细胞培养常用液体配置

【精华】细胞培养常用液体配置细胞冻存！/bbs/post/view?bid=66&id=1075571&sty=1&tpg=1&age=0求助：1%的胰蛋白酶如何配置成0。

25%的？急！/bbs/post/view?bid=66&id=1601091&sty=1&tpg=1&age=0求助海马神经元的培养基配方/bbs/post/view?bid=66&id=1876036&sty=1&tpg=1&age=0【求助】活性碳-葡聚糖苷处理过的胎牛血清问题/bbs/post/view?bid=66&id=1566352&sty=1&tpg=1&age=0谁知道加了小牛血清的1640还能过滤吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1936251&sty=1&tpg=1&age=0求助！/bbs/post/view?bid=66&id=1730359&sty=1&tpg=1&age=0小急！乳鼠心肌细胞培养时配胰蛋白酶没调PH值/bbs/post/view?bid=66&id=1949765&sty=1&tpg=1&age=0配ＤＭＥＭ时直接添加粉剂ＮＡＨＣＯ３可以吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1949670&sty=1&tpg=1&age=0冻存液怎么配置？/bbs/post/view?bid=66&id=1633674&sty=1&tpg=1&age=0求助乳鼠心肌细胞培养的D-HANKS液配方DMEM液和DMEM/F12液/bbs/post/view?bid=66&id=1888172&sty=1&tpg=1&age=0请教心肌细胞的消化！/bbs/post/view?bid=66&id=1913926&sty=1&tpg=1&age=0求助：急需知道/bbs/post/view?bid=66&id=1941147&sty=1&tpg=1&age=0胞内钙测定/bbs/post/view?bid=66&id=1130119&sty=1&tpg=1&age=0<共享>双抗的配置方法/bbs/post/view?bid=66&id=1933663&sty=1&tpg=1&age=0请教0.1%透明质酸酶的配制/bbs/post/view?bid=66&id=1927260&sty=1&tpg=1&age=0请教高人：关于PBS配方及浓度的问题/bbs/post/view?bid=66&id=1655901&sty=1&tpg=1&age=0【请教】培养基、血清长时间放在37度水浴箱内，还能用吗？/bbs/post/view?bid=66&id=1922789&sty=1&tpg=1&age=0关于1640液的配置/bbs/post/view?bid=66&id=1096940&sty=1&tpg=1&age=0 弱弱地问：EDTA《资源》说明书上关于1640的配置/bbs/post/view?bid=66&id=1906137&sty=1&tpg=1&age=0细胞培养常用液体配制/bbs/post/view?bid=66&id=400040&sty=1&tpg=1&age=0细胞培养用的PBS应该如何处理。

常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至7.4(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至1.5％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

4、2.5%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含0.5g卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用0.22滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

v1.0 可编辑可修改常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。

4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

实验一培养用液的配制、除菌与分装【实验目的】1. 掌握常见培养用液的配制方法。

2. 掌握常用的灭菌方法。

3. 了解每种培养用液的作用。

【实验原理】常用细胞培养用液包括磷酸盐平衡盐溶液（Phosphate Buffered Saline，PBS）、液体培养基、胰蛋白酶（Trypsin）和EDTA溶液。

PBS用于清洗细胞、配制胰蛋白酶和EDTA。

培养基含有细胞生长需要的各种营养元素，使用时通常还需填加血清和抗生素。

鱼类细胞培养的培养基常用种类是MEM 和L-15；用于动物的一般是DMEM和RPMI-1640。

胰蛋白酶可将贴壁的细胞从培养瓶壁上消化下来，通常使用浓度为0.25%或0.125%。

EDTA 用于清洗细胞表面，螯合Ca2+等二价离子，使细胞易于为胰蛋白酶消化。

细胞培养用的试剂必需是无菌的，PBS 和EDTA 可以采用高压灭菌，而培养基和胰蛋白酶溶液含生物活性物质，配制好后通过过滤除菌。

【试剂、材料与仪器】试剂：NaCl ；KCl；Na2HPO4；KH2PO4；EDTA；胰蛋白酶；HEPES；碳酸氢钠；MEM或PRMI-1640 培养基干粉；GPS材料：三蒸水，蒸馏水瓶，精密天平，药匙，称量纸，烧杯（250 mL、1000 mL），玻棒，精密pH 试纸（6.8-8.0），容量瓶（250 mL、1000 mL），一次性注射器，一次性过滤器，普镊，酒精灯，打火机，医用酒精，消毒纱布，酒精喷壶，已高压灭菌试剂瓶（500 mL、250 mL、100 mL），记号笔，标签纸，橡胶手套，移液管（5 mL、10 mL），封口膜仪器：超净工作台，加液枪，4℃冰箱【实验分组】实验分组进行，每组4人，每班20人，共分5组。

