高效液相色谱仪LC3000培训教程

LC3000液相色谱仪操作规程1、首先将色谱仪电源打开，让仪器进行预热。

2、进行样品前处理，以及流动相进行过滤和脱气，过滤流动相时使用溶剂过滤器，有机试剂使用有机膜，水使用水系膜。

过滤完后对其进行脱气处理。

注意脱气处理大概需要15-20分钟左右。

3、甲醇处理完后将其接入液路，然后将P3000泵的放空阀打开，并启动泵让甲醇充满液路，并保证没有汽泡，然后关闭放空阀。

也可借助外力（使用洗耳球或注射器）在放空阀处将液体吸过来再启动泵，这样可以省时间。

走30分钟，停止泵，等待泵没有压力。

换10%甲醇水冲洗30分钟以上。

停泵，等待压力降至0左右。

换流动相冲洗，查看管路中有无气泡，保证没有汽泡的情况下，启动泵。

4、双击CXTH-3000色谱工作站→点击CXTH-3000（中文版）→出现提示，关闭即可；→出现色谱数据处理及仪器控制面板界面。

5、在色谱数据处理及仪器控制面板界面中设置所分析样品的色谱条件，如果使用单泵操作时，先确定所用泵是A泵还是B泵。

点开时间程序中查看有无打［√］,如果有［√］；去掉√为［］。

6、设置参数：6.1在基本控制栏中设置波长（nm) ,然后点击［！］确认。

时间常数、量程切换都为2.［切记开灯不要点］。

6.2设定流速（ml/min): 后点击［！］确认。

6.3设定最小压力为0，最大压力为35，如果数据已经符合，就不要改动。

6.4确定管路有无气泡，如果没有气泡，点击电脑上的第一个绿色图标（启动图标）7、做样品之前，保证仪器先用色谱甲醇走30分钟，采集基线。

把满屏量程改至100，其他参数不变。

查看基线走直后，停止采集，进样。

8、如果分析的样品流动相中含有酸、盐，必须用甲醇：水（10:90）及（20:80）的甲醇水过渡40分钟左右。

即先用色谱纯甲醇走基线30min，停止泵，换上甲醇水走基线40min,再停止泵，更换为流动相。

注意：没走一步都要先确认管路中有无气泡后，才能启动泵。

9、等待流动相基线走直后方可进样，所进样品必须用0.45μm有机系滤头过滤。

Ultimate 3000型高效液相色谱仪自主操作培训教材福州大学测试中心2018年9月第一部分Ultimate 3000型高效液相色谱原理和仪器配置一、液相色谱原理简介1、色谱法起源色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

2、液相色谱法的分离原理溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相(stationary phase)时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

英文为High Performance Liquid Chromatography，简称为HPLC。

3、HPLC分离模式包括反相模式 (RP-LC)；正相模式 (NP-LC)；离子对色谱 (IPC)；离子交换色谱 (IEC)；体积排阻色谱 (GPC/GFC)；亲和色谱（AC）等。

其中，反相和正相模式又属于液液分配色谱。

•流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。

正相与反相的出峰顺序相反；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。

C-18柱（常用反相柱）。

4、HPLC与经典液相色谱方法以及气相色谱（GC）方法的比较4.1 HPLC与经典液相色谱方法比较高速：HPLC采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。

高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。

可以在数分钟内完成数百种物质的分离。

高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g, 荧光检测器——10-11g。

1.目的规范LC3000N型液相色谱仪开关机注意事项，正确使用仪器，保证检测工作顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。

2.适用范围适用于LC3000N型液相色谱仪3.职责3.1使用人员：按照本作业指导书，正确对仪器使用、维护，做使用登记。

3.2保管人员：负责对仪器进行定期维护、保养。

3.3设备管理员：负责仪器综合管理。

4.操作规程4.1打开计算机。

4.2打开LC3000各部分（P3000泵、UV3000检测器等）电源。

4.3待检测器和泵自检完成后，双击打开CXTH-3000（中文版）工作站软件图标。

4.4将入液管放入到过滤超声好的流动相中（A泵为乙腈B泵为水，原则上两月互换一次）。

4.5拧开排空阀，将泵冲洗流量设定3ml/min。

点击泵面板上PURGE键。

此时泵开始运行冲洗功能。

直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。

再按PUMP/STOP键停止冲洗。

4.6关闭排空阀，打开工作站上控制面板中泵和检测器，设置流速、设置工作站上控制面板中时间程序。

4.7点击工作站上采集基线图标，点击执行首行，观察基线稳定情况。

4.8点击停止采集，进样扳阀，触发工作站采集谱图。

4.9保存谱图到指定位置。

4.10谱图处理和谱图校正。

4.11打印报告。

4.12实验结束前，用纯乙腈或者其他纯有机相清洗系统。

4.13关闭工作站和仪器电源5.日常维护及注意事项5.1一定要在保证抑制器内有水流通时再开抑制器电源否则抑制器将烧毁5.2色谱柱切忌用大量清水冲洗否则会冲毁色谱柱5.3色谱柱用淋洗液保存，不须用水冲洗5.4色谱柱、抑制器长时间不用需卸下，并用死堵头堵上第1页共2页6.期间核查正常状态下，半年进行一次期间核查。

