㊃实验研究㊃基金项目:甘肃省自然科学基金(1606R J Z A 147,145R J Z A 026);兰州市人才创新创业科技计划项目(2014-R C -71)通信作者:史彦斌,E m a i l :s h i yb @l z u .e d u .c n 大黄素固相脂质纳米粒对大鼠帕金森模型的治疗效果王 霞1,孟 敏1,吴玉琼2,李金成3,史彦斌3(1.甘肃省人民医院药剂科,甘肃兰州730000;2.甘肃省第二人民医院药剂科,甘肃兰州730000;3.兰州大学药学院,甘肃兰州730000) 摘 要:目的 评价大黄素固相脂质纳米粒对大鼠帕金森模型的防治效果,为大黄素新制剂的研发提供参考㊂方法 采用乳化蒸发-低温固化法,应用单硬酯酸甘油酯㊁聚氧乙烯氢化蓖麻油R H 40和聚山梨酯(吐温-80)(3ʒ1,w /w )将大黄素制成固相脂质纳米粒,通过口服给药,调查其对6-羟基多巴胺(6-OH D A )诱发的帕金森病模型大鼠的行为学㊁中脑组织中儿茶酚-O -甲基转移酶(C OM T )和单胺氧化酶B (MA O -B )含量的影响,评价其对帕金森症的防治作用㊂结果 大黄素固相脂质纳米粒在透视电镜下观察,外观呈圆球形,粒径介于40~100n m ;与生理盐水组帕金森模型大鼠比较,大黄素固相脂质纳米粒能够显著降低帕金森模型大鼠的中脑组织中的C OM T 和MA O -B 浓度,大黄素混悬液能显著降低帕金森模型大鼠中脑组织中MA O -B 浓度,但对C OM T 浓度无显著影响㊂结论 大黄素固相脂质纳米粒通过降低6-OH D A 诱发的帕金森模型大鼠脑内的C OM T 和MA O -B 水平发挥治疗帕金森症的作用,其效果优于混悬液㊂关键词:帕金森障碍;大黄素;固相脂质纳米粒中图分类号:R 745.7 文献标志码:A 文章编号:1004-583X (2017)09-0782-05d o i :10.3969/j.i s s n .1004-583X.2017.09.012E f f e c t o f e m o d i n l o a d e d s o l i d l i p i dn a n o pa r t i c l e s o nP a r k i n s o nm o d e l i n r a t s W a n g X i a 1,M e n g M i n 1,W uY u q i o n g 2,L i J i n c h e n g 3,S h iY a n b i n 31.D e p a r t m e n t o f P h a m a c e u t i c s ,t h eP e o p l e 'sH o s p i t a l o f G a n s uP r o v i n c e ,L a n z h o u 730000,C h i n a ;2.D e p a r t m e n t o f P h a m a c e u t i c s ,t h eS e c o n dP e o p l e 'sH o s p i t a l o f Ga n s uP r o v i n c e ,L a n z h o u 730000,C h i n a ;3.C o l l e g e o f P h a r m a c y ,L a n z h o uU n i v e r s i t y ,L a n z h o u 730000,C h i n a C o r r e s p o n d i n g a u t h e r :S h iY a n b i n ,E m a i l :s h i yb @l z u .e d u .c n A B S T R A C T :O b je c t i v e T o e v a l u a t e t h e r a p e u t i c ef f e c t o f e m o d i n l o a d e d s o l i d l i p i dn a n o p a r t i c l e s (E MO -S L N )o n P a r k i n s o nm o d e l o f r a t s .M e t h o d s E MO -S L N w e r e p r e p a r e db y a p p l y i ng e m u l s i o ne v a p o r a t i o n -s o l i d i f i c a t i o na t l o w t e m p e r a t u r em e th o dwi t