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微生物菌种保藏的原理和方法一、原理：1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：1.冷冻保存：（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
4.长期保存：通常，冷冻保存和冻干保存可以实现长期保存，但仍需定期检测和维护保存条件。
在微生物菌种保藏过程中，还需注意以下几点：1.选择合适的保存条件：根据菌种的特性和要求，选择适宜的保存方法和温度。
2.制备合适的保存液：保存液的配方和pH值应与菌种相适应，以保证菌种的存活和精确性。
3.保持无菌操作：在菌种保藏过程中，需保持无菌操作，以防止细菌污染。
菌种的储存条件菌种的储存条件菌种是指具有一定遗传特性和生物学特性的一种微生物群体，是进行科学研究以及工业应用的基础。
为了长期保存和保持菌种的稳定性，在储存菌种时需要注意一些条件。
下面将详细介绍菌种的储存条件。
一、菌种的储存温度温度是影响菌种存活和保持活力的重要因素。
不同种类的菌种对于温度的要求不同，一般可分为冷冻储存和低温储存两种方式。
1. 冷冻储存：一般情况下，冷冻储存温度为-80℃，这是因为在这个温度下，细胞活动几乎停止，生化反应和分解过程也会减缓，从而能够稳定保存菌株。
此外，为了防止温度波动对菌种的影响，冷冻储存应该选择一个温度恒定的冷冻设备。
2. 低温储存：低温储存是相对于冷冻储存而言的，温度范围通常在-20℃至-70℃之间。
在低温下储存菌种，要求采用短时间转入低温环境，快速降温，并注意防止温度波动。
二、菌种的储存液菌种的储存液是将菌株保存在液体培养基中的一种方式，主要有菌种原液储存和冷冻储存液两种形式。
储存液的选择应根据不同菌株的要求、实验室设备和储存方式来决定。
1. 菌种原液储存：菌种原液储存适用于一些较为敏感的菌株，要求其活力尽可能得到保留。
菌种原液储存液一般由培养基和一定浓度的甘油混合而成，需要在使用前进行无菌处理。
2. 冷冻储存液：冷冻储存液中添加了一定比例的甘油或乳糖，可以减少冰晶对菌株的损伤，并增加了冷冻菌株的保活率。
此外，在选择储存液时还可以根据菌株特性添加一些物质，如保鲜剂、抗生素等，以提高菌株的储存质量。
三、菌种的储存容器菌种的储存容器对于菌株的保存稳定性以及长期保存的效果有着重要的影响。
常见的菌种储存容器主要有冷藏管、冷冻管、培养皿、冻干菌种等。
1. 冷藏管和冷冻管：冷藏管适用于低温储存，冷冻管适用于冷冻储存，可以防止水分和气体的渗透，并保持菌株的相对湿度。
在选择菌种储存管时，要注意其质量，确保无渗漏的情况下才能安全储存。
2. 培养皿：一般情况下，培养皿适用于菌种原液保存和短期保存。
微生物菌种保藏方法微生物菌种保藏是指将微生物菌种保存在适宜的条件下，使其保持活力和遗传稳定性的方法。
随着微生物资源的日益减少，菌种保藏对于微生物研究和应用具有重要意义。
现今常见的微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、冷冻干燥和液氮保存等。
I.冷冻保存法冷冻保存法是将微生物菌种在低温下保存，通常是在-80℃或更低的温度下。
冷冻保存的优点是简单易行，保存效果较好。
其步骤如下：1.选择合适的培养基和条件进行培养，确保菌种处于活跃状态；2.菌种分装，常用的分装方式有管内冻存和板块冻存两种。
管内冻存是将菌种转移到小试管中，加入一定的保护剂，如甘油，然后在-80℃下冷冻。
板块冻存是在无菌平板上涂布菌种，用无菌的干胶涂布，然后在-80℃下冷冻；3.将分装好的菌种保存在冷冻机或液氮罐中。
II.冷冻干燥法冷冻干燥法是将微生物菌种先进行冷冻，然后在真空条件下除去水分，最后进行密封保存。
冷冻干燥法的优点是菌种保存稳定性较好，不易失去活力。
其步骤如下：1.选择合适的培养基和条件进行培养，确保菌种处于活跃状态；2.将菌种在低温下冷冻，例如在-80℃冷冻24小时；3.将冷冻的样品放入真空干燥机中，通过极低的压力和温度，使水分从固态直接转变为气态，并在防止湿气生成的条件下除去水分；4.将干燥后的菌种用无菌胶瓶进行密封保存。
III.液氮保存法液氮保存法是将微生物菌种保存在液氮中，保证其温度处于极低的状态。
液氮保存法的优点是保存时间长，保存效果好。
其步骤如下：1.选择合适的培养基和条件进行培养；2.将菌种在低温下冷冻，例如在-80℃冷冻24小时；3.将冷冻的菌种转移到液氮罐中，确保菌种完全浸泡在液氮中；4.密封液氮罐保持其内部温度稳定。
总结起来，微生物菌种保存方法包括冷冻保存、冷冻干燥和液氮保存等多种方法。
科学选用适合的保存方法以及正确操作步骤，可以有效地保护微生物菌种的活力和遗传稳定性，为微生物研究和应用提供有力支持。
微生物菌种的保存方法微生物菌种如何保存呢?下面是小编收集整理的微生物菌种的保存方法，希望对您有所帮助!一、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。
