耐亚胺培南的铜绿假单胞菌的研究
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１１ 资料 ．
一
（） 株 ： １菌 收集 自 ２０ Ｏ ５年 １ ｌ 至 ２月本 院 ＶＴ Ｋ ＩＥ
２２ 改 良三维试验结 果 ：
金属酶 占 ２ ．％。 ２７
３ 仪检出的耐亚胺 培南 铜绿假单 胞 菌 ２ ２ ２株。铜绿 假单
胞菌标准菌株 Ａ Ｃ ７５ 一株 ；２ 药敏纸片 ｌ Ｔ Ｃ２８３ （） 头孢 塞肟 、 头 孢 曲松 、 头孢他定 、 亚胺 培南 ；３ ｏ （ ） ｇｍ 基 因扩增试 剂盒 ： 裂
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浙江临床 医学 ２０ 年 ３ ０７ 月第 ９ 卷第 ３ 期
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３９ ・ ４
耐亚胺培南 的铜绿 假单胞菌 的研 究
李 苏娅
铜 绿假单胞 菌是一种临床上常见的医院内的条件致病 菌， 本研究通过对耐亚胺培南铜绿假单胞菌 的耐药分 析 ， 了 解耐亚胺培南 铜绿假单 胞菌 的耐药 机制 ， 以、 ②抑菌 圈光滑完整则为产金属 酶； ②有扩大生长 、 ①抑菌圈光滑 完整则为产金 属酶 以外 的 碳青酶烯酶 ； 、 ① ②抑菌 圈均 光滑完 整则 为膜通 透性 障碍 ；
（） Ｅ 菌株处理 ： ４ Ｐ Ｒ： 挑取少许新分离 的纯菌种置人 内含无 菌 生理盐水（ｏ￣） １ｏ １的离心 管（ ．ｍ ）离 心 １０ ｒｐ ｍｎ弃 上 Ｏ５ １， ５（ ｍ ５ ｉ， ￣
有 ４株菌株 表现为 ｏ ｇｍ 缺失 （８ ８ ； ３ 细胞外 膜主动 １． ％） （ ） 外排系统的表达 ；４ 青霉 素结合 蛋 白的改 变 ： 实验 未涉 （） 本
清液 ， 加裂解液 Ａ５ ， 解液 Ｂ ２ 混 匀后置入 ５ ￣保 温 Ｏ 裂 ， ５Ｃ
２３ Ｃ ．Ｐ Ｒ结果
２ 株铜绿假单胞菌 中有 ４ ２ 株为 Ｏ Ｄ缺失 ， ｇ 即
由膜通透障碍引起 占 １ ．％。 ８８
解液 Ａ、 解 液 Ｂ 反 应 液 、 热 酶 、 裂 、 耐 阳性 模 板 ； ４ 其 他 ： （）
９８ Ｅ）Ａ・ ２ Ａ Ｈ Ｏ ）无菌生理盐水 ， ．％（ Ｉ Ｋ ＋Ｎ ２ Ｐ ４ ， Ｔ Ｍ—Ｈ平 板 ， 血
３ 讨 论
干后于平板 中央贴 上亚胺 培南纸 片 ， 纸片 ２ｒ 距 ｒｎ处分别 成 ￣
１０打 ２个宽 ｌｍ、 ２ｍ的槽 （ ８￣ ａ ａ长 ｅ 标明① ② ）在 ①加酶粗 提 ， 液 ２ｖ、 Ｏａ②加 酶粗提液 ＋Ｅ Ｔ （ ： ）５Ｃ Ｄ Ａ ９ １ ３ ￣培养 ２ｈ后判 断结 ４
亚胺培南是一种新型 的 Ｂ 一内酰胺类抗生素 ， 属碳青酶 烯类， 具有较好的抗 菌活性 ， 且对 Ｂ 一内酰胺酶 稳定 ＿ ， ２ 是治 ｊ 疗假单 胞菌感染 活性最 强的药 物之一 ， 随着 临床 的广泛 但 使用 ， 耐亚胺 培南 菌株 开始 出现 并 日益增 多 ， 严重 限制 了亚 胺 培南 的应用 。铜绿假单胞菌对亚胺培 南耐药常不 是 由单
