一株犬细小病毒的分离及VP2基因序列分析

犬细小病毒中国内蒙株VP2基因克隆及序列分析Ξ董江丽1,李淑芬2,张鹤龄11(内蒙古大学生命科学院,呼和浩特010021)2(内蒙古农业大学生物工程系,呼和浩特010018)摘要:从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒(CPV )。

提取病毒基因组DNA ,并以此DNA 为模板,采用人工合成的引物进行PCR 扩增,PCR 产物经B am H I 、S ac I 双酶切后,克隆于pUC19质粒的B am H I/S ac I 位点。

重组质粒pUCVP2经PCR 鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:获得了犬细小病毒内蒙株(CPV 2IM )VP2基因的全长克隆,VP2基因全长1755nt ,与国外报道的美国1株(CPV 2N )、美国2株(CPV 2B )和猫全白细胞减少症病毒(FPLV )的核苷酸序列同源性分别为99.32%、98.29%、98.52%,氨基酸序列同源性分别为98.87%、97.09%、97.77%。

关键词:犬细小病毒;VP2基因;序列分析中图分类号:S852.655 文献标识码:A 文章编号:1003-5125(2000)04-0379-09犬细小病毒(Canine Parvovirus ,CPV )属自主复制的细小病毒,该病毒可引起犬细小病毒病,又称犬细小病毒性肠炎。

本病以剧烈呕吐、出血性肠炎、白细胞显著减少为主要特征,不同品种和年龄的犬都易感,幼犬在16周出现心肌炎、死亡率高达20%～100%[1]。

目前,国内主要采用CPV 灭活疫苗和犬五联弱毒疫苗进行免疫预防,由于母源抗体的干扰及CPV 毒株在强大的免疫压力下产生抗原漂移,常导致免疫失败。

1993年,布日古德等用HA 和HI 调查内蒙警犬基地的CPV 感染,结果表明,在正常接种下,感染率高达26%[2]。

细小病毒是目前动物病毒中最小、最简单的一类单链线状DNA 病毒。

CPV 病毒粒体直径为25nm ,无囊膜,呈二十面体,其基因组为单链、负链DNA ,全长5323nt 。

犬细小病毒的分离鉴定及其VP2基因序列分析林鹏;赵航;王建科;程悦宁;任静强;易立;仝明薇;程世鹏【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2015(042)010【摘要】本试验从北京某动物医院疑似犬细小病毒(CPV)感染犬粪便中分离出一株病毒.通过电子显微镜观察、血凝试验、动物回归试验和分子生物学鉴定,本试验成功分离出一株CPV,命名为BJ-24.对BJ-24株的VP2基因序列分析发现该分离株为CPV-2a亚型,其VP2基因与GenBank中19株CPV VP2基因核苷酸序列有较高的同源性,均在98.7％以上,甚至与CPV-JS2株达到100.0％.系统进化分析结果表明所分离的BJ-24株属于中国分支,与CPV-JS2株遗传距离最近.本试验对进一步开展北京地区CPV的流行病学调查提供基础依据,并对防制病毒传播和疫苗研制奠定了坚实的基础.【总页数】7页(P2587-2593)【作者】林鹏;赵航;王建科;程悦宁;任静强;易立;仝明薇;程世鹏【作者单位】中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112;中国农业科学院特产研究所,吉林省特种经济动物分子生物学重点实验室,长春130112【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.犬细小病毒YBYJ株的分离鉴定及VP2基因的序列分析 [J], 张立媛;高旭;陈海迪;于清洋;方爽2.犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 姜燕霞;张淑玲;王金良;申识川3.犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析 [J], 赵屹钦;曾梦颖;郭娟;张迪;高洪;严玉霖4.犬细小病毒VP2基因序列分析及BJ-1株的分离鉴定 [J], 周宏专;苏霞;林路路;齐颀;张进;徐福洲;杨兵5.三株犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 陈延宗;钱晶;王晶宇;赵航;毕振威;夏兴霞;诸玉梅;芮荣;王永山因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的克隆分析易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王建科;赵建军【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2008()4【摘要】2006年从南京疑似细小病毒感染的病犬中分离犬细小病毒一株,分离的病毒培养物能凝集猪红细胞,凝集效价达到128倍,并能被已知的犬细小病毒阳性血清所抑制。

