DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒

陕西普罗安蒂生物科技发展有限公司增强型DAB显色试剂盒说明书产品简介：本试剂盒适用于辣根过氧化物酶（HRP）检测系统的免疫组化染色，也可用于western blot等实验。

产品组成：10xDAB浓缩液3MLDAB缓冲液60ML使用方法：1-对于组织切片或细胞样品或膜，在与HRP标记的抗体或其他形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

对于检测内源性HRP的组织或细胞样品，在适当固定后，也用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5min。

2-10XDAB浓缩液：DAB缓冲液=1:10配置，得DAB工作液。

取1mL DAB 缓冲液，100ul 10xDAB浓缩液混匀后即为DAB显色工作液。

3-最后一次洗涤完毕后，去除洗涤液，加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。

4-室温避光孵育3-10min，或在显微镜下根据颜色深度自行掌握反应时间，染色结果为棕色。

染色结束后，去除反应液，用双蒸水清洗2-3次即可。

注意事项：（1）本产品需避光保存，混合好的工作液30min内有效。

（2）使用时请做好防护，如果不慎将试剂沾染到眼睛、皮肤上，请立即用大量清水冲洗。

（3）本产品仅做科研用途。

贮存条件：-20℃避光保存。

常见问题：1-背景显色太深a-在IHC如果背景显色太深，一方面须考虑使用适当的封闭液进行封闭，使用和一抗相同来源的血清（10%）进行封闭。

另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。

b-在IHC如果背景显色太深,需注意灭活内源性过氧化氢酶，可以在4体积甲醇中加入1体积3%过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。

c-可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度，另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。

2-没有显色或显色太弱a-可以考虑适当提高一抗或二抗的浓度，检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被正常显色。

b-可以考虑使用更加灵敏度的放大体系，例如使用生物素检测体系。

多色免疫荧光染色试剂盒使用说明多色免疫荧光染色试剂盒使用说明酪酰胺信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶(HRP)对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的DAB显色方法，TSA技术同样采纳HRP标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤(HRP催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。

之后用热修复法洗去非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，重复下一种一抗-hrp二抗来其次轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

TSA具体原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H202下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与四周的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到10-100倍增加。

简洁来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP(而不是直接偶联荧光素)，来催化后续添加入体系的非活性荧光素。

荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟接近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。

然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。

再换个一抗来其次轮孵育，周而复始。

等到全部抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最终去检测结果。

由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担忧抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大削减了试验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。

也就是说，假如用TSA技术，同一张片子上全部的靶标都可以选用特异性高的兔单克隆抗体。

搭配同一支抗兔的HRP二抗就可以进行试验，而且信号放大的倍数大大增加。

茹创生物开发的试剂盒详细酪胺荧光染料为以下其中一种或者多种：TYR-480，TYR-520，TYR-570，TYR-620，TYR-690，TYR-780。

GENMED SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS12048.1 v.A GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液产品说明书（中文版）主要用途GENMED二氨基联苯胺（DAB）显色溶液是一种旨在通过过氧化物酶的催化，而形成棕褐色不溶性产物，以鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标印记的实验辅助试剂。

该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。

其适用于辣根过氧化酶标记蛋白的免疫学检测包括蛋白质西方杂交和免疫化学，以及原位杂交染色等。

产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。

技术背景二氨基联苯胺（3，3’-diaminobenzidine，DAB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成棕褐色不溶性产物，且不受乙醇影响。

用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高，特异性好。

产品内容GENMED染色液（Reagent A）毫升GENMED反应液（Reagent B）毫升产品说明书1份保存方式保存GENMED染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，GENMED反应液（Reagent B）在4℃冰箱里；GENMED 染色液（Reagent A），避免光照，有效保证12月用户自备甲基绿复染试剂盒（GMS40010）或苏木素复染试剂盒（GMS80050）：用于常规染色后复染15毫升锥形离心管：用于显色工作液配制的容器平式摇荡仪：用于孵育和混匀反应1.5毫升离心管：用于配制染色工作液的容器光学显微镜：用于细胞染色后观察分析实验步骤一、 免疫印迹染色实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液（Reagent A）和4℃冰箱里GENMED反应液（Reagent B）置入室温下，分别移出 毫升GENMED染色液（Reagent A）和 毫升GENMED 反应液（Reagent B）到15毫升锥形离心管，混匀后标记为GENMED显色工作液，避免光照。