２４ ２ ． ２ 株铜绿假单胞菌抗菌药物敏感性 统计见表 １ 。
表 １ ２ 铜绿假单胞 菌的抗菌药物敏 感性统计 ２ 株 抗菌药物 敏 感 株数 ％
平板等。
１２ 方 法 （ ） 片扩散 法初 筛 ： ． １纸 将新 分离 的纯菌 种配成 ０５ ｅａ ａｄ密涂于 Ｍ—Ｈ琼 脂平板 （￣ ｍ ）０ ｉ ．Ｍ Ｆｒｎ ｌ （／ ｍ １ｒｎ后于平 Ｉ０ ａ 板中央贴上 Ｅ）Ａ纸片 ， Ｉ Ｔ 纸片分 ２ ： 组为 头孢 塞肟 、 组 １ 头孢 曲松 ， 在距离 Ｅ）Ａ纸 片 ｌｍ处对称分别贴上头孢塞肟和头 Ｉ Ｔ ｃ
用药 。现报道如下 。
１ 资 料 与 方 法
史煜 波
１０ 电压 电泳 ２ ～３ｍｎ 出现 与 阳性膜板 分子量相 同的条 ０ｖ ０ ０ ｉ， 带 （９ ｂ ） １３ｐ 即为 阳性 。
２ 结果
．
２ １ 表型初筛结果 ．
同现象 占 ４ ．％。 ５４
２ 株 铜绿假单 胞菌 中有 ｌ 产生协 ２ Ｏ株 ２ ２株铜 绿假 单胞菌 中有 ５株产
因素造成的 ， 目前认 为造成本 菌 耐亚胺 培南 的已知 主要
可能产 Ｂ 一类酰胺酶 ＿ ， ３ 本实验 中由于产金属酶 而耐药的菌 Ｊ
原 因有 ４种 ， １产生 Ｂ内酰胺酶 ： 即（） 据 等报道部分 菌株 株为 ５株（２７ ；２膜通透性 障碍 ： ２ ．％） （） 即其外层 细胞 壁的外 膜蛋 白 Ｄ 是碳青霉烯类抗 生素进入 的通 道 ， ２ 失去特 异性外 膜蛋 白 Ｄ ２导致药物不 能进 入细菌体 内，ｔａｅ ４认为患 Ｓ ｔ 等＿ ａｋ ｊ 者接受过其他 内酰胺 类药 物抗感染 治疗 后 ， 会诱 导铜绿 假 单胞 菌失 去其 膜蛋 白通 道 ｏｒ２ 从 而对 亚胺 培南形 成 耐 ｐＤ ， 药， 本实验 ｏ ｇｍ 基 因扩增结果显示 ：２株铜 绿假单胞 菌 中 ２
管（ ．ｍ ） 一 ０ １５ １中， ８ ℃反复冻 融数次 ， 培养无 菌生长后 于 ４Ｃ ￣ 离心机 ， １ ０ 转／ ｉ 以 ０ ０ ｍｎ离心 ２ｍｎ 取上清液后 一８℃保存 ０ ５ ｉ， ０ 待用 ； ３ 改 良 三 维 试 验 …：将 铜 绿 假 单 胞 菌 标 准 株 （）
Ａ Ｃ Ｔ８３ Ｔ Ｃ ／５ 配成 ０５ ｃａａｄ ．Ｍ Ｆｒ ｎ 密涂于 Ｍ—Ｈ平板 （ ｏ 】） ｌ ＨＩ 待 Ｉ １
孢曲松。另 １ 组为头孢 他定 、 亚胺培南 ， 在距离 Ｅ Ｔ Ｄ Ａ纸片 ｌｍ处分别贴上头孢他定 、 ｃ 亚胺 培南 。３ ￣培 养 ２ｈ后观察 ５Ｃ ４ 结果 。结果判断 ： ①出现协 同现象 可能为产金属 酶 ； ②不出 现协 同现象可能为膜通透障碍或既产金属 酶又有膜通 透障
碍 ；２ 粗提酶（ （） 冻融裂解法 ） 将新 分离 的纯 菌种配成０ ５ ｅ ．Ｍ ． Ｆｒ ｎ ， ５ 于 肉汤 中 ３ ￣培养增菌 ２ｈ后取 ｌ ｌ ａａｄ 取 Ｏ ｌ ５Ｃ ４ ｍ 于离心