h g l y c e r y lm o n o s t e a r a t ea n dc r e m o p h o rR H 40a sw e l l a s p o l ys o r b a t e80(t w e e n80)(3:1,w /w ).T oo b s e r v e t h e i n f l u e n c e o fE MO -S L Ni n6-OH D Ai n d u c e d t h eb e h a v i o r o fP a r k i n s o nm o d e l r a t s ᶄ,c o n c e n t r a t i o no fMA O -Ba n dC OM T i nm i d d l e b r a i n f o l l o w i n g o r a l a d m i n i s t r a t i o n ,t h e r a p e u t i c e f f e c t o fE MO -S L No n r a t sm o d e l o f P a r k i n s o nd i s e a s e .R e s u l t s E MO -S L N w a s s p h e r i c a l i nm o r p h o l o g y a n d t h e d i a m e t e rw a s i n t h e r a n geo f 40-100n m.C o m p a r e dw i t hP a r k i n s o nd i s e a s em o d e l r a t s d i v i d e d i n t on o r m a l s a l i n e g r o u p ,r o t a t i n g be h a v i o r of r a t s i nE MO -S L Ng r o u p a n d e m o d i n s u s p e n s i o n g r o u p w a s i m pr o v e d .C o n c e n t r a t i o n s o fMA O -Ba n dC OM T i nm i d d l e b r a i n o f P a r k i n s o n d i s e a s em o d e l r a t sf o rE MO -S L N g r o u p w e r es i g n i f i c a n t l y re d u c e d ,w h i l e MA O -Bc o n c e n t r a t i o ni n m i d d l eb r a i nof e m o d i n s u s p e n s i o ng r o u p r e d u c e d s i g n i f i c a n t l y b u tC OM Tc o n c e n t r a t i o nsh o w e dn osi g n i f i c a n t d i f f e r e n c e c o m pa r e dt o n o r m a l s a l i n e c o n t r o l g r o u p .C o n c l u s i o n E MO -S L Ns h o w e de f f e c to n6-OH D Ar a tm o d e lo fP a r k i n s o nd i s e a s eb yl o w e r i n g c o n c n e n t a t i o no fC OM Ta n d MA O -B ,a n d i t s t h e r a p e u t i c e f f i c i e n c y i s b e t t e r t h a n t h a t o f e m o d i n s u s pe n s i o n .K E Y W O R D S :P a r k i n s o n i a nd i s o r d e r s ;e m o d i n ;s o l i d l i p i dn a n o pa r t i c l e s 