第1组配制PBS并高压灭菌，第2组配制胰蛋白酶溶液并过滤除菌和分装，第3组配制EDTA溶液并分装高压灭菌，第4组配制培养基，第5组过滤除菌培养基并分装。

每个实验小组需准备试剂有：胰酶50 mL；EDTA 50 mL；培养基90 mL（使用前加入10 mL血清）。

细胞培养标准操作程序(SOP）1．目的:为了保证培养细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培养的基本操作步骤，特制订实验室细胞培养操作流程。

2．适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培养工作的人员。

3．操作规程：3。

1 培养液、PBS、胰蛋白酶的配制3.1.1 1000ml培养液的配制1、准备用品：培养粉、1000ml烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH仪、2～3天内的新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）、NaHCO3粉、1000ml无菌玻璃瓶（100ml×10个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3个过滤器、注射器。

紫外线照台30min.2、将培养粉用900ml新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末.3、充分搅拌，按说明添加成分(如Invitrogen公司的RPMI—1640配制1000ml需加NaHCO3粉2。

0g,Invitrogen 公司的DMEM需加NaHCO3粉3.7g等），再充分搅拌.无需加谷氨酰胺，因该培养基里已含有。

4、用1M(1mol/L）HCl 调PH至7。

0左右（细胞适宜在PH7。

2~7。

4生长，配制好后PH值会升高0。

2～0。

3，故配时调PH至7。

0左右）。

5、用新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）定容到1000ml.6、配青霉素 80万/瓶 + 4ml 蒸馏水溶解配链霉素100万/瓶 + 4ml 蒸馏水溶解取0。

5ml青霉素和0.4ml链霉素加入到1000ml培养液中，使其终浓度均为100U/ml，充分搅拌混匀。

7、在无菌操作台里用0.22um的除菌滤膜过滤配制好的培养液,并分装到到100ml玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口,盖上橡皮塞,放—20℃保存备用.注意：(1）配制培养液及调节培养液PH值所使用的HCl和（或）NaOH均需新鲜三蒸水(或新鲜反渗水）配制。

一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。

（2）准备的100ml×10个玻璃瓶必须事先高压灭菌！烧杯、量筒、玻棒、盛新鲜三蒸水（或新鲜反渗水）的容器均不需高压灭菌,干净即可.3。

常用液体配制标准操作规程（SOP）国家传染病诊断试剂与疫苗工程技术研究中心二〇〇八年九月修订目录一、细菌培养系统（责任人：郑子峥）二、DNA操作系统（责任人：罗文新、陈瑛炜）三、蛋白质操作系统（责任人：李少伟、顾颖、潘晖榕）四、细胞培养相关（责任人：程通、张涛）五、单克隆抗体制备系统（责任人：陈毅歆、）六、EIA系统（责任人：葛胜祥、熊君辉）一、细菌培养系统1、LB培养基:每1000mL加分析纯NaCl 10g ，蛋白胨 10g，酵母粉5g，用ddH2O 配制，再用10M NaOH调pH至(1000mL一般加450ul)，高压蒸汽灭菌15min冷却后使用。

2、固体培养基:LB培养基中加入琼脂至％，高压蒸汽灭菌15min后使用。

3、10%(g/V) 氨苄青霉素钠（Ap）：注射用氨苄青霉素钠（粉末）50g溶于500ml无菌去离子水中，溶解后分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的氨苄青霉素粉末不是无菌包装的，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。

4、%(g/V)硫酸卡那霉素（Kan）注射用硫酸卡那霉素（液体）通常是2ml/支，内含卡那霉素。

取25支药剂（50ml），加入450ml无菌去离子水中，分装入4ml灭菌的EP管，全程超净工作台内操作，避免染菌，分装后－20度保存，培养细菌时做1000×使用。

