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国产盐酸多西环素原料中有关物质的结构鉴定及杂质谱考察

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2010年版中国药典品种盐酸多西环素及其制剂含量和有关物质测定用HPLC法的建立

2010年版中国药典品种盐酸多西环素及其制剂含量和有关物质测定用HPLC法的建立

2010年版中国药典品种盐酸多西环素及其制剂含量和有关物质测定用HPLC法的建立袁耀佐1*；张玫1；钱文1；杨志明2；赵恂1（1 江苏省食品药品检验所，南京 210008 ；2 常州制药厂有限公司，常州 213018）摘要目的：建立先进的盐酸多西环素及其制剂含量和有关物质测定方法，用于2010年版中国药典。

方法：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（pH值适用范围应大于9）；以醋酸盐缓冲液[0.25mol/L醋酸铵－0.1mol/L乙二胺四醋酸二钠－三乙胺（100：10：1），用冰醋酸或氨水调节pH值至8.8]－乙腈（85：15）为流动相；柱温35℃；检测波长为280nm，流速：1.0ml/min；进样体积：20µl。

结果：新色谱条件中用醋酸铵代替草酸铵，解决了《中国药典》2005年版流动相中容易结晶析出堵塞系统管路的问题；通过调整流动相pH值提高了柱效，通过添加EDTA钠和三乙胺改善色谱峰的对称性，使部分原来色谱条件无法有效分离杂质C和杂质F在新系统中能与相邻峰完全分离。

代表性样品色谱图中检出6个主要杂质峰，用杂质对照品对杂质A(ß-多西环素)、B(美他环素)、E(土霉素)进行了定位；用文献方法制备含已知杂质的溶液对杂质C(4-表多西环素)、D(4-表-6-表多西环素)进行了定位；用制备薄层色谱制得杂质F(2-乙酰-2-脱碳酰胺多西环素)溶液(纯度大于99%)，用LC-ESI-IP-MS2对主成分的结构进行了鉴定，用该溶液对杂质F 进行了定位，土霉素、美他环素、ß-多西环素相对于多西环素的相对响应因子（relative response factor，RRF）分别为0.95、1.29、0.77。

建立的方法在0.07～122.556µg/ml范围内线性良好（r=1.0），检测限和定量限分别约为0.016、0.063µg/ml，多西环素及已知杂质的检测精密度良好，片剂和胶囊的回收率分别为99.2%(n=9)、99.4%(n=9)（RSD%均为0.2%），主成分在0.01mol/L的溶剂中可以稳定24小时。

国产盐酸多西环素原料中有关物质的结构鉴定及杂质谱考察

国产盐酸多西环素原料中有关物质的结构鉴定及杂质谱考察

关键词：盐酸多西环素； 杂质谱； 结构鉴定
中图分类号：R927
文献标识码：A
文章编号：1009 － 3656（ 2011） － 2 － 106 － 6
Characterization of Related Substances and Study of Impurity Profile in Domestic Doxycycline Hyclate
多西环素 杂质 A（ β-多西环素） 杂质 B（ 美他环素） 杂质 C（ 4-表多西环素） 杂质 D（ 4-表-6-表多 西环素） 杂质 E（ 土霉素） 杂质 F（ 2-乙酰-2-脱碳 酰胺多西环素）
R1
R2
R3
R4
R5
NH2 H N（ CH3 ） 2 H CH3
NH2 H N（ CH3 ） 2 CH3 H
摘要 目的：鉴定盐酸多西环素原料中检出的有关物质结构，考察国产原料的杂质谱。方法： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂（ pH 值适用范围应大于 9） ； 以醋酸盐缓冲液［0. 25 mol·L － 1 醋酸铵-0. 1 mol·L － 1 乙二胺四醋酸二钠 － 三乙胺（ 100∶ 10∶ 1） ，用冰醋酸或氨水调节 pH 值至 8. 8］-乙腈（ 85∶ 15） 为流动相； 柱温 35 ℃ ； 检测波长为 280 nm，流速： 1. 0 mL·min －1 ； 进样体
陷，笔者在文献方法的启发下，以宽 pH 范围的 C18 填 料为固定相，对多西环素色谱行为主要影响因素进行 了系统地研究，建立了更为简便合理的色谱条件，已 被《中国药典》2010 年版采用（ 详细的建立过程已另 文发表） 。新建色谱条件可以使原料中有关物质得到 良好分离，适用不同厂家原料中杂质谱（ impurity profile） 考察。

