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三七DNA指纹图谱分析赵熙;李艳萍;李顺英;陈黎明;杨小洁;岳淑敏【摘要】目的:对文山三七和广西三七进行DNA指纹图谱的鉴别研究,了解其间遗传变异的大小,并建立三七品种的检定方法.方法:采用RAPD技术.结果:从45个引物中筛选出23个扩增稳定且谱带清晰的引物,共得到211个遗传标记.DNA指纹图谱显示,样品间有遗传差异,具有不同的遗传特征,据此可进行鉴别.结论:RAPD技术可作为三七鉴别的参考方法.【期刊名称】《云南中医中药杂志》【年(卷),期】2006(027)003【总页数】2页(P45-46)【关键词】云南三七,广西田七;RAPD;DNA指纹图谱【作者】赵熙;李艳萍;李顺英;陈黎明;杨小洁;岳淑敏【作者单位】云南省中医中药研究所,云南,昆明,650223;云南省中医中药研究所,云南,昆明,650223;昆明医学院,云南,昆明,650031;云南省中医中药研究所,云南,昆明,650223;云南省中医中药研究所,云南,昆明,650223;云南省中医中药研究所,云南,昆明,650223【正文语种】中文【中图分类】R2三七系五加科人参属植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H的干燥根茎，具有活血化瘀、消肿定痛等功效。
三七是我国人工栽培较早的名贵中药材，已有400余年的栽培历史，三七的主产区是云南文山州，在广西靖西有少量种植。
我国学者已对三七中的化学成分进行了较为系统的研究，从三七中分离到的皂甙、黄酮、多糖等多种活性成分，并发现不同产地、不同时间收获的三七多糖和皂甙的含量不一[1～2]。
为了研究三七各成分含量的变化的生物学规律，对三七的质量进行综合评价，基于PCR技术的DNA指纹图谱在中药品质研究上的稳定性和重现性，我们用RAPD技术对不同产地三七的DNA图谱进行分析。
1.1 实验材料本实验选用云南文山三七和广西靖西产的三七。
1.2 仪器与试剂 PCR仪：Biometr；紫外透射反射仪：上海康华生化仪器制造厂，ZF型；引物：30个,上海生工生物工程技术服务有限公司；Taq酶：TaKaRa(N1202-7)。
三七药材高效液相色谱指纹图谱的研究张迅杰;赫军;柳芳;刘志燕;梁莹莹;张淑君;张相林【摘要】目的:建立三七药材的色谱指纹图谱.方法:采用高效液相色谱法分析,色谱柱为Kromasil-C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水,梯度洗脱,柱温25℃,流速0.9ml/min,分析时间75 min,检测波长203 nm.测定对照药材和10个批次三七药材的色谱图,确立标准图谱.结果:将10个批次三七药材图谱和三七对照药材图谱进行对比,标定了39个共有峰,指认了其中6个主要色谱峰,10个批次三七药材的相似度在0.755～0.963之间.结论:该分析方法的稳定性、精密度、重现性较好,为三七药材的质量控制提供了依据.%OBJECTIVE:To establish the chromatograph fingerprint of Panax notoginseng.METHODS:HPLCanalysis was carried out on a Kromasil-C18 column(250mm×4.6mm,5μm)with the mobile phase consisting of acetonitrile-0.1％phosphoric acidin gradient mode,and the column temperature was kept at 25℃ and flow rate was 0.9 ml/min,the analytic time was 75 min with detection wavelength of 203 nm.10 batches of samples and control medicine herbs were determined to establish the standard HPLC fingerprint of Panaxnotoginseng.RESULTS:After comparing 10 batches of samples with control medicine herbs fingerprints,there were 39 common peaks in the fingerprints of 10 samples,six of which were identified.The similarity of 10 batches of Panax notoginseng samples were 0.755-0.963.CONCLUSIONS:The method was in good reproducibility,precision and stability.The present research provides new evidence for the quality control of Panax notoginseng.【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2017(017)006【总页数】3页(P725-727)【关键词】三七;高效液相色谱法;指纹图谱【作者】张迅杰;赫军;柳芳;刘志燕;梁莹莹;张淑君;张相林【作者单位】中日友好医院药学部,北京100029;北京中医药大学中药学院,北京100029;中日友好医院药学部,北京100029;中日友好医院药学部,北京100029;中日友好医院药学部,北京100029;北京中医药大学中药学院,北京 100029;中日友好医院药学部,北京100029;中日友好医院药学部,北京100029;中日友好医院药学部,北京100029【正文语种】中文【中图分类】R927三七是五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F．H．Chen的干燥根，是我国名贵的传统中药，主产于云南、广西等地。
