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肝脏组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识背景干细胞研究在医学领域中具有重要的意义，尤其是肝脏组织来源的干细胞。
这些干细胞具有巨大的研究和临床应用潜力，但目前在干细胞提取、制备和储存过程中存在质量管理的挑战。
目标本文档旨在与肝脏组织来源的干细胞研究领域的专家共识，制定干细胞提取、制备和储存的质量管理标准，以确保研究和临床应用的可靠性和一致性。
方法通过专家讨论和文献综述的方式，我们总结出以下肝脏组织来源的干细胞提取、制备和储存的质量管理专家共识。
结论1. 提取过程：提取过程：- 使用符合法律法规和伦理要求的方法进行损伤最小化的肝脏组织提取。
- 在提取过程中确保对肝脏组织样本的现场处理，以保证活细胞的数量和质量。
2. 制备过程：制备过程：- 根据提取的肝脏组织样本，选择适当的培养基和培养条件进行干细胞的培养和扩增。
- 采用合适的细胞鉴定技术，确保培养的细胞符合干细胞的特征。
3. 储存过程：储存过程：- 选择合适的冷冻保护剂和冷冻条件进行干细胞的冷冻保存。
- 建立完善的储存数据库，并对储存的干细胞样本进行定期监测和管理。
4. 质量管理：质量管理：- 制定干细胞提取、制备和储存的操作规程和标准操作程序，确保操作的一致性和可重复性。
- 进行内部质量管理和外部质量评估，以确保质量标准的达到和维持。
下一步根据本专家共识，相关研究机构和临床实验室应当参照这些质量管理标准，优化干细胞的提取、制备和储存过程，并加强质量管理体系的建设。
这将有助于肝脏组织来源的干细胞研究的可信度和可靠性，推动其在医学领域的进一步应用和发展。
参考文献1. 例示文档标题的限定2. 例示文档标题的限定3. 例示文档标题的限定。
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。
ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。
大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。
同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。
目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。
为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。
1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。
采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。
采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。
人脂肪来源间充质干细胞的制备及其质量检验方法陈冲;闫俊灵;李梁;徐潇;丁红;汤苏阳【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2015(0)2【摘要】目的：研究人脂肪来源间充质干细胞（human adipose-derived stem cells，hADSCs）的制备及其质量检验方法，为临床研究提供安全合格的干细胞。
方法取50例人吸脂术抽取的脂肪，剪碎，用胰酶和胶原酶消化、分离、培养，并按照《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则》对其进行细胞形态、数量、活率、无菌、支原体、人源特定病毒及猪源病毒、内毒素、免疫抑制活性、分化能力、免疫表型等检测及染色体核型。
结果50例hADSCs；细菌、内毒素检测阴性，无内外源致病菌；干细胞免疫表型检测CD90、CD105表达阳性，阳性率＞95％，CD34、CD45和HLA-DR表达阴性，阳性率＜2％；具有成骨、成脂分化潜能；能抑制异体淋巴细胞的增殖。
间充质干细胞活性冻存前≥92％，冻存复苏后≥82％。
结论按照本工艺及标准制备的hADSCs符合质量控制标准，为同类干细胞制备及其检定过程标准化提供了试验依据。
%Objective To study the human adipose derived mesenchymal stem cells in vitro amplification and quality inspec-tion methods and provide safe and qualified stem cells for clinical research .Methods Fifty human source liposuctioned fat , sheared, underwent trypsin and collagenase digestion , separation, culture, and according to the “stem cell-based medicinal product quality con-trol of pre clinical research guidi ng principle” to detect the cell morphology , quantity, live