DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒

陕西普罗安蒂生物科技发展有限公司增强型DAB显色试剂盒说明书产品简介：本试剂盒适用于辣根过氧化物酶（HRP）检测系统的免疫组化染色，也可用于western blot等实验。

产品组成：10xDAB浓缩液3MLDAB缓冲液60ML使用方法：1-对于组织切片或细胞样品或膜，在与HRP标记的抗体或其他形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

对于检测内源性HRP的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

2-10XDAB浓缩液：DAB缓冲液=1:10配置，得DAB工作液。

取1mL DAB 缓冲液，100ul 10xDAB浓缩液混匀后即为DAB显色工作液。

3-最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。

4-室温避光孵育3-10min，或在显微镜下根据颜色深度自行掌握反应时间，染色结果为棕色。

染色结束后，去除反应液，用双蒸水清洗2-3次即可。

注意事项：（1）本产品需避光保存，混合好的工作液30min内有效。

（2）使用时请做好防护，如果不慎将试剂沾染到眼睛、皮肤上，请立即用大量清水冲洗。

（3）本产品仅做科研用途。

贮存条件：-20℃避光保存。

常见问题：1-背景显色太深a-在IHC如果背景显色太深，一方面须考虑使用适当的封闭液进行封闭，使用和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。

另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

b-在IHC如果背景显色太深,需注意灭活内源性过氧化氢酶，可以在4体积甲醇中加入1体积3%过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。

c-可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度，另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2-没有显色或显色太弱a-可以考虑适当提高一抗或二抗的浓度，检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。

b-可以考虑使用更加灵敏度的放大体系，例如使用生物素检测体系。

多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。

之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。

简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。

荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。

然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。

再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。

等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。

由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。

也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。

搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。

茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS12048.1 v.A GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液产品说明书（中文版）主要用途GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液是一种旨在通过过氧化物酶的催化，而形成棕褐色不溶性产物，以鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标印记的实验辅助试剂。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测包括蛋白质西方杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。

产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。

技术背景二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕褐色不溶性产物，且不受乙醇影响。

用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。

产品内容GENMED染色液（Reagent A）毫升GENMED反应液（Reagent B）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，GENMED反应液（Reagent B）在4℃冰箱里；GENMED 染色液（Reagent A），避免光照，有效保证12月用户自备甲基绿复染试剂盒（GMS40010）或苏木素复染试剂盒（GMS80050）：用于常规染色后复染15毫升锥形离心管：用于显色工作液配制的容器平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应1.5毫升离心管：用于配制染色工作液的容器光学显微镜：用于细胞染色后观察分析实验步骤一、 免疫印迹染色实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent A）和4℃冰箱里GENMED反应液（Reagent B）置入室温下，分别移出 毫升GENMED染色液（Reagent A）和 毫升GENMED 反应液（Reagent B）到15毫升锥形离心管，混匀后标记为GENMED显色工作液，避免光照。

dab显色原理DAB显色原理。

DAB（3,3'-二氨基联苯）是一种常用的组织化学显色试剂，它在免疫组织化学染色中被广泛应用。

DAB显色原理是指DAB在酶标记的免疫组织化学染色中，通过酶的作用将其氧化聚合成棕色沉淀物，从而实现对目标抗原的定位和可视化。

DAB显色原理的关键步骤包括抗原-抗体结合、酶标记二抗结合、底物DAB显色和反应终止。

首先，待检组织切片或细胞标本经脱水、脱脂、抗原修复等处理后，与特异性抗体结合形成抗原-抗体复合物。

接着，加入酶标记的二抗，与抗体结合形成抗原-抗体-二抗复合物。

在底物DAB的作用下，酶催化DAB氧化聚合生成棕色沉淀物，沉积在抗原的位置上，从而实现对抗原的定位和可视化。

最后，反应终止，通常是通过用水或缓冲液对切片或标本进行洗涤，停止显色反应。

DAB显色原理的关键是酶的选择和底物的氧化聚合反应。

常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），它们能够催化底物DAB的氧化聚合反应，生成可见的色素沉淀。

