和迅猛发展为组织或器官缺损的修复重建带来了新的治疗途径，并已逐渐成为目前最有前景的生理性修复技术。应用组织工程的方法再造组织与器宫所用的各类细胞统称为种子细胞。种子细胞研究的目的在于获取足够数量的接种细胞，防止细胞老化并同时保持细胞增殖、合成基质等生物功能。
裂相。５ｄ细胞呈团簇状生长，形成集落。约７ｄ后后细胞融合超过９％。经１次传代后，脂肪间充质干０～２
细胞形态均一、增殖迅速，能稳定传代１代以上，０这说明脂肪间充质干细胞生物学特征稳定，能在体外培养的环境下实现数目扩增，为组织修复提供了
胶原酶＋１％ＢＳＡ在３ｏ７Ｃ下消化皮下脂肪６ｎ，０ｍｉ后也可得到Ｓ细胞，这种ＳＶ￣胞具有于人骨肪基质ＶＦＦｍ细胞相似的表面标记。此外，Ｃｏｓｎ＿采用０２ｕｉ等７］＿％胶原酶ｇｏ２ｕ％ＢＳＡ在３ｏ７Ｃ下消化小鼠腹股沟皮下脂肪４ｎ，过２５ｍｉ后５ｕｍ滤筛，得到的细胞可重建小鼠的造血系统。Ｒａｇｐａ［采用胰酶、胶原酶和ＢＡｎａｐ等８］Ｓ在３ ℃ 联合消化新西兰大白兔腹股沟皮下脂肪２．７５ｈ后，得到的ＡＤＳＣｓ目前一般采用胶原酶消化，离。心，用培养基重悬细胞后，接种到培养瓶中，通过细胞贴壁从而得到ＡＤＳ［Ｃｓ。ＤＭＥＭ。ａ —ＭＥ，ＲＰ６０ＡＤＳ的常用ＭＭｌ１４是ＣＳ培养基。培养ＡＤＳ时一般只添加１Ｃｓ￣牛血清，ｏ％／ｉｆ并且血清无生产批号限制 …，体外易于培养，营养需求低，在培养基中生长旺盛。在３ ℃ 、５７％Ｃ０２、饱和湿度条件下，ＡＤＳＣｓ壁生长，并呈现成纤维细贴胞样形态。体外倍增时间约１６ｈ，快于同步培养的ＭＳ，并且保持稳定的倍增率。Ｃｓ