中药指纹图谱的研究概况中药指纹图谱是一种综合的、可量化的色谱鉴定手段，主要通过获得具有指纹意义的特征组分，以达到对药材饮片或成方方剂内含物质群的整体进行控制的目的。
本文对指纹图谱的基本特性、在中药研究中的应用及发展前景进行了综述。
【关键词】指纹图谱中药研究综述1 中药指纹图谱的概念谢培山先生对中药色谱指纹图谱给出了以下定义[1]:中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的色谱鉴定手段。
借以鉴别真伪、评价原料药材，半成品和成品质量均一性和稳定性。
其基本属性是“整体性” 和“模糊性”。
模糊性强调的是对照样品与待测样品指纹图谱的相似性，而不是完全相同，整体性是强调、比较色谱特征的“完整面貌”，而不是将其“肢解”，这样才能在不同环境的样品色谱中搜索和提取与该药材指纹图谱整体“面貌” 相关的特征，加以鉴别。
所以说色谱特征的整体性及模糊性是中药色谱指纹图谱(图像)分析的最基本的属性。
这种属性是来源于中药作为天然产物本身的“不确定性(uncertainty)”，因为‘Nature never repeats itself'，何况植物的后生代谢产物受环境影响带来的变异。
而带有不确定性的事物不能用解决确定性(certainty)事物的思维和方法来处理。
所以分析色谱指纹图谱强调的是“准确的辨认(accurate recognition)” 而不是“精密的计算(precise calculation)”;较图谱强调的是相似(similarity)而不是“相同(identical)”。
2 中药指纹图谱的基本特征中药指纹图谱是一种综合的可量化的分析手段，中药指纹图谱的三个基本特征是系统性、特征性和稳定性。
2.1 中药指纹图谱应具有系统性系统性是指指纹图谱反映了中药有效部位所含主要成分的种类或指标成分的全部。
2.2 中药指纹图谱应具有特征性特征性是指指纹图谱中反映的化学成分信息是具有高度选择性的，这些信息的综合结果，将能特异地区分中药的真伪与优劣，成为中药自身的“化学条码”，也称为专属性。
人参、西洋参及三七参指纹图谱鉴别翟为民<，袁永生=，周玉新=，高霞=，魏璐雪=（</国家药典委员会，北京<>>>?<；=/北京禾普康天然药物技术开发有限公司，北京<>>>@A）［摘要］目的：对人参、西洋参和三七参进行指纹图谱研究。
方法：B&,#+1%;<@7C，乙腈7水梯度脱，流速</D!,・!1$E<，检测波长=>A$!。
结果和结论：A种参的皂苷类成分均得到很好分离，该法可有效鉴别人参、西洋参和三七参。
［关键词］人参；西洋参；三七参；总皂苷；高效液相色谱［中图分类号］F=@=/G<>/A<［文献标识码］H［文章编号］<>><7D A>=（=>><）>G7>I@<7>A五加科人参属植物人参、西洋参和三七参均为我国名贵药材，收载于《中国药典》（=>>>年版），广泛应用于临床。
人参、西洋参、三七参的鉴别方法有经典的显微法［<］、薄层色谱法［=］、高效液相色谱法［A］以及去氧核酸（J K C）指纹鉴定（为基础的B;F分子生物学技术和基源鉴定法）［I］等。
文献［A］中其流动相中加入缓冲溶液，经L M B7B C N;<@柱净化，样品预处理及实验后处理操作繁锁，且样品净化后其皂苷类含量及组成都发生了变化，所得结果不能准确反应原有指纹特征。
我们采用乙腈7水梯度洗脱，样品无需净化，A种参的皂苷类成分均得到很好分离。
1仪器与试剂C81,"$*<<>>液相色谱仪，J C J检测器。
药材：人参-)+)./$+%,+/;/C/O"P/（产地吉林），西洋参-)+).0*$+0*,123$+Q/（产地加拿大），三七-)+).+2’2/$+%,+/（H5+3/0/R/;-"$）（产地云南文山），本院中药鉴定教研室李家实教授鉴定。
三七化瘀口服液高效液相色谱指纹图谱的建立江国华;黄健;陈淑映【摘要】目的：探讨构建三七化瘀口服液指纹图谱的技术要点及检测条件，建立能反映该制剂整体特征的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱质量评价方法，为提高制剂质量稳定性和保证临床用药的安全有效提供依据。
方法色谱柱为Shim－pack VP－ODS柱（250 mm ×4.6 mm，5μm），流动相为（A）乙腈－（B）0.05%磷酸水( pH=5，梯度洗脱)，流速为1 mL/min，检测波长为203 nm，进样量为10μL。
结果10个不同批次样品的相似度均在0.9~1.0间。
结论该色谱图可作为三七化瘀口服液指纹图谱，用于三七化瘀口服液的质量评价。