rate, sterilization, mycoplasma, human source specific virusand swine virus , endotoxin , immunosuppressive activity , differentiation ability , immunophenotype detection and chromosome karyotype .Results Human adipose derived mesenchymal stem cell activity before cryopreservation is ≥92%, after re-vival≥82%;bacteria and endotoxin test negative , no internal and external source pathogenic bacteria;stem cell immunophenotype de-tection of CD90, CD105 positive, the positiverate >95%, CD34, CD45 and HLA-DR negative expression , the positive rate <2%;with osteogenic and adipogenic differentiation proficiency ,it can inhibit the proliferation of allogeneic lymphocytes .Conclusions The preparation process and the standard of human adipose derived mesenchymal stem cell line according to the quality control standardof“stem cell-based medicinal product quality control of pre clinical research guiding principle ”, it provides the experimental basis for the similar stem cell preparation and standardizing verification process .【总页数】5页(P170-174)【作者】陈冲;闫俊灵;李梁;徐潇;丁红;汤苏阳【作者单位】100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科;100039 北京，武警总医院皮肤再生医学科【正文语种】中文【中图分类】R329.2【相关文献】1.人脂肪来源间充质干细胞诱导人乳腺癌MCF-7细胞上皮间质转化 [J], 徐琦璘;王椋;赵春华2.脐带来源间充质干细胞的制备及其质量检定 [J], 孙瑞婷;陈瑶瑶;王华;靳继德;汪劲松;刘冬梅;王立生;吴祖泽3.人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 刘玉平;刘涛;王明明;李明;俞光荣4.人髌下脂肪垫来源脂肪间充质干细胞的分离、培养及鉴定 [J], 刘玉平;刘涛;王明明;李明;俞光荣;5.茶多酚对人脂肪来源间充质干细胞成骨分化的影响 [J], 王华;齐玉成;杨云芳;赵艺洋;王慧;陈培;杨旭芳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
脂肪来源干细胞相关研宄及临床应用进展摘要：肪干细胞是源于脂肪组织，可在体外诱导分化成典型的中胚层组织，如骨，脂肪和软骨等组织，以及神经、心肌细胞、干细胞和胰腺细胞等。
ADSCs与骨髓来源地间充质干细胞有一样类似的表面标志物。
可以自我更新、具有多向分化潜能的成体干细胞。
从它的获取、分离，多向分化潜能等特性以及应用前景对现在研究现状进行综述。
关键词：脂肪；脂肪来源干细胞；创面愈合；应用前景；研究进展脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）可在体外诱导分化成典型的中胚层组织，如骨，脂肪和软骨等组织，以及神经、心肌细胞、干细胞和胰腺细胞等。
ADSCs与骨髓来源地间充质干细胞有一样类似的表面标志物。
这些细胞在体内的分化潜能还不完全清楚，但已发现这些干细胞具有修复神经元以及促成骨和成血管的作用。
一、脂肪干细胞及其上清液对创面修复的作用目前人干细胞治疗的1期和2期临床试验[22]结果表明干细胞对受损组织的修复是安全有效的，脂肪干细胞处理的创面，不仅使损伤面积减少，而且还能减少创面愈合的时间。
但干细胞促进创面愈合的机制还是不清楚。
有假设认为其可能机制为未成熟的干细胞迀移到受伤的部位，分化成受伤细胞的表型，用健康的细胞代替损伤的细胞促进组织的修复和再生。
研宄表明运用ADSCs-CM处理创面也能达到同样的效果，这表明ADSCs通过复杂的旁分泌作用来促进创面的愈合。
二、脂肪干细胞及其上清液抗衰老作用脂肪干细胞能促进光老化的ADSCs的增殖及I型胶原产生，并减少MMP-1的产量和p16的表达。
在一个凋亡实验中脂肪干细胞可将坏死的或处于早期凋亡状态的细胞延迟凋亡。
实验结果表明脂肪干细胞旁分泌作用和脂肪干细胞与成纤维细胞之间的细胞接触作用是一样重要的，。