传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如*奶等常用生产菌种的保存。
传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。
培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。
若为产*菌种，则应在培养基中添加少量碳*钙。
一般地，大多数菌种的保藏温度以5℃为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用37℃进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。
传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：①菌种管棉塞经常容易发霉;②菌株的遗传*状容易发生变异;③反复传代时，菌株的病原*、形成生理活*物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低;④需要定期转种，工作量大;⑤杂菌的污染机会较多。
二、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。
此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。
其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而某些细菌如固氮菌、乳*杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。
即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。
常用的有方法包括以下几种，如：①土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。
方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。
保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。
使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤(5克)，置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基(以含水量为土壤最大持水量的60%为宜)，然后高压灭菌。
微生物菌株保存与传代的基本方法微生物是一类微小的生物体，包括细菌、真菌、病毒等。
它们在自然界中广泛存在，对生态系统的平衡和人类的健康起着重要作用。
为了研究微生物的特性和应用价值，科学家们需要对微生物菌株进行保存和传代。
本文将介绍微生物菌株保存与传代的基本方法。
一、微生物菌株的保存方法1. 冷冻保存：冷冻保存是最常用的微生物菌株保存方法之一。
首先，将菌株培养在富含营养物的培养基上，使其生长到合适的阶段。
然后，将菌株转移到含有甘油或甘露醇等冷冻保护剂的培养基中。
接下来，将培养基和菌株混合均匀，分装到冷冻管中，并迅速冷冻至-80℃或更低的温度。
此后，将冷冻管存放在液氮罐中，以确保菌株的长期保存。
2. 干燥保存：干燥保存是一种简单且经济的微生物菌株保存方法。
将菌株培养在含有脱水剂（如硅胶）的培养基上，使其生长到合适的阶段。
然后，将培养基和菌株一同放置在无菌条件下的干燥器中，通过低温和低湿度的环境使其脱水。
最后，将脱水后的培养基和菌株密封在无菌瓶中，存放在干燥的环境中。
干燥保存的菌株可以在室温下保存多年。
3. 液氮保存：液氮保存是一种极低温保存微生物菌株的方法。
将菌株培养在富含营养物的培养基上，使其生长到合适的阶段。
然后，将培养基和菌株混合均匀，分装到液氮保存管中。
接下来，将保存管迅速浸入液氮中，使菌株迅速冷冻至-196℃。
液氮保存的菌株可以长期保存，但需要注意安全操作，避免液氮的直接接触。
二、微生物菌株的传代方法1. 液体培养法：液体培养法是最常用的微生物菌株传代方法之一。
首先，将保存的菌株从冷冻或干燥状态中恢复，接种到含有适当营养物的液体培养基中。
然后，将培养基置于适当的温度和pH条件下，培养一定时间，使菌株继续生长和繁殖。
在培养期间，可以通过观察菌液的浑浊度、pH值和菌落形态等指标来判断菌株的生长情况。
2. 固体培养法：固体培养法主要用于分离和纯化微生物菌株。
首先，将保存的菌株从冷冻或干燥状态中恢复，接种到含有适当营养物的固体培养基（如琼脂）上。
微生物菌种保藏方法
微生物菌种的保藏是非常重要的，因为这些菌种可能用于各种实验和研究中。
以下是一些常见的微生物菌种保藏方法：
1. 冷冻保存：将菌种在液氮或-80的冰箱中冷冻保存。
这是最常见的保藏方法，能够长期保存菌株并保持其遗传稳定性。
2. 干燥保存：将菌种在无菌室中取出，用无菌纸或吸水纸吸干，然后放入无菌瓶中密封保存。
干燥保存适用于某些孢子或芽孢的微生物，比如放线菌、链霉菌等。
3. 明胶斜培养基保存：将菌种接种在含有明胶的固体培养基上，然后密封保存。
