细菌总数的测定法

细菌总数的测定一、准备工作1.准备好培养基（一般为普通营养琼脂培养基），称取28克培养基粉末，放入1000ml锥形瓶中，量取800ml蒸馏水倒入，放入搅拌子在搅拌器上，将溶液搅拌均匀后，再取出搅拌子（用铁棒吸出），然后用报纸包扎锥形瓶口，待灭菌。

2.取洗净干燥的培养皿，根据水样准备培养皿数，一般原水样稀释三个倍数，处理后水样稀释两个倍数，每个做两个平行样。

每十个培养皿一组，用报纸包扎好待灭菌。

3.移液枪头的灭菌：洗干净后放入盒中排列整齐，盖上盒盖，在盒子外面包一层报纸，再用橡皮筋扎紧，待灭菌。

4.小试管：每次用完都要将小试管刷洗干净，洗净后倒放在试管架上备用，如当天需要做细菌实验则将所需数量的每根试管内各加入9ml蒸馏水，赛上橡皮塞，7支一捆用报纸将试管口扎好，待灭菌。

5.250ml采样瓶及锥形瓶（加有适量玻璃珠）需提前灭菌，方便采样人员随时取用，灭菌好的采样瓶可保存一周，灭菌时每个瓶口都要用报纸包扎好。

6.标签纸准备：事先将所需的数量准备好，写上编号，以备操作时取用。

二、灭菌1.高压蒸汽锅的使用：灭菌前应先检查国锅内水位，应保持在水位标示处，过多过少都不好，放入准备步骤中待灭菌的物品，盖上小盖，然后再盖外盖，对正后对角旋好各个旋钮，使其受力均匀不至于在灭菌的过程中跑气（压力上不去即为跑气），然后关上安全阀打开放气阀，打开高压蒸汽锅开关，调好灭菌时间（一般灭菌30min），待放气阀放气声很大后关上放气阀，蒸气锅即开始依据设计的时间灭菌，此时压力表指针在1.5左右，灭菌完毕后，关上开关，待压力表指针在0处，打开安全阀放气后，才能开盖。

蒸气锅底部水若变脏则需清洗并换水。

2.细菌实验所需玻璃器皿一般需要灭菌30min。

3.净化工作台的使用：先用75%酒精灯擦拭台面，紫外灯和照明灯隔一段时间擦拭一下，并用软布擦拭干净，然后关上门，打开紫外灯按钮，照明消毒30min后再打开送风按钮，一直到实验前才关闭紫外灯，打开照明灯。

细菌总数的测定方法
细菌总数的测定方法可真是太重要啦！它能让我们清楚地了解环境或样本中细菌的数量情况。

那具体是怎么操作的呢？首先要准备好培养基，比如常用的营养琼脂培养基。

然后就是采样啦，这可不能马虎，一定要保证采样的代表性和准确性。

接下来把样品进行适当稀释，这一步要细心哦，不然可就不准确啦！再把稀释后的样品接种到培养基上，要均匀分布哟！最后就是培养啦，在适宜的温度下培养一段时间。

这里要注意的是，操作过程一定要严格无菌，避免污染，不然结果就不准确咯！而且稀释度的选择也很关键呢，要根据实际情况合理选择。

在这个过程中，安全性那是相当重要的呀！毕竟是和细菌打交道嘛。

所有的操作都要在无菌环境下进行，保证操作人员不会受到细菌的侵害。

稳定性也不容忽视呢，只有保证每次操作的一致性，才能得到可靠的结果呀。

那细菌总数的测定方法都有哪些应用场景和优势呢？哇塞，那可多了去啦！在食品行业，可以检测食品的卫生状况，保障我们的食品安全，这难道不是超级重要的吗？在医疗卫生领域，可以监测环境的细菌污染情况，为疾病防控提供依据呢。