干细胞技术在组织工程中的应用

干细胞技术在组织工程中的应用近年来，干细胞技术在组织工程领域的应用越来越广泛，成为医学界的研究热点之一。

干细胞是一种具有自我更新和分化能力的特殊细胞，可以分化为多种类型的细胞，如神经细胞、心肌细胞等。

这使得干细胞成为组织工程的理想来源，以修复受损组织及治疗各种疾病。

一、干细胞的基本特性干细胞是一类具有自我更新和分化能力的细胞，它们可以在体内或外部环境中自行分化为多个细胞类型，如肌肉细胞、脂肪细胞和神经元等。

与其他成体细胞相比，干细胞有着明显的优势，因为它们有以下特点。

1. 自我更新能力干细胞具有自我更新能力，能一直分化生成相同的干细胞。

这种自我更新机制使得干细胞能长时间存活，并保持其细胞模式，具有长期分化能力。

2. 分化能力干细胞分化成为多种细胞类型的能力被称为分化能力。

通过改变其环境中的化学因子、生物因子或生理因素，干细胞可以分化为不同种类的细胞，如心肌细胞、神经元和骨细胞等。

这使得干细胞成为非常有用的资源。

3. 改性和操纵能力干细胞可以通过分离、分化和组装，改变其特定的分化模式和任意组织模式。

利用这种能力，可以让干细胞像基因工程实验中的工具一样，来调控组织工程中的成体细胞。

二、干细胞技术在组织工程中的应用由于干细胞具有多样性和自我更新能力，因此被广泛应用于组织工程。

组织工程通常包括三个步骤：细胞分离、细胞扩增和移植。

干细胞可被用来代替或促进这三个步骤。

1. 替代性注射替代性注射是一种将干细胞直接注入受损组织的方法，以促进其自我修复和再生。

该方法已经成功应用于体表和内部组织的再生，如骨骼、心肌和大脑等。

因此，干细胞注射被广泛应用于组织修复和再生的研究。

2. 组织工程的预制构件组织工程预制构件是一个特殊的组织工程领域，它利用干细胞来生产组织上的特定成分。

人工预制构件可以用于支持成体细胞在3D环境中的生存和分化。

3. 组织修复和再生干细胞可用于组织修复和再生。

组织修复和再生通过将干细胞定向分化成特定种类的细胞来实现，以生成受损组织所需的细胞类型和组织结构。

脂肪干细胞研究进展与应用前景

Ｋｕｒｉｔａｅｔａｌ研究不同的离心力对分离ＡＤＳＣｓ的影响，发现过度离心会破坏ＡＤＳＣｓ，１２００ｒ／ｍｉｎ为最
新、具有多向分化潜能的成体干细胞，在一定的条件下可以
分化成许多有特定功能的细胞系，具有一般干细胞的特点，
失，形成的脂肪组织与新鲜分离的ＡＤＳＣｓ形成的一样。这使得建立脂肪来源干细胞库成为可能，为
ＡＤＳＣｓ的应用提供了广阔的前景。
２ＡＤＳＣｓ的生物学特性
ｉｒｖｅｄｃｅｌｌｓ，ＡＤＳＣｓ）不仅在体内外具有多向分化潜能，在不同的诱导因子作用下可以像脂肪细胞、软骨
血干细胞的标记，包括普通白细胞的抗原ＣＤ４５、单核／巨噬细胞标记ＣＤ１１ａ和ＣＤ１４、ＭＨＣＩＩ类ＤＲ组
的差异，发现两类细胞的表面标记相似，都表达
ＣＤ１３、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ５８、ＣＤ９０、ＣＤ１０５和ＣＤ１６６，
均不表达ＣＤ１１Ｃ、ＣＤ１９、ＣＤ３１、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＤ４５
细胞、肌细胞、成骨细胞、神经细胞、神经胶质细胞及胰岛细胞分化，而且可以分泌多种促血管生成因子和抗凋亡因子。现就这一领域新的研究进展与应用作一综述。

脂肪间充质干细胞在组织工程中的应用

骨的能力。②脂肪来源干细胞与组织工程支架的联合应用效果。③脂肪来源的间充质干细胞与基因转染技术联
合治疗疾病的效果。
检索策略：以ａｉｏｅｔｓｅｄｒｅｔｍｅｌｄｐｓｉｕ — ｅｉｄｓｅｃｌｓｖ，
此外，国外有文献综述报道：脂肪来源的间充质干
（９９０／０８１）１９ — １２０ — 。２
生长动力学、细胞衰亡、表面标志等方面没有显著的差
异【９６】＿。
近年来，有关学者根据组织来源不同及基因表达倾
向问题，认为不同来源的间充质干细胞其分化能力是不同的，在基因方面脂肪来源的间充质干细胞更容易向成
细胞，引起了各国研究者的广泛关注。
１目的
脂肪组织来源的间充质干细胞具有以下优点：①
脂肪组织来源广泛、取材容易，只需要对患者进行局部
麻醉后吸脂术即可。②相比较骨髓来源的间充质干细胞，脂肪来源的间充质干细胞含量丰富。③与骨髓来源的间充质干细胞具有相似的生物特性及多系分化能力，且与骨髓间充质干细胞相比，脂肪干细胞不易受到肿瘤细胞的污染，更容易进行体外净化。④具有免疫抑制作
文献，中文４５篇，英文８４篇。阅读标题和摘要进行初
不同来源干细胞郝有多向分化的潜能，但由于组织起源不同，其基因、细胞因子和表面受体存在着细微的差别。
筛，排除因研究目的与此文无关的８０篇，内容重复性
的研究１９篇，共保留３０篇文献进行综述。

