莜麦水溶性蛋白的提取及SDS-PAGE分析
- 格式:doc
- 大小:825.00 KB
- 文档页数:4
向日葵食用蛋白的提取和SDS-PAGE电泳技术研究作者:刘宇新,靳力争,张仲国,鲁福成,苏丽娜来源:《天津农业科学》2012年第02期摘要:以向日葵种子为材料,采用SDS-PAGE电泳技术,以不同电泳条件对23种向日葵食用蛋白进行电泳谱带分析试验,研究不同电泳条件下向日葵食用蛋白的谱带变化,以选择出最佳的电泳条件。
结果显示,最佳试验条件为:按照质量与体积比1∶3的比例用去离子水在4 ℃条件下30 min提取水溶性蛋白。
电泳时,在4 ℃条件下进行,凝胶板厚度1 mm,分离胶浓度8%,浓缩胶浓度5%,电压300 V,加样量控制在10 μL。
关键词:向日葵;种子贮藏蛋白;聚丙烯酰胺凝胶电泳;品种纯度中图分类号:S565.503.2 文献标识码:A DOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2012.02.003Technical Study on the Edible Protein Extraction from Sunflower and Protein Analysis with SDS-PAGE ElectrophoresisLIU Yu-xin1, JIN Li-zheng1, ZHANG Zhong-guo1, LU Fu-cheng1, SU Li-na2(1. Tianjin Horticultural Engineering Institute,Tianjin 300384,China; 2.Tianjin Academy of Agricultural Sciences, Tianjin 300192, China)Abstract: Taking sunflower seeds as materials, with different electrophoretic conditions, 23 kinds of edible sunflower protein electrophoresis band were analyzed by SDS-PAGE electrophoresis, in order to study the variations of electrophoresis protein bands of edible sunflower under different conditions and choose the best electrophoretic conditions. The results showed that optimum conditions were: according to the ratio of weight and volume 1∶3 , deionized water was used at 4 ℃ for 30 min to extract soluble proteins. Electrophoresis was done at 4 ℃ under the conditions of the gel thickness 1 mm, gel concentration of 8%, 5% stacking gel concentration, voltage 300 V, plus sample volume 10 μL.Key words: sunflower;seed storage protein;polyacrylamide gel electrophoresis;varietal purity向日葵种子是优质食用油和优质蛋白质的重要来源之一[1]。
木本植物蛋白提取和SDS -PAGE 分析方法的比较和优化①1谷瑞升 2刘群录 2陈雪梅 2蒋湘宁②1(中国科学院植物研究所 北京 100093)2(北京林业大学森林生物实验中心 北京 100083)摘要 在几种木本植物上对4种常用蛋白提取方法、4种凝胶染色和脱色方法及影响蛋白定量和SDS -PAGE 电泳的因素进行了比较研究,发现:利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少,得到的电泳结果,蛋白条带清晰,数量多;将常规凝胶染色和脱色液中的乙醇改用为甲醇可大大改善染色和脱色效果,获得了没有背景或背景很浅的电泳结果。
通过研究确定了一套优化的适用于木本植物的蛋白提取、定量、凝胶制备、电泳、染色、脱色以及干胶制备的方法。
利用这一优化方法对胡杨细胞盐胁迫蛋白进行了研究,发现了与高水平盐胁迫有关的66kD 蛋白和与盐胁迫和干旱胁迫均有关的28kD 蛋白,获得了满意的蛋白SDS -PAGE 分析结果。