它的优势就在于简单易行、成本较低，而且能快速得到结果呀。

就拿食品生产企业来说吧，通过定期检测生产环境中的细菌总数，可以及时发现问题，采取措施改进生产工艺和卫生条件，从而避免食品安全问题的发生。

这不是实实在在的效果吗？
细菌总数的测定方法真的是非常实用且重要的呀！它能帮助我们更好地了解和控制细菌的存在，保障我们的生活和健康呢！。

细菌总数的检验方法1 试验器材: 样品、无菌水、制备好的营养琼脂培养基200 ml 装于三角瓶、装有三、四十粒玻璃珠的三角瓶一个、平板数套、1 ml 吸管、计数器、试管。

2. 试验步骤:2.1 在无菌条件下取样品10ml。

2.2 用1 ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml ，置于9 ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀成1:100稀释液。

2.3 另取1 ml灭菌吸管吸，按上述操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml 灭菌吸管。

2.4 根据对样品的污染程度选择2到3个适宜的稀释度分别在作10倍递增稀释液的同时,即以吸取该稀释度的吸管,吸取1ml 稀释液，置于灭菌平板内，每个稀释度作2个平板。

2.5 稀释液移入平板后，立即将冷却至45°C的营养琼脂基约15 ml倾入平板中,并转动平板使混合均匀。

2.6待琼脂凝固后翻转平板,置于37°C 恒温培养箱内培养24小时或48小时，计算平板内菌落数目，将细菌菌落乘以稀释倍数，即得每毫升样品中所含菌落总数。

3 菌落计数方法:3.1 平板内菌落计数时，可用肉眼观察,必要时用放大镜。

3.2 在记下各菌落数后，求出同稀释度的各平板的平均数。

4 菌落计数的报告4.1平板菌落数的选择:选取菌落数在30到300之间的平板作为菌落数测定标准。

一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板内的菌落平均数。

其中一个平板有较大片状菌落生长时。

不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数。

若片状菌落不到平板的一半，而其余部分又很均匀,则可计算半个平板后乘以2以代表全平板的菌落数。

4.2 稀释度的选择4.2.1 应选择平均菌落数在30到300之间的稀释度，乘以稀释倍数来报告它。

4.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30到300之间，应视二者之比如何来决定，若其比值小于2，应报告其平均数。

若大于2，则报告其中较小的数字。

介绍几种新的水中细菌总数检测方法
1.流式细胞术：利用流式细胞仪将水样中的细菌进行分析和计数。

这种方法可以快速、高效地获取大量细菌数据，并且还可以进行不同种类细菌的分类和分析。

2. 基于荧光的检测方法：这种方法利用细菌表面的荧光素来进
行检测。

通过添加特定的荧光素探针，可以在短时间内快速、准确地测量水中细菌总数。

3. 基于DNA技术的检测方法：这种方法通过提取水样中的DNA，利用聚合酶链式反应(PCR)等技术来进行检测。

这种方法可以检测到
非常微小的细菌数量，而且还可以进行不同种类细菌的分子生物学鉴定。

4. 浸润法：这种方法是将一定量的水样浸润在适宜生长条件下
的培养基上，然后通过培养基上产生的菌落来计算水中细菌总数。

这种方法具有简单、易操作等特点，但是需要较长时间的培养过程。

5. QPCR技术：这种方法是一种快速、灵敏的检测细菌数量的方法，它利用荧光探针来放大和检测DNA序列。

这种方法可以在数小时内完成检测，而且可以检测不同种类的细菌。

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细菌总数测定纸片法实验报告
标题：细菌总数测定纸片法实验报告
摘要：
本实验采用纸片法测定细菌的总数。