这种方法适用于某些菌株，如革兰氏阳性菌和厌氧菌。
4. 低温保存：将菌种保存在4的冰箱中。
这种保存方式可以在短时间内保持菌株的活性，但不能长期保存。
5. 液氮保存：将菌种在锅内预冷冷冻过的无菌玻璃管中加入10%甘油或蔗糖，然后立即在液氮中保存。
这种方法适用于大多数微生物，并且可以长期保存。
微生物名词菌种干燥保存法
在微生物学中，菌种干燥保存法是一种常用的方法，用于保持微生物的活性和稳定性，以便在长时间内保存和使用。
以下是菌种干燥保存法的主要步骤：
1.菌种的选择：选择需要保存的菌种，通常选择具有代表性的菌株或具有特殊性质的菌株。
2.培养基的制备：制备适合菌种生长的培养基，以便在干燥前对菌种进行充足的生长和繁殖。
3.菌落的制备：在培养基上培养菌种，使其形成菌落。
这一步骤可以增加菌种的活性和稳定性。
4.菌种的干燥：将菌落进行干燥处理，以去除多余的水分，保持菌种的活性和稳定性。
常用的干燥方法包括真空干燥、冷冻干燥等。
5.菌种的保存：将干燥后的菌种保存在密闭容器中，以防止外界环境对菌种的影响。
容器通常采用金属或塑料材质，具有良好的密封性和隔绝性。
6.定期检查：在保存期间，定期检查菌种的活性和稳定性，以确保其在使用时具有预期的效果。
7.记录管理：对整个干燥保存过程进行记录和管理，包括菌种的选择、培养基的制备、菌落的制备、菌种的干燥、菌种的保存、定期检查等信息，以便查询和管理。
总之，菌种干燥保存法是微生物学中重要的技术之一，可以有效地保持微生物的活性和稳定性，以便在长时间内保存和使用。
在实际
操作中，需要严格遵守操作规程，确保菌种的活性和稳定性不受影响。
常见微生物的菌种保藏及原理微生物指的是在显微镜下可见的微小生物（如细菌、真菌等）。
由于微生物在各种环境中具有重要的应用价值，如食品加工、制药、环境修复等，因此对微生物菌种的保藏具有重要意义。
目前常见的微生物菌种保藏方法主要包括冷冻保存、干燥保存、冷冻干燥保存和液氮保存等。
下面将介绍这些保存方法的原理及其在微生物保藏中的应用。
一、冷冻保存冷冻保存是最常见且简单的微生物保藏方法之一、其原理是通过降低菌种的生长和代谢速度来延缓细胞死亡，从而使菌种长时间保存。
常见的冷冻保存方式有两种：低温保存和液氮保存。
1.低温保存低温保存常用的温度为-80℃。
将微生物菌种培养物加入附加剂（如甘油、蔗糖）后，迅速冷冻至-80℃，然后保存在低温冰箱中。
这种方法简单易行，并且不需要特殊仪器设备，适用于大多数微生物菌种的保存。
2.液氮保存液氮保存是一种极低温的保存方法，常用温度为-196℃。
液氮保存可以在较长时间内保持微生物菌种的细胞完整性和代谢活性。
液氮保存通常需要配备专门的液氮保存设备，如液氮罐和液氮冷冻器。
虽然保存设备和条件较为复杂，但是液氮保存方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。
二、干燥保存干燥保存是通过去除菌种的水分来实现菌种长时间保存的一种方法。
常见的干燥保存方法主要有两种：常温干燥保存和真空冷冻干燥保存。
1.常温干燥保存常温干燥保存是将微生物菌种培养物均匀涂布于无菌玻璃片或滤纸上，然后在室温下进行干燥。
干燥后的微生物菌种可以直接保存，也可以以泡脱水的方式进行保存。
常温干燥保存适用于耐受干旱的微生物菌种。
2.真空冷冻干燥保存真空冷冻干燥保存是将微生物菌种培养物在真空条件下进行冷冻干燥。
首先，将菌种培养物在低温下冷冻，然后在低压下去除水分。
真空冷冻干燥保存可以保持菌种的细胞完整性和代谢活性。
这种方法适用于保存需求较严格的微生物菌种。
三、液氮保存液氮保存是将微生物菌种培养物冷冻在液氮温度下进行保存的方法。
如前所述，液氮保存要求采用极低温的液氮温度（-196℃）进行保存。
保存菌种的方法
保存菌种是微生物学研究中非常重要的一项工作。
菌种可以通过不同的方法进行保存，以保证其长期的存活和保持其特性。
以下是几种常见的保存菌种的方法：
1. 冷冻保存：将菌株培养在富含营养物的培养基上，然后将细菌悬液添加到含有冷冻保护剂的离心管中，将其置于-80℃的冰箱中冷冻保存。
这种方法可以长期保存菌株，但需要注意冻存液的配制以及冷冻和解冻的操作。
2. 干燥保存：将菌株在富含营养物的培养基上生长，将其转移到无菌纸片上，然后在室温下晾干并密封保存。
这种方法不需要低温保护，但需要在干燥的条件下保存，并且菌株的保存时间较短。
3. 防冻干保存：将菌株培养在富含营养物的培养基上，然后将其转移到无菌滤纸片上，在防冻干剂的条件下进行干燥处理，并在干燥后密封保存。
这种方法可以在室温下保存菌株，并且可以长期保存，但需要注意干燥和密封的条件。
4. 长期冷藏保存：将菌株培养在富含营养物的培养基上，然后在4℃的冰箱中长期保存。
这种方法简便易行，但保存时间较短，通常不超过6个月。
需要注意的是，保存菌株的方法应根据不同的菌株和实验需求来选择。
保存菌株时也需要注意无菌操作，选择适当的保存容器和保存条件，并及时更新保存记录，以保证菌株保存的质量和可靠性。
菌种保存和微生物常识1、常用培养基的制备、灭菌与消毒营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。