关键词 木本植物,蛋白提取,十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳COMPARIS ON AND OPTIMIZATION OF THE METHODSON PROTEIN EXTRACTION AND SDS -PAGE IN W OODY PLANTS1GU Rui -Sheng 2LIU Qun -Lu 2C HE N Xue -Mei 2JI ANG Xiang -Ning1(Institute of Botany ,The Chines e Ac ademy of Scie nce s ,Beijing 100093)2(Expe rimentalC ente r of Fores t Bi ol ogy ,Beijing Fore st Unive rsit y ,Beijing 100083)A bstract The methods of pr otein extraction and SDS -PAGE were compared and optimized in woody plants .The impr oved steps included modified protein extraction ,substitution of ethanol for methanol in the solution of staining and destaining .Satisfied results were achieved in the application of the optimized method to the protein analysis of several woody plants .66kD protein band related to salt stress and 28kD protein band associated with osmotic stress were obviously showed out in the analy -sis for the suspensivly cultured cells stressed with NaCl of Populus euphratica .Key words Woody plants ,Protein extraction ,SDS -PAGESDS -PAGE (十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)是分析生物体蛋白质常用的方法,其技术多采用Laemmli (1970)分析细菌蛋白的方法。
应用技术 张艳馥等:大豆种子醇溶蛋白提取及SDS-PAGE体系优化收稿日期:2018-10-13基金项目:黑龙江省教育厅科学研究项目(12531755)。
作者简介:张艳馥(1964—),女,副教授,主要从事植物解剖及生理生化研究;E-mail:yanfu710@163.com。
大豆种子醇溶蛋白提取及SDS-PAGE体系优化张艳馥, 车睿棋, 谢明博(齐齐哈尔大学生命科学与农林学院, 黑龙江齐齐哈尔161006)Extraction of Soybean Seed Gliadia and Optimization of SDS-PAGEZHANG Yanfu,CHE Ruiqi,XIE Mingbo摘 要:采用正交试验法对大豆种子醇溶蛋白进行提取,并进行SDS-PAGE体系优化。
结果表明:在所设置的2个提取体系中,提取时间是影响大豆种子醇溶蛋白提取的最大因素,提取温度为影响提取的最小因素;提取体系Ⅰ为大豆种子醇溶蛋白SDS-PAGE较优化体系。
关键词: 大豆种子;醇溶蛋白;提取;SDS-PAGEDOI编码: 10.16590/j.cnki.1001-4705.2019.03.141中图分类号: S 565.1 文献标志码: A文章编号: 1001-4705(2019)03-0141-02醇溶蛋白是存在于植物种子中的一种储藏蛋白,目前对于小麦、玉米、高粱等植物醇溶蛋白的提取及应用研究都有较多的报道[1-3],但对豆类种子醇溶蛋白的相关研究较少。
本实验采用2种不同的提取体系对大豆种子醇溶蛋白进行提取,并进行了SDS-PAGE体系的建立,旨在对豆类作物醇溶蛋白的研究提供参考。
1 材料与方法1.1 实验材料实验材料为垦农16大豆种子,市购。
1.2 实验方法采用2个混合提取体系提取大豆种子醇溶蛋白,每一体系均采用正交试验,设计三水平四因素试验(见表1),提取大豆醇溶蛋白。
提取后采用考马斯亮蓝G 250法[4]测定体系中醇溶蛋白浓度。
