第14章 微生物的保存技术
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第5单元生物的多样性第十四章丰富多彩的生物世界第一节五彩缤纷的植物世界一、植物的分类和个类别的特征及与人类生活的关系二、我国一级保护植物有、、、等,二级保护植物有、、。
第二节千姿百态的动物世界一、动物分类:动物根据有无可以分成动物和动物两大类。
地球上约有脊椎动物4.7万种,约占5%,约有无脊椎动物120万种,约占95%。
二、无脊椎动物的分类和各类的主要特征及与人类生活的关系昆虫是,的节肢动物。
三、脊椎动物的分类和各类的主要特征及与人类生活的关系四、脊椎动物与人类生活的关系鱼类:食用两栖类:消灭农业害虫,制造中药(蟾酥)爬行类:皮革制品,壁虎吃蚊子等鸟类:羽绒服、食用、捕食害虫、消灭老鼠(猫头鹰)、药品哺乳类:羊毛衫、食用等五、我国的珍稀动物一级保护动物:大熊猫、蒙古野驴、金丝猴、白暨jì豚、丹顶鹤、朱鹮、扬子鳄六、结构与功能相统一的观点1、观察:鲫鱼的哪些特征与它的水中生活相适应?①体色:背部灰黑、腹部白色保护色②体形:流线型减小水的阻力③体表:粘滑、鳞片保护和减小阻力④体侧:侧线能感知水流的方向⑤用鳃呼吸、用鳍游泳、体内有鳔2、观察:青蛙有哪些特征与两栖生活相适应?①、皮肤裸露且湿润②、感觉器官发达③、后肢发达④、用肺呼吸,皮肤辅助⑤、大脑发达⑥、趾间有蹼3、观察:鸟类在形态、结构上有哪些与飞翔相适应的特征?(1)身体呈注线型(减小阻力)(2)前肢变为翼,成为飞行器官(3)体表有羽毛(保持体温,构成飞翔器官的一部分;使外廊更呈流线型;保护皮肤)(4)骨中空,充满气体(减轻体重,加强坚固性)(5)胸骨形成龙骨突,使胸肌发达(人如果和鸟的胸肌一样发达,将有1米多高的龙骨突)(6)食量大,消化能力强(飞行消耗能量)(三)双重呼吸(飞行时需大量O2)第三节神奇的微生物一、微生物的特征①个体微小②结构简单③体内不含叶绿素二、微生物的种类:包括、、。
三、病毒与细菌、真菌的异同四、结构与功能相统一的观点1、细菌的结构小结:只有核区的细胞称为原核细胞,由原核细胞组成的生物称为原核生物。
北师大版七年级下册《第14章 人在生物圈中的义务》2022年单元测试卷(1)一、选择题(每题1分,共35分)A.两侧对称B.有口无肛门C.有刺细胞D.营寄生生活1.(1分)下列各项中,属于腔肠动物和扁形动物的共同特征的是( )A.软体动物B.节肢动物C.鸟类D.环节动物2.(1分)蝎子是良好的中药材,如果想深入了解蝎子,应该从下面哪一类中查找?( )A.有的体表有发达的角质层B.运动器官退化C.生殖器官发达D.消化系统非常发达3.(1分)下列与寄生在人体内的寄生虫特点不吻合的是( )A.果蝇是良好的遗传学研究材料B.节肢动物因为附肢分节而得名C.蝗虫是用肺呼吸的D.蜜蜂的社会行为主要是遗传物质决定的4.(1分)下列与节肢动物相关事实不符的是( )A.袋鼠、海豚、猫B.青蛙、扬子鳄、蝗虫C.鳄鱼、娃娃鱼、墨鱼D.蜜蜂、蜂鸟、蝴蝶5.(1分)依据动物的形态结构和生理特点可以将不同的动物进行归类,根据这一标准,下列四组动物中归类相对比较科学的是( )A.①B.②C.③D.②和③6.(1分)如图为家鸽与呼吸相关的结构,其中气体交换发生在( )A.蚯蚓长期穴居怕光B.蚯蚓的环带被损伤C.干燥使刚毛收缩而死亡D.无法呼吸导致死亡7.(1分)有的同学在观察蚯蚓时,把蚯蚓放在干燥的环境中,不久发现蚯蚓死亡,原因是( )A.兔子的牙齿有门齿和臼齿是与食草生活相适应B.乌贼是用触手捕食的C.沙蚕体节两侧有疣足可用于爬行和游泳D.蝗虫的外骨骼可以防止体内水分蒸发8.(1分)下列描述中,错误的是( )A.