脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒(荧光免疫层析法)产品技术要求

大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用大鼠血清，血浆及相关液体样本中脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)的含量。

试剂盒性能：1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。

2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围：请来电咨询保存条件及有效期：1.试剂盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6个月注意事项：1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。

一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。

如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。

5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物请避光保存。

7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9．本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)水平。

用纯化的大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)，再与HRP标记的脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)呈正相关。

脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒(免疫比浊法)适用范围：用于体外定量测定人血清中脂蛋白相关磷脂酶A2的含量。

1.1 包装规格校准品(选配)：5×0.5mL；质控品(选配)：水平1：1×0.5mL，水平2：1×0.5mL。

1.2 主要组成成分注：校准品靶值、质控品质控范围详见包装标签。

2.1 外观2.1.1试剂1：无色到淡黄色液体，无可见不溶物。

2.1.2试剂2：无色到白色液体。

2.1.3校准品：无色至淡黄色液体，无可见不溶物。

2.1.4质控品：无色至淡黄色液体，无可见不溶物。

2.1.5包装外观:外观整洁，标签字迹清晰，不易脱落。

2.2 净含量液体试剂的净含量不低于标示体积。

2.3 空白吸光度空白吸光度≤1.8。

2.4 分析灵敏度样本浓度为165μg/L时，吸光度差值应≥0.008。

2.5 线性在[10，800] μg/L的范围内，线性相关系数r≥0.990。

测试浓度在[10，200] μg/L时；绝对偏差应不超过±20μg/L；测试浓度在（200，800] μg/L 时，相对偏差应不超过±10%。

2.6 精密度2.6.1 重复性用高、低2个浓度的样本进行测试，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。

2.6.2 批间差用3个不同批次的试剂盒分别测试样本，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于10%。

2.7 准确度回收率应在85%-115%范围内。

2.8 校准品/质控品瓶内重复性校准品/质控品瓶内重复性（CV）应不大于10%。

2.9 溯源性根据GB/T21415及有关规定提供校准品的来源、赋值过程及测量不确定度等内容，校准品溯源至柏定公司内部工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

2.10 质控品赋值有效性测试结果在质控范围内。

2.11 稳定性2.11.1 效期稳定性试剂盒在2℃～8℃密封避光保存条件下有效期为12个月。

有效期满后3个月内测试，应满足2.3、2.4、2.5、2.6.1、2.7、2.8和2.10的要求。

货号：MS2414 规格：100管/48样磷脂酶 A2（phospholipase A2，PLA2）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：磷脂酶A2（EC3.1.1.4）是磷脂sn-2位脂酰基水解酶，广泛存在于动植物组织、细菌、细胞核分泌物中，参与脂肪消化，精子成熟、细胞信号传递、脂质过氧化修复、宿主反应等生理过程，在控制体内磷脂类物质平衡、调节机体新陈代谢、参与疾病的病理进程等方面发挥着及其重要的作用。

测定原理：磷脂酶A2作用于2-硫代十六酰乙基磷酸胆碱（HEPC）产生游离巯基，与DTNB反应生成黄色物质，在412nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：天平、超速冷冻离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。

试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：液体×5瓶，-20℃避光保存。

临用前根据用量每瓶加入1.8mL试剂二充分混匀；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

样品处理：1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g 离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。

2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，10000g离心5min，取全部上清于4℃、100000g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。

3.血清：直接测定。

测定操作：计算公式：第1页，共2页a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下1．按照蛋白浓度计算酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解HEPC产生1nmol游离巯基所需的酶量为一个酶活力单位。

SEA867Hu96T脂蛋白关联磷脂酶A2(LpPLA2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)适用生物：人使用说明书仅供研究使用，不用于临床诊断!第12版[预期应用]本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中LpPLA2含量。

[试剂盒内容]试剂名称数量试剂名称数量96孔板（预包被）196孔板覆膜4标准品2标准品稀释液1×20mL检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mLTMB底物1×9mL终止液1×6mL洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1[需自备的设备及试剂]1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热）2、单道或多道微量移液器及吸头3、稀释样品的EP管4、蒸馏水或去离子水5、吸水纸6、盛放洗液的容器7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2[试剂盒的储存及有效期]1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。

请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。

2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。

注意：试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。

产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。

[标本的采集与保存]1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断植物（Plant）磷脂酶A2（PLA2）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