燕麦中可溶性膳食纤维(β-葡聚糖)的提取燕麦是世界八大粮食作物之一,也是我围北方各省重要的小杂粮作物.燕麦〔oats〕不但营养价值高,而且医学研究证明,常吃燕麦有降血脂,降血糖和减少心血管疾病的作用.所以美国食品和药物管理局许可在商标或广告上宣传燕麦的降低胆固醇,预防心脏病的作用.国内外科学研究认为,燕麦的保健功能主要归功于燕麦中可溶性燕麦纤维——β-葡聚糖.它是对人体健康十分有益的—种可溶性膳食纤维(SDF), 这种可溶成分在燕麦麸中的含量远高于燕麦胚乳,在燕麦麸中为6.6%~11.3%.在去皮的燕麦粉中为3.0%~5.4%.燕麦麸中的β—葡聚糖含量在4%~10%之间,且可溶部分占65%~90%.由于目前国内对燕麦β—葡聚糖的提取研究不多.大量的燕麦麸仅作为饲料用,经济效益不高.因此积极开展对燕麦麸的深加工利用,进行β—葡聚糖的提取和研究,有着重大的现实意义和良好的应用前景.因此.如果将过去认为是废物的燕麦麸进行深加工利用,对开发保健食品或功能食品具有十分广阔的前景.1 实验方法1.1 原料的预处理1.1.1可溶性膳食纤维物质(β-葡聚糖)的富集提取燕麦中的可溶性膳食纤维或β-葡聚糖,关键是要明确β-葡聚糖位于燕麦籽粒中的部位.国外Wood and Fulcher.《燕麦,化学和工艺》中表明β-葡聚糖主要存在于胚乳细胞壁中,在次糊粉层中大量浓缩.这就说明可以对燕麦经过研磨,将富集可溶性膳食纤维物质(β-葡聚糖)的麸皮分离出来.但在除去胚乳时必须小心防止次糊粉层的胚乳细胞壁过多地随面粉分离出去.1.1.2 研磨燕麦粉燕麦→清理→研磨→燕麦麸皮用布勒试验磨粉机装置对燕麦进行研磨,制成60%的燕麦粉和40%的燕麦麸皮,麸皮中富集β-葡聚糖.1.2 燕麦麸中可溶性膳食纤维(β-葡聚糖)的提取工艺燕麦麸→粉碎→过筛(60目)→加水搅拌提取(调pH9.0,70℃)→离心收集上清液→去蛋白(搅拌下调pH至4.5并静置)→离心收集上清液→醇析(调pH至7.0,80%酒精沉淀)→离心收集沉淀,干燥→β—葡聚糖粗品提取后的物质溶于水,不溶于乙醇.故可以用乙醇进行醇析.1.3 可溶性膳食纤维的定测方法实验中使用可溶性膳食纤维的测定方法.1.4 β-葡聚糖的测定方法:50mg试样中加入1m180%酒精润湿,之后再加入20m1醋酸钠缓冲液(pH5.5),沸水浴溶解;取出后50水浴中恒温10min,加入40Uβ—葡聚糖酶反应1h;冷却到室温,定容至100m1,取0.1m1(两份),加入0.2Uβ—葡萄糖苦酶,50℃反应10min;葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,推算β—葡聚糖含量,由此求得葡聚糖纯度.2 实验结果分析2.1 各因素对β—葡聚糖提取率的影响2.1.1 粉碎粒度对提取率的影响麸皮粒度对提取率有一定的影响,粒度越大,大部分β—葡聚糖尚被颗粒所包裹,不能被提取出来;但粒度太小,澄清困难,粗品中淀粉含量多,色泽不佳.故选择其粒度为40~60目.2.1.2 料水比对提取率影响根据液固萃取基本理论,增大提取液的量将有利于溶质的溶出.但过大的液固比对实际生产过程来说是没有意义的,不仅增加水的消耗及后续的浓缩成本,而且容易导致加工过程中溶质的丢失.本实验研究60℃,pH9.0,提取时间1h条件下,料水比在1:9—1:21之间提取情况.料液比1:91:121:151:20得率3.13.33.43.52.1.3 提取温度对提取率影响液固比,pH,提取时间分别固定为15,7.0,1h,研究提取温度的变化对提取率影响.温度40506070得率1.52.53.24.22.1.4 pH对提取率和色泽的影响在50℃下提取1h,液固比为15的条件下研究pH对提取率影响一般在稀碱条件下进行提取,这是由β—葡聚糖本身的碱溶性质决定的.随着pH的升高,提取率也增加,同时提取液颜色也逐渐加深.选择PH值为9.02.1.5 蛋白的去除麸皮中存在大量蛋白会造成制品纯度不高,选择等电点沉淀法去除蛋白.在搅拌下调pH至4.5并静置,用离心法去除沉淀.2.2 粗品的纯化2.2.1 淀粉的检测准确称取NSP样品0.1g,加水定容至100ml,取一滴于白瓷扳上,加碘液1滴,如碘液不显蓝色,表明样品中不含淀粉,可直接进行纯化.若碘液呈显蓝色,则表明混有淀粉,需进行纯化预处理.2.2.2 纯化的预处理由于在热水浸提过程中,随着淀粉在提取液中的糊化,导致它和多糖一起提取出来,因此有必要在制备过程中用酶法除去淀粉.淀粉的去除效果以碘液与提取液反应所产生的颜色变化作为评判标准,颜色越浅表示淀粉残余含量越低,若无颜色变化,即可认为淀粉已水解完全.将提取液用O.1mol/L Na0H调pH至5.5~6.O,于恒温水浴上加热至92℃,加lml α-淀粉酶溶液恒温酶解,并经常搅拌,酶解过程中淀粉检测,直至没有蓝色为止.