dab显色原理DAB显色原理。

DAB（3,3'-二氨基联苯）是一种常用的组织化学显色试剂，它在免疫组织化学染色中被广泛应用。

DAB显色原理是指DAB在酶标记的免疫组织化学染色中，通过酶的作用将其氧化聚合成棕色沉淀物，从而实现对目标抗原的定位和可视化。

DAB显色原理的关键步骤包括抗原-抗体结合、酶标记二抗结合、底物DAB显色和反应终止。

首先，待检组织切片或细胞标本经脱水、脱脂、抗原修复等处理后，与特异性抗体结合形成抗原-抗体复合物。

接着，加入酶标记的二抗，与抗体结合形成抗原-抗体-二抗复合物。

在底物DAB的作用下，酶催化DAB氧化聚合生成棕色沉淀物，沉积在抗原的位置上，从而实现对抗原的定位和可视化。

最后，反应终止，通常是通过用水或缓冲液对切片或标本进行洗涤，停止显色反应。

DAB显色原理的关键是酶的选择和底物的氧化聚合反应。

常用的酶包括辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP），它们能够催化底物DAB的氧化聚合反应，生成可见的色素沉淀。

在实际应用中，HRP是最常用的酶标记物，因为它的灵敏度高，稳定性好，底物DAB的氧化聚合反应速度快，生成的棕色沉淀物清晰可见。

DAB显色原理的优点在于显色产物明显，对比度高，且稳定性好，不易褪色。

因此，DAB显色方法被广泛应用于免疫组织化学染色中，特别是在肿瘤标志物检测、免疫组化检测等领域。

但是，DAB显色方法也存在一些局限性，比如DAB显色产物不适用于电镜观察，且在光学显微镜下易产生颗粒状沉淀，影响细胞结构的观察。

总之，DAB显色原理是一种常用的免疫组织化学显色方法，通过酶的催化作用使底物DAB氧化聚合生成可见的棕色沉淀物，实现对抗原的定位和可视化。

在实际应用中，DAB显色方法被广泛应用于生物医学研究和临床诊断中，发挥着重要的作用。

辣根过氧化物酶底物化学发光底物（Western Blotting）用于辣根过氧化物酶在Western Blotting 过程SI-CPS160 KIT 2846 中的化学发光检测。

SI-CPS1120 KIT 5340SI-CPS1300 KIT 11874化学发光底物（ELISA）用于辣根过氧化物酶在ELISA 过程中的化学SI-CPS260 KIT 2760 发光检测。

SI-CPS2120 KIT 5139SI-CPS2300 KIT 11428AEC 底物试剂盒（免疫组化）该产品利用3-氨基-9-乙基-咔唑（AEC ）作为辣根过氧化物酶在免疫组化过程中的底物，在反应位SI-AEC101 KIT 895 点产生红色沉淀。

该试剂盒含缓冲液、色原质和双氧水。

AEC 可用于手动或自动免疫组化系统，可以用苏木精复染。

该产品染色后不能使用有机封片剂，需要水相的封片剂如Crystal/MountTM（B-M02，B-M03 ）。

每个试剂盒可使用至少1000 次。

AEC 片每片含20mg 底物。

5 片195 SI-A6926 50 片1090 100 片1696加强型DAB 试剂盒每片DAB 可以配制5ml 的工作液。

浓缩缓冲液中含有镍离子，强化了DAB 的显色。

DAB 沉淀是黑BI-S14 20 片1495 褐色的，可以用苏木精、甲基绿等复染。

DAB 试剂盒（膜）该试剂盒可以配制500ml 的工作液，用于膜的免SI-D6815 1KIT 2394 疫染色。

DAB 试剂盒（免疫组化）该试剂盒可以配制100ml 的工作液，用于免疫组化。

SI-D3939 1KIT 1208该产品用于辣根过氧化物酶在免疫组化、免疫细产品号规格胞化学和原位杂交过程中的显色。

每片可以配制BI-S16 100 片5-10ml 的工作液。

可以用有机或者水相的封片剂封片。

DAB 底物液（ELISA ，低动力学形式）该产品是一种即用型的溶液，用于ELISA 显色。

免疫组织化学染色原理和操作步骤一、免疫组织化学原理免疫组织化学（IHC）又称免疫细胞化学，是根据抗原—抗体特异性结合的原理，应用带有可见标记的特异性抗体作为探针，检测组织和细胞中抗原性物质的一种技术。