在应用脂肪干细胞在微小猪皮肤中的抗皱效果的研宄中，将脂肪干细胞和脂肪干细胞上清液分别注射于微小猪背部的真皮中，虽然组织学评估表明在脂肪干细胞和脂肪干细胞上清液注射区真皮的厚度增加不明显，然而，运用Western-blot分析表明注射脂肪干细胞和脂肪干细胞上清液的皮肤胶原的表达明显增加。
中国组织工程研究 第20卷 第10期 2016–03–04出版Chinese Journal of Tissue Engineering Research March 4, 2016 Vol.20, No.10P .O. Box 10002, Shenyang 110180 1508・综述・www.CRTER .org陈犹白，男，1986年生，黑龙江省齐齐哈尔市人，汉族，解放军医学院在读博士，美国德克萨斯大学MD 安德森肿瘤中心联合培养博士，医师，主要从事脂肪干细胞和组织工程的研究。
通讯作者：韩岩，主任医师，教授，博士生导师，解放军总医院整形修复科，北京市 100853并列通讯作者：Qixu Zhang ，助理教授，美国德克萨斯大学MD 安德森肿瘤中心整形外科，休斯敦 77030中图分类号:R318 文献标识码:A 文章编号:2095-4344 (2016)10-01508-13 稿件接受：2016-01-16 脂肪干细胞分离、纯化和保存：研究进展与未来方向陈犹白1，2，陈聪慧3，Qixu Zhang 2，韩 岩1(1解放军总医院整形修复科，北京市 100853；2美国德克萨斯大学MD 安德森肿瘤中心整形外科，美国休斯敦 77030；3美莱医疗美容医院口腔美容中心，北京市 100020)引用本文：陈犹白，陈聪慧，Qixu Zhang ，韩岩. 脂肪干细胞分离、纯化和保存：研究进展与未来方向[J].中国组织工程研究，2016，20(10):1508-1520.DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2016.10.020 ORCID: 0000-0002-6810-2957 (韩岩)文章快速阅读：文题释义：基质血管成分：即脂肪组织经过消化离心后获得的细胞沉淀，其中脂肪干细胞约占10%，此外还包括脂肪前体细胞、内皮祖细胞、内皮细胞、周细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞、造血干细胞、白细胞、红细胞、T 淋巴细胞、B 淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞等。
![一种脂肪干细胞的提取方法以及制剂和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/97d25a24050876323012124a.png)
专利名称：一种脂肪干细胞的提取方法以及制剂和应用专利类型：发明专利
发明人：王一飞,陈海佳,葛啸虎,卢瑞珊,马岩岩,王小燕申请号：CN201410715134.1
申请日：20141128
公开号：CN104498433A
公开日：
20150408
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种脂肪干细胞的提取方法以及制剂和应用。
本发明所述提取方法先采集人脂肪组织，用生理盐水清洗；然后机械破碎清洗后的脂肪组织，加入质量终浓度为0.25％的Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶混合酶液混匀，恒温下摇床培养，培养后离心弃上清液，获得沉淀；最后向沉淀中加入生理盐水清洗、过滤、离心去上清，获得所述脂肪干细胞。
本发明调整了复合胶原酶的组合形式及其配比和用量，同时以生理盐水作为整个提取方案中的辅助试剂，从脂肪组织的清洗到最终的脂肪干细胞的获得整体进行了工艺优化，使得最终提取的脂肪干细胞数量高、存活率高、活性高，成本较低，能够广泛用于脂肪干细胞制剂的制备中以及整形美容中。
申请人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司
地址：510000 广东省广州市国际生物岛螺旋四路一号生产区第五层502单元
国籍：CN
代理机构：北京集佳知识产权代理有限公司
代理人：赵青朵
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专利名称：从脂肪来源间充质干细胞制备诱导多能干细胞的方法及利用该方法制备的诱导多能干细胞
专利类型：发明专利
发明人：李尚燃,郑元珠,金浩彬,吴珉善,李桂浩
申请号：CN201480079846.7
申请日：20140625
公开号：CN106661545A
公开日：
20170510
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及包含腔昆布(Ecklonia cava)提取物的诱导多能干细胞(induced pluripotency stem cell)重编程用培养基组合物。
并且，本发明涉及利用上述培养基组合物的诱导多能干细胞的制备方法。
若利用本发明的培养基组合物，则可通过利用脂肪来源间充质干细胞来安全并简单地有效制备诱导多能干细胞，所制备的多能干细胞可分化成多种细胞，因此，可用作细胞治疗剂。
申请人：BBHC株式会社
地址：韩国首尔
国籍：KR
代理机构：广州华进联合专利商标代理有限公司
代理人：王雯雯