注：如果购买的卡那霉素是粉末状的非无菌包装，溶解后需用滤膜过滤除菌后再分装。

5、细菌培养：配制相应抗性培养基，每试管倒入3~4ml培养基（卡那霉素抗性培养采用标记试管），无菌牙签挑取单克隆至试管中，于37℃，220rpm 培养。

剩余培养基做好抗性和日期标记，置于4℃保存。

6、化学感受态制备：1）原理:：细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态，这时的菌细胞称为感受态细胞（Competent cell）。

将细菌置于0℃，低渗CaCl2 溶液中时，菌细胞壁和膜的通透性增强，菌体膨胀成球型。

液体配制及实验方法（一）液体配制1.完全培养基DMEM+10%FBS+1%双抗+（1%HAPS液）若放置时间长于2周加1%谷氨酰胺2.PBS1000ml去离子水中溶解8.0gNaCl、0.2gKCl、2.89gNa2HPO4、0.26gNaH2PO43.胰酶用之前调节PH值至7.64.CaCl2将0.165gCaCl2粉末溶于10ml去离子水中配制成50X的溶液每5ml胶原酶中加入100μl CaCl2溶液（终浓度3μmol/L）用于激活胶原酶的活性5.双抗终浓度：青霉素100万U/100ml 链霉素100万U/100ml青霉素0.6μg为1个单位链霉素1.2195μg为一个单位称取青、链霉素粉末各0.6、1.2195g溶于10mlPBS中再定容至100ml6.两性霉素B100mg两性霉素B粉末溶于40mlPBS中，制成浓度为2.5mg/ml(1000X)的浓缩液每100ml完全培养基中加入100μl 浓缩液，稀释为终浓度2.5μg/ml7.细胞冻存液20%DMSO+80%FBS(1mlDMSO+4mlFBS)8STZ溶液STZ溶于柠檬酸和柠檬酸三钠的盐溶液中称取柠檬酸0.105g溶于5mlPBS 称取柠檬酸三钠0.145g溶于5mlPBS中混合两者制成10毫升的溶解液. 再将100mgSTZ粉末溶于该溶解液中制成浓度1%的STZ溶液，调节PH值至4.5，4°避光保存，由于STZ水溶性不稳定，溶液最好在半小时内使用完毕.9油红O原液：油红O 0.6g溶于异丙醇（99% ）100ml 。

稀释液：油红O 原液20ml ，蒸馏水20ml ，过滤后使用。

10茜素红称取0.1g茜素红粉溶于100mlPBS，调节PH值到7.2，过滤后使用.11成骨诱导液配方：DMEM(H)+10%FBS+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+0.1μmol/L地塞米松+50mg/LVitC1）β-甘油磷酸钠分子量：216 溶于水10mmol/L=216mg/100ml称取216mgβ-甘油磷酸钠粉末溶于100ml低糖完全培养基中2）地塞米松分子量：392.5 在无水乙醇中的溶解度为1mg/ml.0.1μmo l/L=0.04mg/L将100mg地塞米松溶于100ml无水乙醇中制成25000X的浓缩液每100ml低糖完全培养基中加入4μl地塞米松浓缩液3）VitC分子量176.1 溶于水称取5mgVitC粉末溶于100ml低糖完全培养基中12成脂诱导液配方：DMEM(L)+10%FBS+10μmol/L地塞米松+200μmol/L吲哚美辛+0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX）+10mg/L胰岛素1）每100ml高糖完全培养基中400μl地塞米松浓缩液2）吲哚美辛分子量：357.79 在无水乙醇中的溶解度为1g/50ml PH 7.4以下0.2mmol/L=7.16mg/100ml称取720mg吲哚美辛粉末溶于50ml无水乙醇制成200X的浓缩液每100ml高糖完全培养基中加入500μl吲哚美辛浓缩液3）IBMX分子量：222.25 在DMSO中的溶解度为1M(222.25mg/ml)0.5mmol/L=1.1mg/100ml将100mgIBMX粉末溶于1mlDMSO 制成100mg/ml(9100X)浓缩液每100ml高糖完全培养基中加入11μlIBMX浓缩液4）Insulin浓缩液浓度为10mg/ml(1000X)每100ml高糖完全培养基中加入Insulin浓缩液100μl.溶解粉末时均需先用少量液体溶解，再定容。

