糜蛋白酶:位点:Tyr、Phe、Trp羧基肽键
Edman 降解法测定N-末端氨基酸
Edman reagent
①
②
PTC-多肽
③
层析色谱鉴定 重复①②③ 与DNS法联合
少一个N-末端 氨基酸的肽链
肽片断在多肽链中排列次序的确定 (见p179)
多肽链中二硫键位置的确定
• 多肽链氨基酸系列的直接测定:最初于1954 年英国剑桥大学的Sanger实验室建立;现 主要由编码蛋白质的基因的核苷酸顺序推导.
包括以下几方面内容: ①多肽链的数目; ②每条多肽链中氨基酸的种类、残 基数目和排列次序; ③链内或链间二硫键的位置和数目。
蛋白质一级结构测定的策略
• 从蛋白质开始的蛋白质序列分析 • 从DNA开始推蛋白质氨基酸序列 • 质谱法测定蛋白质的一级结构
从蛋白质开始的蛋白质序列分析
测定的基本战略 测定一级结构的准备工作 测定一级结构的基本步骤
测定的基本策略
用两种裂解肽链的方法,分别得到裂解肽 段;
分离提纯肽段,测出各个肽段的氨基酸 序列;
对两套肽段序列比较,找出重叠肽,确定 各肽段位置,拼凑整个肽链的氨基酸排序。
测定一级结构的准备工作
对样品纯度的要求 >97% 对蛋白质分子量的测定 误差10% 测定分子中多肽链的数目与种类 蛋白质的氨基酸组成 蛋白质的配基 蛋白质的端基分析
肽段氨基酸序列的测定
Edman降解法:一次可连续测定60~70个氨
糜蛋白酶:位点:Tyr、Phe、Trp羧基肽键
酶质基降谱酸解 法;法:程:序复杂,工作量大; 蛋蛋测用E蛋从 丹要测金计缺从欧蛋组缺灵蛋缺组从组如欧如丹E如经dd白白定两白蛋黄求定黄算点蛋洲白成点敏白点成蛋成有洲有黄有碱mm质 质 各 种 质 白酰 : 一 色 出 : 白 的 质 一 : 度 质 : 一 白 一 二 的 二 酰 二 中aann中一个裂的质 氯断级葡各不质E中个不高中不个质个硫E硫氯硫和MMr降e多级多解一开 法裂结萄种能开多蛋能(多能蛋开蛋键键法键后较aBB解肽结肽肽级始 (点构球氨有始肽白有肽有白始白交交(交可gLLD二D法e((链构段链结的 较的菌基碳的链质碳链碳质的质联联联直NNnEE硝测uutSS数测的的构蛋 少准蛋酸水蛋数分水数水分蛋分:::接基rr))定::oo目定氨方指白 ,备白分化白目子化目化子白子巯巯巯上氟ppN的的基法:质 专工酶子合质的的合的合的质的基基基机ee苯-aa末确策酸蛋序一作(比物序确多物确物多序多乙乙乙自,nn分法端定略顺白列 性存列定肽存定存肽列肽醇醇醇动GMM别高l氨序质分 较在分链在在链分链,,,分uoo得蛋1ll基多析 强析的的析的或或或析ee0到cc白0酸肽、数数数过过过uu裂倍酶llaa链产目目目氧氧氧解)rr)中率和和和乙乙乙BB肽:ii氨高多多多酸酸酸oo段lloo基肽肽肽处处处;gg酸链链链理理理yy 的中中中LLaa排氨氨氨bboo列基基基rraa顺酸酸酸ttoo序的的的rryy,精精精DD包确确确aatt括序序序aa 二列列列BBaa硫是是是nnkk键蛋蛋蛋))((的白白白欧欧位质质质洲洲置一一一分分。级级级子子结结结生生构构构物物的的的学学两两两实实个个个验验重重重室室要要要数 数方 方 方据据面面面库库。。。))