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![一种分离、纯化及提取脂肪间充质干细胞的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s1/m/4fc68b1cb5daa58da0116c175f0e7cd185251848.png)
[19]中华人民共和国国家知识产权局[12]发明专利申请公布说明书[11]公开号CN 101215547A [43]公开日2008年7月9日[21]申请号200810001107.2[22]申请日2008.01.15[21]申请号200810001107.2[71]申请人刘岱良地址200050上海市长宁区镇宁路11号4楼[72]发明人刘岱良 [74]专利代理机构北京中海智圣知识产权代理有限公司代理人曾永珠 吴红飞[51]Int.CI.C12N 5/08 (2006.01)C12N 5/06 (2006.01)权利要求书 2 页 说明书 4 页[54]发明名称一种分离、纯化及提取脂肪间充质干细胞的方法[57]摘要本发明涉及生物细胞提取及应用领域，提供一种分离、纯化及提取脂肪间充质干细胞的方法，包括以下步骤：首先无菌条件下脂肪源抽取，然后通过缓冲液浸泡、冲洗，再采用营养液水浴振荡消化，所得消化物过筛后取过滤液进行离心处理，获其基质微管层，沉淀部分除去红细胞，然后再离心处理后用营养液离心洗涤，将消化分离出的细胞用生理盐水稀释；接着将电泳槽用尼龙筛布均匀横向分为三格，按一定体积比置入氯化钾及葡萄糖酸钙溶液，交流电持续输入2～5分钟，然后将上述所得细胞溶液置入中间格电泳槽搅匀，直流电电泳15～30分钟，抽取正电极侧电泳槽内细胞液，即得脂肪间充质干细胞。
该方法周期短，不会造成DNA双旋链上的基因排序紊乱或突变。
200810001107.2权 利 要 求 书第1/2页 1.一种分离、纯化及提取脂肪间充质干细胞的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：a、脂肪源抽取、分离、纯化无菌条件下脂肪源抽取，然后通过缓冲液浸泡、冲洗，再采用营养液水浴振荡消化，所得消化物过筛后取过滤液进行离心处理，获其基质微管层，沉淀部分除去红细胞，然后再离心处理后用营养液离心洗涤，将消化分离出的细胞用生理盐水稀释；b、间充质干细胞电泳、提取将电泳槽用尼龙筛布均匀横向分为三格，按一定体积比置入氯化钾及葡萄糖酸钙溶液，交流电持续输入2～5分钟，然后将上述所得细胞溶液置入中间格电泳槽搅匀，直流电电泳15～30分钟，抽取正电极侧电泳槽内细胞液，即得脂肪间充质干细胞。
脂肪干细胞的提取及鉴定一、脂肪干细胞(ASCs)的提取及鉴定1、实验技术及原理:运用细胞培养技术、流式细胞术(体外扩增后ACSs的表型会发生改变，主要体现在细胞表面蛋白和细胞因子表达的变化)，差异离心术(可将基质血管细胞沉淀与悬浮的成熟脂肪细胞分离，沉淀中除ASCs，还包括血细胞、成纤维细胞和内皮细胞，基质血管细胞沉淀可以接种到孰料培养瓶中，基质细胞可贴壁，造血和其他杂质细胞不贴壁，在随后的传代过程中被出去，最终得到的ASCs可再很长时间内保持摸分化状态)。
取C57BL,6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液，0.075%II型胶原酶消化(37?，30分钟)以去除外基质，生理盐水终止胶原酶的消化，离心(1200g,10分钟)，去上清液及未消化的脂肪，10%FBS的DMEM重悬细胞沉淀，0.16mol/L氯化氨溶解剩余红细胞，离心洗涤，过200目铜网，得到单个核细胞。
?镜下计数，按10个细胞/ml种植在培养瓶中，37?5%CO2孵箱培养，24小时后第一次换液，以后3天换液一次，80%融合后0.25% Trypsin,0.02%EDTA消化传代。
细胞镜下作形态学观察及取第三代细胞用流式细胞仪作细胞周期及细胞免疫表型(CD29/CD44)的鉴定。
2、实验用品:2.1 材料:C57BL,6 WT小鼠2.2 试剂:PBS液，0.075%II型胶原酶消化，10%FBS，低糖DME M2.3 仪器设备:超净工作台、恒温培养箱、普通显微镜、倒置显微镜、离心机、离心管、解剖剪、眼科剪、镊子(尖头、平头和有沟镊)、小烧杯，200目铜网过滤器，低糖DMEM、血球计数板、橡皮瓶塞、酒精灯、换药碗3、细胞培养的方法与步骤:3.1无菌操作的要领和要求。
3.2细胞原代培养:3.2.1操作步骤a(培养用品消毒后，安放在超净工作台内，紫外线消毒，做好洗手等准备工作。
b. 取材:取C57BL,6 WT小鼠2只，常规麻醉消毒，取腹股沟脂肪组织剪碎至糊状，PBS液冲洗去麻药及血液。
脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会
【期刊名称】《解放军医学杂志》
【年(卷),期】2018(43)10
【摘要】脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue,derived stromal/stem cells,Ascs)是从脂肪组织中分离提取得到的,具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。
ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容,也是组织工程及再生医学的研究热点[1-2].