在实际应用中，HRP是最常用的酶标记物，因为它的灵敏度高，稳定性好，底物DAB的氧化聚合反应速度快，生成的棕色沉淀物清晰可见。

DAB显色原理的优点在于显色产物明显，对比度高，且稳定性好，不易褪色。

因此，DAB显色方法被广泛应用于免疫组织化学染色中，特别是在肿瘤标志物检测、免疫组化检测等领域。

但是，DAB显色方法也存在一些局限性，比如DAB显色产物不适用于电镜观察，且在光学显微镜下易产生颗粒状沉淀，影响细胞结构的观察。

总之，DAB显色原理是一种常用的免疫组织化学显色方法，通过酶的催化作用使底物DAB氧化聚合生成可见的棕色沉淀物，实现对抗原的定位和可视化。

在实际应用中，DAB显色方法被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中，发挥着重要的作用。

辣根过氧化物酶底物化学发光底物（Western Blotting）用于辣根过氧化物酶在Western Blotting 过程SI-CPS160 KIT 2846 中的化学发光检测。

SI-CPS1120 KIT 5340SI-CPS1300 KIT 11874化学发光底物（ELISA）用于辣根过氧化物酶在ELISA 过程中的化学SI-CPS260 KIT 2760 发光检测。

SI-CPS2120 KIT 5139SI-CPS2300 KIT 11428AEC 底物试剂盒（免疫组化）该产品利用3-氨基-9-乙基-咔唑（AEC ）作为辣根过氧化物酶在免疫组化过程中的底物，在反应位SI-AEC101 KIT 895 点产生红色沉淀。

该试剂盒含缓冲液、色原质和双氧水。

AEC 可用于手动或自动免疫组化系统，可以用苏木精复染。

该产品染色后不能使用有机封片剂，需要水相的封片剂如Crystal/MountTM（B-M02，B-M03 ）。

每个试剂盒可使用至少1000 次。

AEC 片每片含20mg 底物。

5 片195 SI-A6926 50 片1090 100 片1696加强型DAB 试剂盒每片DAB 可以配制5ml 的工作液。

浓缩缓冲液中含有镍离子，强化了DAB 的显色。

DAB 沉淀是黑BI-S14 20 片1495 褐色的，可以用苏木精、甲基绿等复染。

DAB 试剂盒（膜）该试剂盒可以配制500ml 的工作液，用于膜的免SI-D6815 1KIT 2394 疫染色。

DAB 试剂盒（免疫组化）该试剂盒可以配制100ml 的工作液，用于免疫组化。

SI-D3939 1KIT 1208该产品用于辣根过氧化物酶在免疫组化、免疫细产品号规格胞化学和原位杂交过程中的显色。

每片可以配制BI-S16 100 片5-10ml 的工作液。

可以用有机或者水相的封片剂封片。

DAB 底物液（ELISA ，低动力学形式）该产品是一种即用型的溶液，用于ELISA 显色。

免疫组织化学染色原理和操作步骤一、免疫组织化学原理免疫组织化学（IHC）又称免疫细胞化学，是根据抗原—抗体特异性结合的原理，应用带有可见标记的特异性抗体作为探针，检测组织和细胞中抗原性物质的一种技术。

免疫组化技术主要有直接法和间接法：直接法是以标记的一抗孵育标本以检测其中的抗原成分；间接法则先后加入一抗和二抗，形成抗原—一抗—二抗复合体以达到检测该抗原的目的，该法因二抗的放大作用而具有较高的敏感性。