大黄素(1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌)是一种广泛存在于蓼科植物大黄㊁首乌和虎杖中植物中的蒽醌类衍生物㊂现代药理学研究表明,大黄素具有泻下[1]㊁抗肿瘤[2-4]㊁神经保护[5-6]㊁降脂降血糖[7]㊁抗感染[8]㊁抗微生物[9]等生物活性㊂随着我国人口的老龄化,帕金森症的发病率呈现上升趋势㊂现代医学认为帕金森症可能与泛素-蛋白酶体系统功能障碍与蛋白分解障碍㊁神经递质多巴胺减少㊁氧化应激㊁神经营养因子缺乏㊁细胞凋亡等多种因素有关[10-11]㊂单胺氧化酶B (MA O -B )和儿茶酚氧位甲基转基酶(C OMT )高表达均可使多巴胺减少,导致帕金森症状[12-13]㊂文献报道大黄素㊁大黄酚和大黄素甲醚均具有保护神经活性[6]㊂大黄素能显著抑制脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1的表达[14],降低脑缺血组织中N F -κB m R N A 表达水平,降低大脑皮层神经元β-淀粉样蛋白诱导的神经毒㊃287㊃‘临床荟萃“ 2017年9月5日第32卷第9期 C l i n i c a l F o c u s ,S e pt e m b e r 5,2017,V o l 32,N o .9Copyright ©博看网. All Rights Reserved.性[15],减少神经元凋亡和脑梗死体积而表现出神经保护活性[16]㊂由此可见,大黄素是一种具有潜在神经保护活性的天然蒽醌类化合物㊂L i u[17]和T e n g等[18]报道大鼠口服给药后,大黄素进入体循环主要以葡萄糖醛酸化代谢产物的形式存在,首过效应明显㊂大黄素与葡萄糖醛酸结合而使自身极性增强,进而排出体外,从而在一定程度上导致大黄素体内生物利用度低㊂为了克服大黄素口服生物利用度低的不足,一些药物制剂新技术应用于大黄素的新型给药系统,如大黄素纳米粒[19]㊁脂质体[20]㊁聚合物胶束[21]㊁固相脂质纳米粒[22]和纳米乳[23]等㊂本课题组采用乳化蒸发-低温固化法,应用单硬酯酸甘油酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油R H40/吐温-80(3ʒ1,w/w)将大黄素制成了固相脂质纳米粒,通过口服给药,调查其对帕金森模型大鼠的行为学㊁中脑组织的MA O-B㊁C OMT含量的影响,探讨其对帕金森症的防治效果,为大黄素类药物新制剂的研发提供参考㊂1材料与方法1.1试剂大黄素对照品,纯度>98%,批号: 110757,规格:20m g,购自中国食品药品检定研究院;单硬酯酸甘油酯,批号:20150217,规格:100g,兰州旋光化学技术有限公司;泊洛沙姆188,批号: P08978,规格:250g,阿达玛斯试剂(上海)有限公司;聚氧乙烯氢化蓖麻油R H40,规格:1k g,批号: 81088756p0,德国B A S F公司;6-羟基多巴胺(6-O H D A),纯度>98.5%,批号:083M4624V,规格:5 m g,美国S i g m a公司;盐酸阿扑吗啡(A P O),纯度> 98.5%,批号:S L B G9333V,规格:100m g,美国S i g m a公司;大鼠单胺氧化酶-B(MA O-B)和儿茶酚氧位甲基转基酶(C OMT)E L I S A试剂盒,批号: 201608,武汉华联科生物技术有限公司;甲醇(色谱纯),批号:20151106083,山东禹王实业有限公司化工分公司㊂1.2动物W i s t a r大鼠,雄性,250~320g,清洁级,购自兰州大学实验动物中心,生产许可证号: S C X K(甘)2005-0007,使用许可证号:S Y X K(甘) 2005-0007㊂所有动物均食用全价营养配合饲料,自由摄食饮水㊂1.3仪器W a t e r s2998高效液相色谱仪(W a t e r sC o.,L t d,U S A)㊁D F-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司)㊁R E-52A A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)㊁J Y92-I I N超声波细胞粉碎机(宁波新芝生物科技股份有限公司)㊁C R21G I I I日立高速离心机(株式会社日立制作所,日本)㊁C P A225D数显电子天平(北京赛多利斯仪器有限公司)㊁JE M-1200E X型透射电镜(J E O L公司,日本);Z e t a s i z e rN a n o3600激光动态散射仪(马尔文仪器有限公司,英国);大鼠脑立体定位仪(深圳市瑞沃德生命科技有限公司)㊂1.4试验药物制备1.4.1大黄素的提取与纯化甘肃掌叶大黄块状根茎,来源:甘肃礼县,存样凭证:N