HPLC法测定盐酸多西环素软胶囊中盐酸多西环素及有关物质

HPLC法测定盐酸多西环素软胶囊中盐酸多西环素及有关物质

２ ． １ 色谱条件 ： 色谱柱 ： Ｃ 。 色谱柱 （ ４ ． ６ ｍ ｍｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｎ ｌ ， ｐ Ｈ 值 适 用范 围大 于 ９ ） ， 流动相 ： 醋酸 盐缓 冲液【 ０ ． ２ ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ醋酸铵一 ０ ． １ ｍｏ ｌ ／ Ｌ乙二胺 四醋酸二钠一 三乙胺（ １ ０ ０ ： １ ０ ： １ ） ， 用冰醋酸或氨 Ｈ值至 ８ ． ８ 卜乙腈 （ ８ ５ ： １ ５ ） 嘲 ； 流速 ： １ ． Ｏ ｍ Ｕｍｉ ｎ ； 检测 波 织等部位的感染ｆ ｌ １ 。许多立克次体属 、 支原体属 、 衣原体属 、 非 水 调节 ｐ 典型分枝杆菌属 、 螺旋体也对本 品敏感 。本品对革兰 阳性菌作 长 为 ２ ８ ０ ｉ ｒ ｍ； 进样量 ２ ０ ， ｌ ｚ Ｌ 。 用优于革 兰阴性菌 ， 但 肠球菌 属对其耐药 。其他如放线菌属 、 ２ ． ２对照品溶液的制备 ： 称取多西环索对照品适量 ， 加０ ， ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 炭疽杆菌 、 单核细胞增 多性李斯 特菌 、 梭状 芽孢杆菌 、 奴卡菌 盐 酸 溶 液 溶 解 并 制 成 每 ｍＬ中 含 多 西环 素 ０ ． １ ｍｇ的溶 液 属、 弧菌布鲁菌属 、 弯曲杆菌 、 耶尔森菌对 本品敏感 。多年来由 （ １ ０ ０ １ ｘ ｇ ／ ｍＬ ） ， 作为对照品溶液。 于四环素类 的广泛应用 ，临床常见病 原菌对本 品耐药现象严 ２ ． ３供试品溶 液的制备 ： 取本 品 ２ ０粒 （ 上海信谊 万象药业 股份 重， 包括葡萄球菌等革兰 阳性菌及多数革兰阴性杆 菌 ３ １ 。本品 有 限公 司， 批号 ０ ９ ０ ３ ０ ２ ） ， 用剪刀剪开将 内容物挤入烧杯 Ａ， 混 与 四环素类抗 生素不同品种之间存在交叉耐药 。本品作 用机 匀 ， 用玻璃棒 蘸取内容物 于烧 杯 Ｂ中 ， 精 密称 定（ 约相 当于多 ． １ ｇ ） ， 用２ ０ ｍ Ｌ 三氯 甲烷将内容物转移人分液漏斗。 用 制为药物 能特异性 与细菌核糖 体 ３ ０ Ｓ 亚基 的 Ａ位 置结合 ， 抑 西环素 ０ 制肽链的增长 和影响细菌蛋 白质的合成。 约２ ０ ｍ Ｌ的 ０ ． Ｏ ｌ ｍ ｏ Ｙ Ｌ盐酸溶液淋洗烧杯 ， 洗液并入分液漏斗 ， 软胶囊是指把一定量的原料 、原料 提取物加上适宜 的辅 强烈振摇 １ 分钟 ， 静置分层 。 下层的三氯甲烷层 回收入烧杯 Ｂ， 料密封于球形 、 椭圆形或其 他形状 的软质囊 中制成 的剂型。软 上层的水层过 滤入 ２ ０ ０ ｍ Ｅ容量瓶 ，烧杯 Ｂ中液体重新转移人 胶囊的特 点 ： ①软胶囊的可塑性强 、 弹性大 。这是 由软胶囊囊 分液漏 斗 ， 白“ 用约 ２ ０ ｍ Ｌ的 ０ ． ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 盐酸溶液 淋洗烧 杯” 开 材组成的性质所决 定的 ， 取决于 明胶 、 增塑剂和水 三者之间的 始同法操作 ， 萃取 ５ 遍 的滤液收集 之后 ， 用０ ． ０ １ ｍ ｏ Ｙ Ｌ 盐 酸溶 比例 。 ②软胶囊可弥补其他 固体剂 型的不足 ， 如含油量高或液 液稀释至刻度 ，摇匀。精密量取！ － ５ ｍＬ ，置 ２ ５ ｎ ｉ Ｌ容量瓶中 ， 加 态药物不易制成丸剂、 片剂时 ， 可制成软胶曩 。盐酸多西环素 ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ 盐 酸 溶 液稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ，即得 供 试 品溶 液 的软胶囊剂型是信谊万象的 国内独家剂型 ， 在 国 内外药典均 （ １ ０ ０ １ ｘ ｇ ／ ｍＬ ） 。 未发现收载本 剂型 的质量标准 ， 也未见有相关 的文献报道。国 ２ ． ４系统适用性实验 阁 ： 称取 土霉素对 照品 、 美他环素对照 品、 家药 品标 准 ＷＳ 一 １ ０ ０ ０ １ ～ （ Ｈ Ｄ 一 １ ５ ７ ０ ） 一 ２ ０ ０ ５收载 了本品的含量 Ｂ 一 多四环素对照 品及 多西环素对照 品适量 ， 加０ ． ０ １ ｍ ｏ Ｙ Ｌ盐酸 测定方法 ， 为微生物效价法Ⅲ 。但 已无 法满足现在 日趋高效准 溶液溶解并制成每 ｍ Ｌ中分别约含土 霉素 、 美 他环素 、 一 多 确灵敏 的分析要求 ， 而且在有关 物质检测方 面还是空 白。为了 环素 Ｏ ． １ ｉ ｎ ｇ 与多西 环素 ０ ． ２ ａ ｒ ｇ的混合溶液 。 理论板数按多西环 寻求更合 理高效 的分析方法 ，本 文拟采用现行方法 中的前处 素峰计为 ３ ３ １ ７ ， 多西 环素主峰与 ｐ ～ 多西 环素峰 的分离度大于 理方法 ， 再对其稍作 改进 ， 与２ ０ １ ０版 中国药 典 中盐 酸多 环 ４ ． ０ ， 与其他相邻 峰的分离度符合要求（ 见图 １ ） 。 素原料含量测定方法 （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 ） 相结合 ， 来测定本剂型 的含量 与有关物质。 １仪器与试药 １ ． １实 验 仪 器 ： Ｗ ａ ｔ ｅ ｒ ｓ １ ５ ２ ５高 效 液 相 色 谱 仪 ； Ｃ 色 谱 柱 （ ４ ． ６ ｍ ｍ ｘ ２ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｍ， ｐ Ｈ值 适 用 范 围 大 于 ９ ） ； Ａ ｐ ｏ ｌ ｌ ｏ Ｃ ｌ ８ （ ５ ０ ２ ３ １ ９ ４ ５ ， ０ ７ ０ ３ ０ ０ ０ ６ ５ ４ ） 、 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｅ ｘ ｔ ｅ ｎ ｄ — Ｃ （ ７ ７ ０ ４ ５ ０— ９ ０ ２ ） ；