动物的遗体或粪便经过分解者分解,产生的物质可以被生产者利用B.进入动物体内的食物经过分解释放能量,同时产生二氧化碳等物质C.动物可以帮助植物传粉和传播种子,有利于扩大植物的分布范围D.动物作为消费者,直接或间接地以植物为食,通过消化和吸收组成自身物质9.(1分)动物能够促进生态系统的物质循环,下列相关理解与之不符的是( )A.狗辨主人、黄牛耕地、老马识途B.蜘蛛结网、惊弓之鸟、大雁南飞C.猫捉老鼠、尺蠖拟态、鹦鹉学舌D.蚂蚁搬家、蜘蛛结网、公鸡报晓10.(1分)下列属于先天性行为的一组是( )A.防御行为、取食行为B.防御行为、迁徙行为C.取食行为、繁殖行为D.迁徙行为、繁殖行为11.(1分)“穿花蛱蝶深深见,点水蜻蜓款款飞”的诗句分别描绘了蝴蝶和蜻蜓的什么行为( )A.2是犬齿B.该动物的食性为草食性C.3主要用来磨碎食物D.牙齿的分化提高了动物的摄食能力12.(1分)如图为某种动物的牙齿,下列叙述不正确的是( )13.(1分)在收藏衣服的柜子里放些樟脑丸可以驱虫、灭虫,樟脑中的物质怎样进入昆虫体内?( )A.从口腔进入B.从气门进入C.从昆虫的体表涔透进入D.从鼻孔进入14.(1分)动物的先天性行为是生来就有的,由遗传因素决定的,下列行为属于先天性行为的是( )①猴子骑自行车 ②母鸡孵小鸡 ③蚯蚓避开电极爬向潮湿的暗室④失去幼崽的雌猫哺育狗崽 ⑤小狗算数。
苏教版生物八年级上册第14章第3节神奇的微生物同步训练1.下列对微生物的认识正确的是( )A.病毒没有细胞结构,繁殖方式是分裂生殖B.真菌都是单细胞生物C.细菌的主要结构特点是没有成形的细胞核D.细菌的繁殖方式是孢子生殖答案:C解析:解答:病毒没有细胞结构,繁殖方式是裂殖,选项A不正确;真菌既有单细胞,如酵母菌,也有多细胞,如蘑菇等,选项B不正确;细菌由细胞壁、细胞膜、细胞质和未成形的细胞核组成,选项C正确;细菌的繁殖方式是分裂生殖,选项D不正确。
故选C。
分析:本题主要考查细菌、病毒和真菌的形态结构、繁殖特点相关知识,意在考查考生能记住所学的知识,把握知识间的内在联系。
2.下列的微生物中,能将复杂有机物分解成简单无机物的是( )A.病毒B.蓝藻C.蘑菇D.根瘤菌答案:C解析:解答:有些细菌和真菌能够分解枯枝败叶、动物的尸体和粪便等中的有机物,获得生活必须的物质和能量,这种营养方式属于腐生,如蘑菇,乳酸菌等;病毒生活方式是寄养在活体细胞中;蓝藻属于生产者,营养方式自养;根瘤菌能够固定空气中的氮气,为植物生活提供含氮的营养物质,生活方式共生。
故选C。
分析:本题主要考查微生物的营养方式相关知识,意在考查考生能记住所学的知识,把握知识间的内在联系。
3.在自然界中,动植物的遗体不会记载保留着,主要原因是( )A.绿色植物能够分解植物遗体B.细菌分布十分广泛C.腐生细菌能够分解动植物遗体D.动植物的遗体自身会分解答案:C解析:解答:动物是不能制造有机物,直接或间接以绿色植物为食,属于消费者;植物能进行光合作用,制造有机物,为动物植物提供物质和能量,属于生产者;细菌和真菌分解动植物的遗体、遗迹等为二氧化碳和水等无机物,回归到无机环境中,促进了生物圈中的物质循环。
故选C。
分析:本题主要考查生态系统的组成和作用相关知识,意在考查考生能记住所学的知识,把握知识间的内在联系。
4.食品放置久了就会腐败变质,主要原因是( )A.细菌的呼吸作用B.动物的取食作用C.腐生微生物的分解作用D.病毒的寄生作用答案:C解析:解答:各种细菌、真菌等微生物等利用食物中的养分,大量的生长和繁殖,造成食品腐败变质。
第14章丰富多彩的生物世界1.植物的主要类群及其特征(1)藻类植物有单细胞的(如衣藻),也有多细胞的(如紫菜、海带),结构比较简单,没有根茎叶的分化,大都生活在水中。