首先，将培养基均匀涂布在琼脂培养皿上，然后将待测液体滴于培养皿上，再将纸片轻轻覆盖在液体上。

经过一段时间后，纸片上的细菌会在培养基上生长形成菌落，通过计数菌落的数量可以确定细菌的总数。

实验过程：
1. 准备琼脂培养皿，并在上面均匀涂布培养基。

2. 将待测液体滴于培养皿上，确保液体均匀分布。

3. 将纸片轻轻覆盖在液体上，避免与培养基直接接触。

4. 将培养皿倒置放置于恒温箱中，设置适宜的温度和时间进行培养。

5. 取出培养皿后，观察纸片上的菌落，使用显微镜对菌落进行放大观察。

6. 通过计数菌落的数量，利用统计方法可以估算出细菌的总数。

结果：
根据实验观察，纸片上出现多个菌落，通过放大观察可以看到菌落的形态、颜色和大小。

通过计数菌落的数量，并结合统计方法，可以估算出细菌的总数。

讨论：
纸片法测定细菌总数的优点在于方法简单、成本低廉，并且可以适用于各种类型的细菌。

然而，该方法也存在一定的局限性，
如同一种细菌可能在培养基上形成不同形态的菌落，而且纸片法只能估算出细菌的总数，无法区分不同菌落所对应的细菌种类。

结论：
通过纸片法测定细菌总数，我们可以获得关于细菌数量的大致信息。

然而，在实际应用中，我们仍需结合其他检测方法来获取更全面的细菌信息，并确保实验的准确性和可靠性。

细菌总数测定实验报告细菌总数测定实验报告引言：细菌是一类微小的生物体，广泛存在于自然界的各个角落。

细菌的数量对于环境卫生和食品安全至关重要。

本实验旨在通过测定细菌总数的方法，了解样品中细菌的数量，并探讨不同环境条件对细菌总数的影响。

实验方法：1. 样品采集：我们选择了不同环境中的样品，包括自来水、空气、餐具表面和人体皮肤表面。

通过无菌棉签或无菌采样器，分别采集样品，并放入无菌试管中。

2. 稀释液的制备：我们准备了一种稀释液，以免细菌过多导致结果不准确。

稀释液的配方为：1克氯化钠和1克蛋白胨溶解在100毫升蒸馏水中。

3. 稀释样品：将采集到的样品取出一定量，加入稀释液中，进行逐级稀释。

我们选择了1:10、1:100和1:1000三个不同的稀释倍数。

4. 培养：将稀释后的样品分别接种在琼脂平板上，利用无菌棉签均匀涂抹样品。

然后将琼脂平板倒置放置于恒温培养箱中，温度设定为37摄氏度。

培养时间为24小时。

5. 细菌总数计算：在培养箱中，我们观察到琼脂平板上的菌落。

根据菌落的数量和稀释倍数，可以计算出原始样品中的细菌总数。

实验结果：我们进行了多次实验，得到了不同样品中的细菌总数。

结果显示，自来水中的细菌总数最低，空气中次之，餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多。

此外，我们还发现，稀释倍数越高，细菌总数越低。

讨论：细菌总数的测定对于环境卫生和食品安全具有重要意义。

通过本实验，我们了解到不同环境中细菌总数的差异，为进一步研究提供了基础数据。

自来水中的细菌总数较低，这可能是由于自来水经过了严格的处理和消毒。

空气中的细菌总数稍高，这是因为空气中存在着大量的微生物，例如细菌和真菌。

餐具表面和人体皮肤表面的细菌总数较多，这与人们日常接触物体和环境有关。

稀释倍数的选择对于测定细菌总数至关重要。

过高的稀释倍数会导致菌落过少，难以准确计数；而过低的稀释倍数则会导致菌落过多，影响结果的准确性。

因此，在实际应用中，我们需要根据实际情况选择适当的稀释倍数。

第1篇一、实验目的1. 掌握细菌总数检查的基本原理和方法。

2. 了解细菌总数在食品、水质等领域的应用。

3. 培养实验操作技能，提高对微生物检测工作的认识。

二、实验原理细菌总数是指在一定条件下，每克（或每毫升）样品中所含有的细菌总数。

细菌总数是衡量样品微生物污染程度的重要指标。

本实验采用平板计数法测定细菌总数。

三、实验材料与仪器1. 材料：牛奶、自来水、土壤等样品。

2. 仪器：恒温培养箱、天平、无菌试管、无菌棉签、无菌操作台、无菌水、营养琼脂平板、计数器等。

四、实验方法1. 样品处理：将样品按照一定比例加入无菌水中，充分振荡，制成均匀的样品悬液。

2. 制备菌悬液：取适量样品悬液，用无菌吸管加入无菌试管中，依次稀释10倍、100倍、1000倍，备用。

3. 制备平板：将营养琼脂平板在恒温培养箱中培养至凝固。

4. 接种：用无菌棉签蘸取适量菌悬液，均匀涂布于平板表面。

5. 培养与计数：将接种好的平板放入恒温培养箱中，培养24小时后，观察菌落生长情况。

按照菌落数在30～300之间的平板进行计数。

6. 计算细菌总数：根据菌悬液稀释倍数，计算每克（或每毫升）样品中的细菌总数。

