Chondrogenic differentiation of rabbit bone marrow-derived mesenchymal stem cells in vitro by ag

RADA-16自组装多肽的合成表征及负载BMP-2的细胞相容性研究于鹏;李明;贾丙申;纪志华;付昆【摘要】目的将RADA-16、珊瑚和BMP-2组成复合材料体系,研究其超微结构及与BMSCs细胞相容性.方法将RADA-16溶解于10％无菌蔗糖溶液中,浓度为1％(10 mg/mL,m/v),将RADA-16再用等体积细胞培养基DMEM/F12溶液触发多肽自组装,浸润珊瑚,进行电镜扫描.等比例混合RADA-16与BMP-2溶液后,把珊瑚在混合液中浸没,用相同体积的DMEM/F12培养基触发自组装的发生,扫描电镜检测.分离培养兔BMSCs,细胞活性染色观察细胞相容性.结果 RADA-16自组装能够形成凝胶,在50倍电镜下观察珊瑚呈多孔状结构,大小均匀,孔隙在200～500μm范围内,且孔隙紧密排布;130倍扫描电镜下观察,RADA-16自组装多肽凝胶均匀附着于珊瑚孔隙中;1000倍扫描电镜显示,RADA-16自组装形成片层与网状结构,其直径从几微米到几十微米不等;10000扫描电镜显示,在珊瑚孔隙中BMP-2黏附于RADA-16,成功合成复合材料体系(RADA-16、珊瑚、BMP-2),BMSCs培养过程中,实验1组(RADA-16、珊瑚、BMP-2)、实验2组(RADA-16、珊瑚)与对照组(珊瑚)中BMSCs都未见明显死亡细胞,差异无统计学意义(P>0.05).结论多肽RADA-16在特定的条件下可以自组装复合材料体系(自组装多肽、珊瑚、BMP-2),与BMSCs有良好的相容性,可以作为骨修复组织工程的生物支架材料.【期刊名称】《局解手术学杂志》【年(卷),期】2018(027)007【总页数】4页(P463-466)【关键词】珊瑚;RADA-16多肽;BMP-2;自组装;细胞相容性【作者】于鹏;李明;贾丙申;纪志华;付昆【作者单位】海南医学院第一附属医院关节创伤外科,海南海口570102;海南医学院第一附属医院关节创伤外科,海南海口570102;海南医学院第一附属医院关节创伤外科,海南海口570102;海南医学院第一附属医院关节创伤外科,海南海口570102;海南医学院第一附属医院关节创伤外科,海南海口570102【正文语种】中文【中图分类】R593.22骨缺损因自体骨移植受到自体骨源有限的限制，往往不能达到完全填充骨缺损区所需要的骨量，随着骨组织工程技术的发展，人造骨组织填充材料不断出现，其可以填充骨缺损区域并促进缺损区域骨生长愈合，提高治疗效果，缩短治疗时间[1]。

李春亮等 Sox9 基因过表达对人脂肪干细胞增殖、凋亡及成软骨分化的影响及机制研究 第 17 期 doi：10. 3969/j. issn. 1000-484X. 2021. 17. 0因过表达对人脂肪干细胞增殖、凋亡及成软骨分化的影响及机制 研究①
李春亮 秦 凤 齐普良 孙凯华 韩雪来 张金柱 刘延蓉 李钊伟 王 凯 李泽清 （青海省人民医院骨科，西宁 810001）
中图分类号 R687. 4 文献标志码 A 文章编号 1000-484X（2021）17-2059-06 ［摘 要］ 目的：研究 Sox9 基因过表达对人脂肪干细胞（hADSCs）增殖、凋亡及成软骨分化的影响及机制。方法：酶消化 法分离 hADSCs 体外培养扩增，Lenti-Sox9-EGFP、Lenti-EGFP 慢病毒液分别感染 hADSCs，设为过表达组和空载组，另以无菌生 理盐水代替设为对照组。比较各组 Sox9 蛋白表达、细胞增殖、转化生长因子 β1（TGF-β1）、信号转导蛋白 3（Smad 3）蛋白表达、 细胞凋亡情况；hADSCs 成软骨诱导分化 2 周检测成软骨分化情况；比较各组 TGF-β1、Smad 3 蛋白表达情况。结果：显微镜下 观察 hADSCs 细胞形态正常，流式细胞计数鉴定 hADSCs 表面抗原符合生物学特征。与空载组和对照组比较，过表达组 Sox9 蛋 白相对表达量更高，MTT 试验 24 h、48 h、72 h 的 A 值与培养 24 h、48 h、72 h 后 TGF-β1、Smad 3 蛋白相对表达量较高，凋亡率降 低（P<0.001）。成软骨诱导分化 2 周后甲苯胺蓝染色显示过表达组 hADSCs 胞浆及细胞核为蓝紫色，空载组和对照组为微弱淡 蓝色；Ⅱ型胶原免疫组化染色过表达组为强阳性，空载组和对照组为弱阳性。与对照组和空载组比较，过表达组 TGF-β1、 Smad 3 蛋白相对表达量更高（P<0.001）。结论：Sox9 基因过表达可促进 hADSCs 增殖及成软骨分化，抑制 hADSCs 凋亡，其机制 可能与上调 TGF-β1、Smad 3 蛋白的表达有关。 ［关键词］ 性别决定区 Y 框蛋白 9；人脂肪干细胞；成软骨分化；增殖；凋亡