其衣壳蛋白基因VP2被克隆并测序,核酸、氨基酸序列同源性分析表明:血清型为CPV-2b。

通过软件对其氨基酸序列分析,预测VP2区域可能的B细胞表位分别为:5-30,300-320,360-380,380-400,400-420区段,这为犬细小病毒基因工程疫苗的研制奠定了基础。

【总页数】4页(P60-63)【关键词】犬细小病毒;分离;鉴定;克隆;序列分析【作者】易立;程世鹏;闫喜军;柴秀丽;罗国良;张海玲;王建科;赵建军【作者单位】中国农业科学院特产研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.犬细小病毒CPV-SHZ分离株VP2基因的克隆与序列分析 [J], 刘志强;钟发刚;王新华2.犬细小病毒山东分离株VP2基因的克隆与遗传变异分析 [J], 于永乐;张传美;张倩;杨海燕;杨瑞梅;张洪亮;单虎3.成都地区犬细小病毒VP2基因克隆分析及基因型鉴定 [J], 杨晓农;王成东;项振义;王斌;张焕容;杨发龙;于学辉;龙虎;刘群;陈世界;严玉宝;余华4.三株犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因序列分析 [J], 陈延宗;钱晶;王晶宇;赵航;毕振威;夏兴霞;诸玉梅;芮荣;王永山5.犬细小病毒分离株VP2基因的克隆与序列分析 [J], 杨玲;徐向明;殷俊;宗卫峰;陈璐;李厚达因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析姜燕霞;张淑玲;王金良;申识川【摘要】本研究从疑似犬细小病毒感染犬粪便中分离鉴定一株犬细小病毒,并进行了VP2基因序列分析.分离株病毒命名为JN株,分离株病毒对猪红细胞的血凝效价为1∶512,Reed-Muench法测定分离株病毒TCID50为10-3.5/0.1 mL,动物回归试验显示攻毒犬能复制出犬细小病毒病的典型临床症状和病理变化,VP2基因序列分析表明该分离株为CPV-2a亚型,与GenBank中的8株CPV VP2基因序列核苷酸同源性在98.7 ％～99.6％之间.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2013(034)005【总页数】4页(P83-86)【关键词】犬细小病毒;分离鉴定;VP2基因;序列分析【作者】姜燕霞;张淑玲;王金良;申识川【作者单位】滨州医学院附属医院,山东滨州256603;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;滨州市妇幼保健院,山东滨州256600;山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600;湖南省宁远县畜牧水产局,湖南宁远425600【正文语种】中文【中图分类】S852.659.2犬细小病毒病（Canine parvovirus disease，CPVD）是由犬细小病毒（Canineparvovirus，CPV）引起的犬的一种急性、烈性传染病，该病于1978年在美国首次发现，目前呈世界范围内流行，是危害犬类的最重要传染病之一，每年都给全球养犬业和宠物行业带来了巨大的经济损失［1－5］。

CPV属于细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus），基因组为单股线状DNA病毒，全长为5.0kb，编码2个结构蛋白（VP1、VP2），其中VP2蛋白是保护性颗粒抗原，可诱导机体产生中和抗体，VP2中的几个关键碱基和氨基酸的变化就可改变病毒的抗原特性和宿主范围［4－6］。

近年来，CPV不断出现新的变异情况，分离鉴定CPV的当地流行毒株以及对结构蛋白VP2基因进行序列分析是了解和掌握CPV变异趋势的主要方法［4.6－7］。

·研究论文·Chinese Journal of Animal Infectious Diseases中国动物传染病学报摘 要：为了解犬细小病毒的临床流行及变异情况，本研究于河南省方城县采集了8份疑似CPV 感染犬粪便样品，经过PCR 检测、CRFK 细胞增殖培养、透射电镜观察和病毒滴度测定后，对其VP2基因进行序列分析。

