血清碱性磷酸酶活力测定
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血清碱性磷酸酶ALP磷酸对硝基苯酚法测定作业指导书1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4,2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP)存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯(pNPP)的转换速率决定。
ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率,它与标本中ALP的活性成正比。
2. 标本采集与处理:2.1 病人准备:无特殊要求。
2.2 标本类型:标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。
2.3 血清分离:应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3. 标本存放:2~3天内的活性损失:15~25℃保存:<10%;标本稳定性:4~8℃保存稳定7天;-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上,最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4. 标本运输:常温条件下运输5. 标本拒收标准:细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 上海申能ALP测定试剂盒(141 0417170 1 试剂1 6×64 ml +试剂 2 6×16 ml)6.1.1 试剂组成试剂1:2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP)缓冲液0.90mol/L (pH:10.4)醋酸镁1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA2.0mmol/L试剂2:磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存:原试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。
6.1.5 注意事项:碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠,避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性,切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触,请速用水冲洗。
6.2 校准品:使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。
血清碱性磷酸酶(ALP)磷酸对硝基苯酚法测定1.实验原理碱性磷酸酶的活性由在pH值为10.4,2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP)存在的情况下测量p-硝基-磷酸苯酯(pNPP)的转换速率决定。
ALPpNPP + AMP -----------﹥pNP+AMP-PO4在410/480nm测定pNP的生成速率,它与标本中ALP的活性成正比。
2. 标本采集与处理:2.1 病人准备:无特殊要求。
2.2 标本类型:标本最好是无溶血的血清或肝素化的血浆。
2.3 血清分离:应在收集后两小时内分离出来。
避免使用含EDTA或草酸盐的血浆。
3. 标本存放:2~3天内的活性损失:15~25℃保存:<10%;标本稳定性:4~8℃保存稳定7天;-20℃保存至少可稳定2个月标本。
如果分析延迟8小时以上,最好把血清冷藏。
冷冻的血清在融解后会表现出血清值的显著降低。
4. 标本运输:常温条件下运输5. 标本拒收标准:细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:6.1 上海申能ALP测定试剂盒(141 0417170 1 试剂1 6×64 ml +试剂2 6×16 ml)6.1.1 试剂组成试剂1:2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP)缓冲液0.90mol/L(pH:10.4)醋酸镁 1.6mmol/L硫酸锌0.4mmol/LHEDTA 2.0mmol/L试剂2:磷酸对硝基酚16.0mmol/L6.1.2 试剂准备:试剂为即用式。
6.1.3 试剂稳定性与贮存:原试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂不可冰冻。
6.1.4 变质指示:当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。
6.1.5 注意事项:碱性磷酸酶试剂中含叠氮钠,避免接触皮肤及粘膜。
反应过程中产生的对硝基苯酚有毒性,切勿吸入、吞食、接触皮肤或粘膜。
若反应液与皮肤或粘膜接触,请速用水冲洗。
6.2 校准品:使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准,具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。