【总页数】5页(P811-815)
【作者】中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】R622
【相关文献】
1.同种异体脂肪组织来源干细胞联合地黄低聚糖对心肌梗死小型猪心肌凋亡的影响[J], 裴志勇;曹丹阳;尹巧香;高伟;赵玉生
2.地黄低聚糖对过氧化氢－血清饥饿诱导的脂肪组织来源干细胞 Bax／Bcl-2表达的影响 [J], 裴志勇;张健;尹巧香;杨桂利;赵玉生
3.人眼袋脂肪组织来源间充质干细胞的分离及生物学特性观察 [J], 陈霞;胡文君;王英杰
4.脂肪组织来源干细胞调控血管生成的研究进展 [J], 李凯; 樊欣
5.脂肪组织来源干细胞调控血管生成的研究进展 [J], 李凯(综述); 樊欣(综述); 吴剑波(审校)
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脂肪组织来源的干细胞提取、制备及储存质量管理专家共识脂肪组织来源的干细胞(adipose tissue-derived stromal/stem cells，ASCs)是从脂肪组织中分离提取得到的，具有取材容易、对机体损伤小、体内储备量大、体外可大规模培养、可多向分化等优点。
ASCs在人体修复重建、免疫调节及组织再生等方面的应用成为近年来干细胞研究的重要内容，也是组织工程及再生医学的研究热点。
大量研究表明，自体脂肪组织移植到软组织缺损部位后，其中40%~60%会被吸收，自体脂肪组织结合ASCs移植，能明显减少自体脂肪组织移植的吸收、液化、坏死及纤维化等情况发生，有利于构建具有生物学结构和功能的脂肪组织。
同时，利用脂肪组织可以进行大规模的ASCs提取、制备、储存，为再生医学提供种子细胞。
目前，国内外尚缺乏ASCs提取、分离、制备及储存的标准和质量管理规范，导致各制备机构或研究应用机构之间无法进行统一评估和交流，严重制约了ASCs在皮肤软组织修复重建等相关领域的发展。
为了建立安全、规范、稳定、可追溯的行业共识、指南及标准，从源头保证ASCs的提取、制备、储存的高质性和安全性，中国医药生物技术协会皮肤软组织修复与重建技术分会联合从事细胞制备和存储、皮肤软组织修复重建、分子生物学及整形和美容外科等多学科的专家，参照中国医药生物技术协会《细胞库质量管理规范》及《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，组织起草脂肪组织采集及ASCs制备、检测、储存的标准和质量管理专家共识，旨在促进ASCs在皮肤软组织修复重建技术等领域研究成果的转化，进一步促进多学科的交流和发展。
1 脂肪组织采集1.1 脂肪组织采集机构要求脂肪组织的采集工作应在取得《医疗机构执业许可证》的医疗机构中实施。
采集人员应持医师或者护士执业证书，经过相应的专业技术培训。
采集机构应具有完整的标准化操作规程(standard operation procedure，SOP)，并备有采集过程中的应急预案。
采集过程应在层流手术室内进行无菌操作，最大限度地减少污染和交叉感染的发生。
1.2 脂肪组织供者要求对供者健康状况进行全面检查(如一般信息、既往病史和家族性遗传病等)及病原微生物的感染筛查和在危险疫区停留情况的调查。
身体状态良好、有完整体检报告、无遗传性家族病史、无恶性肿瘤、无急慢性传染病及血液系统疾病；血常规及分类、肝肾功能正常；人源性特定病毒(包括但不仅限于HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV等)阴性、梅毒螺旋体阴性(提供脂肪组织的同时，另需提供不少于8ml外周血用于复检，ABO血型、HLA-Ⅰ类和Ⅱ类分型检查，以备追溯性查询)。
若供者HBV、HCV、HTLV、EBV、CMV检查结果为阳性，实验室应具有处理感染性样本的独立物理空间、独立的空调系统，能做到使用后的器具和相关物品可经过灭活处理后再移出该区域。