多西环素注射液的研制及其含量测定

多西环素注射液的研制及其含量测定

多西环素注射液的研制及其含量测定李向超;黄显会;曾振灵【摘要】为开发盐酸多西环素新制剂,根据单因素试验,采用正交设计试验法筛选出盐酸多西环素注射液最优配方,以高效液相色谱法测定制剂含量.所研制注射液的外观色泽、澄明度、pH等指标均符合《中国兽药典》2005版注射液项的要求.高效液相色谱测定多西环素含量显示,在5～100 μg/mL浓度范围内,峰面积与药物浓度的线性关系良好(R2=0.9992),平均回收率为99.87％,日内变异系数≤0.42％,日间变异系数≤0.96％.注射液含量为98.3％.结果表明含量测定方法稳定、可靠,最终配方合理,含量符合要求.%In order to develop the, new doxycycline prepration, the best formula of doxycycline injection was selected by orthogonal experiments on the basis of single factor experiment and determined by high perfomance liquid chromatography with ultraviolet detector. The injection's appearance, clarity, pH value and so on all meet the requirement of Veterinary Pharmacopoeia of the People's Republic of China. The-calibration curve was linear in the concentration range of 5 to 100 μg/mL, R2 = 0. 9992, with the average recovery rate of 99. 87% ,the intra-day CV≤0. 42% , the extra-day CV≤0. 96%. The concentration of doxycycline injection is 98. 3%. The results show that the determination method is steady reliable, the final formula is reasonable and the content meets the requirement.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2011(038)008【总页数】4页(P217-220)【关键词】多西环素注射液;正交试验;含量测定【作者】李向超;黄显会;曾振灵【作者单位】华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室,广东广州 510642;华南农业大学兽医学院广东省兽药研制与安全评价重点实验室,广东广州 510642【正文语种】中文【中图分类】S859.5多西环素又名强力霉素或脱氧土霉素，属于第二代半合成四环素衍生物，对革兰氏阴性菌、阳性菌、螺旋体、立克次氏体、支原体、衣原体等均可产生抑制作用，为广谱抗生素（陈杖榴，2002），其药理作用为通过与敏感菌核糖体30S亚基的可逆性结合阻止其与氨酰tRNA的结合，抑制蛋白质合成。