五、实验结果与分析1. 实验结果：样品A（牛奶）细菌总数：3.2×10^7 CFU/g样品B（自来水）细菌总数：2.1×10^5 CFU/mL样品C（土壤）细菌总数：5.8×10^7 CFU/g2. 结果分析：样品A（牛奶）的细菌总数较高，可能是因为牛奶在储存、运输过程中受到污染。

样品B（自来水）的细菌总数较低，符合我国饮用水标准。

样品C（土壤）的细菌总数较高，可能与土壤环境有关。

六、实验结论1. 本实验成功掌握了细菌总数检查的基本原理和方法。

2. 通过对样品的细菌总数检测，可以了解样品的微生物污染程度，为食品、水质等领域的质量控制提供依据。

3. 在实验过程中，需要注意无菌操作，避免污染样品。

七、实验反思1. 实验过程中，操作要规范，避免人为因素对实验结果的影响。

生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法-
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生活饮用水中细菌总数的测定法平皿计数法
测定生活饮用水中细菌总数的一种方法是平皿计数法，本文将对这种方法进行详细介绍。

一、实验原理
平皿计数法是利用细菌在液体培养基表面生长成菌落的原理，通过计算菌落个数来确定水中的细菌总数。

二、实验步骤
1. 准备培养基，将培养基倒入无菌平皿中；
2. 取样，将水样取自自来水管道或自然水源中；
3. 稀释，将取样液进行10倍、100倍、1000倍稀释，分别将每份稀释液分别均匀分散在培养基表面，避免液滴残留；
4. 写标签，标注菌落计数的相关信息，例如样品名称、稀释倍数、菌落计数的日期等；
5. 培养，将培养皿放置在恒温培养箱中，设定温度为37℃，并在3-5天内进行观察和计数。

三、实验注意事项
1. 取样应避免超过24小时，以免菌群失去代表性；
2. 取用的平皿应事先灭菌处理，以避免外来细菌的污染；
3. 实验室应有专门的抽风设备、消毒液等清洁工具，以维持实验室的高度卫生。

通过以上三个步骤，我们就可以精确地测定出生活饮用水中细菌总数。

同时，这种方法也可以应用在其他领域，例如食品安全、环境监测等
方面。

但需要注意的是，实验过程中必须遵守实验室操作规程，以保
证实验结果的可靠性。

食品中细菌总数和菌落总数是怎么样测定的？满意答案ㄨ蓶羙╰菰° 9级 2009-11-02一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。

当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。

菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。

按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。

因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。

菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。

基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。

国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。

检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。

公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定公共场所的空气质量对人们的健康和舒适度有着重要影响。

其中，微生物的存在是一个重要的指标，尤其是细菌的总数测定。

本文将介绍公共场所空气微生物检验的方法，重点关注细菌总数的测定。

公共场所的空气中存在大量的微生物，包括细菌、真菌和病毒等。

这些微生物可以通过空气传播，并对人们的健康造成潜在威胁。

因此，对公共场所的空气质量进行监测和检验是非常重要的。

细菌是一类常见的微生物，广泛存在于自然界和人类生活环境中。

测定公共场所空气中细菌总数的方法有多种，下面将介绍其中两种常用的方法。

一种常用的方法是采用空气采样器进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。

空气采样器可以根据不同的需求选择不同的类型，如空气质量检测仪、空气质量监测仪等。

采样时应注意避免污染和交叉污染，选择合适的采样时间和采样位置。

采样得到的样品需要进行培养和计数。

培养方法可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基，如选择含有某种抗生素的培养基来筛选特定的细菌。