往预先包被磷脂酶A2（PLA2）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。

用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的磷脂酶A2（PLA2）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。

样品收集、处理及保存方法1.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

2.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。

3000转离心10分钟取上清。

3.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。

从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、3、6、12、24、48U/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2的浓度。

1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=6.5）50mmol/L 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=8.0）50mmol/L 包被鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体的胶乳悬浊液<0.5%1.2.2校准品的组成校准品为液体，校准品组成是在磷酸盐缓冲液中加入含一定浓度的脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

1个水平校准品目标浓度为800ng/mL，浓度有批特异性，具体定值详见瓶签。

1.2.3质控品的组成两水平液体质控品，在磷酸盐缓冲液中加入脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

靶值范围分别为：（90～200） ng/mL、（200～500）ng/mL。

2.1 外观试剂R1为无色至淡黄色澄清液体；试剂R2为乳白色悬浊液；校准品为无色至淡黄色澄清液体；质控品为无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 空白吸光度试剂空白吸光度应在0.2～2.0之间。

2.4 空白限试剂空白限应不大于10ng/mL。

2.5 分析灵敏度测定分析灵敏度：浓度为160ng/mL时，吸光度变化应≥0.01。

2.6 线性测试血清样本，试剂线性在(0，800] ng/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.99；测定结果在(0，200] ng/mL时绝对偏差不超过±20ng/mL；在（200，800] ng/mL范围内的相对偏差不超过±10%。

2.7 重复性试剂盒测试项目重复性CV≤10%。

2.8 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。

2.9 准确度回收实验：回收率在90%～110%。

2.10质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.11校准品溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至脂蛋白相关磷脂酶A2纯品（来源：Sigma；纯度≥95%）。

脂蛋白磷脂酶A2测定试剂盒（胶体金免疫层析法）适用范围：该产品用于体外测定全血/血清/血浆中人脂蛋白磷脂酶A2的含量。

1.1规格卡型1人份、10人份/盒、20人份/盒、50人份/盒。

1.2组成每盒含1/10/20/50人份试纸条、1 份批号卡和1/10/20/50份样品缓冲液。

其中：每人份试纸条包括1份脂蛋白磷脂酶A2检测卡、1支滴管和1包干燥剂。

脂蛋白磷脂酶A2测定卡由样品垫、硝酸纤维素膜（T线包被鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体；C线包被兔抗鼠抗抗体）、金标垫（胶体金标记的鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体）、吸水纸、塑料载板组成。

样品缓冲液每支装定量为3mL/瓶，由0.1%的表面活性剂和0.1mol/L的Tris （pH7.0）溶液组成。

2.1物理性状2.1.1 外观检测卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；材料附着牢固；标签字迹清晰，无破损。

2.1.2 膜条宽度检测卡的膜条宽度≥2.5mm。

2.1.3 液体移行速度液体移行速度应不低于10 mm/min。

2.1.4样品缓冲液样品缓冲液体积应不少于标示值，pH值6.5～8.0。

2.2 空白限空白限应不高于25 ng/mL。

2.3 精密度批内精密度（CV%）应不高于15.0%。

2.4批间差批间差（CV%）应不高于15.0%。

2.5 线性在（0，500]ng/ml的范围内，用线性拟合公式拟合，剂量-反应曲线相关系数应不低于0.990。

2.6 准确度样本回收率应在85%～115%范围内。

2.7分析特异性检测浓度为25ng/mL的游离血红蛋白、25ng/mL的甘油三酯，检测结果应小于25ng/mL。

2.8稳定性将检测卡在4℃～30℃的环境中放置18个月后，取样分别检测2.1、2.2、2.3、2.5、2.6、2.7项，结果应符合各项目的要求。

2.9 溯源性应根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所有校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准信息可溯源至本公司工作校准品，工作校准品与已上市试剂盒比对赋值。

脂蛋白相关磷脂酶A2测定试剂盒（荧光免疫层析法）适用范围：本试剂盒用于体外定量检测人全血或血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）浓度。

1.1 包装规格25人份/盒，50人份/盒，100人份/盒。

1.2主要组成成分2.1 物理性状2.1.1 外观外观应符合如下要求：2.1.1.1 试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰，各组分齐全、完整；2.1.1.2 检测卡应整洁完整、无毛刺、无破损、无污染；2.1.1.3 样本稀释液为透明溶液，无渗漏无沉淀或絮状物。