o.856002,鉴定人:李建银(兰州大学药学院生药学研究所)㊂掌叶大黄根茎粉碎,粉末按照1:5(w/v)与20%硫酸混合,70ħ酸解,抽滤,滤渣水洗后干燥㊂按照1:30 (w/v)加入90%乙醇,超声提取,抽滤,滤液减压浓缩,残留水混悬液用氯仿萃取,有机层用氢氧化钠溶液萃取,加入盐酸调p H值至2.0,离心,沉淀用水洗至中性,真空干燥得大黄蒽醌粗提物㊂粗提物经硅胶柱层析,石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,浓缩,重结晶得黄色至棕红色产物㊂用对照品为参照,经薄层色谱法定性鉴别为大黄酚㊁大黄素甲醚㊁大黄素㊁芦荟大黄素及大黄酸㊂以大黄素对照品为参照,反相高效液相色谱外标一点法定量分析,色谱柱为D i a m o n s i l-C18柱(250mmˑ4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸(88:12,v/v),流速1m l/m i n,紫外检测波长254n m,柱温40ħ,进样体积:20μl㊂所得大黄素纯度不低于95.0%㊂纯化大黄素的高效液相色谱(H P L C),见图1㊂图1大黄素的高效液相色谱图1.4.2大黄素固相脂质纳米粒的制备采用乳化蒸发-低温固化法制备固相脂质纳米粒㊂准确称取自制大黄素6.0m g,单硬脂酸甘油酯60m g,加入5 m l丙酮后,置于60ħ水浴中加热溶解;取适量聚氧乙烯氢化蓖麻油R H40和吐温-80(3ʒ1,w/w),加入20m l去离子水,使得乳化剂浓度为15%(w/v),于同样温度下加热溶解㊂在上述水浴温度下,将油相逐滴加入到水相中,滴注过程中以1000g的速度持续搅拌约2小时,蒸发除去丙酮㊂剩余水混悬液快速置于冰水浴中持续搅拌2小时,水相滤膜过滤,冷冻干燥,即得大黄素固相脂质纳米粒㊂给药前用纯水稀释至含大黄素质量浓度为1m g/m l的固相脂㊃387㊃‘临床荟萃“2017年9月5日第32卷第9期 C l i n i c a l F o c u s,S e p t e m b e r5,2017,V o l32,N o.9Copyright©博看网. All Rights Reserved.质纳米粒混悬液㊂用S e p h a d e xG凝胶柱分离游离药物和包封药物,H P L C分析计算包封率和载药量㊂1.4.3大黄素固相脂质纳米粒的表征透射电镜下观察大黄素固相纳米粒的形态㊂马尔文激光粒度仪分析其粒径和Z e t a电位㊂以葡聚糖凝胶S e p h a d e xG-50色谱小柱分离大黄素固相脂质纳米粒和未包封的大黄素,活化后上样,用去离子水洗脱,收集带有乳光的洗脱液,转移至25m l容量瓶,用甲醇定容㊂取同体积的同一批载药纳米粒,不经过凝胶过滤色谱分离,直接加入甲醇定容至25m l,摇匀㊂1.4.4空白脂质纳米粒的制备按照大黄素固相脂质纳米粒的制备方法制备不加大黄素的脂质纳米粒㊂给药前按与大黄素固相脂质纳米粒稀释相同倍数得混悬液㊂1.4.5大黄素混悬液的制备配制含0.2%吐温80和0.5%(w/v)羧甲基纤维素钠的混合溶液,按每毫升混合溶液加入1.0m g大黄素,磁力搅拌均匀,即得大黄素混悬液㊂1.5方法1.5.1大鼠帕金森模型的建立W i s t a r大鼠,用10%水合氯醛按4.0m l/k g剂量腹腔注射麻醉㊂之后将大鼠俯卧位固定于大鼠大脑立体定位仪上㊂剪毛后常规消毒,钝性分离至暴露头骨,30%双氧水和生理盐水清洗㊂依照P a x i n o s a n d W a t s o n(1986)图谱,以前囟为标准参考点,牙科钻开颅,按硬膜下两点将6-O H D A溶液定位注射于一侧纹状体内㊂每点注射1.5μl6-O H D A溶液(5μg/μl),注射速度为0.3μl/m i n,留针5m i n,术后大鼠置于安静保温处直至清醒,自由进食饮水㊂1.5.2分组与给药 W i s t a r大鼠随机分为5组,每组5~10只,其中1~4组进行6-O H D A立体定位注射造模,造模后次日分别口服给予大黄素固相脂质纳米粒混悬液㊁空白脂质纳米粒混悬液㊁大黄素混悬液和生理盐水,单次口服剂量为10m l/k g(10m g/ k g),给药间隔为12小时,连续给药4周;第5组作为正常大鼠对照组,不给予任何药物㊂各组大鼠分别于注射6-O H D A进行纹状体损伤后第1㊁2㊁3和4周进行行为学评价㊂1.5.3取样与检测第4周行为学评价后,处死大鼠,取出脑组织,分离出中脑,称取重量,加入一定量的p H7.4磷酸缓冲液,2~8ħ的温度下匀浆,3500 g低温离心20分钟,收集上清㊂按照试剂盒操作说明(酶联免疫分析/E L I S