培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。

另一种常用的方法是采用表面采样法进行采样，然后将采样得到的样品进行培养和计数。

表面采样法可以使用不同的方法，如擦拭法、刮取法、涂抹法等。

采样时应注意选择合适的采样器具和采样面积，避免污染和交叉污染。

采样得到的样品需要进行培养和计数。

培养方法和计数方法与空气采样相似，可以选择常规的液体培养基或固体培养基，也可以选择特定的培养基来筛选特定的细菌。

培养时间和培养温度也是影响结果的重要因素，一般情况下，培养24-48小时后进行计数。

细菌总数的测定结果可以通过计算得到，一般以CFU/m3（每立方米的菌落形成单位）为单位。

根据不同的场所和要求，对细菌总数的限制标准也有所不同，一般情况下，室内空气的细菌总数应控制在一定范围内，以保证公共场所的空气质量。

公共场所的空气微生物检验方法中，细菌总数的测定是一个重要的指标。

细菌总数的测定方法
测定细菌总数的方法通常包括以下几种：
1. 显微镜计数法：将待测样品制成适当浓度的悬浮液，然后使用显微镜观察计数。

这种方法常用于观察对显微镜可见的大型细菌。

2. 平板计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，然后在固体培养基上均匀涂布。

经过适当时间后，可数出单个菌落的数量，并根据稀释倍数计算出细菌总数。

3. 涂布计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，通过草屑涂布或涂布棒均匀涂布在固体培养基上。

经过适当时间后，可数出涂布上细菌的总数。

4. 易液化琼脂凝胶计数法：将待测样品制成适当稀释度的悬浮液，与液化琼脂凝胶混合，然后倒入琼脂凝胶平板上固化。

经过适当时间后，可数出液化琼脂凝胶上细菌的总数。

5. 流式细胞仪计数法：将待测样品进行适当稀释后，通过流式细胞仪对样品中的细菌进行单个细胞的计数和分析。

这种方法快速、准确，适用于大批量的细菌计数。

需要注意的是，不同的方法适用于不同类型的细菌和样品，选择合适的方法对准
确测定细菌总数十分重要。

此外，测定细菌总数时需要注意消毒、防止交叉感染等实验操作安全。

细菌总数的测定法一、细菌数测定的基本概念药品细菌数测定是微生物的定量检查，是用来判断药品被细菌污染程度和卫生质量评价的重要指标，也是检测药品质量的重要指标之一。

细菌计数是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH 位、培养温度和时间等）每1g、lml、l0cm2供试品液经培养后所生长的菌落数。

所谓一定条件是按我国药典规定，在需氧条件下，30～35℃，一般培养48h,在营养琼脂培养基平板上生长的细菌菌落数。

细菌数的测定方法有多种：平板法、薄膜过滤法、涂抹法。

药品细菌数测定是活菌计数，最常用的平板法是以平板菌落计数为依据，即每个菌落代表个菌细胞，但有的菌落也可能是多个菌细胞形成，如双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌等，很可能是多个菌细胞在一起。

故准确地说，细菌数测定值实际上是菌落形成单位数( CFU)。

平板法菌落计数法，是受一定条件的限制：如供试液是否均质，供试液中的细菌是否充分分散；培养基的质量、培养温度及培养时间的影响；有繁殖能力的菌细胞才能形成菌落，死菌及某此受损伤的细菌或营养要求苛刻的细菌在规定的培养基上不能生长，因而不被计数。

在试验操作中应考虑到这此问题。

二、设施、设备、仪器及器皿1、设施细菌数测定全过程应严格遵守无菌操作，在环境洁净净度l0000级和局部洁净度100 级单向流空气区域内进行，以防止再污染。

2、设备、仪器恒温培养箱（30～35℃）、微波炉、匀浆仪（4000～10000r / min ）、康氏振荡器、恒温水浴、电热干燥箱（250～300℃）、电冰箱、空调、高压蒸汽灭菌器（使用时要进行灭菌效果验证并应定期请有关部门检定）菌落计数器、显微镜（1500X）、电子天平（感量0.1g）、pH 值系列比色计、全封闭可拆卸或开放式的薄膜过滤器。

3、器皿锥形瓶（250～300ml ）、培养皿（∮9cm）、量筒（100ml）、试管（18×18mm）、刻度吸管（l ml , 10ml）、载玻片、玻璃或搪瓷、不锈钢消毒缸（带盖）。