盐酸多西环素的合成工艺研究

盐酸多西环素的合成工艺研究

盐酸多西环素的合成工艺研究介绍在医学领域中，多西环素是一种广泛应用的抗微生物药物，它可以通过盐酸多西环素的合成工艺来生产。

本文将探讨盐酸多西环素的合成工艺，包括原料的选择、反应条件的优化以及分离纯化等方面。

原料选择盐酸多西环素的合成需要选择合适的原料。

以下是盐酸多西环素合成工艺中常用的原料： - 对-二氯苯 - 二甲基甲酰胺 - 氨水 - 酥化法制备的多西环素底物反应条件优化为提高盐酸多西环素的产率和纯度，需要对反应条件进行优化。

以下是一些常见的反应条件优化方法： 1. 温度优化 - 在反应初期，较高的反应温度可以促进底物与试剂的反应速度，提高产率。

- 随着反应进行，适当降低温度可以避免副反应的发生，提高纯度。

2. 反应时间控制 - 控制反应时间可以避免过度反应产生的副产物，同时确保足够的反应时间使得底物完全转化。

- 根据反应的进度和底物的含量，合理调整反应时间。

3. 试剂比例控制 - 控制试剂的摩尔比例可以避免废弃试剂的浪费，提高经济效益。

- 合理计算试剂的用量，确保理论过量以保证底物的完全反应。

4. pH值调控 - 在反应过程中，通过调控反应体系的pH值，可以提高产率和纯度。

- 选择合适的缓冲溶液来调节反应体系的pH值。

反应步骤盐酸多西环素的合成工艺包括多个反应步骤。

以下是盐酸多西环素的合成步骤： 1. 反应物悬浮 1. 将对-二氯苯溶于二甲基甲酰胺中，并加入适量氨水。

2. 搅拌反应物混合物，使其悬浮均匀。

2. 反应 1. 将多西环素底物加入反应体系中。

2. 在适宜的温度下控制反应时间，使底物完全转化为盐酸多西环素。

3. 调控反应体系的pH值，使其适合反应进行。

3. 分离纯化 1. 通过酸碱中和使反应体系达到酸性条件，得到盐酸多西环素。

2. 使用适当的溶剂对反应混合物进行提取，使得盐酸多西环素得以分离。

3. 使用旋转蒸发仪将溶剂蒸发，得到纯净的盐酸多西环素。

优化工艺条件为提高盐酸多西环素的合成效果，还需考虑以下方面： 1. 反应容器的选择 - 选择适合的反应容器，能够耐受反应条件下的高温和腐蚀性物质。

盐酸多西环素中氯乙烷含量及变化研究

盐酸多西环素中氯乙烷含量及变化研究

盐酸多西环素中氯乙烷含量及变化研究黄忠明;苏令;金亮;章留留【摘要】盐酸多西环素是目前最广泛使用的抗生素之一。

盐酸多西环素中检测到有氯乙烷残留，因此我们采用气相色谱法进行跟踪分析，既分析每个原料中氯乙烷的含量，又分析反应过程中氯乙烷的产生量，并得到如下结论：1、盐酸多西环素生产所用的盐酸乙醇中会带入氯乙烷至成品中；2、盐酸多西环素生产过程中溶解温度、保温温度过高和烘干温度过高都会产生氯乙烷。

【期刊名称】《当代化工研究》【年(卷),期】2017(000)001【总页数】3页(P108-110)【关键词】盐酸多西环素;氯乙烷;溶剂残留;气相色谱【作者】黄忠明;苏令;金亮;章留留【作者单位】[1]扬州联博药业有限公司研发中心,江苏225127【正文语种】中文【中图分类】T盐酸多西环素又名盐酸脱氧土霉素、强力霉素，属于第二代半合成的四环素衍生物，是常用的广谱抗菌药物之一。