免疫组化技术主要有直接法和间接法：直接法是以标记的一抗孵育标本以检测其中的抗原成分；间接法则先后加入一抗和二抗，形成抗原—一抗—二抗复合体以达到检测该抗原的目的，该法因二抗的放大作用而具有较高的敏感性。

间接法常用的有过氧化物酶—抗过氧化物酶（PAP）法、亲和素—生物素—过氧化物酶（ABC）法和链霉亲和素—过氧化物酶（SP）法。

PAP法一抗和二抗均不标记，避免了标记过程对抗体活性的影响，但需要制备过氧化物酶的抗体，与适量过氧化物酶混合形成PAP复合物（含3个酶分子和2个抗体分子），染色时依次加入一抗、二抗、PAP 复合物孵育标本，最后用H2O2和二氨基联苯（DAB）为底物显示过氧化物酶，即可检测标本中的抗原成分。

生物素为含硫的杂环单羧酸，可通过其羧基与蛋白质中的氨基结合，从而标记抗体和酶。

亲合素又称抗生物素蛋白，与生物素有很高的亲合力，1分子亲合素可结合4分子生物素，ABC法即在此基础上建立。

ABC法与PAP法相似，一抗不标记，二抗用生物素标记，染色前按一定比例将亲和素与生物素标记的过氧化物酶混合，制成ABC复合物，并使亲合素分子上至少空出一个生物素结合位点。

在标本孵育过一抗和二抗后，再加入ABC复合物使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB 进行显色。

ABC法的敏感性较PAP法更高。

图1. 免疫组织化学基本原理示意图（引自八年制《组织学与胚胎学》）SP法与ABC法相似，其不同于ABC法之处在于用生物学特性与亲和素相似的链亲和素标记过氧化物酶。

在标本孵育过一抗和二抗后，加入链亲和素标记的过氧化物酶使其结合到二抗的生物素上，最后加入DAB进行显色。

与亲和素相比，链酶亲和素的结合力与亲和素相似而非特异性结合较亲和素低。

免疫显色试剂说明书【产品名称】免疫显色试剂【包装规格】【预期用途】在免疫组化反应或原位杂交反应中与首要抗原抗体结合，通过染色，将靶点进行标记。

【检测原理】免疫显色试剂是二步法免疫组化试剂盒，适合与兔或鼠源一抗配用。

其主要过程为，一抗与切片中的靶抗原形成抗原抗体复合物，酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物与抗原抗体复合物中的一抗结合，再利用辣根过氧化物酶催化二氨基联苯胺（DAB）在抗原部位形成棕色显色。

由于该系统不含生物素和链亲和素，所以不受内源性生物素干扰，染色背景非常清晰。

【主要组成成分】其他需要但未提供的材料：PBST缓冲液（pH7.2-7.4）、纯化水、酒精、脱蜡液、苏木素染色液、中性树胶、塑料湿盒、染色缸、染色架等。

【储存条件及有效期】储存条件：2-8℃，有效期18个月。

请在开瓶3个月内使用。

生产日期、有效期至：见标签。

【样本要求】常规经福尔马林固定、石蜡包埋的组织切片。

【检测方法】常规脱蜡水化：石蜡切片经常规脱蜡和水化。

抗原热修复：参照一抗说明书进行抗原修复。

DAB工作液的配制：按每毫升DAB缓冲液（试剂D）中加入50μL DAB色原（试剂C）（约1滴）的比例配制DAB工作液，DAB工作液应现配现用。

配制好的DAB 工作液需在2小时内使用，如出现沉淀，使用前先混匀。

操作步骤：1）抗原修复完毕后自然冷却的切片，用自来水清洗。

2）除去切片上组织周围的液体，用免疫组化笔圈定玻片上的待测组织区域并放入PBST缓冲液中。

3）取出切片，除去PBST缓冲液，滴加内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上孵育10分钟，用PBST清洗切片。

4）除去PBST缓冲液，滴加100μL左右一抗工作液（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），于组织上进行孵育（按照各自一抗说明书操作）。

一抗孵育完毕，用PBST清洗切片。

5）除去PBST缓冲液，每张切片加酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物（试剂B）100μL左右（视切片大小以完全覆盖切片组织为宜），室温下孵育30分钟。

广州市外显子生物技术有限公司Http//DAB显色试剂盒（20×）说明书货号：S-1503规格：溶液A：10ml溶液B：10ml保存：-20℃避光密闭保存，一年有效，避免反复冻融；短期可2-4℃保存。

