犬细小病毒VP2基因的克隆表达与免疫印迹分析

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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
中提 取 的 总 ＤＮ 为 模 板 ， 行 Ｐ Ｒ扩增 。把 扩 增 产物 克 隆 至 ｐ Ａ 进 Ｃ ＭＤ１一 ８Ｔ载 体 进 行 测 序 、 定 。 将 克 隆 的 Ｖ ２ 鉴 Ｐ 基
因片 段 克 隆 至 原 核 表 达 载 体 ｐ Ｅ 一 Ｔ ２ 再 将 构 建 成 功 的 原 核 表 达 质 粒 载 体 ｐ Ｘ ４ 一一 ２转 化 至 大 肠 杆 菌 Ｇ Ｘ４ 一， ＧＥ 一 Ｔ ２ＶＰ
犬细小 病 毒 ＶＰ ２基 因 的克 隆 表达 与免 疫 印迹 分析
陈胜 男 ，马素 贞 ，陶 玉成 ，申卫红 ， 腾 飞 ， 子 健 刘 简
（ 新疆 农 业 大 学 动 物 医学 学 院 ， 鲁 木 齐 乌 摘 ８０５） ３０ ２
要 ： 根 据基 因库 已 发 表犬 细 小 病 毒 序 列设 计 合 成 了 Ｖ ２基 因的 １ 特 异 引 物 ， Ｐ 对 以细 小 病 毒 感 染 的犬 粪 样 品
Ｂ ２ （ Ｅ ） 。 行鉴 定 、 序 、 达 。结 果 表 明 ， Ｌ １Ｄ ３ 中 进 测 表 克隆 的 ＶＰ ２基 因 片 段 全长 １７５ｂ ， １ 个 ＶＰ ５ ｐ 与 ３ ２基 因序 列 的 同 源 性 为 ９ ． ％ ～９ ． 。系 统进 化 树 分 析 表 明 ， 克 隆 的 Ｖ ２Ｃ Ｎ ３６ １ 列 同 日本 株 （ Ｂ ５ ２２ 、 大 利株 ８４ ９８ 所 Ｐ Ｓ ８０ ｌ 序 Ａ ０４２）意 （ Ｆ ０ ４５ 的进 化 途径 一 致 。Ｗ ｅｔ ｎｂｏｔ ｇ 析 显 示 ， 达 产 物 为 ９ Ｄ的 融 合 蛋 白 ， Ａ ３６ ４ ） ｓ ｒ—ｌｔｎ 分 ｅ ｉ 表 ０ｋ 可被 犬 细 小病 毒 阳性 血
清所 识 别 ， 有 良好 的 反应 原性 。 具
关键 词 ： 犬 细 小 病毒 ；Ｖ ２ 因 ； 隆 ； 核 表 达 ； 应 原性 Ｐ 基 克 原 反
中图 分 类号 ： ８ １ ６ ９ ２ ￥ ５ ．５ ． 文献 标 识 码 ： Ａ
Ｃｌ ｎｉ ｇ Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｎ ｎ ｒ ｏ ｉ ｕ ｏ ｎ ｐ ｅ ｓｏ ｆ Ｃａ ｉ ｅ Ｐａ ｖ ｖ ｒ ｓ ＶＰ２
ｐ Ｄ１ － ｖ ｃ ｏ ｎ ｏ ｄ ｒ ｔ ｏ ｔ ｕｃ Ｍ Ｔ ｅ ｔ ｒｉ ｒ ｅ ｏ ｃ ｎｓ ｒ ｔｐＭ Ｄ１ 一 ８ ８ ＣＰＶ ＶＰ２ ｒ ｃ ｍｂｉ ｔｏ ａ ｍｉ ｎ ｈ ｎ ｔ ａ ｓ ｏ ｍｅ ｎｔ ｅｏ ｎａ ｉ ｎ ｐｌ ｓ ｄ ａ ｄ ｔ ｅ ｒ ｎ ｆ ｒ ｄ ｉ ｏ ｔ ｈｅＥ．ｃ ｉ ｏ ｌＤＨ５ ｆ ｅ ｅ ｅ ｉ ｇ ａ ａ ｙ ｉ ．ＴｈｅＣ ｏ ｄ ＣＰＶ ａ ａ ｔ ｒｓ ｑｕ ｎｃｎ ｎ ｌ ｓｓ ｌ ｎｅ ＶＰ２ ｇ ｎ ｓ ｓ ｂｃｏ ｄ ｉ ｔ ｘ ｒ ｓ ｉ ｅ — ｅ ｅ ｗａ ｕ ｌｎｅ ｎ ｏ ｅ ｐ ｅ ｓｏｎ ｖ ｃ
新 疆 农 业 大 学 学 报 ２ １ ，３ １ ：７ ２ ０ ０ ３ （ ） ４ ～５ Ｊ ｕｎ ｌ ｆＸｉｊａ ｇＡ ｒ ｕｔｒ ｌ ｎ ｖｒｉ ｏ ｒ ａ ｎ ｉｎ ｇ ｉ ｌ ａ ｉ ｓｔ ｏ ｃ ｕ Ｕ ｅ ｙ
文章 编 号 ： ０ ７８ １ （ ０ ０ ０ — ０ ７０ １ ０ — ６ ４ ２ １ ） １ ４ —６ ０