感染性样本与非感染性样本的处理及制备不使用同一设备，方可进行脂肪组织的采集，但必须使供者知情，同时通知接收、制备、质控及医护人员等做好防护措施。
当实验室不具备上述相对应病原体阳性制备/培养区时，不得采集上述阳性供者的脂肪组织。
若供者HIV、梅毒螺旋体检查结果为阳性时，不得采集供者的脂肪组织。
高度怀疑HIV感染或者考虑HIV感染窗口期的供者不予采集。
1.3 采集方式、采集部位和采集量1.3.1 采集方式用肿胀液(生理盐水250ml＋2%利多卡因10~15ml＋肾上腺素0.25mg)局部浸润麻醉供脂肪组织区域，以20ml注射器配备口径1.5~3.5mm、侧孔3.0~5.0mm的吸脂针，进入供区，形成负压，呈扇形手动均匀吸取脂肪组织，吸出3~5mm3脂肪组织颗粒，若脂肪组织颗粒较大，则需要进行手工剪制。
1.3.2 采集部位选择下腹部或者大腿内、外侧或者身体其他部位(供者要求的吸脂部位)。
接受注射溶脂、冷冻溶脂、热立塑及超声溶脂的部位不建议作为脂肪组织采集部位。
供区针眼或切口处按压排除肿胀液，进行适当的加压包扎，24~48h后更换包扎敷料，预防感染，7d针眼或切口愈合。
1.3.3 采集量(脂肪组织，肿胀液除外)女性≤45岁，男性≤50岁，脂肪组织采集量不少于50ml。
女性45~55岁、男性50~60岁者不少于80ml。
男性体脂＞25%、腰围＞100cm，女性体脂＞33%、腰围＞88cm，不少于100ml。
体脂率=[1.2×BMI+0.23×年龄－5.4－10.8×性别系数(男=1，女=0)]。
女性＞55岁，男性＞60岁，或者近期服用减肥药者不建议采集脂肪组织提取ASCs。
1.4 脂肪组织运输和接收吸取的脂肪组织应保存于标准配置的无菌容器内，贴条码标签，应遵从安全与准确的原则，做到样本与供者一一对应，记录启运时间和到达时间，低温冷链运输，建议时间控制在48h内，送达制备机构。
制备机构应设置脂肪组织的接收取样工作区，执行登记、初检、核对、暂存、交接等；目检脂肪组织有无污染或变质，应建立脂肪组织异常情况处置标准操作规程。
2 ASCs的制备与储存制备机构或研究应用机构应建立相应完善的SOP，所有试剂和原材料应明确其来源、批号、质量检定合格报告，应尽可能采用GMP临床应用级别的原料或国家已批准的可临床应用的产品，相关制备、生产记录及留样应至少保存至使用结束后3个月。
制备人员应该经过专门的技术培训，ASCs的制备建议在B级背景下A级洁净度级别的环境中进行。
2.1 脂肪干细胞的分离采集的脂肪组织用无菌生理盐水冲洗，按照脂肪组织体积加入相应浓度Ⅰ型胶原酶(建议GMP级)或胰蛋白酶混合液，37℃水浴或气浴振荡，离心，吸弃上层脂肪和液体层，加入生理盐水重悬细胞沉淀，用细胞滤器过滤，去除未消化完全的组织团块，滤液离心，弃上清，获得基质血管成分(stromal vascular fraction，SVF)。
SVF是围绕在脂肪细胞周围，含有内皮细胞、非特征性基质细胞、血液细胞、巨噬细胞、造血祖细胞、脂肪来源的基质/干细胞等细胞的异质性细胞群，台盼蓝染色进行细胞计数。
填写细胞操作记录，包括组织酶解分离时间、细胞数量和活性等。
2.2 脂肪干细胞的培养与传代接种SVF至培养瓶中，培养条件为5% CO2、37℃常规培养，保持湿度。
细胞融合度达到70%~80%时可以传代，收集消化的细胞悬液，接种至培养瓶中，传代培养，培养基应使用无血清培养基或不含血清添加物的细胞培养基。
填写细胞操作记录，包括时间、批次、细胞数量等。
2.3 建立脂肪干细胞种子细胞库收集P2或P3代细胞，做质量检测和性能指标检测(包括细菌、支原体、内外源病毒、细胞活力、细胞鉴别、生长特性、细胞纯度、均一性及内毒素等)，调整细胞浓度至(2~3)×106个/ml，分装至细胞冻存管中，贴标签，标注细胞数量、冻存日期及代次等。