二,β-葡聚糖的功能性1,β一葡聚糖降血糖功能:研究结果表明:用含5%燕麦可溶性膳食纤维饲料喂养的实验组大鼠,其血糖含量明显低于对照组,仅为对照组的68.9%.该结果与国外文献相关报道一致.该结果表明:NSP是莜麦中降低血糖的主要有效成份之一,它能使高血糖大鼠体内血糖明显降低.该结果也为阐明莜麦血糖指数最低的原因提供了有益的参考:由于莜麦中所含的NSP是富强粉的9.0倍,大量NSP的存在而使得莜麦粉的血糖指数很低oNSP降低血糖的原因可能是因为NSP的存在增加了胃内容物的粘滞性,使得胃排空延迟,从而防止了爱后血糖急剧上升,同时可镕性膳食纤维进人小肠,又使小肠内不搅水层加厚而降低了糖的吸收,因此阳P具有降低血糖的功能.2 β一葡聚糖降血脂作用β一葡聚糖对高血脂人群有明显的降低胆固醇作用. 可以用四种代谢机制来解释这一作用结果:(1)这种可溶性淀粉在肠道内与胆酸结合,使循环至肝的胆酸量减少.这样,可促使胆固醇分解胆酸,来满足内源代谢和循环的需要.只有一小部分胆固醇与胆酸结合随粪便一起排外,所以,经粪便排除并不是降低胆固醇的主要原因.(2)可溶性淀粉在肠内微生物菌丛的作用下发酵产生短链脂肪酸(SCFAs)——乙酸,丙酸和丁酸.这些SCFAs经过门静脉被吸收,通过抑制HMG—CoA(胆固醇生物分解作用的限速酶)的活力,可以阻止肝胆固醇的合成,提高LDL—C的分解作用.但是,据最新研究结果表明.只有SCFAs之丙酸有作用.(3)可溶性淀粉可以减缓胃的排空,这样可以减少由于多食引起的血中胰岛素的提高.这一作用可以减少通过HMG—COA合成肝胆固醇.(4)燕麦可溶性淀粉可提高肠道内粘度,从而抑制膳食中脂肪的吸收,其中包括胆固醇.当粘度增加后,食物含有过量的水,从而减缓了其运动速度.植物组织蛋白质提取方法方法一:1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
匕云格盒$御蚪二42019,No.6-------------------------------------------------------------------------------------------------------------CEREAL&FEED INDUSTRYdoi:10.7633/j.issn.1003-6202.2019.06.007响应面法优化筱麦蛋白的酶解工艺及酶解物抗氧化活性的研究宁芯",罗志辉2,墨紫梅3,汪磊1,2(1.玉林师范学院化学与食品科学学院,广西玉林537000;2.广西农产资源化学与生物技术重点实验室,广西玉林537000;3.广西-东盟食品药品安全检验检测中心,广西南宁530001)摘要:以蔽麦蛋白为原料,采用响应面分析法优化蔽麦蛋白制备抗氧化肽工艺。
以酶解液的还原能力为指标,研究pH值、加酶量、酶解温度和酶解时间对蔽麦蛋白酶解产物抗氧化活性的影响。
在单因素试验的基础上,采用4因素3水平的响应面分析法优化蔽麦蛋白制备抗氧化肽工艺,同时研究其酶解物抗氧化活性。
结果表明,胰蛋白酶酶解蔽麦蛋白的最佳工艺条件为:pH8.1,加酶量16900U/g,酶解温度55°C,酶解时间2.62h,该条件下制备的筱麦蛋白酶解物具有较好的抗氧化活性。
关键词:筱麦蛋白;抗氧化肽;酶解工艺;响应面法;抗氧化活性中图分类号:TS210.4文献标志码:A文章编号=1003-6202(2019)06-0025-05Optimization of enzymatic hydrolysis technology of naked oat protein and antioxidant activity of hydrolysates-by response surface methodNING Xin1>2,LUO Zhi-hu严,LUO Zi-mei3,WANG Lei1'2(1.College of Chemistry and Food Science,Yulin Normal Universityl,Yulin537000,China;2.Guangxi Key Laboratory of Agricultural Resources Chemistry and Biotechnology2,Yulin537000,China;3.Guangxi-ASEAN Center for Food and Drug Safety Control3,Nanning530001,China)ABSTRACT:The enzymatic hydrolysis technology of naked oat protein and the antioxidant activity of the hydrolysates were studied.Based