天气转暖,池水变绿,这与藻类的大量繁殖有关。
(2)蕨类植物有真正的根、茎、叶,且体内具有输导组织,依靠孢子(生殖细胞)繁殖。
常见种类有石松、蕨、桫椤等。
苔藓植物和蕨类植物的生殖都离不开水,因此,它们生长在阴暗潮湿的环境中。
(3)种子植物包括裸子植物和被子植物。
裸子植物的种子裸露,没有果皮包被。
常见种类主要包括各种松、柏以及银杏、苏铁等。
(4)被子植物是常见的绿色开花植物,一般都具有根、茎、叶、花、果实和种子。
种子外面有果皮包被形成果实。
生殖过程不需要水,适于生活在各种环境中。
2.我国的珍稀植物国家一级保护植物有:桫椤、水杉、金花茶、珙桐等。
国家二级保护植物有:龙棕、红桧、荷叶铁线蕨等。
3.动物(无脊椎动物、脊椎动物)的主要特征(1)无脊椎动物的共同特征是它们的身体内没有由脊椎骨组成的脊柱。
无脊椎动物约占动物种数的95%,包括腔肠动物、扁形动物、线形动物、环节动物门、软体动物门、节肢动物门等主要类群。
①腔肠动物开始出现组织分化,具有简单的器官:身体中央有消化腔,有口无肛门。
代表动物:海蜇、水螅、珊瑚②扁形动物身体扁平,消化道有口无肛门,虽然组织、器官、系统有了进一步的分化,但仍没有呼吸系统和循环系统。
代表动物:涡虫、吸虫、绦虫。
③线形动物身体大多细长,呈线形,身体不分节,消化道有口有肛门。
代表动物:蛔虫、丝虫④环节动物的身体是由许多形态相似的体节组成。
代表动物有:蚯蚓、蚂蝗、沙蚕等。
⑤软体动物大多数在身体的腹面有块状肌肉足,体外被覆坚硬的贝壳。
代表动物有:珍珠贝、蜗牛、枪乌贼(鱿鱼)等。
⑥节肢动物是动物界中种类最多,数量最大,分布最广的动物类群,占动物总数的2/3以上,同时也是无脊椎动物中最适应各种生活环境的类群。
节肢动物的主要特征是身体分节,体表有坚硬的外骨骼和分节的附肢,头部有眼、触角和口等器官。
第14章稳定塘和污水的土地处理14.1复习笔记【知识框架】【重点难点归纳】一、稳定塘1.概述(1)原理稳定塘又称氧化塘,是一种天然的或经一定人工构筑的污水净化系统。
污水在塘内停留、储存,通过微生物(细菌、真菌、藻类、原生动物等)的代谢活动以及相伴随的物理化学过程,使污水中的污染物进行转换、降解和去除,实现污水的无害化、资源化与再利用。
(2)生物稳定塘的主要优点①处理成本低,操作管理容易;②能取得较好的BOD去除效果;③去除氮磷营养物质、病原菌、重金属及有毒有机物。
(3)生物稳定塘的主要缺点①占地面积大;②处理效果受环境条件影响大;③处理效率相对较低;④可能产生臭味及滋生蚁蝇,不宜建设在居住区附近。
(4)稳定塘的分类①按塘中微生物优势群体类型和塘水中的溶解氧状况分类:a.好氧塘;b.兼性塘;c.厌氧塘;d.曝气塘,如表14-1所示。
表14-1稳定塘的分类及特点②按用途分类:a.深度处理塘;b.强化处理塘;c.储存塘;d.综合生物塘等。
2.好氧塘(1)好氧塘概述好氧塘是一类在有氧状态下净化污水的稳定塘,它完全依靠藻类光合作用和塘表面风力搅动自然复氧供氧。
塘深一般为0.15~0.5m,最多不深于1m,污水停留时间一般为2~6d。
好氧塘一般适于处理BOD小于100mg/L的污水。
好氧塘按有机负荷的高低进行分类:a.高负荷好氧塘;b.普通好氧塘;c.深度处理好氧塘。
(2)好氧塘的净化机理(见图14-1)图14-1好氧塘工作原理示意图阳光照射时,塘内的藻类进行光合作用,释放氧,同时,由于风力的搅动,塘表面还存在自然复氧,两者使塘水呈好氧状态。
塘内的好氧型异养细菌通过代谢氧化分解有机污染物并合成本身的细胞质,其代谢产物CO 2则是藻类光合作用的碳源。
