醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白原理和实验方法

生物化学实验醋酸纤维素薄膜电泳法分离血清蛋白质一、实验目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法二、实验原理蛋白质是两性电解质。

在pH值小于其等电点的溶液中，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动；在pH值大于其等电点的溶液中，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动。

血清中含有数种蛋白质，它们所具有的可解离基团不同，在同一pH的溶液中，所带净电荷不同，故可利用电泳法将它们分离。

血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等，各种蛋白质由于氨基酸祖坟、立体构象、相对分子质量、等电点及形状不同，在电场中迁移速度不同。

由表可知，血清中5种蛋白质的等电点大部分低于pH值7.0，所以在剪下，分别用0.4mol/L NaOH溶液浸洗下来，进行比色，测定其相对含量。

也可以将染色后的薄膜直接用光密度计扫描，测定其相对含量。

肾病、弥漫性肝损害、肝硬化、原发性肝癌、多发性骨髓瘤、慢性炎症、妊娠等都可以使白蛋白下降。

肾病时α1、α2、β球蛋白升高，γ-球蛋白降低。

肝硬化时α2、β-球蛋白降低，而α1、γ-球蛋白升高。

三、实验器材1、醋酸纤维薄膜（2cm*8cm，厚度120μm）2、人血清；3、烧杯及培养皿数只；4、点样器；5、竹镊子；6、玻璃棒；7、电吹风；8、试管六只；9、恒温水浴锅；10、电泳槽；11、直流稳压电泳仪；12、7220型分光光度计；13、剪刀四、实验试剂1、巴比妥-巴比妥钠缓冲液：取两个大烧杯，分别称取巴比妥钠和巴比妥溶解于500ml 蒸馏水中；2、染色液，可反复使用；3、漂洗液：取乙醇45ml ，冰醋酸10ml ，混匀；4、浸出液：0.4mol/L NaOH 溶液；5、透明液：取冰醋酸25ml 、无水乙醇75ml ，混匀。

五、实验操作1、准备和点样取一条醋酸纤维薄膜，浸入缓冲液中，完全浸透后，用镊子轻轻取出，将薄膜无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，再放一张干净滤纸吸取多余的缓冲液；用玻棒蘸取少量血清，涂在点样器上，然后轻轻于距纤维薄膜一端1.5cm 处接触，样品即呈一条状突于纤维膜上。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告一、实验目的1.学习血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳的原理和方法；2.学习如何使用电泳进行蛋白质的定量分析；3.掌握实验中常见的数据处理和结果分析方法。

二、实验原理1.醋酸纤维薄膜电泳醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，其原理是利用电场的作用使蛋白质在醋酸纤维薄膜上移动，分离出不同的蛋白质成分。

2.定量实验方法通过电泳分离后的蛋白质带，可以使用染色剂染色，然后利用分光光度计测定吸光度，再根据标准曲线，可以定量测定蛋白质的含量。

三、实验步骤1.制备醋酸纤维薄膜准备醋酸纤维薄膜并浸泡在0.1%凯伦派氏液中，取出后放置干燥。

2.样品制备将血清样品进行蛋白质沉淀，并将蛋白质沉淀溶解在适量的缓冲液中。

3.电泳将蛋白质样品加在醋酸纤维薄膜上，连接电泳装置，设置适当的电压和电流，进行电泳分离。

4.染色电泳结束后，取出醋酸纤维薄膜，用染色剂染色，保留足够时间以确保染色充分。

5.图像捕获与分析将染色后的薄膜放在透射式扫描电子显微镜下，捕获图像，并使用图像处理软件进行蛋白质带的分析。

6.分析数据处理根据染色后的蛋白质带的相对定量测定，绘制标准曲线并计算样品中蛋白质的浓度。

四、结果分析将标准品浓度和吸光度值录入Excel表格中，通过线性回归得到标准曲线方程。

根据电泳结果图像中的各蛋白质带的吸光度值，代入标准曲线可以得到各蛋白质的浓度。

进一步可以分析各样品中不同蛋白质的浓度和百分比。

五、实验结论本实验成功地进行了血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验。

通过电泳分离和染色后的薄膜图像，我们得到了各蛋白质的相对定量测定结果，并利用标准曲线计算了蛋白质的浓度。

实验结果可以用于血清蛋白质的定量分析。

实验一血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳(doc)一、实验目的：了解蛋白质在醋酸纤维素薄膜电泳中的电泳特性，掌握电泳操作技能。

二、实验原理：血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳是一种基于电场作用对蛋白质进行分离的方法。

它是将样品蛋白质通过电泳方式在薄膜上进行分离，通过比较蛋白质的电泳迁移率来判断不同蛋白质的分子量大小。

血清蛋白质主要是血清白蛋白、球蛋白和纤维蛋白，分子量范围从14 kDa到850 kDa 不等。

在醋酸纤维素薄膜电泳中，蛋白质受到电场力的作用下，向电极方向迁移，带电的蛋白质分子在电场力和阻力的作用下进行不断运动，大分子运动缓慢，小分子运动快，不同分子量的蛋白质在电泳中迁移率不同，可以根据迁移率区分出不同的蛋白质成分并计算其分子量。

