过氧化物酶标记链霉亲和素说明书

链霉亲和素磁珠（BeaverBeads TM Streptavidin ）产品简介链霉亲和素-生物素（SA-Biotin ）系统具有极高的结合亲和力（Kd=10^-15），在生物领域具有广泛的应用。

BeaverBeads TM Streptavidin 采用海狸专利的蛋白偶联技术将SA 共价连接于固相载体表面，可高效结合生物素化抗体、核酸、蛋白等配体分子。

本产品采用超顺磁性微球，粒径均一、形貌规整，有利于方便、快捷地捕获目标分子以及实现磁性分离。

本产品可配套自动化设备进行高通量操作。

产品信息产品信息 SA 磁珠（300 nm ）生物素化IgG 结合性能 20μg/mg 磁珠 磁珠浓度 10 mg/mL 磁珠表面 亲水基团保存溶液 1×PBS ，含0.1%（w/v ）BSA ，0.1%（v/v ）proclin-300 保存条件 2-8 ℃ 保质期2年产品应用范围适用于体外诊断体系磁微粒化学发光免疫诊断操作流程（本操作以两步双抗体夹心CLIA 法为例）1. 使用前准备1.1. 检测试剂：包括捕获抗体、待测物标准品、待测样品、酶标记抗体、底物液等，使用前平衡至室温1.2. Washing buffer ：用户根据需求配制洗液，使用时平衡至室温 1.3. 化学发光96孔平底微孔板1.4. 96孔平底微孔板磁性分离器：可选用海狸磁性分离器，Cat.No.60302 1.5. 漩涡振荡器 1.6. 真空吸液泵 1.7. 化学发光仪 1.8. 移液器2. 磁微粒化学发光免疫诊断操作流程2.1.调整磁珠至合适浓度（建议0.8mg/ml ），将磁珠置于漩涡振荡器上20 s ，振荡重悬磁珠。

用移液器移取50 μL 磁珠至96孔板中，磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下96孔板。

2.2. 每孔加入100 μL 生物素化捕获抗体，充分震荡重悬磁珠，37℃恒温箱中孵育15min 后，磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下96孔板。

过氧化物酶(POD)试剂盒说明书一、测定原理：利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理，通过测定420nm 处吸光度的变化得出其酶活性。

二、实际的组成和配置试剂一：液体60ml×4瓶，4℃保存6个月试剂二：粉剂×3瓶，4℃保存6个月试剂二应用液的配置：临用每瓶粉剂加入10ml 的双蒸水溶解，4℃避光保存试剂三：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月试剂三应用液的配制：临用前用双蒸水15倍稀释，使得1cm 光径，双蒸水调零时A240保持在0.4左右，现用现配。

若A 值太高，则加双蒸水稀释，若A 值太低，则加入适量试剂三。

（一般在25倍左右稀释）试剂四：液体50ml×2瓶，4℃保存6个月。

三、操作步骤：1、前处理：植物组织匀浆的制备：准确称取组织重量，按照重量(g):体积(ml)=1:9的比列加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水或磷酸盐缓冲液:0.1 mol/L pH 7-7.4)，冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液，3500r/min 离心10min ，取上清液进行测定。

混匀后，3500r/min 离心10min ，取上清于波长420nm 处，1cm 光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。

四、计算及举例1、定义：在37℃条件下，每毫克组织蛋白每分钟催化1ug 底物的酶量定义为一个酶活力单位。

2、植物组织中过氧化物酶(POD)活力计算公式：10)/()min 30()()()1(12-)/(⨯÷÷⨯⨯=ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD 匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力 3.计算举例取新鲜桑叶，制备成10%匀浆，取100ul 匀浆上清，按照操作表进行操作，测得数据如下：对照OD 0.237；测定OD 0.665；同时测得10%桑叶匀浆蛋白浓度是1.80mgprot/ml 根据公式计算如下:mgprotU ml mgprot ml ml cm OD OD mgprot U POD / 26.42010001.80300.14.01120.237-0.6651000)/()min 30()()()1(12-)/(=⨯÷÷⨯⨯=⨯÷÷⨯⨯=匀浆蛋白浓度反应时间样本量反应液总体积比色光经值对照值测定活力。

链霉亲和素Streptavidin说明书货号：S9170规格：1mg/5mg/10mg保存：-20℃干燥保存，有效期至少保持2年。

纯度：≥95%活性：≥15Units/mg，（Green改良法测定）。

产品来源：大肠杆菌发酵工程菌株。

分子大小：60kDa产品简介：链霉亲和素（SA）是阿维丁链霉菌（Streptomyces avidinii）分泌的一种同型四聚体蛋白。

与生物素具有很高的亲和力，本制品为127AA最佳核心结构，每分子SA结合4个生物素分子，国际比活性12-15 U/mg。

SA与禽类亲和素（Avidin，AV）相比特异性更强，与生物素结合后半衰期长达6小时，而AV半衰期仅为1小时。

由于SA不含糖基且等电点接近于中性，因此SA在检测应用中具有比AV更低的非特异性背景。

本制品已广泛应用于包被免疫检测用微孔板，制备SA偶联酶制剂（如SA-HRP、SA-AP等），SA偶联荧光素（即荧光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA偶联磁珠等，进而参与酶联免疫吸附和酶催化放大实验，免疫组化化学、亲和色谱填料制备、含StrepTagⅡ标签（8-AA寡肽）的蛋白纯化、生物传感器、生物纳米微球、预靶向制药研究和生物芯片被料等生物技术领域。