间接法常用的有过氧化物酶—抗过氧化物酶（PAP）法、亲和素—生物素—过氧化物酶（ABC）法和链霉亲和素—过氧化物酶（SP）法。

PAP法一抗和二抗均不标记，避免了标记过程对抗体活性的影响，但需要制备过氧化物酶的抗体，与适量过氧化物酶混合形成PAP复合物（含3个酶分子和2个抗体分子），染色时依次加入一抗、二抗、PAP 复合物孵育标本，最后用H2O2和二氨基联苯（DAB）为底物显示过氧化物酶，即可检测标本中的抗原成分。

生物素为含硫的杂环单羧酸，可通过其羧基与蛋白质中的氨基结合，从而标记抗体和酶。

亲合素又称抗生物素蛋白，与生物素有很高的亲合力，1分子亲合素可结合4分子生物素，ABC法即在此基础上建立。

ABC法与PAP法相似，一抗不标记，二抗用生物素标记，染色前按一定比例将亲和素与生物素标记的过氧化物酶混合，制成ABC复合物，并使亲合素分子上至少空出一个生物素结合位点。

在标本孵育过一抗和二抗后，再加入ABC复合物使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB 进行显色。

ABC法的敏感性较PAP法更高。

图1. 免疫组织化学基本原理示意图（引自八年制《组织学与胚胎学》）SP法与ABC法相似，其不同于ABC法之处在于用生物学特性与亲和素相似的链亲和素标记过氧化物酶。

在标本孵育过一抗和二抗后，加入链亲和素标记的过氧化物酶使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB进行显色。

与亲和素相比，链酶亲和素的结合力与亲和素相似而非特异性结合较亲和素低。

免疫显色试剂说明书【产品名称】免疫显色试剂【包装规格】【预期用途】在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。

【检测原理】免疫显色试剂是二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。

其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色显色。

由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。

【主要组成成分】其他需要但未提供的材料：PBST缓冲液（pH7.2-7.4）、纯化水、酒精、脱蜡液、苏木素染色液、中性树胶、塑料湿盒、染色缸、染色架等。

【储存条件及有效期】储存条件：2-8℃，有效期18个月。

请在开瓶3个月内使用。

生产日期、有效期至：见标签。

【样本要求】常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片。

【检测方法】常规脱蜡水化：石蜡切片经常规脱蜡和水化。

抗原热修复：参照一抗说明书进行抗原修复。

DAB工作液的配制：按每毫升DAB缓冲液（试剂D）中加入50μL DAB色原（试剂C）（约1滴）的比例配制DAB工作液，DAB工作液应现配现用。

配制好的DAB 工作液需在2小时内使用，如出现沉淀，使用前先混匀。

操作步骤：1）抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。

2）除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST缓冲液中。

3）取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。

4）除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。

一抗孵育完毕，用PBST清洗切片。

5）除去PBST缓冲液，每张切片加酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（试剂B）100μL左右（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），室温下孵育30分钟。

广州市外显子生物技术有限公司Http//DAB显色试剂盒（20×）说明书货号：S-1503规格：溶液A：10ml溶液B：10ml保存：-20℃避光密闭保存，一年有效，避免反复冻融；短期可2-4℃保存。

产品简介：DAB是过氧化物酶（POD）的显色底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP 标记的免疫印记或免疫组化反应。

过氧化物酶催化底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物，免疫印记可直接在膜上显示条带；免疫组化标本显色时间一般为室温10-15分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察。

操作说明：1. 对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5 分钟。

2. 取900μl PBS（或双蒸水），加入50μl溶液A，50μl溶液B 混合均匀，即配成DAB工作液。

如需要更大体积工作液，可按比例放大。

此溶液必须现用现配，配好后避光保存，30min内使用，过期后请将剩余的液体废弃。

Http// 3. 向组织切片或印记膜上加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。

4. 室温避光孵育10-15 分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。

5. 去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤2-3 次即可终止显色反应。

6. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。

对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

注意事项：1. DAB溶液应低温密封保存。

如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。

2. 显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。

3. 显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。

固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在。

4. DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。

操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。

dab与二抗显色原理DAB与二抗显色原理一、引言免疫组织化学染色（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过检测组织标本中特定抗原与抗体的相互作用来确定该抗原存在与否的技术。