三、实验步骤：1.制备0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液：取700ml去离子水，加入1.68g粉末琼脂糖，微弱的加热搅拌至完全溶解后添加1ml 1M Tris-HCl（pH6.8），0.2ml 10%（w/v）SDS，0.1 ml 10%（w/v）溴酚蓝溶液，搅拌均匀，得到电泳缓冲液。

2.制备凝胶：取0.9%琼脂糖凝胶电泳缓冲液120ml，加入3ml 10%（w/v）APS和0.2ml TEMED，充分混合，倒入成型板中，插入2个酯化的平板梳子，待凝胶完全固化后去除梳子。

3.制备血清样品：血清样品先离心5min，将上清离心液保存备用，调整浓度至3mg/ml，加入适量的样品缓冲液，并加入0.1%（w/v）溴酚蓝染料，离心去除蛋白质沉淀，取上清液。

4.醋酸纤维素薄膜电泳：将凝胶放入电泳槽中，加入电泳缓冲液至凝胶表面，将样品用枪头均匀加到凝胶的对侧。

将电泳槽封好，接上电源，电压保持在120 V，电泳时间约为1.5小时。

电泳完成后取出凝胶。

5.染色：将凝胶放入染色液中，室温下摇晃染色1h，去除染色液，在清水中冲洗几次，静置清水中至少30min。

6.成像：将凝胶放在扫描仪上进行成像，选择合适的波长进行成像。

实验七醋酸纤维薄膜电泳法分离牛血清蛋白一.目的掌握醋酸纤维薄膜电泳法分离蛋白质的原理和方法。

二、原理蛋白质是两性电解质。

当PH>PI时，蛋白质为负离子，在电场中向阳极移动；当PH<PI时，蛋白质为正离子，在电场中向阴极移动。

血清中含有数种蛋白质，在同一PH值时，因所带电荷不同，而在电场中的移动速度也不相同，故可用电泳法将其分离。

本试验以牛血清为材料，醋酸纤维薄膜为支持物，通过点样、电泳、染色、脱色从而得到血清中蛋白质的分离图谱，再进行观察和定量分析。

血清中含白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等。

其等电点低于pH7.0，在缓冲液中（pH8.6）中，电离成负离子，在电场中向阳极移动。

用醋酸纤维薄膜作蛋白电泳有简便，快速，分离清晰，容易定量等优点。

三、实验仪器1、牛血清2 、醋酸纤维薄膜3 、镊子4 、电泳仪5 、电泳槽6 、盖玻片四、实验试剂1、巴比妥—巴比妥钠缓冲液（离子强度，PH8.6）：称取巴比妥1.66g 和巴比妥钠12.76g，溶于蒸馏水并稀释至1000ml。

用pH计较正后使用。

2、染色液：氨基黑10B0.5g,甲醇50ml，冰乙酸10ml，蒸馏水40ml 混匀即可。

3、漂洗液：95%乙醇45ml，冰乙酸5ml和蒸馏水50ml混匀即可。

五、实验步骤1、准备：用镊子取薄膜一条，浸入缓冲液中，完全浸透后（大约3-5分钟），用镊子取出，将无光泽的一面向上，平放在干净滤纸上，将滤纸对折，吸取多余的缓冲液（注意不要吸的太干）。

2、点样：取盖玻片一块，用玻璃棒将血清均匀的涂在盖玻片的一端面上，直直的在薄膜一端1/3处点样。

3、电泳：将薄膜平贴于放在电泳槽上并已浸透缓冲液的滤纸上，无光泽面要向下放置，点样端放在阴极，进行电泳。

电泳条件：电压90-110V，电流0.4-0.6A,通电60分钟。

4、染色：电泳完毕，将薄膜浸入染色液（回收）中10分钟，进行染色。

5、漂洗：染色完毕，将薄膜取出，放入漂洗液中漂洗至背景无色，在浸入蒸馏水中。

醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告实验室报告
题目：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验报告
一、实验目的
本实验旨在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白，并分析其分离效果。

二、实验原理
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种利用薄膜作为电泳载体，在交流电场中将带电微粒体分离的方法。

其分离原理在于不同电动力学直径的带电微粒体在局部电场中受到的电离流和离子机动力学的影响不同，导致粒径较小的微粒体在电场中移动的速度较快，粒径较大的微粒体则移动较慢，从而实现了分离。