on the results of single factor tests,reducing power was chosen as the response values,the influences of hydrolysis pH,enzyme dosage,temperature and time for enzymatic hydrolysis were inspected.Box-Benhnken center-united experiment design coupled with response surface methodology was used to optimize the preparation process for antioxidant peptides from naked oat protein.The results showed that the optimal hydrolysis conditions for naked oat protein were as follows: pH8.1,enzyme dosage16900U/g,hydrolysis time2.62h,temperature55°C.On the condition,the naked oat protein hydrolysate have remarkable antioxidant activity.KEYWORDS:naked oat protein;antioxidant peptides;enzymatic hydrolysis;response surface methodology;antioxidant activity影响人体健康的因素中自由基侵害占85%左右,人体通过适当摄入具有抗氧化活性的物质可以降低体内自由基水平,防止脂质过氧化,帮助机体抵御疾病⑴。
SDS-PAGE与分子标记相结合分析宁夏小麦HMW-GS组成与变化特点摘要:高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)是影响小麦品质的重要因素之一。
为了探究宁夏地区小麦HMW-GS组成与变化特点,本文采用SDS-PAGE和分子标记技术对44个宁夏小麦品种进行了分析。
结果发现,宁夏地区小麦的HMW-GS种类丰富,其中1Bx7+1By9具有最高的表达频率,占比达到37.5%。
水平方面,各品种的HMW-GS含量存在一定差异,最高含量为7.48%,最低含量为3.21%。
同时,本研究还发现不同产地、不同年份的小麦HMW-GS组成和含量也存在一定差异,说明小麦品质的影响因素是多方面的。
综上所述,本研究为宁夏小麦品种的选育和产业发展提供了参考和支持。
关键词:SDS-PAGE;分子标记;高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS);宁夏小麦;品质1. 引言小麦(Triticum aestivum L.)作为全球最重要的粮食作物之一,对人类生活和经济社会发展具有重要意义。
而小麦品质的好坏直接关系到食品的口感和营养价值,因此一直是研究的热点之一。
麦谷蛋白是构成小麦种子细胞的主要蛋白质,其中高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)是影响小麦品质的重要因素之一。
HMW-GS是指分子量在60-90 kDa之间的麦谷蛋白亚基,可以形成亚基间的二硫键和非共价键,进而形成高分子量的麦谷蛋白。
HMW-GS的种类和含量都会影响小麦的品质,比如影响面团的弹性、延展性和面包的体积、弹性等。
因此,对HMW-GS进行分析和研究,对小麦品质的提高和优化具有重要的实际意义。
宁夏位于我国的西北地区,干旱少雨,光照强烈,土壤瘠薄,因此小麦品种的选育和生产存在一定的困难。
为了探究宁夏地区小麦品种HMW-GS的组成和变化特点,本研究采用SDS-PAGE和分子标记技术对44个小麦品种进行了分析,并对结果进行了讨论。
2. 材料与方法2.1 材料本研究共选取了44个宁夏地区小麦品种,其中包括北部、中部和南部地区的品种。
莜麦水溶性蛋白的提取及SDS-PAGE分析摘要:以莜麦为实验材料,通过脱脂、水提、盐析和Sephadex G 25凝胶排阻层析等步骤提取莜麦水溶性总蛋白。
通过SDS-PAGE初步分析莜麦的蛋白组成,与黑麦、高粱、薏米水溶性蛋白进行比较,结果表明莜麦蛋白含量较高,具有较高的营养价值。