具有：组织穿透力强、抗菌活性强、体内分布广、半衰期长、较高生物利用度及无明显肾毒性等优点。

主要用于治疗敏感的革兰氏阳性球菌和革兰氏阴性杆菌所致的上呼吸道感染、扁桃体炎、胆道感染、淋巴炎、老年慢性支气管炎，也可用于炭疽的治疗。

盐酸多西环素还是常用的动物饲料预混添加剂之一，用于常见动物消化道、呼吸道等疾病的预防。

氯乙烷在医疗中用于小手术局部麻醉，也有冷冻麻醉作用，从而使局部产生快速镇痛效果，但是氯乙烷在皮肤有开放性损伤的时候禁用。

氯乙烷有刺激性作用，高浓度氯乙烷会损伤心、肝、肾，还可能会引起运动失调、知觉消失，循环和呼吸抑制，因此弄清盐酸多西环素中氯乙烷产生及变化尤为重要。

在盐酸多西环素中检测到氯乙烷残留值在300～3000ppm之间波动，以下对盐酸多西环素的生产过程中氯乙烷产生的过程进行了研究。

先分析了原料中氯乙烷的含量，接着研究了盐酸多西环素中氯乙烷产生的原因。

(1)实验仪器电子天平、HH恒温水浴锅、SZCL-2数显智能控温磁力搅拌器、SHZ-111循环水式真空泵、DEF-6050型真空干燥箱、安捷伦7890A气相色谱仪、安捷伦G1888顶空进样器。

兽药盐酸多西环素质检报告及产品说明-链菌无踪

河南正大动物药业有限公司原料检验报告原料名称盐酸多西环素检验日期2011年05月08日规格100g/袋报告日期2011年05月09日检品来源仓库待验区检验项目全检批号20110505 数量50kg检验依据《中国兽药典》2005年版一部检验项目标准规定检验结果项目结论【性状】本品应为淡黄色的结晶性粉末本品为淡黄色的结晶性粉末符合规定无臭,味苦无臭，味苦比旋度应为－105°至－120°为－109°符合规定【鉴别】(1) 本品的红外吸收图谱应与对照本品的红外吸收图谱应与对照符合规定图谱一致图谱一致(2) 供试品溶液主峰的保留时间供试品溶液主峰的保留时间符合规定应与对照品的保留时间相同与对照品的保留时间相同(3) 本品的水溶液显氯化物的鉴别反应符合规定符合规定【检查】酸度PH值应为2.0～3.0 2.6 符合规定吸光度在349nm波长处测定应为测得的结果为0.30 符合规定0.28～0.31杂质吸光度在490nm波长处测定应测得的结果为0.08 符合规定不得过0.12有关物质应符合规定符合规定符合规定链菌无踪主治：畜禽细菌性疾病【主要成份】强力霉素【性状】本品为淡黄色或黄色粉末，味苦。

【适应症】主要用于变形大肠杆菌、沙门氏菌、霉形体等引起的病症。

对家禽细菌与霉形体混合感染，疗效更佳。

【主治】1、猪：传染性胸膜肺炎、喘气病、链球菌病、附红细胞体病等疗效极佳。

2、对鸡由禽流感等继发的慢性呼吸道病、弓形体、大肠杆菌、传染性鼻炎等呼吸道病有特效。

临床表现为拉稀、消瘦、无名高烧、耳炎、肛门周围发紫、血尿、呼吸困难、走路摇摆、突然死亡、转圈、关节肿大、皮肤化脓等症。

【用法用量】混饮：本品100g兑水300-400kg，每天2次，连用3-5天。

混饲：本品100g拌料200-250kg，每天2次，连用3-5天【规格】100g：强力霉素30g【包装】100g/袋检验结论：依据《中国兽药典》2005年版一部检验,结果符合规定。

盐酸多西环素结晶工艺的优化

•药研动态•盐酸多西环素结晶工艺的优化王玉1,程晓兵2(1盐城苏海制药有限公司研发中心，江苏盐城224145；2江苏腾龙生物药业有限公司，江苏盐城224145)摘要：目的优化盐酸多西环素的结晶工艺。

方法考察了加酸温度、加酸量、物料与溶剂配比和搅拌速率等因素对产物粒度分布、晶型、杂质以及收率的影响。

结论调节加料初始温度45°C能够控制结晶成核，游离碱与乙醇的质量比为135,搅拌速率为4001/min,得到粒度分布均匀、收率高、杂质含量低的优质产品。

关键词：盐酸多西环素；结晶；工艺优化；单因素实验中图分类号：R978.1+4文献标志码：A文章编号：1001・8751(2021)02・0125・05Optimization of Crystallization Process of Doxycycline HydrochlorideWang Yu1,Cheng Xiao-bing2(1Research and Development Center ofYancheng Suhai Pharmaceutical Co.,Ltd.,Mncheng Jiangsu224145;2Jiangsu Tenglong Biological Pharmaceutical Co.,Ltd.,Yancheng Jiangsu224145)Abstract:Objective To optimize the crystallization process of doxycycline hydrochloride.Methods The effects of acid temperature,acid quantity,material-solvent ratio and stirring rate on the particle size distribution, crystal form,impurity and yield of the product were investigated.Conclusion The crystallization nucleation can be controlled by adjusting the initial temperature of feed at45°C.The mass ratio of Free Alkali to ethanol is1:3.5and the stirring rate is400r/min.The high quality product with uniform particle size distribution,high yield and low impurity content is obtained.Keywords:doxycycline hydrochloride;crystallization;process optimization;single factor experiment盐酸多西环素(Doxycycline hydrochloride,1),结构式见图1,化学名为6■甲基4(二甲氨基卜3,5,10,12,12(x・五轻基-1,11■二M R-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢2并四苯甲酰胺盐酸盐半乙醇半水合物，又称盐酸脱氧土霉素、强力霉素⑴。