三、实验步骤
1.将5μL血清样品加入凝胶载体中。

2.在醋酸纤维薄膜电泳仪中进行样品电泳分离，设置电场参数：电压300 V，电泳时间30分钟。

3.将分离后的血清蛋白样品涂在聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳定
量和分析。

四、实验结果
通过电泳定量和分析，我们可以得到血清蛋白的分离效果。

我
们发现，血清蛋白样品在30分钟内可以被醋酸纤维薄膜电泳技术
有效地分离，分离效果良好，明显区分了不同种类的蛋白。

五、结论
醋酸纤维薄膜电泳技术是一种非常有效的血清蛋白分离方法。

通过本次实验，我们得到了良好的分离效果和明确的蛋白种类区分。

这种技术具有高分离效率、高通量、简单易行等特点，可以
在临床医学、药物研发、生命科学等领域得到广泛应用。

此外，在使用醋酸纤维薄膜电泳技术分离血清蛋白时，需要注意控制一定的电场参数，以确保实验效果。

醋酸纤维素薄膜电泳分离及定量测定血清蛋白成分一、实验目的1．掌握醋酸薄膜电泳的原理及操作。

2．定量测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。

3．掌握分光光度计的原理及操作二、实验原理采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。

醋酸纤维素，是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯。

将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。

该膜具有均一的泡沫状的结构，有强渗透性，厚度约为120μm。

醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术。

它具有微量、快速、简便、分辨力高、对样品无拖尾和吸附现象等优点。

该技术已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、结合球蛋白、同功酶的分离和测定等方面。

目前，醋酸纤维薄膜电泳趋向于代替纸电泳。

四、试剂和器材（一）试剂（1）新鲜血清——无溶血现象。

（2）巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06)：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1 000ml。

（3）染色液①：称取氨基黑10B 0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。

（4）漂洗液①：取95％乙醇45ml，冰乙酸５ml和蒸馏水50ml。

混匀，在具塞试剂瓶内贮存。

[易挥发、密封]（5）透明液①[易挥发、密封]甲液—取冰乙酸15ml和无水乙醇85ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。

乙液—取冰乙酸25ml和无水乙醇75ml，混匀，装入试剂瓶内，塞紧瓶塞，备用。

（6）液体石腊。

（7）0.4mol氢氧化钠溶液：称取16g氢氧化钠（分析纯）用少量蒸馏水溶解后定容到1000ml。

（二）器材（1）醋酸纤维素薄膜—2㎝×8㎝（浙江黄岩曙光化工厂等处生产）（2）培养皿（直径9～10㎝）（3）血色素吸管或点样器（4）直尺和铅笔（5）镊子（6）电泳仪和电泳槽（7）万用电表（8）玻璃板（8㎝×12㎝）（9）普通滤纸（10）试管和试管架（11）吹风机（12）单面刀片（13）擦镜纸（14）吸量管（2ml、5ml）和吸量管架（15）722型分光光度计五、实验仪器介绍（1）722型分光光度计①测量原理分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律：当容液中的物质在光的照射和激发下，产生了对光吸收的效应。

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告实验报告：血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量一、实验目的本实验旨在通过醋酸纤维薄膜电泳技术，对血清中的蛋白质进行分离和定性，同时利用扫描仪对电泳条带进行定量分析，加深对血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量的理解。

二、实验原理醋酸纤维薄膜电泳是一种常用的蛋白质分离方法，主要是利用电泳的原理将血清中的蛋白质进行分离并定性地鉴定。

其原理是基于各种蛋白质在电场中的迁移率不同，大小不同的蛋白质在电场的作用下，向正极或负极移动的速度也不同，从而将血清中的蛋白质分成不同的区带。

三、实验步骤1.准备试剂和仪器：醋酸纤维薄膜电泳试剂盒、电泳仪、醋酸纤维薄膜、玻璃板、移液器、注射器等。

2.配制试剂：按照醋酸纤维薄膜电泳试剂盒的说明书配制分离液、浓缩液和电极液等。

3.加样：将血清样品用移液器加到醋酸纤维薄膜上，控制加样量为5μL。

4.浸泡：将加好样的醋酸纤维薄膜放入分离液中浸泡10分钟，使其完全湿润。

5.电泳：将湿润的醋酸纤维薄膜放在玻璃板上，再覆盖上另一块玻璃板，然后将电泳槽装配好，接通电源进行电泳。

电泳时间和电压根据具体实验条件进行调整。

6.染色：电泳结束后，将醋酸纤维薄膜取出，放入染色液中染色10分钟，以便更好地观察蛋白质条带。

7.脱色：将染色后的醋酸纤维薄膜放入脱色液中脱色，直到背景清晰，蛋白质条带颜色较浅为止。

8.扫描定量：利用扫描仪对脱色后的醋酸纤维薄膜进行扫描，获取各蛋白质条带的OD值（吸光度），计算各蛋白质的相对含量。

四、实验结果通过醋酸纤维薄膜电泳，我们可以成功地将血清中的蛋白质分离成不同的条带。

从扫描结果中我们可以得到各条带的OD值，通过这些数据可以进一步计算出各蛋白质的相对含量。

以下是本实验的部分实验数据：OD值（吸光度）数据分析表：通过本次实验，我们成功地利用醋酸纤维薄膜电泳对血清中的蛋白质进行了分离和定性分析。

同时通过扫描定量，我们得到了各蛋白质条带的OD值以及相对含量。