在IHC中，显色是一个重要步骤，它能够将抗原与抗体的结合位置可视化，从而得到有关组织标本的信息。

其中，DAB与二抗显色是一种常用的显色方法。

二、DAB显色原理DAB（3,3'-二氨基联苯）是一种常用的显色底物，它在存在过氧化物酶（如辣根过氧化物酶或过氧化物酶）的催化下，会发生氧化反应，产生棕色的沉淀物。

DAB的显色原理可以简单描述为：过氧化物酶将DAB氧化成稳定的有机阳离子，该阳离子在存在氨基酸的条件下聚合形成棕色的沉淀物。

三、二抗显色原理二抗显色是指在免疫组织化学染色中，使用二抗与特异性一抗结合，并通过DAB显色来可视化抗原的位置。

具体而言，二抗是与一抗种属不同的抗体，它可以结合在一抗与抗原结合的位置。

二抗通常与辣根过氧化物酶或过氧化物酶结合，形成复合物。

当底物DAB被加入后，过氧化物酶催化DAB氧化反应，产生棕色的沉淀物，从而标记出抗原的位置。

四、DAB与二抗显色的优缺点DAB与二抗显色方法在免疫组织化学染色中广泛应用，主要由于以下几个优点：1. 显色结果稳定可靠：DAB氧化反应生成的棕色沉淀物在显微镜下清晰可见，且具有较好的稳定性，不易褪色。

2. 显色反应可控性好：根据显色反应时间的长短，可以调节显色强度，使得显色结果更加可控。

3. 可视化效果好：DAB显色后的组织标本形成棕色的沉淀物，与组织背景形成明显对比，便于观察和分析。

4. 显色过程简单快速：DAB与二抗显色方法操作简单，显色过程相对快速，适用于大批量样本处理。

然而，DAB与二抗显色方法也存在一些缺点：1. 显色结果非定量：DAB与二抗显色方法只能判断抗原是否存在，而无法准确测量抗原的表达水平。

2. 显色结果有局限性：DAB显色只能形成棕色的沉淀物，对于某些需要其他颜色标记的研究，可能不适用。

增强型DAB 显色试剂盒（20×）说明书货号：DA1016规格：3ml/10ml 试剂盒内容：DA1016-3DA1016-10保存温度溶液A3ml 10ml 2-8℃避光溶液B3ml 10ml 2-8℃避光溶液C 60ml 100ml ×22-8℃保存：2-8℃避光密闭保存，请勿冻存；复检期至少1年。

产品简介：增强型DAB 显色试剂盒是一种借助辣根过氧化物酶(HRP)，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western 、Southern 、Northern 、EMSA 等膜显色的试剂盒。

DAB 是辣根过氧化物酶的常用底物。

在辣根过氧化物酶的催化下，DAB 会产生棕色沉淀。

该棕色沉淀不溶于水和乙醇。

本产品采用特殊配方，灵敏度高，背景低，重复性好，储存稳定，使用方便，适合于蛋白印迹、免疫组织化学和免疫细胞化学、斑点印迹和生物芯片等的染色和显色反应。

操作说明（仅供参考）：1.对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP ）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5分钟。

2.50μl 溶液A 、50μl 溶液B 、900μl 溶液C ，并混合均匀，即为DAB 工作液，1h 内使用。

3.向组织切片或膜上加入适量DAB 工作液，确保能充分覆盖样品。

4.室温避光孵育1-30分钟，显色时间过长可引起本底增高，故应密切观察显色过程（一般3-10分钟最理想），并在本底较浅且达到适当显色强度时以流水漂洗终止显色反应。

5.对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后可对其进行其他染料复染。

对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

注意事项：1.DAB 溶液A 切勿冻存，以免影响染色效果；2.显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用；3.DAB 在常温下不稳定，每次取用后均应及时加盖密封放回冰箱，以免因DAB 分解影响实验，或因渗漏造成实验环境污染。