关键词:莜麦水溶性蛋白黑麦高粱薏米The Extraction and SDS-PAGE Analysis of Water-solubleProtein of Naked oatsAbstract: Using naked oats as the experimental material, extract total water soluble protein of naked oats by degreasing, extraction, salting and Sephadex G 25size-exclusion chromatography. Analyse the composition of the naked oats protein preliminary by SDS-PAGE and compare with the water soluble protein of rye chineses sorghum and barley.The results show that content of naked oats protein is higherand has the high nutritional value.Keywords:Naked oats Water-soluble Protein Rye Cchineses Sorghum Barley莜麦为禾谷类作物,学名裸燕麦。
莜麦原产中国,喜寒凉,耐干旱,抗盐碱,生长期短。
莜麦营养丰富,耐饥抗寒,糖分少,是糖尿病患者较好的食品,脂肪中含有较多的亚油酸,是老年人常用的疗效食品。
水溶性蛋白的提取功能性质测定专业:09生教学号:060109129 姓名:陈苏舒摘要:本文以测定大豆中蛋白质的相对分子质量的为目的,通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法,以大豆为例阐述了实验室测定蛋白质相对分子质量的方法,论证了此方法的可行性极其效果,得出了大豆中蛋白质相对分子质量的多少。
关键词:SDS-PAGE 相对分子质量大豆蛋白质引言:十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate, 简称SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量,是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在实验基础上发展起来的一项新技术。
用这种方法测定蛋白质的分子量具有快速灵便,设备简单等优点。
实验原理:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法:蛋白质的电泳迁移率在一般的电泳方法中,主要取决于它在某pH下所带的净电荷量、分子大小(即分子量)和形状的差异性,而SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对大多数蛋白质,主要取决于它们的分子量,与原有的电荷量和形状无关。
SDS是一种阴离子表面活性剂,在一定的条件下,它能打开蛋白质氢键和疏水键,并按比例地结合到这些蛋白质分子上形成带负电荷的蛋白质-SDS复合物,每克蛋白质一般结合1.4克SDS。
SDS与蛋白质的定比结合使蛋白质-SDS复合物均带上相同的负电荷,其量远远超过蛋白质原有的电荷量,因而掩盖了蛋白质间原有的电荷差异。
在水溶液中,蛋白质-SDS复合物具有相同的构象,近似雪茄烟形的长椭园棒(短轴均为1.8nm,长轴则随蛋白质的分子量成正比变化),克服了蛋白质间原有的形状差异。
这样蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移率不再受原有电荷和形状的影响,而只是蛋白质分子量的函数。
蛋白质分子量与电泳迁移率间的关系可用下式表示:lgMr = K –bm式中Mr为分子量;K为常数;b为斜率;m为迁移率。
因此,用本法测定蛋白质的分子量只需根据待测蛋白质在已知分子量的标准蛋白质的lgMr~迁移率的图中的位置,就能得知分子量。
燕麦分离蛋白的提取及功能性测定李玉娥;王愈;陈振家【摘要】以裸燕麦为原料,采用传统的碱提酸沉法,在料液比为1∶10 g/mL,pH=8.5(碱提)和pH =4.5(酸沉),T=20℃条件下提取燕麦分离蛋白,蛋白提取率为75%,再在不同的pH、离子强度和蛋白浓度条件下,进行燕麦分离蛋白的功能性测定,测定其乳化活性、起泡性、持水性、粘度.结果得出,燕麦分离蛋白在等电点附近时其乳化活性、起泡性、持水性数值最低,离子强度对各功能性指标的影响各不相同,燕麦分离蛋白粘度与其蛋白浓度成正比.【期刊名称】《粮油食品科技》【年(卷),期】2018(026)004【总页数】5页(P31-35)【关键词】燕麦分离蛋白;乳化性;起泡性;持水性;粘度【作者】李玉娥;王愈;陈振家【作者单位】山西农业大学食品科学与工程学院,山西晋中030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西晋中030801;山西农业大学食品科学与工程学院,山西晋中030801【正文语种】中文【中图分类】TS201.1燕麦为禾本科一年生草本植物,属小杂粮,《本草纲目》中称之为雀麦、野麦子。