细胞培养相关常用液体配制标准SOP操作规程样本（一）胰酶的配制：（浓度为1‰，1L）1、认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2、称取牛胰蛋白酶1.0g；EDTA 2 g；3、用超纯水溶解；4、磁力搅拌器搅拌至胰酶完全溶解，溶液变得澄清；5、超纯水定容至1L；6、不锈钢滤器加0.22um滤纸两张高温灭菌后，在超净工作台过滤；7、在血清瓶中加入少量滤好的胰酶，置于细胞培养箱中检测是否染菌，其余置于4℃待用；8、过滤后洗净滤器再次灭菌，避免残留的胰酶降解蛋白。

（二）DMEM配制：1、所需试剂及材料：试剂：DMEM干粉（GIBCO 10L）、超纯水（Milli-Q）、Na2CO3 （Sigma）材料：10L玻璃瓶、500ml盐水瓶（灭菌）、0.22um滤膜、滤器（事先放好两层滤膜并高压灭菌）、磁力搅拌器大号搅拌子蠕动泵胶塞2、操作步骤：(1)10L玻璃瓶洗涤，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

(2)在10L玻璃瓶中加入超纯水9.5L，将DMEM干粉倒入，在磁力搅拌器上搅拌溶解。

(3)按照3.7g/L 加入Na2CO3 。

(4)调节pH值至7.2~7.4。

(5)过滤分装，并注明名称及配制日期。

此过程注意无菌操作！(6)最后用血清瓶取10ml左右置于细胞培养箱中检测是否染菌。

(7)清洗滤器，10L玻璃瓶，软管，将所有实验器具归位。

（三）1640、MEM培养基的配制同上，Na2CO3的用量见包装说明（四）细胞间100×双抗（青霉素、链霉素）的配制青霉素及链霉素配制的终浓度为1万单位/毫升。

配制的步骤以400ml为例：1.认真清洗配制容器，自来水20遍，去离子水5遍，超纯水润洗3遍。

2.准备5瓶青霉素（80万单位/瓶）、4瓶链霉素（100万单位/瓶）。

3.加入1-2ml细胞间专用PBS进入青霉素、链霉素的瓶子内，浸泡后吹吸数次至全部溶解，溶解后的液体吸入配制容器内。

常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是为了在体外维持细胞生长和增殖所设计的一种营养液。

细胞培养基的配方要求提供细胞所需的基本营养物质，如氨基酸、糖类、维生素和激素，并提供适当的pH和离子平衡。

同时，缓冲液也是细胞培养过程中不可或缺的一部分，用于稳定细胞培养基的pH，维持细胞正常的生长环境。

下面列举几种常用的细胞培养基配方及缓冲液：1. DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)-细胞培养基配方：-DMEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：无2. RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute Medium) -细胞培养基配方：-RPMI1640培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)溶液，浓度为25mM，用于稳定pH。

3. MEM (Minimum Essential Medium)-细胞培养基配方：-MEM培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)- 缓冲液：盐酸/NaOH缓冲体系，通常用NaHCO3/N-2-羟乙基piperazine-N'-2-乙磺酸(HEPES)缓冲。

4. Hank's Balanced Salt Solution (HBSS)-细胞培养基配方：-HBSS培养基粉末-对应体积的无菌水-缓冲液：无5. L-15 Medium (Leibovitz's L-15 Medium)-细胞培养基配方：-L-15培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。

6. DMEM/F12 Medium (Dulbecco's Modified Eagle Medium and Ham's F-12 Medium)-细胞培养基配方：-DMEM/F12培养基粉末-对应体积的无菌水-10%火马骅胎血清(FBS)-1%青霉素/链霉素(P/S)-缓冲液：HEPES溶液，浓度为25mM。

一、新生大鼠、新生小鼠及鸡胚背根神经节分散细胞培养种植培养液：80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L)；10%胎牛血清；10%马血清；NGF 20ng/ml；谷氨酰胺100μg/ml。

脱氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。

饲养培养液: 95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,)；5 % 马血清；NGF 20ng/ml；神经营养素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。

二、新生小鼠颈上交感神经元分散细胞培养种植培养液：80%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L)；10%胎牛血清；10%马血清；NGF 20ng/ml；谷氨酰胺100μg/ml。

脱氧核糖核酸酶 I 40μg/ml。

饲养培养液：95%Eagle's DMEM(含葡萄糖600mg/100ml、NaHCO3 3.7g/L,)；5%马血清； NGF 20 ng/ml；神经营养素 1ml/100ml；谷氨酰胺100μg/ml。