产品说明书 / Specification Sheet辣根过氧化氢酶DAB显色试剂盒产品编号：PW017产品简介：DAB即：二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。

用于检测过氧化物酶的活性，它灵敏度高，特异性好。

是HRP结合物最常用的底物,常在免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色或检测细胞或组织内源性的过氧化物酶中应用广泛。

运输和保存条件：常温下运输，收到后，将溶液A, 溶液C在-20度闭光的环境中保存，反应液2-8度保存，保质期一年。

组成:本试剂是为免疫组化,原位杂交,Western blot等膜显色专门配制的,由反应液,溶液A, 溶液C三部分构成:能够使用5次1: PW017-1 反应液50ml2:PW017-2 溶液A 1 ml3:PW017-3 溶液C 0.12ml使用方法:1:在免疫印迹(western blot)实验中,先将相应的HRP（辣根过氧化氢酶）标记的二抗覆盖膜后,在37度的情况下,于震荡器上,震荡一个半小时左右,再用TBST或者PBST洗涤膜3~4次,最后一次用TBS或PBS洗涤膜,再将膜转移到阴暗处。

2:显色前,先取反应液10 ml在一个15ml的干净棕色瓶子中，再取200ul左右的溶液A和溶液C 20ul形成显色工作液, 加入充分混匀。

3在阴暗处.将显色工作液加入膜上,将膜覆盖, 在37度的情况下,震荡反应十分钟左右即可.这时浅棕色的条带出现。

4倒掉反应液，双蒸水冲洗条带3~4次，自然干燥。

5照像记录实验结果。

注意事项:1: 溶液A在使用之前，37度温育10分钟，以免产生沉淀。

2: 显色时间严格控制，非常小心，一般10分钟左右。

以免造成过度显色，而且显色后数小时将会褪色。

3: 请使用完后，将反应液，溶液A, 溶液C的盖子旋紧,以防止溶液挥发和与空气中的成分发生化学反应。

dab染色原理DAB染色原理。

DAB（3,3'-二氨基联苯）是一种常用的组织化学染色试剂，广泛应用于免疫组化和组织化学实验中。

它的染色原理主要是通过酶标记技术来实现对目标蛋白的可视化检测。

在本文中，我们将对DAB染色原理进行详细介绍，以帮助您更好地理解其在实验中的应用。

DAB染色的原理基于酶标记技术，该技术利用特定的酶与抗体结合，然后通过酶底物的作用产生可见的染色反应。

在DAB染色中，常用的酶是辣根过氧化物酶（HRP），它能与抗体结合形成抗原-抗体-HRP复合物。

当这个复合物与其靶标蛋白结合后，就会在酶底物DAB的作用下产生棕色的沉淀物，从而实现对目标蛋白的可视化检测。

DAB染色的步骤主要包括抗体结合、酶底物作用和染色显色三个关键步骤。

首先，将样本组织或细胞切片与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

然后，将HRP标记的二抗加入到样本中，与抗体结合形成抗原-抗体-HRP复合物。

最后，加入DAB底物，HRP催化DAB氧化聚合生成可见的棕色沉淀物，从而实现对目标蛋白的染色显色。

DAB染色具有高灵敏度和特异性，能够清晰地显示目标蛋白的位置和表达水平。

同时，DAB染色也具有较好的稳定性和持久性，染色后的样本可以长时间保存而不会失去染色信号。

因此，DAB染色在免疫组化和组织化学实验中被广泛应用，成为一种重要的组织染色技术。

除了其应用的广泛性外，DAB染色还具有操作简便、成本低廉等优点，适用于大规模样本的染色实验。

因此，无论是在科研领域还是在临床诊断中，DAB染色都扮演着重要的角色，为科学研究和临床诊断提供了可靠的技术支持。

总结而言，DAB染色原理是基于酶标记技术实现对目标蛋白的可视化检测。

通过抗原-抗体-HRP复合物与DAB底物的作用产生可见的染色反应，从而清晰地显示目标蛋白的位置和表达水平。

DAB 染色具有高灵敏度、特异性、稳定性和持久性等优点，被广泛应用于免疫组化和组织化学实验中。

希望本文能够帮助您更好地理解DAB染色的原理和应用，为您的实验工作提供帮助。

仅供科研版本号：161208 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)【产品组成】【保存条件】-20℃,避光,12个月【产品概述】DAB辣根过氧化物酶显色液(DABHorseradishPeroxidaseColorDevelopmentKit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。