A),分别检测大鼠的中脑组织中单胺氧化酶B(MA O-B)和儿茶酚-O-甲基转移酶(C OMT)含量,比较各组间酶含量的变化㊂含量测定时,先用纯化的酶抗体包被微孔板,制成固相抗体㊂往包被单抗的微孔中加入待测酶对照液或样品,37ħ温育30分钟,再加入辣根过氧化物酶标记的待测酶抗体,37ħ温育30分钟,经3次洗涤后加底物TM B显色㊂用酶标仪在450n m波长下测定吸光度(O D值,X),分别通过标准曲线计算样品中MA O-B和C OMT的浓度(Y)㊂1.6统计学方法采用S P S S19.0统计软件进行统计学处理,计量资料用平均值ʃ标准差(x-ʃs)表示,多组间比较采用单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义㊂2结果2.1大黄素固相脂质纳米粒的性质采用乳化蒸发-低温固化法制备所得的大黄素固相脂质纳米粒在透视电镜下观察,外观呈圆球形,平均粒径介于40~100n m,与激光粒度分析仪测定结果基本相符㊂泽塔电位(Z P)值为(-25.2ʃ0.5)m V㊂柱分离-H P L C法测得平均包封率为51.2%,载药量为3.6%㊂见图2㊂图2大黄素固相脂质纳米粒的透射电镜图2.2大鼠帕金森模型的评价2.2.1 A P O诱导的旋转行为从注射6-O H D A损伤纹状体手术后第1周开始,大鼠正中颈部皮下注射A P O2.0m l/k g(0.5m g/k g)诱导旋转行为㊂大鼠旋转时以健侧后肢为支点,原地逆时针旋转,首尾相接360度为1转,从皮下注射A P O后5分钟开始记录旋转的次数,观察30分钟;不完全损伤的大鼠会绕1个圈旋转,也纳入造模成功范围㊂每周观察1次,连续4周㊂至第4周时约90%的术后大鼠能够㊃487㊃‘临床荟萃“2017年9月5日第32卷第9期 C l i n i c a l F o c u s,S e p t e m b e r5,2017,V o l32,N o.9Copyright©博看网. All Rights Reserved.发生连续旋转行为㊂2.2.2大鼠悬空摆动试验经中后部尾巴提起大鼠,使大鼠头处于向下垂直状态,头部距离地面约2 c m,以摆动偏离垂直位并再返回到垂直位记为摆动1次,记录提起20次中大鼠头或上身向左摆动的次数㊂该指标判断干扰因素多,但基本能确定有75%的大鼠向左摆动的频率明显高于其它方向㊂2.2.3行为学评价预实验中,A P O诱导的大鼠旋转行为随6-O H D A损伤时间延长而加快㊂而在术后给予药物干预后,第4周观察时,大黄素固相脂质纳米粒组大鼠旋转行为与大黄素混悬液组和生理盐水组相比,均得到一定程度的改善,正常组大鼠无规律性旋转㊂2.3 MA O-B和C OMT含量检测通过E L I S A实验,得到C OMT的标准曲线为Y(n g/g)=(0.0434 -2958.12954)/(1+(x/4.70641E7)^(0.72237))+ 2958.12954,r2=0.98943,线性范围为8.734~ 3694.252n g/g㊂同法得到MA O-B标准曲线为Y (n g/g)=(0.09316-3.32865)/[1+(x/58.58028)^ (1.22077)]+3.32865,r2=0.99633,线性范围为0.756~241.62n g/g㊂大黄素固相脂质纳米粒与生理盐水组比较,两种酶含量均显著降低;而大黄素混悬液组与生理盐水组比较,仅MA O-B含量显著降低㊂生理盐水组与空白固相脂质纳米粒组比较,两种酶含量差异均无统计学意义,大黄素固相脂质纳米粒组与正常对照组比较,两种酶含量差异均无统计学意义,而大黄素混悬液组和正常对照组间比较,MA O-B含量差异无统计学意义,但大黄素混悬液组的C OMT含量比正常对照组的含量显著增高㊂见表1㊂表1考察大黄素及其制剂对6-O H D A诱发帕金森大鼠模型的中脑组织中C O M T和M A O-B含量的影响(n g/g,x-ʃs,n=5)组别C OM T MA O-B生理盐水76.413ʃ28.2737.074ʃ1.156大黄素固相脂质纳米粒35.957ʃ10.248*#ә3.658ʃ1.093*空白固相脂质纳米粒87.617ʃ43.9285.106ʃ1.387大黄素混悬液78.161ʃ28.4224.221ʃ1.367*正常对照39.972ʃ11.936*ә3.732ʃ0.420* F值33.58743.862P值0.0310.019注:与生理盐水组比较,*P<0.05;与空白固相脂质纳米粒组比较,#P<0.05;与大黄素混悬液组比较,әP<0.053讨论3.1大黄素固相脂质纳米粒的制备课题组之前进行了大黄素纳米乳的制备,虽然解决了大黄素水溶性差㊁口服生物利用度低的问题[23-24]㊂但发现所制纳米乳长期贮存不稳定,主要表现为乳液由澄清变浑浊,提示乳滴发生聚集,进而会影响口服给药的吸收㊂因此,选用生物相容性材料脂肪酸甘油酯类,将大黄素制成了固相脂质纳米粒,既增加了稳定性,又避免了选用含氰基高分子材料制备纳米粒的生物毒性㊂连续4周的口服给药显示大黄素的体重增加与正常对照组相似,提示大黄素固相脂质纳米粒不会对大鼠造成明显的毒性㊂3.2大鼠帕金森模型的建立建立帕金森膜型的方法很多,一般选择雄性大鼠进行造模㊂诸如大鼠6-O