三、解剖溶液：由平衡盐水（D1-无钙镁离子的Puck氏液）、HEPES缓冲液和蔗糖－葡萄糖溶液组成称为D1-SGH。

D1平衡盐水：NaCl 8.0g、KCl 0.4g、Na2HPO4.7H2O 0.045g、KH2PO4 0.03g、酚红0.0012g、三蒸水50ml。

蔗糖－葡萄糖（SG）：蔗糖7.5g、葡萄糖3g、三蒸水50ml。

7.4，加三蒸水至28ml。

~HEPES（H，0.352mM）：用25ml左右的三蒸水溶解2.35g的HEPES后，用NaOH 或HCl调pH至7.3C︒将D1、SG和H三者合在一起并稀释到1000ml即为解剖液，小瓶分装成5ml后置4 备用四、pbs缓冲液1、含0.05%吐温－20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS－T)配制方法为：称取磷酸二氢钾(KH2PO4)，磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)，氯化钠(NaCl)，氯化钾(KCl)，吐温－20 ，加水。

微生物实验室常见20种培养基配方大全1.肉汤培养基成分：牛肉膏或牛肉汤500克，葡萄糖10克，胰蛋白胨10克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于各种需有机氮源的细菌的培养。

2.十倍腌盐水成分：NaCl300克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于耐盐真菌和嗜盐细菌的培养。

3.果胶培养基成分：果胶5克，葡萄糖5克，NaNO32克，K2HPO40.2克，MgSO4·7H2O0.1克，CaCO30.02克，FeSO4·7H2O0.01克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于果胶酶产生菌的培养。

4.大肠杆菌选择性培养基成分：土豆提取物4克，蛋白胨2克，乳糖10克，NaCl10克，胆盐0.75克，碱性蓝2克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于分离大肠杆菌的选择性培养。

5.卡波培养基成分：石蜡300克，肉浸膏100克，大豆酪蛋白胨20克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于致病真菌的培养。

6. Nutrient Broth培养基成分：肉膏1克，酵母提取物2克，葡萄糖2克，NaCl5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于细菌和真菌的常规培养。

7. Luria-Bertani（LB）培养基成分：酵母提取物5克，酪蛋白胨10克，NaCl10克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于E. coli等细菌的培养。

8. Sabouraud葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖40克，醇20克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于真菌的培养。

9. MacConkey琼脂培养基成分：鱼精膏20克，胆盐胆红素15克，玛琪琼脂25克，NaCl5克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于肠道杆菌的培养、分离。

10.马加提琼脂培养基成分：马加提琼脂50克，蒸馏水1000毫升。

用途：适用于细菌、酵母和霉菌的常规培养。

11.酵母醇葡萄糖琼脂培养基成分：葡萄糖20克，醇30克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。

常用细胞培养基配方及缓冲液细胞培养基是一种含有适当营养物质和生长因子的液体或凝胶，用于维持细胞的生长与繁殖。

常用的细胞培养基配方和缓冲液如下：一、常用的细胞培养基配方：1. DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）-DMEM是最常用的细胞培养基之一，适用于多种种类的细胞培养。

-基本配方：-高糖DMEM：添加25mM葡萄糖-低糖DMEM：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸DMEM：添加高浓度的氨基酸，以促进细胞生长和蛋白质合成。