①塘内菌藻生化反应可用式(14-1)和式(14-2)表示:a.细菌的降解作用()2224572O +H CO +H O+NH +C H O N++→有机物+细菌(14-1)b.藻类的光合作用()22342106263110162106CO +16NO +HPO +122H O+18H C H O N P+138O --+→藻类(14-2)上述生化反应表明,好氧塘内有机污染物的降解过程是溶解性有机污染物转换为无机物和固态有机物——细菌与藻类细胞的过程。
第14章 微生物的保存技术工业、农业、医学和科学研究的需要促进了微生物保存技术的发展。
例如,当发现微生物就是某些传染性疾病的特殊病原时,为发展疫苗、抗生素和化学药品,人们需要分离、鉴定和保存微生物。
农业上最明显的例子就是对固氮菌的研究,关于工业应用微生物的例子更是不胜枚举。
微生物发酵还提供了大量的食品、饮料和药品。
在分子生物学研究中,用先进的DNA重组技术可以修饰微生物(U.S.Congress 1981),微生物是基因工程的基础。
微生物是重要的生物资源,保存微生物的目的,不仅使微生物菌株以活的生命状态保存下来,并使其遗传性状从分离时或从实验开始就一直保持不变。
这也是保护微生物多样性的重要手段,还使后人能更好地应用先进技术开发和运用微生物,为人类造福。
为此,世界各发达国家都设有专门的菌种保藏机构。
如美国的典型菌种保藏中心(ATCC),英国的国家典型菌种保藏所(NCTC),日本的大阪发酵研究所(IFO)等。
我国也设有中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM)。
微生物的保存方法很多,根据不同的微生物菌(毒)株或不同的实验要求,可选用不同的保存方法。
这些保存方法的原理大同小异。
首先要挑选典型菌种的优良纯种,再创造一个适合其长期休眠的环境条件,诸如低温、干燥、缺氧、避光、缺少营养等,使被保存的微生物减少代谢率及繁殖和利用营养的比率(Halliday,Baker 1985)。
然而,所有减少代谢率的方法都会导致一定比率的活力下降。
为了防止菌株的丢失,还需要开发出不仅能减少代谢率,而且能防止活力下降的方法。
与保存技术有关、但较为费时的另一项关键性工作是档案记录(Halliday,Baker1985)。
这一工作不仅包括菌种或毒株的培养史和诊断特征等方面的准确记录,还包括对保存物的定期复苏和培养记录,以确定其活力、验证其纯度及基因的稳定性。
最常用的微生物保存法有冻干保存法和超低温冻存法(Gherna 1981;Halliday,Baker 1985;Malik 1990;Rudge 1991)。
这两种方法均可保存相当长的时期(通常可长达30年)。
其他保存微生物的方法还有:低温保存法、传代培养保存法、砂土保存法等(Gherna 1981)。
14.1 细菌的冻干保存法14.1.1 一般概念冻干是目前最常用的微生物保存技术(Day,Mclellan 1995)。
美国ATCC在1985年第16版《细菌、噬菌体和rDNA载体目录册》及1987年第17版《真菌/酵母目录册》中,记载有 11 000株细菌、噬菌体和rDNA载体及 21 000株真菌、酵母用冻干法保存(Gherna等本章作者:田保平,韦剑珊,俞乃胜170 遗传多样性研究的原理与方法1981;Jong等 1987)。
冻干法是长期保存细菌、酵母、真菌、病毒和立克次氏体的标准方法 (Franks 1985;Berny等 1991;Smith1993;Day,Mclellan 1995):将在理想条件下生长 的健康的微生物细胞以相当高的浓度(106~107个细胞/ml)分装在小灭菌瓶或安瓿内,迅速 将这些小瓶在极低温度的液体溶剂内水浴或用仪器超低温冷冻(-60℃),再用真空泵除去这些冷冻悬浮液中的水分,在真空状态下用空气喷灯熔解小瓶顶部的玻璃进行热封口,然后贮存于低于5℃的冰箱内。