去分化脂肪细胞及其在口腔颌面部骨组织工程中应用的研究进展

去分化脂肪细胞及其在口腔颌面部骨组织工程中应用的研究进展沈荧怡;曹希萌;胥春【期刊名称】《口腔疾病防治》【年(卷),期】2024(32)3【摘要】寻找合适的种子细胞是口腔颌面部骨组织再生领域亟需解决的重要科学问题。

脂肪干细胞在组织与器官修复和再生中的应用已有较多研究,近年来,去分化脂肪细胞在骨组织工程领域也显露了广阔的应用前景。

去分化脂肪细胞表达干细胞相关标志,且具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、心肌细胞和内皮细胞等多向分化的潜能,此外,去分化脂肪细胞还具有获取方式微创、增殖能力强、同质性高等优势。

目前,去分化脂肪细胞在基于支架及无支架骨组织工程中应用的研究结果均能证实其促进骨再生的有效性,但其细胞学研究仍面临一些挑战,包括细胞培养纯度尚不够高、表型特性不完全明确和去分化机制不明晰等。

相信随着分离、培养、鉴定以及定向诱导其成骨分化的方法不断发展完善,去分化脂肪细胞有望在未来成为口腔颌面部骨组织工程领域中优异的种子细胞。

【总页数】6页(P223-228)【作者】沈荧怡;曹希萌;胥春【作者单位】上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔修复科【正文语种】中文【中图分类】R78【相关文献】1.牙髓干细胞在口腔颌面部骨组织工程中的应用进展2.骨组织工程应用于口腔颌面部骨组织缺损修复研究进展3.引导骨组织再生技术在口腔颌面部创伤后牙缺失伴骨缺损种植修复中的临床应用效果分析4.引导骨组织再生技术在口腔颌面部创伤后牙缺失伴骨缺损种植修复中的应用价值5.引导骨组织再生技术在口腔颌面部创伤后牙缺失伴骨缺损种植修复中的应用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

骨组织工程中脂肪间充质干细胞的作用

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・综　述・人脂肪组织来源的干细胞在骨组织工程中的应用冯　林综述　张锡庆审校中图分类号　R687 文献标识码　A 文章编号　1005-8478(2005)08-0620-02作者单位:苏州大学附属儿童医院骨科,　215003作者简介:冯林,女,河南郑州人,在读博士。

研究方向:小儿矫形。

1987年,美国国家科学基金会(NSF )在加利福尼亚举行的专家讨论会上,首次提出了“组织工程”的概念,其定义为[1]:组织工程就是运用工程学和生命科学的原则和方法,研究哺乳类动物正常和病理组织的结构与功能的相互关系,并发展可恢复、保留或改善组织功能的生物替代品。

骨组织工程是组织工程的一个重要分支,并且被认为是目前最具有前途和可行性的一个领域。

骨组织工程学的研究中种子细胞、支架材料和细胞与材料的相互作用是研究重点。

其中种子细胞是组织工程研究中最基本也是首要的环节。

脂肪干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一群多能干细胞,具有向多种组织分化的潜能。

2001年,Zuk 等[2]从人抽脂术中抽取的脂肪组织悬液中第一次分离取得了多向分化干细胞,命名为Pr ocessed L i poas p irate (P LA )。

研究发现这些P LA 细胞可以在体外稳定的增殖且衰亡率低。

免疫荧光和流式细胞仪检测表明P LA 细胞中的大部分来源于中胚层或间质。

因为脂肪组织取材容易,因此虽然发现较晚,但研究非常迅速深入,目前已证实脂肪组织来源的干细胞能向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、肌肉细胞及心肌细胞定向转化,可作为组织工程的种子细胞,有很重要的研究价值。

1　人脂肪组织来源干细胞的多向分化能力1.1　向成骨细胞的定向分化Zuk 等[2]通过实验发现:在向成骨方向诱导4d 后,P LA细胞的结构开始发生变化,由一个狭长的类成纤维细胞形态转变为一种圆形、立体的形状。