2.RPMI1640-适用于淋巴细胞和一些肿瘤细胞的培养。

-基本配方：-高糖RPMI1640：添加25mM葡萄糖-低糖RPMI1640：添加5.5mM葡萄糖-高氨基酸RPMI1640：添加高浓度的氨基酸。

3. MEM（Minimum Essential Medium）-MEM是最早用于细胞培养的培养基。

-基本配方：-高糖MEM：添加25mM葡萄糖-低糖MEM：添加5.5mM葡萄糖4. Ham's F-10-适用于肿瘤细胞和一些原代细胞的培养。

-基本配方：- 高糖Ham's F-10：添加25mM葡萄糖- 低糖Ham's F-10：添加5.5mM葡萄糖5.L-15-适用于多种种类的细胞培养。

-基本配方：- L-15培养基：必须在CO2-free环境下使用。

二、常用的缓冲液：1. 磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Saline，PBS）-0.1MPBS的配方：-8gNaCl-0.2gKCl-1.44gNa2HPO4-0.24gKH2PO4-1L去离子水-调pH至7.42.HEPES缓冲液-基本配方：-119mMNaCl-5mMKCl-0.8mMMgSO4-0.4mMKH2PO4-2.4mMNaHCO3-20mMHEPES（pH7.4）-0.6mMCaCl23. Tris缓冲液-基本配方：- 25mM Tris- 192mM glycine-10%甘油-0.1%SDS-pH8.34. Hanks平衡盐液 (HBSS)-基本配方：-8gNaCl-0.4gKCl-0.146gKH2PO4-0.2gMgSO4-0.06gMgCl2-0.35gNaHCO3-0.06gNa2HPO4-pH7.45. Tris-EDTA-基本配方：- 1M Tris-HCl，pH 8.0-0.5MEDTA，pH8.0以上是常用的细胞培养基配方和缓冲液的一些例子，不同细胞类型和实验要求可能需要不同的培养基和缓冲液。

酵母菌液体培养基配方酵母菌液体培养基是一种用于培养和繁殖酵母菌的培养基。

它提供了酵母菌所需的营养物质和环境条件，使其能够正常生长和繁殖。

下面将介绍一种常用的酵母菌液体培养基配方。

配方：- 葡萄糖（20 g/L）：提供碳源，为酵母菌提供能量。

- 酵母浸出物（10 g/L）：提供氮源和维生素，促进酵母菌的生长和繁殖。

- 酵母精蛋白（5 g/L）：提供氮源和维生素，增强酵母菌的生长和繁殖能力。

- 氯化镁（1 g/L）：提供镁离子，维持细胞内环境稳定。

- 磷酸二氢钾（3 g/L）：提供磷酸盐，为酵母菌提供磷源。

- 氯化钙（0.1 g/L）：提供钙离子，维持细胞内钙离子平衡。

- 硫酸镁（0.5 g/L）：提供镁离子，维持细胞内环境稳定。

- 硫酸钾（0.5 g/L）：提供钾离子，维持细胞内钾离子平衡。

- 硫酸铵（1 g/L）：提供氮源，为酵母菌提供氮源。

- 氯化钠（1 g/L）：提供钠离子，维持细胞内钠离子平衡。

- 红曲粉（0.01 g/L）：提供维生素和生长因子，促进酵母菌的生长和繁殖。

将葡萄糖、酵母浸出物、酵母精蛋白、氯化镁、磷酸二氢钾、氯化钙、硫酸镁、硫酸钾、硫酸铵和氯化钠按照配方中的比例加入适量的蒸馏水中。

然后，将培养基混合均匀，并用蒸馏水调整pH值，使其保持在5.5-6.0的范围内。

pH的调整可以使用盐酸或氢氧化钠溶液进行。

接下来，将培养基分装到装有适量的量筒或瓶中，并用塞子或铝箔密封，以防止细菌和其他污染物的进入。

将培养基在121摄氏度高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌处理，以杀灭其中的细菌和其他有害微生物。

完成以上步骤后，酵母菌液体培养基就可以用于培养和繁殖酵母菌了。

总结：酵母菌液体培养基配方的制备是一个相对简单的过程，只需要将适量的各种营养物质按照一定比例加入蒸馏水中，并进行适当的pH 调整和高温高压灭菌处理，就可以得到一种适用于酵母菌生长和繁殖的培养基。

这种培养基可以广泛应用于酵母菌的实验室研究和工业生产中，为酵母菌的生长和繁殖提供了必要的条件和营养物质。

一、培养细胞常用配置培养基的配置：基础培养基500ml+胎牛血清50ml+双抗5ml冻存液的配置：10 % DMSO + 90%胎牛血清依次比例酌量配置。

超净工作台常规配置移液器1套（2.5μl、20μl、200μl、1ml），酒精灯1盏，液器1台，斜架1台，酒精喷壶1个，酒精棉球缸1个，污缸1个，常规耗材：培养瓶（50㎝2），定量移液管（5ml、10ml），枪头（1ml、200μl、10μl），培养皿，6/24/48/96孔板，医用脱脂棉球，冻存管所需试剂：培养基，胎牛血清，双抗，DMSO，胰酶，75%酒精……实验前准备：所需的各项高压后的耗材及污物缸放于超净工作台内，用酒精喷壶喷洒实验台面，并关闭工作台打开紫外灯照射30min后开始实验操作。