DAB即3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。

在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生棕色沉淀，该棕色沉淀丌溶于水和乙醇。

因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。

本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。

同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。

【使用方法】1、常规组织切片、细胞样品、膜不辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。

对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。

2、按(A):试剂(B):蒸馏水=1:1:18的比例混合,即为DAB染色工作液，即配即用。

3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保覆盖样品。

4、室温避光孵育30min或更长时间，直至显色至预期深浅。

5、去除DAB染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。

6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。

对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。

【常见问题及可能原因】1、背景显色太深①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。

现成组织芯片进行免疫组化的方法学一、前言免疫组织化学（IHC）是一种用于在组织水平检测特定蛋白质的方法，它对于许多生物医学研究领域，包括肿瘤学、神经科学和免疫学等，具有重要意义。

本方法提供了现成组织芯片的免疫组织化学处理步骤，旨在帮助研究人员更有效地分析组织样本中的蛋白质表达。

二、材料和试剂1. 组织芯片2. 抗体（根据需要选择适当的抗体）3. 生物素化二抗4. 辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素5. DAB显色试剂盒6. 苏木精染液（用于复染细胞）7. 柠檬酸抗原修复液8. 封闭液（如血清或BSA）9. 显微镜10. 图像分析软件（如ImageJ）三、方法步骤1. 抗原修复：将组织芯片标本进行抗原修复，常用的方法有高温高压法或柠檬酸缓冲液法。

2. 血清或BSA封闭：在抗体孵育之前，使用封闭液覆盖组织芯片标本，以减少非特异性背景染色。

3. 抗体孵育：将适当抗体的生物素化二抗与特异性抗体结合，并进行孵育。

注意选择与抗体最佳比例的二抗浓度。

4. 链霉亲和素-HRP复合物的孵育：使用辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与已与抗体结合的生物素化二抗结合，并进行孵育。

5. DAB显色：使用DAB显色试剂盒进行显色反应，通常在显微镜下观察并确定适当的显色时间。

6. 苏木精复染：使用苏木精染液进行细胞核的复染。

7. 透明和封片：将标本进行透明和封片，以便进行观察和分析。

8. 图像分析：使用适当的图像分析软件对组织芯片进行图像分析，以确定特定蛋白质的表达情况。

四、结果解释与讨论1. 结果解释：通过观察和分析免疫组织化学染色结果，可以确定特定蛋白质在组织中的表达情况。

注意区分特异性染色和背景染色，并比较不同组织和/或不同病例之间的表达差异。

2. 讨论：讨论结果的统计学意义、临床意义和应用前景。

同时，还可以讨论可能存在的局限性，如样本选择、抗体性能和实验条件等因素的影响。

五、注意事项与实验条件调整1. 注意事项：在进行免疫组织化学实验时，应注意避免污染、确保严格的实验室卫生标准，以及妥善处理实验废弃物。

DAB显色试剂盒
Data sheet: 40412a
Cat.No:DAB-0031/1031
前言
本试剂盒适用于辣根过氧化酶(HRP)系统的免疫组化染色，如PAP、ABC和SP法等。