结果表明5株分离株为犬细小病毒，病毒滴度分别为10-4.22/0.1 mL （China-HN-01株）、10-3.56/0.1 mL （China-HN-02株）、10-3.78/0.1 mL （China-HN-05株）、10-4.47/0.1 mL （China-HN-06株）、10-4.4/0.1 mL （China-HN-07株）。

VP2基因序列比对和遗传进化树分析结果显示，4株分离株基因型为New CPV-2a ，1株分离株基因型为CPV-2c ，5株分离株与疫苗株的同源性为97.8%~98.7%，与国内外参考毒株的同源性为94.0%~99.0%，4株New CPV-2a 基因型毒株与四川的Canine/China/24/2017株亲缘关系最近，CPV-2c 基因型毒株与蒙古国5-MGL 分离株位于同一分支，与我国河南地区的3株CPV-2c 毒株亲缘关系较远。

对河南方城地区CPV 毒株的分析，为研究CPV 变异株在河南地区的传播和宠物疫病防控提供了理论依据。

关键词：犬细小病毒；分离；VP2基因；进化分析中图分类号：S852.65文献标志码： A文章编号：1674-6422（2023）03-0054-08Isolation and Sequence Analysis of VP2 Gene of Canine Parvovirus from Fangcheng, HenanLIN Yuting 1,2, ZHAI Qi 2, ZHAI Shaolun 2, LYU Dianhong 2, ZHOU Xiurong 2, JIA Chunling 2, HUO Wei 2,WEN Xiaohui 2, Wei Wenkang 1,2,3(1. College of Animal Science & Technology, Zhongkai University of Agriculture and Engineering, Guangzhou 510225, China; 2. Institute of Animal Health, Guangdong Academy of Agricultural Sciences, Key Laboratory of Livestock Disease Prevention of Guangdong Province, Scientific Observation and Experiment Station of Veterinary Drugs and Diagnostic Techniques of Guangdong Province, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Guangzhou 510640, China; 3. Agro-biological Gene Research Center, Guangdong Academy of AgriculturalSciences, Guangzhou 510640, China)收稿日期：2021-01-11基金项目：国家重点研发计划（2016YFD0501000）；广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项资金（2019KJ119）；广东省农业科学院学科团队建设（201634TD）；广东省农业科学院院长基金（202024）作者简介：林瑜婷，女，硕士研究生，预防兽医学专业；翟颀，男，助理研究员，主要从事动物疫病诊断技术研究 通信作者：温肖会，E-mail：*******************；魏文康，E-mail：**************犬细小病毒河南方城株分离及VP2基因序列分析林瑜婷1,2，翟 颀2，翟少伦2，吕殿红2，周秀蓉2，贾春玲2，霍 玮2，温肖会2，魏文康1,2,3（1.仲恺农业工程学院动物科技学院，广州510225；2.广东省农业科学院动物卫生研究所 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室 农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站，广州510640；3.广东省农业科学院农业生物基因研究中心，广州510640）2023,31(3):54-61Abstract: In order to investigate the prevalence and variation of Canine parvovirus, 8 fecal samples were collected from dogs suspected of CPV infection from Fangcheng county, Henan province. Five CPV isolates were obtained based on PCR amplifi cation, growth on CRFK cells, transmission electron microscopy and virus titration. The TCID 50 titers of these isolates were 10-4.22/0.1 mL (China-HN-01 strain), 10-3.56/0.1 mL (China-HN-02 strain), 10-3.78/0.1 mL (China-HN-05 strain), 10-4.47/0.1 mL (China-HN-06 strain) and 10-4.4/0.1 mL· 55 ·林瑜婷等：犬细小病毒河南方城株分离及VP2基因序列分析第31卷第3期犬细小病毒病是由细小病毒科（Parvoviridae）细小病毒属（Parvovirus ）的犬细小病毒（Canine parvovirus, CPV）感染犬只引起的致命性传染病[1]，该病常以出血性肠炎、白细胞含量显著减少、腥臭血便和严重脱水等为主要临床特征，部分表现为突然死亡的急性心肌炎型[2]。