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医学微生物学实验报告（本科）实验室：姓名：学号：班级：海南医学院微生物学与免疫学教研室编写二OO四年四月第一次实验【实验内容】实验一微生物的形态与结构的观察实验二微生物的分布【结果记录及判定】实验一微生物的形态与结构的观察1、细菌正常形态及特殊结构的观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：特殊结构：霍乱弧菌破伤风梭菌芽胞形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：肺炎链球菌荚膜伤寒沙门菌鞭毛形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：炭疽杆菌脑膜炎球菌2、病毒包涵体观察及记录（示教）：绘图并描述描述：狂犬病毒包涵体（H-E染色）3、真菌的形态观察及记录（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：特殊结构：特殊结构：白假丝酵母菌皮肤癣菌4、革兰染色法结果观察及记录：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌大肠埃希菌实验二微生物的分布结果记录：1、空气中的细菌种类（种）：数量（个）：2、水中细菌数检测（1）自来水中细菌的种类（种）：数量（个）：（2）污水中细菌的种类（种）：数量（个）：3、物品和手指上的细菌检查（记录本人结果）物品表面的细菌种类（种）：数量（个）：手指表面的细菌种类（种）：数量（个）：结论：成绩：_________________批改教师签名：____________批改时间：________________第二次实验【实验内容】实验三微生物的分离培养实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌【结果记录及判定】实验三微生物的培养1、细菌分离培养方法（分区划线接种法），生长现象为：2、纯种细菌接种技术（1）琼脂斜面接种培养，大肠埃希菌生长现象：（2）液体培养基接种法，大肠埃希菌生长现象：（3）半固体培养基接种技术①标本名称：大肠埃希菌半固体培养基②标本名称：痢疾志贺菌半固体培养基穿刺线：穿刺线：培养基：培养基：结论：结论：3、沙保弱琼脂平板上的真菌菌落观察及描述（示教）：类酵母型菌落：丝状菌落：实验四抗菌药物敏感性试验实验五消毒、灭菌、除菌一、紫外线灭菌法（示教）玻璃盖遮住平板的一半现象：现象：分析：分析：二、机械除菌法（示教）：1、未经过滤的液体培养基培养后的现象：2、经过过滤的液体培养基培养后的现象：分析：成绩：_________________批改教师签名：____________第三次实验【实验内容】实验六细菌的致病性实验七化脓性感染的细菌学检查【结果记录及分析】实验六细菌的致病性一、透明质酸酶试验（示教，实验动物：家兔）测量试验侧与对照测的黑墨水扩散范围（cm×cm）：实验侧：对照侧：分析：二、破伤风外毒素的毒素作用（实验动物：小鼠）实验现象：实验侧：对照侧：分析：实验七化脓性感染的细菌学检查一、病原性球菌的形态观察（示教）：绘图并描述形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：葡萄球菌链球菌形状：形状：排列：排列：染色性：染色性：脑膜炎奈瑟菌淋病奈瑟菌二、病原性球菌的鉴别：三、血清学试验抗“O”试验（乳胶凝集法）实验现象：阳性对照：阴性对照：标本1：标本2：结果判定：标本1为________，标本2为_________。
1实验内容：2显微镜油镜的使用与保护。
3细菌的形态与结构的观察。
4实验目的：5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。
6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。
7熟悉细菌的特殊结构。
8实验材料：显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。
4实验方法：(1)显微镜油镜的使用与保护显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的工具。
因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。
1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。
2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。
对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。
3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。
⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。
⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。
4、显微镜的保护：⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。
⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。
避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。
⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。