盐酸多西环素ChP2015标准检测的紧邻主成分后杂质的制备及鉴定

药 物 分 析 杂 志 Chin J Pharm Anal 2017,37(4)
·6 9 5·
盐酸多西环素 ChP 2015 标准检测的紧邻主成分后杂质的制备及鉴定
杨帆 1，张娅 2，3，张锦琳 2，杨志明 4，殷学智 4，赵述强 5，袁耀佐 2 *，张玫 2
（1. 南京理工大学医院，南京 210094；2. 江苏省食品药品监督检验研究院，南京 210008；3. 中国药科大学药物化学教研室，南京 210009；4. 常州制药厂有限公司，常州 213018；5. 中国医药城公共平台服务中心，泰州 225300）
* 通信作者 Tel：（025）86631609；E-mail：yyzyz7256@ 第一作者 Tel：（025）84315786；E-mail：79214129@

Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis
摘要 目的：制备盐酸多西环素中国药典 2015 年版（ChP 2015）标准检测的紧邻主峰后杂质，并鉴定其结 构。方法：以盐酸多西环素成盐用母液为对象，采用室温条件下半制备液相色谱分离纯化杂质；色谱条件： 采用 Synergi C18（50 mm×250 mm，10 μm）色谱柱，以 0.1% 三氟乙酸水溶液（A）-0.1% 三氟乙酸乙腈溶液 （B）为流动相，线性梯度洗脱（A-B）：0.0 min（85∶15）→ 40.0 min（60∶40）→ 40.5 min（85∶15）→50.0 min （85∶15），流速为 80 mL·min-1；254 nm 检测收集目标组分，旋转蒸发去除有机溶剂，冷冻干燥制得目标杂 质；采用盐酸多西环素 ChP 2015 标准中有关物质检查的高效液相色谱法确证制得物质为目标杂质并采用 归一化方法测定其纯度；采用光谱综合分析等手段确证其结构。结果：制得目标杂质纯度为 98.7%，结构确 证为 2- 乙酰 -2- 脱氨甲酰多西环素（即 EP 8.0 中的盐酸多西环素杂质 F），在有关物质测定用供试品溶液 中添加该杂质后，多西环素后相邻峰面积显著增加。结论：盐酸多西环素 ChP 2015 标准检测的紧邻主峰后 杂质经制备色谱分离并成功鉴定，该结论被 ChP 2015 采用。 关键词：四环素类抗生素；多西环素；杂质 F；乙酰 - 脱氨甲酰多西环素；杂质制备；结构确证