培养基及胰酶恢复常温后使用，可37℃水浴5-10min二、细胞复苏步骤：1. 紫外消毒30min后关闭紫外灯，开启超净台正常工作状态，用酒精消毒操作者的双手。

2. 培养液（DMEM），恒温水浴箱37℃预热20min，备用。

超净台内准备一支15ml离心管备用。

3.将所需的培养基确保瓶身干净后酒精消毒放于工作台面内，点燃酒精灯，再将瓶口对准在酒精灯上消毒2-3次，旋开瓶盖后需再次分别消毒瓶口和瓶盖。

4. 从液氮保存罐中取出冻存管，立即放入37℃水浴中，快速摇晃，直至冻存液融化至黄豆粒大小后迅速取出。

5. 将细胞悬液移入15ml离心管，缓慢加入4ml培养液，离心（1000r/min，5min）。

6. 取出2个培养皿并做好标记（复苏日期等），提前加入5-10ml培养液；离心结束后用1ml培养液悬液混悬沉淀细胞后分别加入培养皿内。

7. 将培养基瓶口和瓶盖消毒2-3次后拧紧，熄灭酒精灯，整理实验台面，取出实验试剂及污缸等，关闭超净工作台。

8. 将培养瓶放入培养箱内培养注意事项：1. 取细胞的过程中注意带好防冻手套。

此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。

生物工程配液方案模板一、实验目的本实验旨在通过配制合适的培养基，为生物工程实验提供所需的适宜环境，以满足细胞培养、发酵、基因表达等过程的需求。

二、实验材料1. 蒸馏水2. 葡萄糖3. 酵母粉4. 大豆蛋白胨5. 酵母提取物6. 胰蛋白酶7. 氰化钾8. 磷酸二氢钠9. 硫酸镁10. 不同种类的氮源：氨酸、尿素、硝酸铵等11. 不同种类的微量元素：铁盐、锌盐、锰盐等三、实验仪器1. 电子天平2. 反应釜3. 干燥箱4. 培养箱5. 恒温振荡器四、实验步骤1. 配制基础培养基a. 在1000ml蒸馏水中加入20g葡萄糖，搅拌均匀。

b. 加入10g酵母粉和5g大豆蛋白胨，继续搅拌至完全溶解。

c. 在溶液中加入氰化钾0.5g、磷酸二氢钠0.5g和硫酸镁0.5g，搅拌均匀。

2. 调整pH值a. 使用pH计测定溶液的pH值，一般调整到7.0左右。

b. 如果pH值偏高，可以添加少量盐酸或硫酸调节；如果pH值偏低，可以添加少量氢氧化钠或氢氧化钠调节。

3. 添加微量元素和氮源a. 根据实验需要，加入不同种类的氮源和微量元素。

b. 最常用的氮源是氨酸，需要根据实验需求调整添加量；微量元素一般以铁盐、锌盐、锰盐为主，也需要根据实验需求调整添加量。

4. 混合均匀并灭菌a. 将配制好的培养基溶液通过过滤器或高温高压的方法进行灭菌处理，确保培养基的无菌性。

b. 灭菌处理后，培养基可存放在4摄氏度冰箱中，待生物工程实验使用。

五、实验注意事项1. 配制培养基时要注意严格按照操作流程进行，确保培养基的质量和无菌性。

2. 在调整pH值时需小心操作，避免对人身体造成伤害。

3. 在添加氮源和微量元素时，根据实验需要合理调整添加量，避免过量或不足。

4. 灭菌处理时需使用专业设备，并严格按照操作规程进行。

六、实验结果通过本实验的配制，可获得适宜的培养基溶液，用于生物工程实验中的细胞培养、发酵、基因表达等过程，为实验提供所需的适宜环境。

七、实验结论本实验设计的培养基配液方案可以满足生物工程实验中的培养基需求，为后续实验提供了良好的基础条件。

细胞培养PBS配方
所需试剂和设备:
-NaCl(氯化钠)
-KCl(氯化钾)
-Na2HPO4(磷酸氢二钠)
-KH2PO4(磷酸二氢钾)
-无菌水
-电子天平
-烧杯和量筒
-反应管和磨研器
步骤:
1.称取所需试剂。