保存温度低(-3 0~-7 0℃)可以延长其活力。
当微生物浓度较高时,生存率高,保存期也长。
长期保存时,贮藏温度越低则越好。
在冻干前一般要加冷冻保护剂,这样可使细胞免除在冷冻初期因形成冰晶而造成的损害。
ATCC常规用10%脱脂奶或12%蔗糖作为冷冻保护剂,而美国农业部(USDA)的农业研究服务机构的实验人员用牛或马血清作为微生物的冷冻保护剂(Halliday,Baker 1985)。
在菌液中加入甘油和二甲亚砜(DMSO)也可防止冷冻中微生物的死亡,但实际操作中应根据不同微生物决定应用或不用防冻剂。
冻干细胞的复苏很简单。
只要在室温下打开安瓿,将少量液体营养培养基加入细胞中,再将重新水合的细胞转移到含有益于生长的培养基的容器内即可。
用于冻干的实验设施成本为 2.5万美元(Colwell 1986),但准备冻干培养物的实际花销不高。
用冻干法保存的细胞其长期活力很好,这种方法也许是目前所使用的微生物保存法中效果较好和最经济的方法(Halliday,Baker 1985)。
但有的微生物不适宜应用该技术,如病原微生物在冻干过程中往往由于细胞飞溅而发生污染或感染事故,所以,对于某些病原微生物还必须使用其他的贮存方法保存。
14.1.2 材料(1)冷冻保护液(肌醇血清营养肉汤):肌醇(Sigma,Poole,Dorset,UK) 6.67g营养肉汤粉(Unipath,Basingstoke,Hampshire,UK) 0.825g蒸馏水 33.3ml 将上述物质置于一个250ml的三角烧瓶内溶解和混合均匀后,用120℃高温灭菌15分钟,冷却后在无菌条件下加灭菌马血清(Advanced Protein Product Ltd.)100ml,混匀后,分装于 5ml 小瓶内。
分装好的小瓶在30℃下培养2~3天,确定无菌后置-30℃下保存,临用前解冻。
(2)冷冻管:外径 16mm、长 36mm的硼硅中性玻璃小管(Schubert Seals,N1595,Gosport,Hampshire,UK),使用前要经160℃灭菌2小时。
(3)塞子(Type 20133A,Schubert Seals),使用前要加热除去水分(单层放入不锈钢托盘中,置入110℃ 热风干燥箱中加热2小时)。
(4)冻干仪(Edwards Freeze-dryer,Modulyo,Crawley,Sussex,UK)。
(5)灭菌塑料加样头(Alpha Laboratories,Ltd.,Eastleigh,Hamp-shire,UK)。
(6)铝制封口盖。
14.1.3 方法(1)先用清洗剂(Flow Laboratories,Thame,Oxfordshire,UK,7倍无磷实验室用清洗剂)清洗玻璃珠,然后用0.1mol/dm3HCl中和玻璃珠上的碱性,反复用自来水冲洗至珠子第14章微生物的保存技术 171的PH值与自来水的pH值相同为止,再用蒸馏水或去离子水清洗,最后置热风干燥箱内干燥。
(2)用非选择性固体培养基(如营养琼脂或血琼脂)在理想的条件下培养(一般用有螺纹盖的20ml管装的斜面培养基,将减少污染的机会)。
(3)无菌条件下加 2ml冷冻保护液到琼脂斜面内。
(4)将细菌与保护液充分混匀,这时的细菌浓度为108~1010个细胞/ml。
(5)将混匀后的细菌悬液移入剩余的3ml保护液内再次混匀(操作时要避免产生气溶胶,尤其是操作病原菌时)。
(6)吸0.5ml混匀液,加到预先标记好的冷冻管底部,操作时要特别小心,不要使液体漏到冷冻管外壁,以免造成污染。
将塞子塞入冷冻管(但不要塞紧,以便在冷冻干燥仪中抽真空)。