燕麦主要有两种,分别是皮燕麦和裸燕麦。
裸燕麦成熟后不带壳,俗称油麦,即莜麦,以食用为主,国产燕麦大部分是这种;皮燕麦成熟后带壳,多用来生产饲料。
我国是燕麦的原产地之一,其中莜麦是主要的高寒作物之一,为上等杂粮。
燕麦在中国种植历史悠久,遍及各山区、高原和北部高寒冷凉地带。
据中国医学科学院卫生研究所综合分析,中国裸燕麦含粗蛋白质15.6%、脂肪8.5%,还含有淀粉以及磷、铁、钙等元素,与小麦、大米、高粱、谷子、荞麦、玉米、黍、大麦8种粮食相比,均名列前茅。
燕麦中水溶性膳食纤维分别是小麦和玉米的4.7倍和7.7倍;除此之外,燕麦中还含有丰富的B族维生素、尼克酸、叶酸、泛酸,特别是VE,每100 g燕麦粉中VE高达15 mg;同时,燕麦粉中还含有谷类粮食中缺少的皂甙(人参的主要成分)。
酶解法提取莜麦麸皮可溶性膳食纤维工艺的研究池慧芳;韩永霞;翟丽丽【摘要】本实验利用α-淀粉酶、胰蛋白酶对武川莜麦麸皮可溶性膳食纤维进行了提取,通过正交实验确定最佳提取工艺条件是:α-淀粉酶用量和酶解时间分别为0.5%和50min,蛋白酶用量和酶解时间分别为0.4%和40min,在最佳工艺条件下提取武川莜麦麸皮SDF的得率为6.20%.【期刊名称】《黑龙江科技信息》【年(卷),期】2017(000)030【总页数】2页(P116-117)【关键词】莜麦麸皮;可溶性膳食纤维;提取【作者】池慧芳;韩永霞;翟丽丽【作者单位】包头轻工职业技术学院乳品与农牧技术学院,内蒙古包头 014035;包头轻工职业技术学院乳品与农牧技术学院,内蒙古包头 014035;包头轻工职业技术学院乳品与农牧技术学院,内蒙古包头 014035【正文语种】中文膳食纤维是指在人体大肠能全部或部分发酵的可食用的植物性成分及其相类似物质的总和,被称为人类的“第七营养”物质[1]。
膳食纤维分为可溶性膳食纤维(soluble dietary fiber,SDF)和不溶性膳食纤维(insoluble dietary fiber,IDF),具有抗糖尿病、降低血脂、防高血压等生理保健功能[2]。
莜麦属于燕麦的一种,内蒙古是我国莜麦的主产区,尤其以武川莜麦盛名。
莜麦麸皮是制取膳食纤维的理想材料。
莜麦麸皮膳食纤维的提取提高了其副产物的经济价值和再利用程度。
目前,国内外主要利用化学法提取膳食纤维,但此法容易导致纤维素、半纤维素和水溶性纤维被溶解,损失较大[3]。
酶法提取膳食纤维条件温和,环境污染小,具有良好的发展前景。
因此,本实验采用酶法提取武川莜麦麸皮SDF,研究酶反应条件对武川莜麦麸皮SDF提取率的影响。
莜麦麸皮:武川莜麦加工制得,胰蛋白酶(上海雅心生物技术有限公司),α-淀粉酶(山东隆大生物工程有限公司),NaOH、HCl,蒸馏水等,均为分析纯。
莜麦水溶性蛋白的提取及SDS-PAGE分析
摘要:以莜麦为实验材料,通过脱脂、水提、盐析和Sephadex G 25凝胶排阻层析等步骤提取莜麦水溶性总蛋白。
通过SDS-PAGE初步分析莜麦的蛋白组成,与黑麦、高粱、薏米水溶性蛋白进行比较,结果表明莜麦蛋白含量较高,具有较高的营养价值。
关键词:莜麦水溶性蛋白黑麦高粱薏米
The Extraction and SDS-PAGE Analysis of Water-soluble
Protein of Naked oats
Abstract: Using naked oats as the experimental material, extract total water soluble protein of naked oats by degreasing, extraction, salting and Sephadex G 25
size-exclusion chromatography. Analyse the composition of the naked oats protein preliminary by SDS-PAGE and compare with the water soluble protein of rye chineses sorghum and barley.The results show that content of naked oats protein is higherand has the high nutritional value.