置于干燥处，以防受潮。
(二)细菌形态观察1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌2、细菌的特殊结构：荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌鞭毛：水弧菌（周毛菌）一、实验内容：3细菌标本片的制备（操作）4革兰染色法（操作）二、实验目的：1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。
病原性球菌及检验球菌种类很多，根据革兰氏染色的不同，分为G-、 G+两类球菌。
G+有：葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌和微球菌。
G-有：脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、卡他布兰汉氏菌等。
对人体致病的球菌称病原性球菌，因能引起机体化脓性炎症，故又称为化脓性球菌。
常见的有葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌。
一、葡萄球菌属(一)形态与染色葡萄球菌呈不规则堆集排列，形似葡萄串状，也可见单个、成对或短链排列。
为G+性球菌，直径0.5-1.5um，（致病性葡萄球菌菌体较非致病性葡萄球菌菌体小）无芽胞，无鞭毛、无荚膜；无动力。
(二)分类 1965年按血浆凝固酶分为：血浆凝固酶阴性葡萄球菌，血浆凝固酶阳性葡萄球菌。
1.血浆凝固酶阴性葡萄球菌包括：表皮、腐生葡萄球菌。
2.血浆凝固酶阳性葡萄球菌包括：金黄色、中间型、家畜葡萄球菌。
(三)抗原本菌水解后，用沉淀法可获两种抗原即蛋白抗原和多糖抗原。
1.蛋白抗原：是一种表面抗原，为完全抗原；有种特异性，无型特异性。
存在葡萄球菌细胞壁的表面，结合在细胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，称葡萄球菌A蛋白。
2.多糖抗原：是半抗原，存在于细胞壁上，是金黄色葡萄球菌的重要抗原。
有型特异性，分A、B、C三型。
(四)标本接种1.脓汁、尿道分泌物、脑脊液沉淀物，通常直接接种在血琼脂上，经37℃24-48h培养，可见直径2-3mm，产生不同色素的菌落。
2.粪便、呕吐物应接种卵黄高盐、高盐甘露醇琼脂平板上，经37℃24-48h培养可形成细小菌落，48h后形成典型菌落。
3.疑为败血症者，抽取静脉血5ml，注入50ml葡萄糖肉汤培养基中。
(五)培养特性需氧或兼性厌氧，对营养要求不高。
在20%CO2环境中，有利于毒力产生。
最适温度37℃，最适PH7.4。
DNA中G+C含量：30-39%。
1.在普通琼脂平板上，经37℃、24-48h培养，可形成圆形，凸起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽、不透明、脂溶性色素的菌落，直径一般为1-2mm，但大者也有4-5 mm的菌落。
一、实训目的1. 掌握病原性球菌的基本概念和分类。
2. 熟悉病原性球菌的形态学观察方法。
3. 理解病原性球菌的培养特性及生化反应。
4. 提高实验室操作技能，为临床诊断提供依据。
二、实训时间2023年10月15日三、实训地点微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材：显微镜、接种环、玻片、酒精灯、无菌生理盐水、肉浸液琼脂平板、血琼脂平板、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇、明胶、石炭酸复红染液、结晶紫、碘液、95%乙醇等。
2. 试剂：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等。
五、实训内容1. 病原性球菌的形态学观察（1）革兰染色：取适量金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等，分别进行革兰染色，观察其染色特性。
（2）镜检：将染色后的玻片置于显微镜下观察，记录细菌的形态、排列方式、细胞壁结构等特征。
2. 病原性球菌的培养特性观察（1）肉浸液琼脂平板培养：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于肉浸液琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征。
（2）血琼脂平板培养：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于血琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征及溶血现象。
3. 病原性球菌的生化反应观察（1）糖发酵试验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇等培养基，37℃培养24小时，观察是否产生气泡。
（2）明胶液化试验：将金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性链球菌等分别接种于明胶培养基，37℃培养24小时，观察明胶是否液化。
4. 病原性球菌的免疫学检验（1）SPA协同凝集试验：将金黄色葡萄球菌与SPA抗体混合，观察是否出现凝集现象。
（2）血浆凝固酶试验：将金黄色葡萄球菌接种于血浆培养基，37℃培养24小时，观察血浆是否凝固。
六、实训结果与分析1. 革兰染色观察：金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌均为革兰氏阳性球菌，呈葡萄串样排列；溶血性链球菌为革兰氏阴性球菌，呈链状排列。