产品简介：DAB是过氧化物酶（POD）的显色底物，DAB显色液主要用于免疫过氧化物酶法，适用于辣根过氧化物酶HRP 标记的免疫印记或免疫组化反应。

过氧化物酶催化底物发生反应，于反应部位产生棕色沉淀物，免疫印记可直接在膜上显示条带；免疫组化标本显色时间一般为室温10-15分钟，随后在显微镜下观察显色情况，显色充分后应将标本及时脱水封固，其终产物可直接在光镜下观察。

操作说明：1. 对于组织切片或蛋白质印记膜，在与辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次3-5 分钟。

2. 取900μl PBS（或双蒸水），加入50μl溶液A，50μl溶液B 混合均匀，即配成DAB工作液。

如需要更大体积工作液，可按比例放大。

此溶液必须现用现配，配好后避光保存，30min内使用，过期后请将剩余的液体废弃。

Http// 3. 向组织切片或印记膜上加入适量DAB工作液，确保能充分覆盖样品。

4. 室温避光孵育10-15 分钟或更长时间，避免光照，直至显色至预期深浅。

5. 去除DAB染色工作液，用蒸馏水洗涤2-3 次即可终止显色反应。

6. 对于组织切片或细胞样品，显色反应终止后，可对其进行其他染料复染。

对于膜，显色反应终止后，可以室温晾干避光保存。

注意事项：1. DAB溶液应低温密封保存。

如有结晶析出，应确保结晶完全溶解再行使用。

2. 显色工作液应现用现配，新鲜配制的工作液应为无色或浅棕色，如颜色过深，请勿使用。

3. 显色时间严格控制，根据情况调整，以免显色过度。

固相膜显色数小时后即会褪色，不能永久存在。

4. DAB为可疑致癌物，请采取必要的防范措施。

操作时应戴手套，尽量避免与皮肤接触，用后及时彻底冲洗，接触DAB的实验用品最好经洗液浸泡24h后使用。

dab与二抗显色原理DAB与二抗显色原理一、引言免疫组织化学染色（Immunohistochemistry，IHC）是一种通过检测组织标本中特定抗原与抗体的相互作用来确定该抗原存在与否的技术。

在IHC中，显色是一个重要步骤，它能够将抗原与抗体的结合位置可视化，从而得到有关组织标本的信息。

其中，DAB与二抗显色是一种常用的显色方法。

二、DAB显色原理DAB（3,3'-二氨基联苯）是一种常用的显色底物，它在存在过氧化物酶（如辣根过氧化物酶或过氧化物酶）的催化下，会发生氧化反应，产生棕色的沉淀物。

DAB的显色原理可以简单描述为：过氧化物酶将DAB氧化成稳定的有机阳离子，该阳离子在存在氨基酸的条件下聚合形成棕色的沉淀物。

三、二抗显色原理二抗显色是指在免疫组织化学染色中，使用二抗与特异性一抗结合，并通过DAB显色来可视化抗原的位置。

具体而言，二抗是与一抗种属不同的抗体，它可以结合在一抗与抗原结合的位置。

二抗通常与辣根过氧化物酶或过氧化物酶结合，形成复合物。

当底物DAB被加入后，过氧化物酶催化DAB氧化反应，产生棕色的沉淀物，从而标记出抗原的位置。

四、DAB与二抗显色的优缺点DAB与二抗显色方法在免疫组织化学染色中广泛应用，主要由于以下几个优点：1. 显色结果稳定可靠：DAB氧化反应生成的棕色沉淀物在显微镜下清晰可见，且具有较好的稳定性，不易褪色。

2. 显色反应可控性好：根据显色反应时间的长短，可以调节显色强度，使得显色结果更加可控。

3. 可视化效果好：DAB显色后的组织标本形成棕色的沉淀物，与组织背景形成明显对比，便于观察和分析。

4. 显色过程简单快速：DAB与二抗显色方法操作简单，显色过程相对快速，适用于大批量样本处理。

然而，DAB与二抗显色方法也存在一些缺点：1. 显色结果非定量：DAB与二抗显色方法只能判断抗原是否存在，而无法准确测量抗原的表达水平。

2. 显色结果有局限性：DAB显色只能形成棕色的沉淀物，对于某些需要其他颜色标记的研究，可能不适用。