7d 后,这些细胞开始分泌出岛状的细胞外基质。

2周后内源性碱性磷酸酶染色阳性并形成矿化结节。

从第2～4周,培养孔中钙化的细胞外基质的量明显增加,具有统计学意义。

而且,P LA 细胞向成骨细胞分化的能力可以维持相当长的时间,其表达碱性磷酸酶活性最迟可达培养的175d 。

研究证明了P LA 细胞向成骨细胞分化的能力。

1.2　向软骨方向诱导Huang 、Zuk [3]等应用组织学和分子生物学的方法证实在高密度的培养条件下,培养基中加入TGF 2β、胰岛素、干扰素和抗坏血酸,48h 内可以诱导P LA 细胞形成明显的软骨结节并表达软骨特异性标记Ⅱ型胶原,硫酸软骨素-4和硫酸角质素。

逆转录多聚酶链反应分析也确认了Ⅱ型胶原和软骨特异性蛋白聚糖—聚集蛋白聚糖的表达。

因此认为这种多能干细胞确实具有向软骨方向转化的能力。

尽管P LA 细胞不是真正的软骨细胞,但是它们所显示出来的原始软骨组织的特征使得其有望成为软骨组织工程的种子细胞。

国内的余方圆等[4]从新西兰大白兔体内切取的脂肪组织进行一系列处理后,将获得的脂肪组织干细胞向软骨方向进行了诱导分化,结果发现细胞逐渐变圆,并聚集形成软骨样结节,Ⅱ型胶原呈强阳性、聚集蛋白聚糖表达阳性、番红0、阿利新蓝染色阳性,也说明了干细胞向软骨的定向分化。

1.3　向肌肉方向诱导M izuno 等[5]将P LA 细胞置于肌源性诱导条件下6周后通过结构学、组织学和逆转录多聚酶链反映观察到肌源性标记MyoD1和肌球蛋白重链的表达。

研究者发现,诱导3周后,P LA 细胞形成多核巨细胞并提示有肌管形成。

另外;MyoD1和肌球蛋白重链表达的时间不同,在P LA 细胞分化的过程中MyoD1的表达先于肌球蛋白重链。

研究结果揭示:大约有15%的P LA 细胞在诱导6周后向肌肉方向分化。

目前,骨骼肌组织工程主要用来治疗原发性的骨骼肌病变和因创伤和缺血继发的骨骼肌的丧失。

对于这些疾病现今尚无有效的治疗,尽管P LA 细胞向肌肉方向分化与其向脂肪组织和成骨方向分化的水平相比较低,但通过应用一些外源性的因素进行干扰以及改善培养条件有希望提高P LA 的分化水平,提高其临床应用价值。

1.4　向非中胚层组织的分化P LA 细胞为多能干细胞,它可以分化成为多种中胚层来源的组织,如骨、软骨、脂肪和肌肉。

A shjian 等[6]则通过研究发现P LA 细胞可以诱导分化为外胚层来源的早期神经祖细胞。

未分化的P LA 细胞本身就表达一些特征性的神经细胞标记,如神经原特异性烯醇化酶(NSE )、波形蛋白和神经原特异性核蛋白(Neu N )。

在用异丁基甲基黄嘌呤(I B MX )吲哚美辛和胰岛素诱导2周后,大约20%～25%的P LA 分化形成具有典型神经细胞形态特征的细胞;同时伴随着NSE 、波形蛋白和神经生长因子受体tr12A 表达增加。

但是,诱导后的P LA 细胞并没有表达成熟神经原标记MAP 或成熟星型细胞标记GF AP 。

而且向神经原方向诱导的P LA 细胞出现了一个延迟的整流器即K +电流(一种早期发育的离子通道),同时伴有形态学的改变和神经原特异性标记表达的增加。

研究结果揭示,尽管向神经原方向诱导的P LA 细胞并未表现出成熟神经原细胞和神经胶质的特异性标记,但其表现出的早期神经原细胞的特征不容忽视。

因此需要进一步研究体外的培养条件以及活体模型(如中枢神经系统损伤模型)中P LA细胞最终是否能形成成熟的神经原或神经胶质细胞,并且参与中枢神经系统的整合和修复。

这些发现表明,P LA细胞可能具有治疗神经系统疾病的潜能。

2　人骨髓间充质干细胞(MSCs)与P LA的比较De Ugarte等[7]将从人类同一个样本获得的M SCs和P LA 进行了以下几个方面的比较:2.1　细胞的采集和分离平均采集的标本量骨髓为7g,脂肪组织17g。