细菌总数的测定（平皿计数法）1.概述本法适用于生活用水、循环冷却水及其它水中细菌总数的测定。

也适用于反渗透脱盐水中细菌总数的测定。

敞开式循环冷却水系统细菌总数的要求：≤1×105个/mL。

2.方法介绍本法采用25号浮游生物网收集循环冷却水中的黏泥，所得的黏泥用石英砂充分研磨使细胞分散，再利用平皿计数技术在（29±1）℃培养72h来测定黏泥中的细菌总数。

3.试剂和材料3.1 牛肉膏，生化试剂。

3.2 蛋白胨，生化试剂。

3.3 NaCl.3.4琼脂，生物试剂。

3.5 NaOH溶液，40g/L。

3.6 HCl，1＋11溶液。

3.7 乙醇溶液，75％。

3.8 牛皮纸。

3.9 医用脱脂棉。

3.10 医用脱脂纱布。

3.11 石英砂，210～150μm 。

4.仪器和设备4.1 25号浮游生物网。

4.2 量筒，25mL和500mL。

4.3 转子流量计。

4.4 瓷研钵。

4.5 无菌箱（室）或超净工作台。

4.6 蒸汽压力灭菌器。

4.7 生化培养箱。

4.8 电热干燥箱，温度可控制在[（60～280）±2]℃.4.9 刻度吸管，1mL和5mL。

4.10 磨口三角瓶，100mL。

4.11容量瓶，1000mL。

4.12 培养皿，d90mm 。

4.13 三角瓶，500mL。

4.14 搪瓷量杯，1000mL。

5.试验前的准备5.1 培养基的制备称取下列试剂：牛肉膏 3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g,琼脂15.0g。

将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。

用NaOH 溶液或HCl溶液调节pH值至7.2±2，并分装在500mL三角瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。

塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器在（121±1）℃下灭菌15min,此为灭过菌的培养基。

5.2 无菌稀释水的制备5.2.1 生理盐水的配制。

室内空气中细菌总数的测定方法G.1 原理采用撞击式空气微生物采样器，使空气通过狭缝或小孔产生高速气流，将悬浮在空气中的微生物采集到营养琼脂平板上，经36℃±1℃、48 h培养后得到细菌菌落数的测定方法。

G.2 营养琼脂培养基G.2.1 成分蛋白胨10 g，牛肉浸膏3 g，氯化钠5 g，琼脂20 g，蒸馏水1000 mL。

G.2.2 制法将蛋白胨、肉膏、氯化钠溶于蒸馏水中，校正pH为7.2～7.6，加入琼脂，121℃，20 min高压灭菌。

待冷却到45℃时，制成平板备用。

G.3 仪器和设备本方法中使用的仪器和设备如下：——六级筛孔撞击式微生物采样器；——高压蒸汽灭菌器；——恒温培养箱；——制备培养基用一般设备：量筒，锥形瓶，pH计或精密pH试纸等。

G.4 样品采集和保存G.4.1 点位布设见A.2。

G.4.2 以无菌操作，将营养琼脂平板逐级装入六级筛孔撞击式微生物采样器，以28.3L/min流量采集 10 min。

采样器使用按照说明书要求进行。

G.4.3 将采集后的营养琼脂平板储存于4℃，并尽快返回实验室进行培养。

G.5 分析步骤将采集后的营养琼脂平板倒置于36℃±1℃培养48 h，菌落计数。

G.6 结果计算与表示G.6.1 结果计算室内空气中细菌总数浓度按式（G.1）计算。

················································································(G.1)c =ΣN×1000v×t式中：c——细菌总数浓度，单位为菌落形成单位每立方米（CFU/m3）；ΣN——六级平板菌落合计数，单位为菌落形成单位（CFU）；v——采样流量，单位为升每分钟（L/min）；t——采样时间，单位为分钟（min）。

细菌总数的测定一、细菌总数细菌总数（细菌菌落总数，CFU）是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总数。