试剂盒组成
试剂A: DAB缓冲液(DAB Buffer，20×) 3 ml/ 12 ml 试剂B: DAB底物 (DAB Substrate，20×) 3 ml/ 12 ml 试剂C: DAB显色剂(DAB Chromogen，20×) 3 ml/ 12 ml 使用方法
在小试管中先加入0.85ml蒸馏水，再按试剂A、B、C顺序加入试剂各50μl，混匀即成1ml的DAB显色液。

若出现沉淀可过滤后使用。

配制好的溶液应避光存放，30分钟内有效。

染色结果为棕色。

室温下染色时间约3-10分钟，一般在显微镜下根据颜色的发展情况掌握染色时间。

试剂盒规格及贮存条件
规格：3ml (600片)/ 12ml (2400片)
贮存条件：本试剂盒宜4℃保存，稳定期1年
注意事项
本试剂盒仅适合研究使用。

在使用过程中，请勿将试剂沾染到皮肤或衣物上。

(19)国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 202110839028.4(22)申请日 2021.07.23(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 113484313 A(43)申请公布日 2021.10.08(73)专利权人 图凌（杭州）生物医药有限公司地址 310052 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号5幢1702室(72)发明人 陶娜娜　章月凯　潘丽　(74)专利代理机构 杭州信与义专利代理有限公司 33450专利代理师 万景旺(51)Int.Cl.G01N 21/78(2006.01)G01N 33/58(2006.01)G01N 33/53(2006.01)(56)对比文件US 5225325 A ,1993.07.06CN 110361245 A ,2019.10.22CN 105164272 A ,2015.12.16US 2012077211 A1,2012.03.29CN 109856383 A ,2019.06.07CN 111766385 A ,2020.10.13US 2002164660 A1,2002.11.07CN 111426826 A ,2020.07.17审查员 卞庆娜 (54)发明名称用于免疫组化检测的DAB显色试剂盒及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于免疫组织化学检测的DAB显色试剂盒，属于免疫组化检测技术领域。

所述DAB显色试剂盒包括DAB缓冲液和DAB色原，所述DAB缓冲液包括咪唑、4‑壬基苯基‑聚乙二醇、苯扎氯铵、过氧化氢、EDTA溶液和焦磷酸钠；所述DAB色原包括：1,2‑丙二醇和3,3‑二氨基联苯胺四氯盐水合物，进一步，所述试剂盒还包括DAB增强剂，所述DAB增强剂包括硫酸铜、氧化钠、氧化钾、蔗糖和苯扎氯铵。

本发明进一步公开了所述DAB显色试剂盒的应用。

利用本发明的DAB显色试剂盒进行免疫组化检测，能够显著提高染色强度和灵敏度，并且本发明的DAB显色试剂盒组分简单，易于配制，具有极佳的稳定性。

过氧化物酶染色液（DAB法）使用说明书过氧化物酶染色液(DAB法)使用说明书货号：G2370有效期：6个月有效。

产品内容：名称4×10ml4×20ml Storage 试剂(A):BFA固定液10ml20ml4℃避光试剂(B): POX孵育液B1:DAB染色液10ml20ml-20℃避光B2:DAB氧化剂2×100μl4×100μl RT临用前，按B1:B2=1000:1比例混合，即为POX孵育液，即配即用。

试剂(C):WG染色液10ml20ml RT避光试剂(D):WG buffer10ml20ml RT产品说明：过氧化物酶(Peroxidase，简称POX或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

过氧化物酶染色液(DAB法)是ICSH推荐采用的POX染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的DAB的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX所在部位。

该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX活性部位呈棕黄色。

自备材料：1、载玻片2、显微镜操作步骤(仅供参考)：1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA固定液，4℃固定30～60s，稍水洗。

2、滴加配制好的POX孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min，水洗2min。

3、滴加WG染色液，孵育30～60s。

4、直接滴加等量WG buffer，染色10～15min。

5、水洗、晾干、镜检。

染色结果：POX活性部位棕黄色细胞核蓝色粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。

浆细胞及巨核细胞均为阴性。