每克骨髓分离出的有核细胞的平均数量远高于脂肪组织。

分离培养后,骨髓和脂肪都在2周内达到了亚融合状态。

并且,对于同一个样本,骨髓和脂肪组织在采集的标本量、有核细胞的个数、贴壁的细胞数和平均每克组织的贴壁细胞数均无差异。

2.2　生长动力学和衰亡在细胞密度为1.85～103/c m2时,P LA细胞和MSCs都在第13d融合传代。

平均倍增时间在对数生长间期内从3～9d 不等,无统计学意义。

细胞的衰亡亦无差别。

2.3　在体外的分化P LA细胞和MSCs在向脂肪组织和成骨细胞分化上未观察到明显差异。

P LA细胞能够成功的形成阿利新蓝染色阳性的微量结节,但是MSCs在同样的培养条件下则不能形成。

2.4　基因转染P LA细胞和MSCs都能够成功的转染腺病毒、慢病毒和逆转录病毒。

M SCs腺病毒转染的效率高于P LA细胞且具有统计学差异;而对于慢病毒和逆转录病毒二者的效率相似。

3　展　望脂肪组织来源丰富,容易获取,痛苦小,对培养基的要求低,体外扩增能力强且具有多向分化潜能。

因此,脂肪组织来源的干细胞有望成为新的组织工程的种子细胞。

参考文献:[1]　Heineken FG,Skalak R.Tissue Engineering.A B rief Overview[J].Journal of B i omechanical Engineering,1991,113:111.[2]　Zuk P A,M.Zhu,H.M izuno,et al.Multilineage cells fr om humanadi pose tissue:I m p licati ons f or cell2based therap ies[J].TissueEng,2001,7:211～226.[3]　Huang J I,Zuk P A,Jones NF,et al.Chondr ogenic potential of mul2ti potential cells fr om human adi pose tissue[J].Plast Reconstr Surg,2004,113:585～594.[4]　余方圆,卢世璧,袁玫,等.脂肪干细胞向软骨方向诱导的初步研究[J].中国矫形外科杂志,2004,12(10):762～764.[5]　M izuno H,Zuk P A,M.Zhu,et al.Myogenic differentiati on by hu2man p r ocessed li poas p irate cells[J].Plast Reconstr Surg,2002,109:199～211.[6]　A shjian PH,Elbarbary AS,et al.I n vitr o differentiati on of humanp r ocessed li poas p irate cells int o early neural p r ogenit ors[J].Plast Reconstr Surg,2003,111:1922～1931.[7]　De Ugarte DA,Moriz ono K,et paris on of multi2lineage cellsfr om human adi pose tissue and bone marr ow[J].Cells Tissue O r2 gans,2003,174:101～109.(收稿:2004212220)・读者、作者、编者・标注参考文献要规范准确标注参数文献是科技论文重要组成部分。

科技论文参考文献著录格式要求十分严谨。

结合本刊近年来审读来稿情况,在标注参考文献方面主要存在以下问题:(1)无引文题目、题目错误或刊名错误;(2)引文的杂志无卷次/页码或书写错误;(3)正文中无标注符号和标注错误;(4)引用文献在检索系统查不到;(5)缺少引用文献类别标识码;(6)引用文献书写格式不规范,排列次序不对或标点符号不对。

为避免以上问题,希望作者在投稿前务必对已完成的论文参考文献进行认真仔细的检查、再检查,确实做到准确无误。

否则将失去参考文献的功能和使用价值。

《中国矫形外科杂志》编辑部。