是生命活动的物质基础，是生命活动的起点。
营养物：具有营养功能的物质。
也包括光能。
提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。
营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。
要求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。
2、选用和设计培养基的原则、方法及制备过程原则：目的明确、营养协调、经济节约物理化学条件适宜方法：生态模拟、查阅文献精心设计、试验比较步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查培养基种类：一、按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基、加富培养基鉴别培养基消毒与灭菌：消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。
主要破坏细菌代谢机能。
如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。
加热法：（1）干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。
原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。
3、注意事项：1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2）温度控制在<180°；3）物品不能太挤；4）温度降至70°时才开箱门。
（2）湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。
所以效果比同温度下干热好。
高压蒸汽灭菌法：1、设备：高压灭菌锅2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有所变化。
3、适用于培养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，也可用于玻璃器皿的灭菌。
4、注意事项：1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为“0”时方可打开。
常压蒸汽灭菌：对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳培养基，含糖培养基等可采用此法。
彻底灭菌则采用间歇灭菌方法。
煮沸灭菌法：适用注射器和解剖器皿，时间10－15min，超高温杀菌:135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品。
优点：保持食品价值和营养成分。
过滤除菌：原理：介质在有压力时阻隔微生物。
适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。
设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。
优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。
需大量无菌空气以及净化工作台。
注意事项：1、压力适当；2、无菌条件下进行；3、防止渗透现象。
辐射灭菌：原理：紫外线波长在200－300nm，具有杀菌作用，以265-266杀菌力强。
此段波长易被细胞中核酸吸收；可产生臭氧和过氧化氢。
杀菌效力与强度和时间的乘积成正比。
缺点：穿透力不大。
距照射物<1.2m为宜。
应用：无菌室，医院。
注意事项：对眼睛和皮肤有刺激作用。
射线灭菌：r射线，穿透力强，适用于堆积物品的灭菌。
化学药品灭菌：原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。
杀菌剂如重金属离子；抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。
注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种类以及微生物所处的环境有关。
常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等3、微生物的分离、纯化及培养技术分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程。
为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不一定保证是一种菌。
常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法稀释涂布平板法稀释混合平板法平板划线法稀释涂布平板法：步骤：1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。