2.1.2 宽度试纸宽度应≥2.5mm。

2.1.3 移行速度移行速度应不低于10mm/min。

2.1.4 样本稀释液装量液体体积为180μL±3.6μL。

2.2 准确度回收率为85%～115%。

2.3 空白限不高于16ng/mL。

2.4 线性试剂盒的线性范围为 [18，1000]ng/mL，相关系数r不小于0.975。

2.5 重复性用高、低2个浓度水平的样本各重复检测10次，其变异系数（CV）不大于13%。

2.6 批间差用3个批号试剂盒检测同一份样本，变异系数（CV）不大于15%。

2.7 效期稳定性试剂盒在2℃～30℃保存，有效期18个月，取到效期后产品进行检测，检测结果应符合2.1～2.5项要求。

2.8 校准信息的溯源性根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供所用校准品的来源、赋值过程以及不确定度等内容,试剂盒校准信息溯源至企业工作校准品，并与已上市产品比对赋值。

脂蛋白磷脂酶A2 测定试剂盒（化学发光免疫分析法）
2性能指标
2.1外观
外观应符合如下要求：
a)磁珠包被物R1摇匀后应为棕褐色悬浊液；静止久后，棕褐色磁珠沉降于底部，上清液应为无色液体；酶标记物R2应为无色液体，无沉淀或絮状物；校准品应无色液体，
无沉淀或絮状物；
b)试剂盒各组分应齐全、完整，液体无渗漏；
c)中文包装标签清晰，无磨损。

2.2准确度
将具有溯源性的两个正确度控制品进行检测，检测结果与标定浓度的相对偏差在±15% 范围内。

2.3空白限
不大于10ng/mL。

2.4线性
试剂盒在10ng/mL～1000 ng/mL 区间内，其相关系数（r）绝对值不低于0.9900。

2.5重复性
变异系数CV≤15%。

2.6批间差
变异系数CV≤15%。

2.7校准品
2.7.1装量
校准品装量不低于0.5mL。

2.7.2校准品准确度
测定校准品，C1，C2 测定结果的相对偏差在±10%范围内，C0 测定结果的绝对偏差的绝对值不高于10ng/mL。

2.7.3校准品瓶内均一性
校准品C1，C2 瓶内均一性≤8%，C0 的SD≤10ng/mL。

2.7.4校准品瓶间均一性
校准品C1，C2 瓶间均一性≤5%，C0 的SD≤10ng/mL。

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)测定试剂盒（连续监测法）2.性能指标2.1试剂性能指标2.1.1外观2.1.1.1试剂盒应包装完整，各组分齐全，无内容物溢出。

2.1.1.2说明书、标签内容应清晰、完整。

2.1.1.3试剂各组分外观应符合表1 规定。

表 1 试剂各组分外观要求2.1.2装量试剂装量应不小于标示装量。

表 2 试剂标示量要求2.1.3试剂空白吸光度试剂空白吸光度应不大于1.2。

2.1.4试剂空白吸光度变化率试剂空白吸光度变化率（∆A/min）应不大于0.005。

2.1.5分析灵敏度检测浓度200U/L 的样本，吸光度差值（∆A）应不小于0.01。

2.1.6 线性范围：100U/L~1400U/L2.1.6.1在线性范围（100U/L~1400U/L）内检测结果的相关系数r≥0.990。

2.1.6.2（100U/L~200U/L ）范围内，线性绝对偏差不大于±20U/L ；（200U/L~1400U/L)范围内，线性相对偏差不大于±10%。

2.1.7精密度2.1.7.1重复性变异系数应不大于5％。

2.1.7.2批间精密度试剂批间相对极差应不大于6%。

2.1.8准确度相对偏差应不超过±10%范围。

2.2校准品、质控品性能指标2.2.1外观2.2.1.1标签应清晰、完整。

2.2.1.2校准品、质控品外观应符合表3 规定。

表3 校准品、质控品外观要求2.2.2校准品赋值准确度检测值与赋值的相对偏差应不超过±8%。

2.2.3质控品赋值有效性检测值在质控品赋值的范围内。

2.2.4均一性2.2.4.1瓶内均一性：CV值≤5%。

2.2.4.2瓶间均一性：CV值≤6%。