H D A模型㊁机械损伤大鼠帕金森模型㊁1-甲基-4苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(M P T P)帕金森模型㊁鱼藤酮大鼠帕金森模型等[25]㊂其中最常用的是大鼠6-O H D A模型,其也是第一个选择性破坏儿茶酚胺神经系统的工具药㊂模型成功与否的评价手段很多,包括行为学异常㊁神经病理改变和神经递质变化㊁神经毒性评价等㊂本研究基于预实验的经验和节约成本考虑,在挑选帕金森模型大鼠时仅采用了诱导旋转和悬空摆动㊂主要依据单侧纹状体注射神经毒素6-O H D A后,皮下注射A P O诱导旋转的方法判断造模是否成功㊂3.3防治效果的评价 E L I S A实验在加入待测样本时,有双抗体夹心一步法和两步法[26]㊂预实验采用双抗体夹心一步法,即将对照液或样本和辣根过氧化物酶标记的抗体同时加入到含有酶抗体的微孔板孔中,考察了大黄素固相脂质纳米粒给药模型组的中脑组织中的C OMT和MA O-B表达量随时间的变化趋势㊂预实验结果显示大黄素固相脂质纳米粒给药模型组的中脑组织中的MA O-B浓度和C OMT的O D值(C OMT浓度低于检测限)在4小时和36小时均达到谷值,36小时后又上升㊂为了能够分别定量C OMT和MA O-B浓度,本实验采用两步法(即待测样本加入后温育,再加H R P标记的抗体后温育),C OMT和MA O-B最低检测浓度分别达到7.834n g/g和0.756n g/g㊂由实验结果可知,生理盐水组MA O-B与C OMT含量最高,与正常对照组相比差异有统计学意义,结合行为学结果,表明单侧纹状体内两点注射6-O H D A能够引起帕金森样病变;大黄素固相脂质纳米粒混悬液组与生理盐水组间差异有统计学意义,表明大黄素固相脂质纳米粒可以显著降低模型组脑内两种酶含量,理论上可以降低两种酶诱导的多巴胺降解反应㊂大黄素固相脂质纳米粒混悬液组与空白固相脂质纳米粒混悬液组间酶含量明显差异,表明引起两种酶表达量降低的为药物大黄素㊂大黄素固相脂质纳米粒混悬液组和㊃587㊃‘临床荟萃“2017年9月5日第32卷第9期 C l i n i c a l F o c u s,S e p t e m b e r5,2017,V o l32,N o.9Copyright©博看网. All Rights Reserved.大黄素混悬液组间的显著差异显示固相脂质纳米粒剂型在降低C OMT表达量作用优于混悬液㊂而两种剂型对于MA O-B作用差异无统计学意义,这对进一步研究给药剂量设计提供参考,也为将来的研究提供新的思路㊂参考文献:[1]S r i n i v a sG,B a b y k u t t y S,S a t h i a d e v a n P P,e ta l.M o l e c u l a rm e c h a n i s m o f e m o d i n a c t i o n:t r a n s i t i o n f r o m l a x a t i v ei n g r e d i e n t t o a na n t i t u m o r a g e n t[J].M e dR e sR e v,2007,27(5):591-608.[2]S h i aC S,S u r e s hG,H o uY C,e t a l.S u p p r e s s i o n o nm e t a s t a s i sb y r h u b a r b t h r o u g hm o d u l a t i o no n MM P-2a n du P Ai nh u m a nA549l u n g a d e n o c a r c i n o m a:A n e x v i v o a p p r o a c h[J].JE t h n o p h a r m a c o l,2011,133(2):426-433.