免疫组化及特殊染色_图文.
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免疫组化染⾊原理⼀、项⽬介绍免疫组织化学IHC。
肿瘤⼀般流程,做HE常规染⾊,确认后进⾏针对性IHC检测分析。
不同项⽬的染⾊位置不同,分为:核染,膜染和浆染。
⼆、乳腺癌案例三种成因,对应三种检测对象:1.Her2,可采⽤罗⽒靶向治疗药物赫塞丁针对性治疗。
2.ER,主要因激素等原因导致的乳腺癌,术后通过调节内分泌有效治疗⽅法。
3.PR,主要因激素等原因导致的乳腺癌,术后通过调节内分泌有效治疗⽅法。
4. 三阴,以上三种测试结果均为阴性的肿瘤,原因不详,可能与转移有关,严重程度⾼。
三、检测流程1. 术后标本⾸先通过甲醛浸泡脱⽔,两⽅⾯:1.1 防⽌细菌滋⽣使标本腐烂1.2 防⽌组织细胞内酶渗透出细胞壁,破坏细胞形态。
2. 包埋,将标本⽤蜡包埋,便于保存和切割。
3. 切⽚,将组织切⽚,2~3微⽶,⽤于测试。
3.1 切⽚机包含⼿动和⾃动,⼿动切⽚机内部通过钢丝绕线,⼿动转动过程进⾏拉伸。
提供2~5微⽶调节旋钮。
3.2 ⾃动切⽚机,原理不详,不排除齿轮⽅案。
只提供特定厚度切换。
4. 上机脱蜡,由于蜡侵⼊组织,反应试剂⽆法进⼊,因此必须先脱蜡后才能反应。
4.1 设置温度80度。
4.2 4分钟清洗⼀次,清洗过程为:加-吹-加。
4.3 由于溶解蜡的液体性能⼀般,需要多次清洗。
5. 抗原修复,甲醛固定时会将位点粘连,导致⽆法与⼀抗结合,因此需要将位点打开,使⽤抗原修复液⾼温修复。
5.1 ⾼压锅⽅案温度达到121度左右,⼿⼯常规⽅式。
5.2 ⼀般采⽤三种⽅式修复:化学⽅法,微波⽅法和加热⽅法。
设备采⽤化学(抗原修复液和加热组合⽅式)5.3 上机95摄⽒度⽅案同121度⽅案偏差不⼤。
5.4 ⼲⽚问题,如果出现⼲⽚,容易导致组织皱缩,影响最后的组织观察。
5.5 ER种类包括三种:PBS(缓冲液,ph7,磷酸盐成分,容易结晶且难以去除,可使⽤84消毒液或冰⼄酸溶解,容易使长菌,5天左右可出现蓝-藻类、深⾊半点-霉菌)、CBS(ER1,ph6)、EDTA(ER2,ph9)6. 添加ER过程中需要补液,由于抗原修复液中含有⽔和特殊物质,⽔沸点低,补液过程特殊物质浓度逐渐增加且残留在玻⽚上,因此需要pbs进⾏单独清洗。