高效液相色谱法测定盐酸多西环素原料药中的有关物质

高效液相色谱法测定盐酸多西环素原料药中的有关物质
徐群
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2006(025)003
【摘要】目的用当前和放置六年后的盐酸多西环素样品验证HPLC法适合于测定盐酸多西环素中的有关物质.方法色谱柱:Hamilton柱(250×4.6mm,7um)(苯乙烯-二苯乙烯填料),柱温:60℃,流动相:叔丁醇-硫酸四丁基氢铵-EDTA(15:125:1),检测波长:254nm.结果及结论本法专一性好,最小检测限,分离度,耐用性均符合规定.适合于盐酸多西环素的稳定性试验中有关物质的检测.
【总页数】2页(P159-160)
【作者】徐群
【作者单位】江苏常州卫校,常州,213003
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.反相高效液相色谱法测定富马酸替诺福韦二吡呋酯原料药7种有关物质含量 [J], 朱跃芳;姚亮元;林芳;陈珉珉;朱婧
2.高效液相色谱法测定盐酸莫西沙星原料药中的有关物质 [J], 高莹;于建华;王胜;刘印;任继波;于辉
3.高效液相色谱法测定分析原料药氟胞嘧啶中有关物质的方法验证 [J], 袁拥军;张伟男
4.高效液相色谱法测定分析原料药氟胞嘧啶中有关物质的方法验证 [J], 袁拥军;张伟男
5.高效液相色谱法测定盐酸伐地那非原料药中的有关物质 [J], 黄美容;曹阳;黄顺旺;曹明成
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陷，笔者在文献方法的启发下，以宽 pH 范围的 C18 填 料为固定相，对多西环素色谱行为主要影响因素进行 了系统地研究，建立了更为简便合理的色谱条件，已 被《中国药典》2010 年版采用（ 详细的建立过程已另 文发表） 。新建色谱条件可以使原料中有关物质得到 良好分离，适用不同厂家原料中杂质谱（ impurity profile） 考察。
质按色谱出峰顺序分别为土霉素、4-表-6-表多西环素、4-表-多西环素、美他环素、β-多西环素、2-乙酰-2-脱碳酰胺多西环素； 杂
质谱考察结果显示，不同来源的国产盐酸多西环素的杂质谱相似，均检出美他环素、β-多西环素、2-乙酰-2-脱碳酰胺多西环素
及另外两未知杂质，但大多未检出土霉素。结论： 建立的方法适用于盐酸多西环素原料中杂质谱考察和有关物质检查。
积： 20 μL。用土霉素、美他环素、β-多西环素对照品色谱保留环素和 4-表-6-表多西环素，再采用色谱保留时间定位方法鉴定其他 2 个杂质，用制备薄层色谱制备 2-乙酰-2-脱碳酰胺多西 环素溶液（ 采用 LC-ESI-IT-MS2 法鉴定其结构） 鉴定另外 1 个主要杂质。结果： 典型样品色谱图中检出 8 个杂质峰，6 个主要杂
Drug Standards of China 2011，Vol. 12 No. 2
含量
硝酸益康唑 /%
98． 2 95． 9 98． 0 92． 6 93． 8
牻牛儿酮 / mg / 粒
16． 55 16． 28 17． 02 16． 61 16． 39
三氯甲烷层由绿色变为红灰色。实验中存在水相与 三氯甲烷层的平衡过程，滴定速度慢，反应时间长， 需剧烈振摇，滴 定 终 点 不 易 确 定，测 定 结 果 波 动 较 大。本法采用 HPLC 法同时检测硝酸益康唑和牻牛 儿酮的含量，经方法学验证，该方法灵敏、准确，重复 性好，适用于复方莪术油栓中硝酸益康唑和牻牛儿 酮的含量测定，能对产品的质量进行有效的控制。 参考文献
中国药品标准 2011 年第 12 卷第 2 期 106
16. 92 mg，RSD 为 0. 5% ，重复性良好。 2. 9 精密度实验
取“2. 8”项下供试品溶液 1 份，连续进样 6 次， 按上述色谱条件测定硝酸益康唑和牻牛儿酮的峰面 积，结果表明，硝酸益康唑和牻牛儿酮峰面积 RSD 均为 0. 2% ，进样精密度良好。 2. 10 溶液的稳定性
［1］ 国家药典委员会 .《中国药典》. 2005 年版 . 一部［S］. 2005： 433.
［2］ 国家药典委员会 .《中国药典》. 2005 年版 . 一部［S］. 2005： 279.
国产盐酸多西环素原料中有关物质的结构鉴定及杂质谱考察
袁耀佐1 ，张玫1 ，钱文1 ，杨志明2 ，赵恂1 （ 1. 江苏省食品药品检验所，南京 210008； 2. 常州制药厂有限公司，常州 213018）
盐酸多西环素（ Doxycycline Hyclate） 是以土霉 素为原料制得的半合成广谱四环类抗生素［1］，其含 半分子乙醇和半分子结晶水的盐酸盐在临床上有着
广泛的 应 用，盐 酸 多 西 环 素 及 其 片 剂、胶 囊 剂 在 USP31 / NF26、BP2008、Ph. Eur 6. 0、JPⅩⅤ 和《中国 药典》2005 年版等中均有收载［2 ～ 6］，Ph. Eur 6. 0 提 供了其 6 个潜在杂质的化学结构，分别命名为杂质 A、B、C、D、E、F，盐酸多西环素及其潜在杂质的化学 结构如图 1 所示［4］。
取“2. 8”项下供试品溶液 1 份，在 0、2、4、6、8 h 内，分别进样，按上述色谱条件测定硝酸益康唑和牻 牛儿酮的峰面积，结果表明，供试品溶液在室温条件 下，8 h 内稳定，硝酸益康唑和牻牛儿酮峰面积 RSD 分别为 0. 3% 和 0. 2% 。 2. 11 样品测定
取供试品适量，按上述方法制备供试品溶液并 测定。结果见表 3。 3 讨论
多西环素 杂质 A（ β-多西环素） 杂质 B（ 美他环素） 杂质 C（ 4-表多西环素） 杂质 D（ 4-表-6-表多 西环素） 杂质 E（ 土霉素） 杂质 F（ 2-乙酰-2-脱碳 酰胺多西环素）
R1
R2
R3
R4
R5
NH2 H N（ CH3 ） 2 H CH3
NH2 H N（ CH3 ） 2 CH3 H
Yuan Yao-zuo1 ，Zhang Mei1 ，Qian Wen1 ，Yang Zhi-ming2 ，Zhao Xun1 （ 1. Jiangsu Institute for Drug Control，Nanjing 210008；
2. Changzhou Pharmaceutical Factory，Changzhou 213018）