(7)将冷冻管放入金属半圆支架上,置入-30℃冰箱内冷冻2小时,同时将充填物(玻璃珠,20~30粒/管)预冷至—30℃,以免将盛有冷冻管的架子移入时冷冻管内的内容物解冻。
(8)打开冻干仪的冷凝器开关,关闭冷凝器的排水阀。
当冷凝器的温度降至-50℃时,迅速将充填装置和冷冻管放入冻干室。
然后关闭空气阀抽真空。
20分钟后要求真空室的压力到300Pa。
要让冻干仪运行1~24小时,以便样品完全干燥。
(9)上述工作结束时,在真空条件下转动螺旋起重器,以终止运行。
(10)用高频火花检测器(Edwards High Vacuum)检测冷凝管干燥器和放置期间是否维持真空环境。
冷凝器内发浅蓝色或紫色光表示完全真空,深紫色或不发光表示非完全真空。
(11)用铝盖密封冷冻管上的塞子。
(12)小心移去铝盖和拔出塞子,使细菌复苏。
(13)加约0.5ml营养肉汤到冷冻管内,与冻干的细菌混匀,再将该肉汤接种到肉汤培养基中,并在理想的条件下培养。
(14)移少量(0.1ml)解冻后的菌到营养琼脂板上,检测任何可能的污染。
14.2 病毒的超低温保存法14.2.1 一般概念大多数微生物可用超低温保存,超低温保存法是适用范围最广的微生物保存法。
需要复杂营养的微生物种,如用其他的贮存方法不能保持其活力( 如植物的病原性真 菌),通常可用超低温的方法保存(ATCC 1983;Halliday,Baker 1985)。
此法是将冻存 在小管或安瓿里的细胞以较慢的冷冻速率(1℃/分钟)冷冻,直至—150℃,再将这些小管 贮存在—150~-196℃的液氮中。
超低温的冷冻保护剂不同于冻干法所用的冷冻剂。
ATCC常用一种由甘油(10%)、二甲 亚砜(5%)和培养液制成的混合剂保存多数的细胞株。
这些化学试剂进入细胞内可避免内膜的冷冻损伤。
贮存在低温容器内的细胞复苏时必须小心操作。
当小管被加热时,所形成的冰晶会将细胞杀死,正确操作就可避免这种事故。
只要迅速将样品解冻就能减少活力的丢失,做法是:将封口的小管迅速放入37℃的水中,直至所有的冰融化,然后打开管口,将内容物移入培养基。
172 遗传多样性研究的原理与方法超低温保藏的微生物必须始终贮存在温度非常低的环境中,因此需要液氮罐。
在长期贮存 的过程中必须经常注意补充液氮。
这种贮存方式比冻干法需要更多的经费,包括为了维持贮存温度所必要的劳动力和液氮等。
14.2.2 材料病毒超低温保存所需材料有:热收缩塑料管(Nunc Cryoflex),液氮罐,防护手套和面罩,永久性记号笔,气体喷灯,装液氮的保温瓶。
14.2.3 方法(1)剪一段两端各超出冷冻管长度2cm的热收缩塑料管。
(2)将含有澄清病毒悬液(组织培养的上清培养基,或组织培养基内的细胞溶解产物均可)冰浴几分钟,用灭菌移液管将0.2ml冰浴过的上清悬液分装到冷冻管内,并将盖子拧紧。
(3)将有病毒的冷冻管放入热收缩塑料管中部,插入正确的标签。
(4)用喷灯小心加热热收缩塑料管,并使之包住冷冻管。
注意不要用太高的温度加热热收缩塑料管。
(5)再小心加热热收缩塑料管的两端,用大号镊子夹紧管的端口至完全密封。
(6)将密封好的冷冻管快速在装有液氮的保温瓶中冷冻(操作时要求戴面罩和手套)。
(7)将冷冻过的冷冻管放入液氮罐中的格子内,同时记录样品的详细的存放位置、实验编号和存放日期等。
(8)需要用时,迅速从液氮罐内取出所需样品,并投入37℃水浴箱中解冻后,用解剖刀片在冷冻管的硅化垫圈处切开热收缩塑料管。
拧开冷冻管的盖子时不需要除去热收缩塑料管。
14.3 低温保存法14.3.1 材料(1)培养基:2号营养肉汤粉(Unipath) 2.5g甘油(Sigma) 15ml蒸馏水 85ml将上述材料混匀后,分装在5ml瓶内,在121℃下灭菌15分钟。