当仪器处在超出规定环境条件（恶劣条件或容易产生漂移情况）下工作或工作频次超出规定的限度后或发生漂移，对仪器设备的计量特性产生一定的影响时,进行期间核查。

核查项目及方法如下：6.1基线噪声和基线漂移核查将衰减置于最灵敏档，用零位调节器调节，使输出信号在记录器或积分仪的中间位置，待基线稳定后，记录半小时，测量并计算基线噪声和基线漂移，根据计量检定证书、检测项目依据的标准、仪器说明书判断是否合格。

LC3000高效液相色谱仪的操作规程一、仪器组成P3000泵、UV3000检测器。

※所有仪器必须接有稳压器并确保接地。

二、泵参数设定1.打开泵开关2.移动光标至run and calibrate ，按Enter进入，再将光标移动到pressure calibrate , 打开放空阀，按Enter。

执行压力校准。

3.光标移动到system setting 按Enter 进入，对P（MAX），P（MIN），PURGE FLOW分别进行设定。

完成后按Enter。

4.按PURGE启动泵。

三、检测器参数设定1、打开检测器开关2、按“入”键输入检测器波长值后按“ENTER”确认四、工作站设定1. 在计算机桌面上双击CXTH-3000色谱工作站（中文版）图标2. 点击文件菜单拉出一下拉菜单,点击工作目录弹出一对话框, 点击一文件夹后点击确定即可.3. 点击选项图标, 弹出对话框点击命名栏后命名一文件名.4. 点击谱图采集图标，即采集信号。

在采集过程中可点击谱图参数框,在满屏时间和满屏量程内改变数值来观察图谱5. 若谱图采集基线走直后点击停止图标，弹出一对话框点击取消即可.五、测定操作1.用注射器抽取3~4倍定量管的样品，无气泡。

2.匀速进样后快速扳阀3. 快速点击采集图标此时工作站界面开始采集。

4. 在采集过程中可点击谱图参数框在满屏时间和满屏量程内改变数值来观察图谱5. 若谱图采集完后点击停止图标，弹出一对话框, 命名一名字后点击保存即可将谱图停止并保存6.若仍进样，可重复操作第1-5步。

六、关机操作2.关闭泵、检测器电源。

七、图谱处理1. 在工作站左侧工作单内双击选择一要处理的图谱。

2. 在谱图参数框内，点击谱图高级处理参数栏在最小峰面积和起始峰宽水平栏内输入数值3. 点击再处理即可对谱图处理4. 点击定量计算图标5. 点击定量结果框即可看到峰面积及其他一些峰信息6. 点击打印图标即可将报告打印出来。

1.试验完成之后，选用合适溶剂对柱子进行清洗。

RIGOL-L3000高效液相色谱仪1.目的：明确RIGOL-L3000高效液相色谱仪使用及维护保养。

2.范围：本规程适用于RIGOL L-3000高效液相色谱仪使用及维护保养。

3.职责：仪器操作员对本操作规程负责实施，QC主管、质量部长负责监督。

4.操作环境：电压：220V±10% 频率：50~60HZ 温度：20～30℃；相对湿度<80％；远离高电磁干扰、高振动设备，有良好的通风设施，避免仪器处于强对流空气环境下。

5.内容：5.1 准备：5.1.1配制所需的流动相(HPLC级)，用对应的0.45μm微孔滤膜过滤，超声脱气20min；5.1.2准备系统清洗液。

5.1.3配制样品和标准溶液，用对应的0.45μm针式过滤器过滤。

5.1.4根据相应的检测方法更换合适的色谱柱(注意方向)。

5.1.5检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否正确连接，废液管和废液瓶是否接好。

5.2依次开启L-3000各模块电源，打印机、电脑显示器与主机电源。

开通电源后仪器将进行自检，待自检结束后，运行RIGOL色谱工作站软件。

5.3更换流动相，排气泡：5.3.1将对应的滤杯放入装有少量新流动相的烧杯中；5.3.2逆时针转动泵的排液阀旋钮90°～ 180°以打开排液阀；5.3.3用针筒连接放空阀排液管，抽尽泵头内的空气，直至管线内无可见‘气柱’；5.3.4打开设备监视器界面,点击“清洗”，将流速设置为5mL/min，冲洗2分钟；5.3.5排完空气后，将排液阀顺时针旋转拧紧，关闭排液阀。