[3] H s uC M,H s uY A,T s a i Y,e t a l.E m o d i n i n h i b i t s t h e g r o w t ho fh e p a t o m ac e l l s:F i n d i n g t h ec o mm o na n t i-c a n c e r p a t h w a yu s i n g H u h7,H e p3B,a n d H e p G2c e l l s[J].B i o c h e m B i o p h y sR e sC o mm u n,2010,392(4):473-478.[4] W a n g C G,Y a n g J Q,L i u B Z,e ta l.A n t i-t u m o ra c t i v i t y o fe m o d i na g a i n s th u m a nc h r o n i cm y e l o c y t i c l e u k e m i aK562c e l ll i n e s i nv i t r o a n d i nv i v o[J].E u r JP h a r m a c o l,2010,627(1-3):33-41.[5] A l i S,W a t s o n M S,O s b o r n e R H.T h es t i m u l a n tc a t h a r t i c,e m o d i n,c o n t r a c t s t h er a t i s o l a t e d i l e u m b y t r i g g e r i n g r e l e a s eo f e n d o g e n o u sa c e t y l c h o l i n e[J].A u t o n A u t a c o i dP h a r m a c o l, 2004,24(4):103-105.[6] L i M,F u Q,L i Y,e t a l.E m o d i n o p p o s e s c h r o n i cu n p r e d i c t a b l e m i l ds t r e s si n d u c e dd e p r e s s i v e-l i k eb e h a v i o ri nm i c eb y u p r e g u l a t i n g t h e l e v e l so fh i p p o c a m p a l g l u c o c o r t i c o i d r e c e p t o r a n d b r a i n-d e r i v e d n e u r o t r o p h i c f a c t o r[J].F i t o t e r a p i a, 2014,98:1-10.[7] X u eJ F,D i n g W J,L i u Y.A n t i-d i a b e t i ce f f e c t so fe m o d i ni n v o l v e d i nt h ea c t i v a t i o no fP P A Rγo nh i g h-f a td i e t-f e da n dl o w d o s e o f s t r e p t o z o t o c i n-i n d u c e d d i a b e t i c m i c e[J].F i t o t e r a p i a,2010,81(3):173-177.[8]孙燕妮,杨洁,王丽敏,等.大黄素对脓毒症急性肺损伤大鼠水通道蛋白1表达的影响[J].临床荟萃,2014,29(8):903-908.[9] X i o n g H R,L u oJ,H o u W,e ta l.T h ee f f e c to f e m o d i n,a na n t h r a q u i n o n ed e r i v a t i v ee x t r a c t e df r o m t h er o o t so fR h e u mt a n g u t i c u m,a g a i n s th e r p e ss i m p l e xv i r u s i nv i t r oa n d i nv i v o[J].JE t h n o p h a r m a c o l,2011,133(2):718-723. 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