%Objective To investigate the fingerprinting techniques and detection conditions of Sanqi Huayu Oral Liquid,build an HPLC fingerprint quality evaluation method to reflect the overall characteristics of the preparation in order to improve the quality of prepara-tion and stability,and provide basis for the safety and effectiveness of clinical medication. Methods The chromatographic column was Shim-packVP-ODS column(250 mm × 4. 6 mm,5 μm);mobile phase was(A)acetonitrile-(B)0. 05% phosphoric acid water(pH=5, gradient elution),the flow rate was 1 mL/min,the detection wavelength was 203 nm;the injection volume was 10 μL. Results By cal-culating the similarity,the similarity of the 10 batches of samples were between 0. 9-1. 0. Conclusion The chromatographic diagram can be used as the fingerprintof Sanqi Huayu Oral Liquid,and to evaluate its quality.【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2016(025)008【总页数】4页(P69-71,72)【关键词】三七化瘀口服液;指纹图谱;高效液相色谱法【作者】江国华;黄健;陈淑映【作者单位】广东省佛山市中医院，广东佛山 528200;广东省佛山市中医院，广东佛山 528200;广东省佛山市中医院，广东佛山 528200【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R286.0三七化瘀口服液为我院中医骨伤科的优良验方，由三七和延胡索经醇提浓缩后调配分装而成，具有活血化瘀、消肿止痛、舒筋通经、强身健体的功效，经多年临床实践证明，对跌打损伤、各种血症、痛症等症疗效显著[1－2]。
收稿日期:2002-07-15三七药材指纹图谱研究高增平,陆蕴如,王宝华(北京中医药大学中药学院,北京100029)摘要:目的:应用HPLC法制定三七药材指纹图谱检测标准。
方法:Nova-PakÒC18分析柱,乙腈-水梯度洗脱,流速110ml P min,检测波长210nm。
结果和结论:建立了三七药材的指纹图谱检测标准,实验方法简便、准确、重复性好。
关键词:三七;HPLC;指纹图谱中图分类号:R28411文献标识码:B文章编号:1005-9903(2003)01-0011-02Studies on the Fingerprint of Radix NotoginsengG AO Zeng-ping,LU Yun-ru,WANG Bao-hua(Beijing University o f Chinese Medicine,Beijing100029China)Abstract:Objective:To study the fingerprints of the radix notoginseng.Method:Nova-PakÒC18column was used, with mixture liquid of acetonitrile and water as mobile phase in a gradient mode.The wavelength of measurement was 210nm.Result and C onclusion:The standard fingerprint of the radix notoginseng has been gotten.The method is simple and reliable.Key words:Radix notoginseng;HPLC;Fingerprint本文按国家药品监督管理局2000年8月关于/中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)的通知0,对10批三七药材进行了指纹图谱测定,建立了指纹图谱检测标准,实验方法的精密度、稳定性、重现性良好,操作简便可行。
比、超声时间对通经草总黄酮收率的影响，实验结果表明乙醇浓度为60 %，料液比为30:1，超声时间为75 min时，分别达到单因素条件下通经草总黄酮收率的最佳水平。
在单因素试验的基础上，以通经草总黄酮收率为指标，根据Box-Behnen中心组合试验设计原理，选择乙醇浓度、料液比、超声时间3个考察因素，设计3因素3水平响应面分析法，确定提取通经草总黄酮的最佳工艺：乙醇体积为57 %、料液比为34:1、超声时间77 min，通经草总黄酮收率达10.19 %。