使用方法：一、微孔板包被1.用碳酸钠缓冲溶液（pH9.6）溶解冻干粉，将浓度稀释成3-10ug/ml（客户可设定梯度进行实验）注意：由于SA等电点是7.4，包被不建议使用中性缓冲液。

2.用移液器吸取100ul/孔，4℃过夜包被或者37℃包被2h；3.洗涤：倒尽板孔中液体，加200ul洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽，扣干4.后续进入封闭、洗涤、抗原抗体结合流程若不立即进入下游实验，包被板需要进行烘干保存时。

包被前，将包被液中加入20%蔗糖作为活性保护剂。

二、SA偶联磁珠2.1NHS活化1.充分混匀磁珠后，取100μl PangoBeads COOH磁珠到1.5ml离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液；2.取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到离心管中，置于磁性分离上，待固液分离后去除上清液。

Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088过氧化物酶（POD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。

货号：BC0095规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体0.04 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体3 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：液体置于试剂瓶内EP管中，使用前需先离心。

2、试剂二工作液：取0.01mL试剂二加入3.2 mL试剂一混合备用（约106T），现配现用，也可根据样本量按比例配制。

产品说明：POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

POD在有过氧化氢存在的情况下，能使愈创木酚发生氧化，生成茶褐色物质，该物质在470nm有最大光吸收。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌、细胞或组织样本的制备细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

Mouse TNF-α ELISA Kit产品编号 产品名称包装 PT512Mouse TNF-α ELISA Kit96次产品简介：碧云天的Mouse TNF-α ELISA Kit (Mouse Tumor Necrosis Factor-α Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay Kit)，即小鼠肿瘤坏死因子-α酶联免疫吸附检测试剂盒，是一种用于特异性地高灵敏地定量检测小鼠血清、血浆、细胞或组织裂解液、或细胞培养上清液中的TNF-α的试剂盒。

本产品检测灵敏度高，特异性强，重复性好。

多次重复检测结果表明，最小检出量为30.8pg/ml ，与人TNF-α、sTNF RIs 、TNF RII 等均没有交叉反应，板内、板间变异系数均小于10%。

TNF-α，即TNF 、TNF α或TNFalpha ，也称cachectin 、cachexin 或TNFSF1A 。

TNF-α由巨噬细胞、上皮细胞等多种细胞在细菌感染、内毒素刺激、病毒或寄生虫感染时产生。

肿瘤坏死因子超家族(Tumor necrosis factor superfamily)共约19个成员，包含由巨噬细胞等产生的TNF-α和T 淋巴细胞产生的TNF-β(也称Lymphotoxin-alpha)，以及FASL 、TRAIL 、CD40L 、CD27L 、CD30L 等。

TNF-α与TNF-β在结构上有一定的相似性，并且在氨基酸水平有28%的同源性，它们拥有共同的受体TNFR1和TNFR2。

由于TNF-α的生物学活性占TNF 总活性的70%~95%，因此目前常说的TNF 多指TNF-α。

TNF (Tumor Necrosis Factor)因为能诱导细胞死亡而得名，实际上其很多时候诱导的细胞死亡为细胞凋亡。

人TNF-α有两种形式，一种是由233个氨基酸组成的跨膜蛋白同源三聚体(homotrimers)，另外一种是该跨膜蛋白在TNF-α转化酶TACE(TNF-α converting enzyme)的作用下切除信号肽，形成成熟的157个氨基酸的可溶性TNF-α单体(分子量为17KDa)的同源三聚体。

谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）试剂盒说明书谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差别大的样本做猜测定。

测定意义：GSHPx是谷胱甘肽氧化还原循环中催化还原型谷胱甘肽（GSH）氧化的重要酶之一、GSHPx不但能够特异地催化还原型谷胱甘肽与ROS反应，生成氧化型谷胱甘肽GSSG，从而保护生物膜免受ROS的损害，维持细胞的正常功能；而且具有保护肝脏、提高机体免疫力、拮抗有害金属离子对机体的损害和加添机体抗辐射等本领。

测定原理：GSHPx催化有机过氧化物氧化GSH，产生GSSG；谷胱甘肽还原酶（GR）催化NADPH还原GSSG，再生GSH，同时NADPH氧化生成NADP+；NADPH在340nm有特征汲取峰，而NADP+没有；通过测定340nm光汲取减少速率来计算GSHPx活性。

自备仪器和用品：低温离心机、水浴锅、可调整移液器、酶标仪、96孔板和蒸馏水。

试剂构成和配置：试剂一：液体120mL×1瓶，室温保管。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保管。

试剂三：液体10μL×1支，20℃保管。

试剂四：液体200μL×1瓶，4℃保管。

粗酶液提取：1.组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。

8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细菌、真菌：依照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波碎裂细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.血清等液体：直接测定。

GSHPx测定操作：1.酶标仪预热30min，调整波长到340nm。

2.混合试剂在25℃或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min。