将冻存管程序降温后，转入–196℃液氮保存，即为种子细胞库，供建立工作细胞库用。
填写细胞操作记录，包括时间、批次、细胞数量、冻存数量等。
2.4 建立脂肪干细胞工作细胞库经脂肪干细胞种子细胞库传代增殖，将传至P5代的细胞制成均质细胞悬液，取样进行临床使用前的质量控制和安全鉴定。
分装于一定数量的冻存管，贴好对应批次细胞标签，保存于–196℃液氮中，即为工作细胞库。
填写细胞操作记录，包括时间、批次、细胞数量、冻存数量等。
工作细胞库的质量控制和安全鉴定＞种子细胞库质量控制和安全鉴定。
2.5 脂肪干细胞冻存数量脂肪干细胞冻存的数量是根据实际需求来计算的，应考虑后续检定需要、保藏年限、检测用数量及复检频率等，根据个体的需要确定，遵循“够用原则”。
ASCs细胞制剂建议设1×107个ASCs为1个单位。
填写细胞操作记录，包括时间、批次、细胞数量、冻存数量等。
3 ASCs的运输3.1 参照中国医药生物技术协会《干细胞制剂制备质量管理自律规范》，ASCs制剂采取冷链运输，建议运输时间控制在48h内。
3.2 应建立ASCs制剂运输的标准操作规程，运输方式等应经过验证。
防止发生损害、变质、污染或其他不良影响。
每批次ASCs制剂的整个运输过程应有发运记录，并能够追踪。
3.3 若存在安全隐患，应立即召回ASCs制剂，由制备机构进行合法和符合伦理要求的处置并记录存档。
3.4 制备机构如委托第三方机构运输ASCs制剂，应评估其承运机构的资质。
承运人应接受制备机构相应的培训，确保其可按照脂肪干细胞制剂运输要求完成运输过程。
应由设有资质的第三方机构复核ASCs制剂运输。
4 ASCs的质量安全性制备机构根据ASCs自身特性、临床研究情况，配备相关专业技术人员和设备，确立制剂质量检验操作规程，所有检测方法应经过验证，可以委托有资质的第三方开展相关质量检测。
检验应满足安全性、质量可控性和(或)有效性的基本要求，检测结果应有质量负责人或质量受权人签字审核。
4.1 基本性能ASCs的基本性能指标包括细胞形态、周期倍增时间、细胞活性、增殖、细胞表型、集落形成、端粒酶活性等。
4.2 安全性能ASCs的安全性能指标包括微生物、内毒素、核型、致瘤性、毒性、残留物及人畜共患猪细小病毒检测，必要时包括病毒核酸检测，确保ASCs制剂临床应用的安全性。
如果Asc采用胰蛋白酶消化,建议检测猪细小病毒。
5 ASCs的分化功能测定5.1 向成骨细胞分化能力取对数生长的ASCs，加入成骨诱导液进行培养，第19天行茜素红染色，镜下观察。
脂肪干细胞被茜素红染成红色，染色面积占总面积的比例≥50%。
5.2 向成软骨细胞分化能力取对数生长的ASCs，加入成软骨诱导液进行培养，第14天行甲苯胺蓝或Ⅱ型胶原蛋白抗体进行染色分析，染色面积占总面积比例≥80%。
5.3 向成脂肪细胞分化能力取对数生长的ASCs，加入成脂肪分化条件培养基，第12天行油红O染色，脂肪干细胞被油红O染成红色，染色面积占总面积的比例≥50%。
6 ASCs的组织再生功能检测6.1 促血管形成功能用含100ml/L FBS的DMEM/F12培养体系将ASCs以1×105个/ml密度与脐静脉内皮细_胞共培养，4h后，镜下统计形成的血管环数≥37/10 000个细胞。
6.2 巨噬细胞极化用含100ml/L FBS的DMEM/F12培养体系将ASCs以1×105个/ml密度与巨噬细胞共培养，24h后，与巨噬细胞对照组相比，用ELISA试剂盒检测上清中TNF-α、IL-1β、TGF-β及IL-10的表达水平，其中TNF-α、IL-1β水平应下降，TGF-β、IL-10水平应上升，差异有统计学意义(P＜0.05)。
6.3 抗凋亡功能ASCs培养24h后，取上清液，培养成纤维细胞，与普通培养基成纤维细胞对照组相比，ASCs上清液培养的成纤维细胞组，成纤维细胞凋亡比例下降，差异有统计学意义(P＜0.05)。