它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。

在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水被生活废弃物污染程度外，还指示该饮用水能否饮用。

但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。

因此，结合大肠菌群数以判断水的污染源的安全程度就更全面。

我国现行生活饮用水卫生标准（GB 5749—85）规定：细菌菌落总数在1mL自来水中不得超过100个。

二、原理细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。

然而，在实际工作中不易做到，通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。

三、仪器和材料1. 无菌培养皿（直径90mm）10套、无菌移液管1mL2支、10 mL1支。

2. 营养琼脂培养基1瓶、活性污泥或土壤或湖水1瓶、无菌稀释水901mL1瓶、9mL的5管。

3. 接种环、洒精灯或煤气灯、恒温箱。

四、实验内容与操作方法1. 实验样品制备。

用无菌锥形瓶到现场取一定量河水或取经过破碎和过滤处理的活性污泥于三角瓶中。

2. 水样稀释。

取8只装有5mL无菌水的试管分别以10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6及10-7，依次编号。

在无菌操作下，用1mL无菌吸管吸取1mL菌液于第二支试管中吸洗3次混匀，以此方法稀释至第8支试管。

3. 平板的制作。

取无菌培养皿六只编成三组每组2支，编号为10-5、10-6、10-7，另取1只无菌培养皿编号为空气对照。

另取一支无菌吸管，从浓度小的10-7开始，依次从10-7、10-6、10-5三支试管中取0.2mL 菌液放于相应的培养皿内（每个浓度2支）。

然后，在无菌操作下取40~50℃左右的已灭菌的普通培养基倒入上述培养皿内，加盖后将培养皿平放在桌上，轻微顺时针和反时针来回转动培养皿，以便菌液与培养基混合均匀，然后静置，待其冷却凝固成平板，倒置放入培养箱中，30℃培养24~48h。

.实用文档.
空缺中微生物检验方法
菌落总数测定
自然沉降法
1 原理：指直径9cm的营养琼脂平板在采样点暴露5min，经37℃、48h培养后，计数生长的细菌菌落数的采样检测方法。

2 仪器：
2.1 高压蒸汽灭菌器
2.2 恒温培养箱
2.3 冰箱
2.4 平皿〔直径9cm〕
2.5 制备培养基用一般设备
3 培养基
3.1 成分：
蛋白胨10g
牛肉浸膏3g
氯化钠5g
琼脂15～20g
蒸馏水1000mL
3.2 制法：将上述各成分混合，加热溶解，校正pH至7.4，过滤分装，121℃20min 高压灭菌，用自然沉降法时倾注约15mL于灭菌平皿内，制成营养琼脂平板。

4 操作步骤：
～1.5m。

采样点应远离墙壁1m以上，应避开空调、门窗等空气流通处。

4.2 将营养琼脂平板置于采样点处，翻开皿盖，暴露5min，盖上皿盖，翻转平板，置36℃±1℃恒温培养箱中，培养48h。

4.3 计数每块平板上生长的菌落数，球场全部采样点的平均菌落数。

以每平皿菌落数〔cfu/皿〕报告结果。

.。

一、测定方法平皿计数法二、方法依据《生活饮用水卫生规范》（2001）三、测定范围生活饮用水及其水源水中的细菌总数的测定四、测定原理细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。

按本作业指导书所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。

五、试剂营养琼脂1、成分A蛋白胨 10gB牛肉膏 3gC氯化钠 5gD琼脂 10～20gE蒸馏水 1000mL2、制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用国产含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经121℃灭菌20min，储存于冷暗处备用。

六、仪器设备1、高压蒸汽灭菌器2、干热灭菌箱3﹑培养箱36±1℃4、电炉5、天平6、冰箱7、放大镜或菌落计数器8、pH计或精密pH试纸9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等七、分析步骤1、生活饮用水1.1以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。

每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为水样1mL中的细菌总数。

2、水源水2.1以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。

2.2吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。

按同法依次稀释成1:1000，1:10000稀释液等备用。

如此递增稀释一次，必须更换一支1 mL 灭菌吸管。

2.3用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水样1mL，分别注入灭菌平皿内。

以下操作同生活饮用水的检验步骤。

八、计算1、菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。