2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在三角瓶中振摇20min。
取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中，以此类推，制成不同稀释度。
3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。
4、培养：高氏I号和查氏倒置培养于28℃培养箱中培养3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。
5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
平板划线法：1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验日期。
2、划线方法稀释混合平板法：1、先加菌2、倒平板时注意培养基温度3、混合均匀4、微生物培养技术1、斜面接种2、液体培养基接种3、穿刺接种4、将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培养箱中培养5、将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃冰箱中保存。
几种常用的保藏方法：1、传代培养法保藏的菌种通过斜面、穿刺或疱肉培养基（用于厌氧细菌）培养好后，置4C˚冰箱中存放，定期进行传代培养、再存放。
可用胶塞代替棉塞或在斜面上覆盖一层无菌液体石蜡来进一步延长保存期。
2、载体法使生长合适的微生物吸附在一定的载体上进行干燥。
常用的载体有土壤、砂土、硅胶、明胶、麸皮、磁珠和滤纸片等。
3、悬液法将细菌、酵母菌细胞悬浮在一定的溶液中保存。
溶液包括蒸馏水、糖溶液、磷酸缓冲液、食盐水等。
4、冷冻法使菌种始终存放在低温环境下的保藏方法。
包括低温法和液氮法。
此法关键是要克服细胞的冷冻损伤。
注意控制降温速率及保护剂的使用。
5、真空干燥法这类方法包括冷冻真空干燥法和L－干燥法。
冷冻真空干燥法是将要保藏的微生物样品先经低温预冻，然后在低温状态下进行减压干燥。
L-干燥法则不需要低温预冻样品，只是使样品维持在10－20C˚范围内进行真空干燥。
操作方法1、斜面保藏法将菌种转接在适宜固体斜面培养基上，待其充分生长后，用牛皮纸将棉塞部分包扎好（棉塞换成胶塞效果更好），置4C˚冰箱中包藏。
保藏时间依微生物的种类而定。
霉菌、放线菌及芽孢菌保存2－4个月移种一次，酵母菌间隔两个月，普通细菌一个月，假单胞菌两周传代一次。
此法优点是操作简单、使用方便，缺点是保藏时间短、易被污染。
2、液体石蜡保藏法将无菌石蜡加在已长好菌的斜面上，其用量以高出斜面顶端1CM为准，使菌种与空气隔绝。
将试管直立，置低温或室温下保存。
此法实用且效果较好。
霉菌、放线菌、芽孢菌可保藏两年以上，酵母菌可保藏1－2年，普通细菌也可保藏1年左右。
3、穿刺保藏法按穿刺接种方式培养菌种，菌种长好后用胶塞封严，置4℃冰箱存放。
4、砂土管保藏法(1)河砂处理取河砂若干加入盐酸10% ，加热煮沸30min除去有机机质。
倒去盐酸溶液，用自来水冲洗至中性，最后一次用蒸镏水冲洗，烘干后用40目筛子过筛，弃去粗颗粒，备用。
(2)土壤处理取非耕作层不含腐殖质的痩黄土或红土，加自来水浸泡洗涤数次，直至中性。
烘干后碾碎，用100目筛子过筛，粗颗粒部分丢掉。
(3)砂土混合处理妥当的河砂与土壤按3：1的比例掺合(或根据需要而用其他比例，甚至可全部作砂或土)均匀后，装入10x100mm的小试管或安瓿管中，每管分装1g左右，塞上棉塞，进行灭菌(通常采用间歇灭菌2--3次)，最后烘干。
(4)无菌检查每10支砂土管随机抽1支，将砂土倒入肉汤培养基中，30℃培养40h，若发现有微生物生长，所有砂土管则需重新灭菌，再作无菌试验，直至证明无菌后方可使用。
(5)菌悬液的制备取生长健壮的新鲜斜面菌种，加入2-3ml无菌水(每18x180mm 的试管斜面菌种)，用接种环轻轻将菌苔洗下，制成菌悬液。
(6)分装样品每支砂土管(注明标记后)加入0．5ml菌悬液(刚刚使砂土润湿为宜)，用接种针拌匀。
(7)干燥将装有菌悬液的砂土管放入干燥器内，干燥器底部盛有干燥剂。
用真空泵抽干水分后火焰封口(也可用橡皮塞或棉塞塞住试管口)。
(8)保存置4℃冰箱或室温干燥处，每隔一定的时间进行检测。
此法多用于产芽孢的细菌、产生孢子的霉菌和放线菌。
在抗生素工业生产中应用广泛、效果较好，可保存几年时间，但对营养细胞效果不佳。
5、冷冻真空干燥法（1）冻干管的准备：中性硬制玻璃，烘干，灭菌。
（2）菌种培养：细菌芽孢脱落；放，霉孢子丰满。
（3）保护剂的配制：配制，灭菌，检查。
（4）菌悬液的制备：2-3ml保护剂。
（5）分装样品：菌悬液每管0.2ml。
（6）预冻：程序控温仪降温。
（7）冷冻真空干燥：-50℃下抽真空。
（8）取出样品：轻敲松散即达标。
（9）第二次干燥。
（10）熔封。
（11）存活性检测：抽取一管进行存活性检查。
（12）保存：4℃保存。