5.4 开启在线清洗：打开在线清洗，设置清洗速度为中速，用10%异丙醇水溶液清洗泵头。

5.5方法设置5.5.1 通过RIGOL色谱工作站选择所需的使用方法。

如需新建方法，依次设置仪器各组件、积分和校正等参数，然后保存并发送方法；5.5.2 点击“发送方法”，系统将自动开始平衡。

5.6 平衡系统5.6.1检查管路连接、柱接头及系统各处是否漏液，如漏液可按各组件相应的手册指导予以排除。

LC3000液相色谱仪操作规程一、仪器和试剂准备1.确保LC3000液相色谱仪处于稳定的电源供应状态。

2.检查仪器的运行状态，确保漆面、玻璃器皿和连接管道均无损坏。

3.校正色谱仪的移液器，并确保移液器能够正常工作。

4.检查分析柱的状态，确保柱是干净的，并根据需要准备好相应类型和规格的分析柱。

5.检查色谱仪的溶剂储存器，确保溶剂剩余量足够。

二、样品准备和进样1.准备样品溶液，根据分析需要选择合适的溶剂，并按比例配制好样品溶液。

2.超微量进样模块的试剂架和样品架清洗干净，并确保试剂架和样品架上无残留的试液。

3.通过固定时间进样或体积进样设置进样模式，并根据需要设置样品进样量和流速。

4.将样品溶液注入进样模块，调整进样量和流速，确保样品能够顺利进入分析柱。

三、色谱柱和流动相分析1.打开色谱仪软件，选择合适的分析方法。

2.设置流动相的组成和梯度条件，根据分析需要设置好流变条件。

3.打开色谱柱和色谱仪的阀门，启动流动相泵，确保流动相能够正常循环。

4.监测流动相的压力和流速变化，确保流动相能够保持稳定的压力和流速。

5.根据色谱图和设置的分析方法，分析样品中所含的化合物。

四、数据分析和结果处理1.根据色谱图和峰面积计算定量分析结果，如果需要可以导出数据报告。

2.根据数据结果进行结果分析和对比，确保分析结果的准确性。

3.对分析结果进行整理和归档，保存相关实验记录，并做好数据的备份工作。

五、仪器的保养和维护1.在使用完毕后，保持仪器的干净和整洁。

2.定期检查仪器的各个部件，维护和更换损坏的零部件。

3.定期校正仪器的性能，确保仪器的准确性和稳定性。

4.清洗和保养色谱柱，确保色谱柱的使用寿命和分离效果。

六、安全注意事项1.在操作过程中，严禁接触有毒和腐蚀性试剂，必要时戴好防护手套、口罩和护目镜。

2.操作过程中注意实验室的通风情况，避免有害气体的积累。

3.在更换试剂和溶剂时，要小心操作，避免溅洒和皮肤接触。

4.注意电源的安全使用，确保仪器正常工作，避免电源过载和短路。

1_LC3000系列高效液相色谱仪标准操作规程（初稿）LC3000系列高效液相色谱仪标准操作规程一目的规范LC系列高效液相色谱仪的操作和维护。

二适用范围该操作规程仅适用于皖仪LC3000系列高效液相色谱仪的使用及维护操作。

三仪器组成LC3000高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、柱温箱、色谱柱、检测器、色谱工作站及相关组件构成，实际配置以用户现场为准。

四操作环境电压：220V±10% 频率：50~60Hz 温度：20℃~30℃相对湿度：≤75% 远离电磁干扰和高振动设备；防止仪器放置在阳光直射和空调设备直吹位置；保持实验室良好通风。

五操作程序1.准备流动相：液相用水必须是超纯水；所用液体试剂为HPLC级；固体试剂最好为优级纯；配制好的流动相需经0.45μm的微孔滤膜过滤，并超声脱气15min以上。

清洗液：系统配置自动进样器，测试前需要补充清洗瓶中的清洗液，清洗液也需要过滤并超声脱气。

制备测试用对照品和供试品，注入系统前需用0.45μm的滤膜过滤。

根据测试方法查看流动相是否与高压泵输液管对应，二元高压梯度注意识别A泵和B泵，四元低压梯度系统注意识别A、B、C、D四个通道。

选择合适的色谱柱，并按照色谱柱上标注的方向正确安装。

检查仪器各个模块的电源及管路是否安装正确2.开机分别开启仪器各个部分的电源开关，并打开计算机。

仪器自检结束后，运行Cactus色谱工作站。

打开“采集”界面中的仪器控制，查看仪器各个模块是否联机正常。

3.更换流动相、排气取小烧杯倒入适量的流动相，将对应管路的滤头浸入烧杯中的流动相中，轻轻搅拌洗去滤头原来残留的溶剂；将清洗好的滤头放入流动相瓶中，逆时针拧开高压泵上的放空阀，点击仪器控制面板中的排空按钮，排空3-5分钟。

二元高压梯度系统点击“启动purge”按钮，四元低压梯度系统点击“purge”按钮后需要选择通道，然后点击“开始”按钮才能启动排空操作。

注意：对于首次安装或者管道内有大量气泡的情况，需要使用注射器辅助排空。