根据下述配方，称取正确比例的NaCl、KCl、
Na2HPO4和KH2PO4、确保所有试剂都是无菌的，并在称取时保持清洁卫生。

2.备制1L的PBS溶液。

将称取的试剂添加到烧杯中，并用无菌水稀
释至1L。

3.搅拌混合。

使用一个电子磨研器或类似的设备，将溶液进行彻底的
混合以确保所有试剂充分溶解。

尽可能避免气泡的形成。

4.pH调节。

使用pH计来测定溶液的pH值。

根据需要，使用NaOH或HCl溶液调节pH值。

PBS的理想pH值为7.4左右。

5.灭菌。

将溶液装入无菌试管中，并将其密封。

以121°C的温度下，在高压蒸汽灭菌器中处理溶液。

处理时间为15-20分钟。

注意事项:
-在制备PBS时务必保持实验室的环境无菌，因为这种溶液广泛应用
于细菌和真菌的生长培养中。

-要使用新鲜的试剂来制备PBS，以避免试剂的老化和变质。

-处理溶液时要小心，避免对溶液的污染。

使用无菌操作来减少污染
的风险。

-在制备PBS溶液之前，请先确保相关设备（如烧杯、磨研器等）已
经过彻底清洁和消毒处理。

培养细胞所需的几种主要液体的配制方法：1．DMEM维持培养基DMEM基础培养基95ml 95ml胎牛血清5ml谷氨酰胺液2ml含有DMEM基础培养基95ml，胎牛血清5ml，谷氨酰胺液2ml。

混合均匀，密封后与4摄氏度保存。

2．D-hank’sD-hank’s干粉g(1袋)NaHCO3超纯水1000ml取D-hank’s干粉加入超纯水500ml搅拌均匀，加入的NaHCO3搅拌至完全溶解，倒入1000ml容量瓶中，用1mol/l的HCL或者NaOH 溶液调整溶液的PH值为7.2,最后经过∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装后4摄氏度保存.3. DMEM完全培养基85ml,DMEM基础培养液85ml,, l-谷氨酰胺溶液, 2ml1000u/ml双抗液1ml胎牛血清15ml取DMEM基础培养基85ml, 胎牛血清15ml,l -谷氨酰胺溶液2ml,混合均匀,密封于4摄氏度保存.4. DMEM细胞基础培养基DMEM干粉(1袋)Na2HCO3超纯水1000 ml取DMEM干粉1袋()倒入烧杯中,取800ml 超纯水溶解培养基干粉,搅拌均匀,然后向溶液中加入的Na2HCO3,搅拌至完全溶解后倾入1000 ml容量瓶中,再用1mol/l 的HCL 或者1mol/l的NaOH溶液调整溶液的PH值为7.2,混合均匀后,定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装4摄氏度保存.5. l-谷氨酰胺溶液l-谷氨酰胺DMEM基础培养基100ml称取l-谷氨酰胺干粉g于烧杯中,加80 ml超纯水于烧杯中搅拌溶解,用100ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20摄氏度保存.使用添加量是1ml/50ml,使用浓度是2mmol/l.青霉素(注射用) 80万单位(1瓶)链霉素(注射用) 0.8 g％生理盐水80ml取注射用青霉素100万单位及注射用链霉素于80ml DMEM培养基中,搅拌混合均匀,用∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中-20℃％的胰酶溶液胰蛋白酶干粉 0.25 gDMEM基础培养基100ml称取胰蛋白酶干粉0.25 g于烧杯中,加入80ml DMEM基础培养基溶液,进行搅拌溶解,100 ml容量瓶定容,∮0.22微升的滤膜过滤除菌,分装于小瓶中于-20℃条件下保存.8.mg/ml的内皮细胞生长添加物溶液(ECGS)ECGS干粉 15 g(1支)无菌超净水 6 ml取内皮细胞生长添加物15 g(1支),加入6 ml无菌超纯水完全溶解后,分装于-20℃条件下保存.在培养基中添加剂量为1ml/50ml,即培养基浓度为50微克/ ml.9.PBS 液KCLNaclNa2HPO4.12H2OKH2PO4分别取KCL, Nacl, Na2HPO4.12H2O, KH2PO4于烧杯中,加入适量的超纯水搅拌至所有药物完全溶解,然后倾入1000ml容量瓶中,最后定容并调节PH为7.20,分装于4℃保存,。