与传统提取工艺相比，提高了通经草总黄酮收率，为通经草的开发及利用提供了理论依据。
参考文献[1] 莎日娜. 蒙药通经草的化学成分研究[D]. 呼和浩特: 内蒙古医学院, 2008: 1-38.[2] 青海省药品检验所, 青海省藏医药研究所. 中国藏药: 第1卷[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 1990: 335.[3] 张晓文. 通经草总黄酮含量及抗炎作用研究[J]. 商洛学院学报,2015, 29(4): 56-58, 79.[4] 张蕾, 孙丹丹, 孔冬梅. 响应面法优化冻绿果实黄酮提取工艺[J]. 山西大学学报（自然科学版）, 2019: 1-10.[5] Zhang H F, Yang X H, Wang Y. Microwave assisted extractionof secondary metabolites from plants: Current status and future directions[J]. Trends Food Sci Tech, 2011, 22(12): 672-688. [6] 张黎明, 李瑞超, 郝利民, 等. 响应面优化玛咖叶总黄酮提取工艺及其抗氧化活性研究[J]. 现代食品科技, 2014, 19(4): 233-239.三七药材HPLC指纹图谱的优化研究袁振海，贾婵媛，陈彬合*（山东省药学科学院，山东济南 250101）摘要：目的建立、优化三七的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，结合主成分分析（PCA）和聚类分析（CA）对不同产地、批次的三七药材质量进行比较研究。
312 本方法精确度高,回收率良好。
样品溶液在24h 内基本保持稳定,可准确用于样品的含量测定,较现采用之卫生部标准及现行之美国药典方法简便、精密、结果准确。
试验结果令人满意。
参考文献〔1〕中华人民共和国卫生部1卫生部标准W S-328(X-256)-981〔2〕The U nited Stated Phar m acopeial Conventi on Inc.The U nited Stated Phar m acopeia241三七指纹图谱的研究潘馨1 郭素华2(11福建省药品检验所 福州;21福建中医学院 福州 350001)摘要:目的 应用RP2H PLC(DAD)对三七药材进行指纹图谱研究。
方法 用N ova2pakC18(250mm×416mm,4Λm)色谱柱,乙腈2水梯度洗脱,检测波长为203nm。
流速均为112m l・m in-1。
结果 指纹图谱中对三七各皂苷类成分均有较好分离。
结论 该方法简便,准确,重现性好,可作为三七具有专属性的指纹图谱。
关键词:三七;H PLC;指纹图谱中图分类号:R927111;R926 文献标识码:A 文章编号:100623765(2002)0520047202S tudi es on the F i nge rpri nt of Radi x notogi nsengPAN Xi n1,GUO su2hua2(I ns titute fo r D rΛg Contro l Fuzhou 350001;21Fuji an Chi ne ss M e d i ca l Uni ve rs ity Fuzhou 350003)ABS TRACT:OBJECTI VE A F ingerp rin t of R adix no togin seng has been studied byH PL C(DAD).M ETHOD S N ova2pakC18co lΛm n w as used,w ith m ix tures of A ceton itrile and w ater as mobile phase in a gradien t mode. T he w avelength w as203nm.T he fl ow rate w as112m l・m in-11RESUL TS A cco rding to the ch rom atograph ic conditi on,a good fingerp rin t of R adix no togin seng has been described1CONCL USI ON T he m ethods is si m p le. accurate w ith good rep roducibility,It m ay be p ractical value fo r the quality con tro l of sa mp le fo r R adix no togin seng.KEY W ORDS:R adix no togin seng;H PL C;F ingerp rin t 三七为五加科植物三七Panax no togin seng (Burk.)F.H的干燥根,中国药典三七中已有薄层扫描法对其中人参皂苷R g1,R b1含量测定项目,但尚未见三七指纹图谱标准。
三七中的主要成分为总皂苷,总皂苷中有多种皂苷,有人参皂苷R g1,R b1,R e, R d,三七皂苷R1等,为提高药材质量,促进优质药材规范化生产基地的建立,我们对三七总皂苷类成分进行指纹图谱研究,实验证明该方法可操作性强,重现性好,可作为三七的指纹图谱。