1.PNA 端粒FISH 探针肽核酸（PNA ）PNA 本身不带电荷所以在原位杂交实验中很好的特异性，用PNA 探针的FISH (fluorescent in situ hybridization)实验可以用低浓度的PNA 探针进行快速的杂交，可以减少背景结合且有很高的信噪比。

F1001 TelC-FAM5nmoleF1002 TelC-Cy3 5nmoleF1003 TelC-Cy5 5nmoleF1004 TelC-Alexa488 5nmoleF1005 TelG-FAM 5nmoleF1006 TelG-Cy3 5nmoleF1007 TelG-Cy5 5nmoleF1008 TelG-Alexa488 5nmoleF1009 TelC-FITC 5nmoleF1010 TelG-FITC 5nmoleF2001 TelC-TMR 5nmoleF2002 TelG-TMR 5nmole2.着丝粒FISH 探针检查染色体的着丝粒确认三染色体性、多染色体、断裂等与染色体数相关的染色体的异常。

F3003 Cent-Cy3 5nmoleF3006 Cent-FAM 5nmole参考文献（端粒FISH 探针和着丝粒FISH 探针）：1Kentaro Taemura et al., Dynamic rearrangement of telomeres during spermatogenesis in mice. Developmental Biology. 2005;281:196-207.2Won-Woo Lee et al., Age-related telomere length dynamics in peripheral blood mononuclear cells of healthy cynomolgus monkeys measured by Flow FISH. Immunology. 2002;105:458-465.3Heather Perry et al., Identification of indicator microorganisms using a standardized PNA FISH method. Journal of Microbiological Methods 2001;47:281-292.4Caifu Chen et al., Single base discrimination of CENP-B repeats on mouse and human chromosomes with PNA-FISH. Mammalian Genome. 1999;10:13-18.5M. Hultdin et al., Telomere analysis by flourescence in situ hybridization and flow cytometry. Nucleic Acids Research. 1998;26(16):3651-3656.6Peter M. Landsdorp et al., Heterogeneity in telomere length of human chromosomes. Human Molecular Genetics. 1996;5(5):685-691.3.PNA oligomers for PCR clamping 球蛋白抑制剂血液内存在的mRNA 的70%以上是球蛋白mRNA，显著减少基因的发现分析及敏感度。

高同型半胱氨酸血症家兔动脉粥样硬化发生机制的研究李颖;彭海【期刊名称】《中国神经免疫学和神经病学杂志》【年(卷),期】2004(011)004【摘要】目的观察高同型半胱氨酸血症家兔发生动脉粥样硬化过程中是否伴有细胞间黏附分子-1、血管细胞黏附分子-1表达,及其与活性氧、核因子-κB是否相关.方法采用皮下注射蛋氨酸法建立高同型半胱氨酸血症动物模型,以光镜和透射电镜方法观察动脉病理形态学改变,用比色法观察血浆超氧化物歧化酶活力、活性氧水平变化,经免疫组织化学方法观察细胞黏附分子和核因子-κB的表达. 结果 (1)7周末对照组家兔血浆同型半胱氨酸水平无明显变化,而实验组明显增高.(2)对照组动脉壁结构基本正常,实验组光镜、电镜下均呈动脉粥样硬化早期改变.(3)对照组血浆超氧化物歧化酶活力、活性氧水平无明显变化,实验组前者显著下降而后者增高.(4)对照组细胞黏附分子、核因子-κB表达水平较低,实验组明显增高.结论高同型半胱氨酸血症可能通过诱导细胞黏附分子表达而导致动脉粥样硬化形成,此过程可能与活性氧及核因子-κB有关.【总页数】4页(P206-209)【作者】李颖;彭海【作者单位】华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,湖北,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科,湖北,武汉,430022【正文语种】中文【中图分类】R743.1【相关文献】1.胱氨酸致家兔动脉粥样硬化发生机制的实验研究 [J], 闵姜勇;林伦民2.高同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化机制的研究进展 [J], 徐倩;曹凯3.高同型半胱氨酸血症导致动脉粥样硬化氧化应激机制的研究进展 [J], 陈宝丽4.高同型半胱氨酸血症促进动脉粥样硬化发生发展的炎症免疫机制 [J], 冯娟;王宪5.高同型半胱氨酸血症致动脉粥样硬化机制研究进展 [J], 刘晓军;蔡东联因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。