Keywords:Naked oats Water-soluble Protein Rye Cchineses Sorghum Barley
莜麦为禾谷类作物,学名裸燕麦。
莜麦原产中国,喜寒凉,耐干旱,抗盐碱,生长期短。
莜麦营养丰富,耐饥抗寒,糖分少,是糖尿病患者较好的食品,脂肪中含有较多的亚油酸,是老年人常用的疗效食品。
此外,维生素和磷、铁等物质也比较丰富。
山西省莜麦种植面积约为17万公顷,总产量14~15万吨,占到全国的10%。
莜麦在山西省农业经济中占有重要地位,因此,对莜麦的深入研究有利于提高莜麦食品的深加工,产生一定的经济效益。
1 材料与方法
1.1 仪器与材料
莜麦、黑麦、高粱、薏米购自当地市场
实验所用试剂均为分析纯
Sephadex G 25层析柱、蛋白质纯化系统为GE Healthcare产品
电泳槽及电泳仪为北京六一产品
1.2 实验方法
1.2.1 莜麦水溶性蛋白的提取
莜麦经过低温干燥后粉碎,过0.2mm孔径筛网,以3:1(V/m)的比例加入丙酮,4℃条件下搅拌脱脂3小时后减压抽滤,向所得滤饼中加入乙醚,低温搅拌3小时,减压抽滤,滤饼低温干燥后即为莜麦脱脂粉。
取莜麦脱脂粉20g,加入200mL浸提缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl, pH 8.0),在4℃条件下搅拌浸提6小时,12000×g离心,取上清,加入硫酸铵至80%饱和度,4℃条件下搅拌盐析6小时,12000×g离心,沉淀用少量浸提缓冲液溶解。
所得溶液含有大量硫酸铵,影响进一步电泳及活性测定。
因此,选用Sephadex G 25层析柱进行脱盐处理,缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl,100 mmol/L NaCl pH8.0,控制流速为0.5 mL /min。
收集蛋白洗脱峰,进行SDS-PAGE分析。
同样方法制备黑麦、高粱、薏米水溶性总蛋白。
1.2.2 莜麦水溶性蛋白的SDS-PAGE分析
对提取的莜麦、黑麦、高粱、薏米水溶性总蛋白进行SDS-PAGE[]分析。
浓缩胶浓度为4%,分离胶浓度为12.5%,浓缩胶电压80V,分离胶电压100V,使用考马斯亮蓝R-250染色。
2 结果与讨论
2.1莜麦水溶性蛋白的提取
由图可知,随着洗脱体积的增加,吸光度值增加,当洗脱体积达到一定值时,吸光度值出现第一个峰值,此后吸光度值随着洗脱体积的增加而减小,当减小到最小值时,吸光度值随着洗脱体积的增加而增加,当洗脱体积达到一定值时,吸光度值出现第二个峰值,且第
一个峰值大于第二个峰值。
此后吸光度值随着洗脱体积的增加而减小。
由图可知,随着洗脱体积的增加,电导率增加,当洗脱体积达到一定值时,电导率出现第一个峰值,此后电导率随着洗脱体积的增加而减小,当减小到最小值时,电导率随着洗脱体积的增加而增加,当洗脱体积达到一定值时,电导率出现第二个峰值,此后电导率随着洗脱体积的增加而减小。
2.2 莜麦水溶性蛋白的SDS-PAGE分析
蛋白条带
1 2 3 4 5
图中1,2,3,4,5均为水溶性蛋白条带,从上到下蛋白的分子量依次减小。
前四个蛋白条带与5相比较宽,且个别蛋白不是很明显,是脱盐前样品对应的电泳图,条带5较窄,蛋白种类较多,且明显,是脱盐后样品对应的电泳图。
2.3讨论
水溶性植物功能蛋白因其具有“三高一强”的功能特性,在面制品应用中不但能提高蛋白质含量,增加营养,而且明显改善组织结构,增加馒头、面包、面条的弹性、韧性及表面
光泽度,且因其是来源于小麦蛋白,使用后无需增加任何标识,卫生安全。
在沙拉酱的生产过程中,由于使用蛋黄,其质量环节较难控制,使用该产品生产无蛋沙拉酱不仅生产过程易于操作,保质期延长,而且由于是植物蛋白,不含胆固醇,更利于健康。
植脂末产品一直是以酪蛋白钠或酪蛋白作为乳化剂,该乳化剂的成本较高,影响植脂末的市场竞争力。
水溶性植物功能蛋白由于具有高水溶性和强乳化能力,可以全部替代酪蛋白钠或酪蛋白而应用于植脂末中,从而在不影响其品质的前提下大大降低了生产成本。
水溶性植物功能蛋白还可与植物油、淀粉和麦芽糊精配合使用,可部分代替奶粉应用于冰淇淋、甜奶等乳制品中。
还可广泛应用于其他需要添加植物蛋白和需要乳化功能的食品中,如火腿肠,宠物食品等。
参考文献
[1]. Laemmli U K, Favre M. Gel electrophoresis of proteins[J]. Mol.Biol, 1973, 80: 575-599.
[2].。