1 仪器与试剂A gilen t1100高效液相色谱仪;M I L L IPO KE纯水器。
人参皂苷R g1,R b1,三七皂苷R1(中国药品生物制品检定所),三七样品(经福建省药品检验所鉴定为panax no togin seng(Burk.)F.H),乙腈、甲醇为色谱纯。
其余试剂为分析纯。
2 色谱条件色谱柱:N ova2pakC18(250mm×416mm,4Λm)色谱柱。
检测波长为203nm;乙腈2水梯度洗脱,检测波长为203nm。
流速均为112m l・m in-1,分离结果(见图1)。
图1 三七的H PLC图谱3 实验方法与结果311 对照品溶液的制备 精密称取对照品人参皂・74・Strait Phar m aceutical Journal V o l14N o.52002苷R g 1,R b 1三七皂苷R 1适量,加甲醇制成每1mL 含1m g 的对照品溶液。
312 供试品溶液的制备 精密称取三七粉末(样品来源见表1)lg ,精密加入甲醇50mL ,称重,超声提取30m in ,放冷至室温,补足失重,摇匀,滤过,精密量取续滤液20mL ,回收甲醇至干,残渣用水10mL 溶解,用水饱和的正丁醇提取5次,合并提取液,蒸干,残渣加水1mL 使溶解,加入D 101大孔树脂(5g ,115c m )柱内,用100mL 水洗脱,弃去水液,再用70m l 乙醇洗脱,蒸干,残渣用甲醇适量溶解,置5mL 量瓶,用甲醇定容,摇匀,过0145Λm 微孔滤膜,即得供试品溶液。
表1 不同地区三七的来源及规格编号来源及规格 11云南60头21云南30头31云南120头41广西30头51广西60头61广西120头71四川60头81四川120头91四川无数头101市售313 系统适应性 为考察组分的分离度,用混合对照品进行色谱分析,其色谱峰的分离度R 12R g1及R g12R b1分别为4118和20110。
314 精密度度试验 取上述对照品溶液10Λ1,连续重复进样5次,测得各峰峰面积积分值,计算样品中主要色谱峰的相对保留时间,相对峰面积,结果:相对保留时间R SD 均小于1112%,相对峰面积R SD 均小于0182%。
315 重复性 称取三七样品6份,按上述供试品溶液制备方法,以人参皂苷R g 1峰为参照,计算6次试验测定图谱中主要色谱峰的相对保留时间和相对峰面积,计算,相对保留时间R SD 均小于2105%,相对峰面积R SD 均小于2195%。
316 样品测定结果 为了考察方法的可行性,对10批样品进行指纹图谱的比较,结果(见表2)。
表3 三七指纹图谱共有峰的峰面积峰号样品1样品2样品3样品4样品5样品6样品7样品8样品9样品101110811120188119201361198212501870143015522R 11918520121171531915618132161991815920115211361716332Rg 1100100100100100100100100100100411381116115311161119117811461166111811395111611421124115211432118921110116362R b14811546132411364213644136481724911547118471464618273176315931483112318131873112315731773144821182178214521692177218221462146216621159211421592111210021592143214921222153214610121181218818116181591814415132101631014612145131651131683112311531823152315731292199217821461221832156217821192155215121772158214921661321442143221712174221562146218821753 讨论411 共有峰的确定 在10份样品的指纹色谱图中,其相对保留时间及色谱峰较稳定的峰有11个,确定三七共有峰为1,2,3,4,5,6,7,8,9,11,12号峰。
用此指标考察三七药材的质量。
412 定量分析依据中国药典2000年版一部规定,以人参皂苷R g 1,R b 1为定量指标,二者总含量应不得低于318%,对10批样品测定结果,其含量均符合药典规定。
三七药材应符合含量测定及指纹图谱两项质量标准。
413 在实验中要求同时做试剂空白试验,以帮助准确识别共有峰。
参考文献〔1〕中华人民共和国药典委员会编1中国药典一部,2000年版;101〔2〕潘馨1薄层扫描法测定三七中人参皂苷Rg 1,Rb 1的含量,中草药,1999,(30):1031〔3〕潘馨1薄层扫描法测定片仔癀中人参皂苷Rg 1。
中草药,1995(28):53612003年《中文科技资料目录・中草药》征订启事《中文科技资料目录・中草药》为国家科技信息检索体系的刊物,以全面、系统、准确、迅速报道中草药文献题录,为读者提供准确、便捷的检索途径为办刊宗旨,是目前报道中草药文献最全的印刷本检索工具。
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