典型样品中检 出 多 个 杂 质，作 者 对 6 个 主 要 杂质进行了结构推 定，推 定 思 路 根 据 有 无 杂 质 对 照的情况而异。对有杂质 对 照 品、或 虽 然 无 杂 质 对照品但有杂质溶液制备方法的 5 个主要杂质， 采用色谱保留时间定位法确定其结构； 另一主要 杂质结构的鉴定相 对 复 杂，采 用 了 制 备 薄 层 色 谱 制得纯度较高的杂质溶液，用 LC-ESI-IT-MSn 法进 行结构推 定，用 其 作 为 杂 质 对 照 溶 液，再 采 用 色 谱色谱保留时间定位法确定其在色谱图中的出 峰位置，实验中还应 用 了 光 电 二 极 管 阵 列 检 测 技 术（ PAD） 采集对照品和检出杂质 的 紫 外 图，用 于 旁证结构的一致性。现将研究结果报道如下。 1 仪器与试药
摘要 目的：鉴定盐酸多西环素原料中检出的有关物质结构，考察国产原料的杂质谱。方法： 用十八烷基硅烷键合硅胶为填 充剂（ pH 值适用范围应大于 9） ； 以醋酸盐缓冲液［0. 25 mol·L － 1 醋酸铵-0. 1 mol·L － 1 乙二胺四醋酸二钠 － 三乙胺（ 100∶ 10∶ 1） ，用冰醋酸或氨水调节 pH 值至 8. 8］-乙腈（ 85∶ 15） 为流动相； 柱温 35 ℃ ； 检测波长为 280 nm，流速： 1. 0 mL·min －1 ； 进样体
NH2
H
N（ CH3 ） 2 R4 + R5 = CH2
NH2 N（ CH3 ） 2
H
H CH3
NH2 N（ CH3 ） 2
H
CH3 H
NH2 H N（ CH3 ） 2 OH CH3 CH3 H N（ CH3 ） 2 H CH3
图 1 多西环素及有关物质的结构式
盐酸多西环素有关物质测定方法报道很多，主要 以 HPLC 方法为主［2 ～8］，由于目前文献方法均存在缺
作者简介： 袁耀佐，男，副主任药师。学科及研究方向： 抗生素质量研究。联系电话： 13905172943。
Drug Standards of China 2011，Vol. 12 No. 2
中国药品标准 2011 年第 12 卷第 2 期 107
Abstract Objectives： To identify the chemical structures of related substances in bulk of Doxycycline Hyclate and to study the impurity profile of Doxycycline Hyclate. Methods： Carry out the method with high performance liquid chromatogram，using a column packed with octadecysilane bonded silica gel and a mixture of a buffer solution which consist of 100 volumes of 0. 25 mol·L －1 ammonium acetate solution，10 volumes of 0. 1 mol·L －1 ethyldiaminetetraacetic acid disodium salt solution and 1 volume of triethyamine adjusting pH to 8. 8 with glacial acetic acid acetonitrile （ 85∶ 15） as the mobile phase，maintain the column temperature at 35℃ ，detection wavelength is 280nm，flow rate is 1 mL·min －1 ，injection volume is 20 μL. Use oxytetracycline，metacycline and β-epidoxycycline reference substances to identify and locate three impurities peaks in the chromatogram of a typical bulk of doxycycline hyclate，other two impurities were identified and located in the chromatogram by impurity solutions prepared according to literature methods，another impurity was located by a impurity solution which prepared by a preparative TLC method，and identified by LC-ESI-IT-MS2. Results： There are eight impurity peaks in a chromatogram of typical bulk of doxycycline hyclate，the six major impurity peaks are oxytetracycline，4epi-6-epidoxycline，4- epidoxycline，metacycline，β-epidoxycycline and 2-acetyl-2-decarbamoyldoxycline respectively according to the elution order. The study showed that impurity profiles of different domestic doxycycline hyclate were similar，all include metacycline， β-epidoxycycline，2-acetyl-2-decarbamoyldoxycline and other unknown impurities，but no oxytetracycline was detected from most doxycycline hyclate samples. Conclusions： The established method was suitable to be applied in the study of impurity profile and test of related substances of doxycycline hyclate Key Words： Doxycycline hyclate； Related substance； impurity profile； Characterization