实验、磺胺嘧啶的重氮化滴定(永停滴定法)

磺胺嘧啶是一种广谱的抗菌药物，可以被常规氯仿提取。

永停法是测定磺胺嘧啶含量的一种方法，其基本原理是利用磺胺嘧啶与永停试剂（1：1的氧化剂-还原剂复合物）的氧化还原反应，生成深红色络合物，其吸收峰为530nm。

该方法灵敏度高、重现性好、操作简便，是目前测定磺胺嘧啶含量的常用方法之一。

需要注意的是，该方法仅适用于磺胺嘧啶的含量低于50mg/g的样品，同时需要避免样品中有其他药物残留或者其他干扰物。

永停法测定磺胺嘧啶含量的计算公式如下：
磺胺嘧啶含量（%）= 试剂量（mg）× 0.01 × 100 ÷ 样品质量（g）
其中，0.01为磺胺嘧啶的摩尔质量/精确质量，也就是1g磺胺嘧啶的质量。

试剂量为永停试剂添加量，单位为毫克（mg）。

样品质量为永停试剂添加前样品的质量，单位为克（g）。

永停滴定法测定磺胺间甲氧嘧啶钠注射液含量的不确定度评定杨星;于晓辉;董玲玲;赵富华;万仁玲【摘要】Taking sulfamonomethoxine sodium injection for example, the uncertainty of content determination by dead-stop titration was evaluated.A mathematical mode of uncertainty evaluation was established and the sources of uncertainty were analyzed and evaluated during the whole determination procedure. Finally the expanded uncertainty was calculated and the result of content determination can be expressed as (95.3±0.8)% (k=2). It showed that the main sources of measurement uncertainty were measurement repeatability, calibration and the laboratory temperature variation.%以磺胺间甲氧嘧啶钠注射液为例，阐述永停滴定法含量测定结果的不确定度评定。

通过建立数学模型，分析不确定度来源，对各个不确定度分量进行了评估，计算了扩展不确定度，含量测定结果可表述为（95．3±0．8）％（k＝2）。

结果表明，重复性测量、校准和温度差异引入的不确定度为测量结果不确定度的主要来源。

【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2015(000)003【总页数】5页(P43-47)【关键词】磺胺间甲氧嘧啶钠注射液;含量测定;不确定度;永停滴定法【作者】杨星;于晓辉;董玲玲;赵富华;万仁玲【作者单位】中国兽医药品监察所，北京100081;中国兽医药品监察所，北京100081;中国兽医药品监察所，北京100081;中国兽医药品监察所，北京100081;中国兽医药品监察所，北京100081【正文语种】中文【中图分类】S859.84测量不确定度是表征赋予被测量值分散性的非负参数［1］，对实验室间比对、测量结果临界值的判断、方法的确认以及检测工作国际化等方面都有重要的意义。

磺胺嘧啶检验记录一．性状：本品为（应为白色或类白色的结晶或粉末）；无臭，无味；遇光色渐暗。

结果：二．鉴别：电子天平/型号：红外分光光度计型号： TJ270-30（A）1．取本品g（约0.1 g），加水与0.4%氢氧化钠溶液各3ml，振摇使溶解，滤过，取滤液，加硫酸铜试液1滴，即生成（黄绿色沉淀），放置后显(紫色)。

结果：2．取本品，依法操作（中国药典2010年版二部附录Ⅳ C），所得的本品红外光吸收图谱与对照图谱（光谱集570图）（应一致）。

图谱见打印附页结果：3．取本约mg（约50 mg），加稀盐酸1ml，缓缓煮沸使溶解。

放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液体数滴，生成（橙黄到猩红色）沉淀。

结果：三．检查：1．酸度：天平型号：取本品g，加水100ml，置水浴中振摇加热10分钟，立即放冷，滤过，分取滤液25ml，加酚酞指示液2滴与氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）0.20ml，显（粉红色）。

结果：2．碱性溶液的澄清度与颜色取本品g ，加氢氧化钠试液10ml熔解后，加水至25ml，溶液（应澄清无色）；如显色，与黄色3号标准比色液比较，（不的更深）结果：3．氯化物标准氯化钠溶液的制备：精密量取标准氯化钠贮备液ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

（每1ml 相当于10μg 的C l ）。

取两支配对的50ml 比色管，甲管为供试品管，乙管为对照品管。

取上述酸度项下的剩余的滤液25ml 置甲管中；另取标准氯化钠溶液 （5.0）ml ，置乙管中；在甲、乙两管中分别加稀硝酸 （10）ml ，加水使成40ml ，摇匀，加入硝酸银试液 （1.0）ml ，用水稀释成50ml ，摇匀，在暗处放置 （5）分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，甲管比乙管 （应不得更浓）。

结果：4．干燥失重： （规定减失重量不得过0.5％ ）天平型号： 电热恒温鼓风干燥箱/型号： 干燥温度： ℃取一个称量瓶，置干燥箱中干燥2小时，取出，移置干燥器中，放冷至室温，精密称定，W 1= g ；再置干燥箱中干燥1小时，取出，移置干燥器中，放冷至室温，精密称定，W 2= g ；称量瓶已恒重。

实验五 磺胺嘧啶非静脉给药后的药时曲线及药动学参数计算一、实验目的了解磺胺嘧啶非血管内一次给药后血药浓度随时间变化的规律。

二、实验内容（1）制作磺胺嘧啶钠浓度标准曲线；（2）兔静脉注射磺胺嘧啶钠溶液，定时采血测血药浓度，绘制血药浓度——时间曲线；三、实验原理、方法和手段已知磺胺嘧啶等磺胺类药物在酸性环境下其苯环上的氨基（—NH2）将被离子化而生成铵类化合物（—NH3+）。

后者与亚硝酸钠反应可发生重氮化反应进而生成重氮盐（—N ＝N+—）。

该化合物在碱性条件下可与麝香草酚生成橙黄色化合物。

在525nm 波长下比色，其光密度与磺胺嘧啶的浓度成正比。

具体反应过程为：根据上述原理，在给受试家兔一次给予一定剂量的磺胺嘧啶后，于不同时间点采集其静脉血样，采用比色法对各样品中磺胺嘧啶的血药浓度进行定量分析，并以血药浓度对相应时间作图，从而获得磺胺嘧啶的静脉给药后的药时曲。

四、实验组织运行要求 五、实验条件动物 3kg 左右家兔一只药品 20％磺胺嘧啶（sulfadiazine ，SD ）、7.5％三氯醋酸、0.1％SD 标准液、0.5％亚硝酸钠、0.5％麝香草酚（用20％NaOH 配制）、1000u/mL 肝素生理盐水、3％戊巴比妥钠、蒸馏水。

器材 721分光光度计、离心机、磅秤、手术器械、动脉夹、尼龙插管（或玻璃插管、硅胶管）、兔手术台、注射器（5mL ）及针头、移液器（0.01～1mL ）、吸头、试管、离心管、试管架、玻璃记号笔、药棉、纱布、计算机。

六、实验步骤（1）麻醉：全麻或局麻均可。

取兔一只（实验前禁食12小时不禁水），记录体重和性别，耳缘静脉注射3％戊巴比妥钠0.8～1.0 mL/kg 麻醉，仰位固定于兔手术台上。

（2）手术：颈部手术区剪毛，切皮约6cm 左右，钝性分离皮下组织和肌肉，气管插管，分离出颈总动脉约2～3 cm 左右，在其下穿两根细线，结扎远心端，保留近心端。

（3）耳缘静脉注射1000u/mL 肝素1 mL/kg 。

药物分析实验思考题参考答案实验一 甲硝唑片溶出度的测定-----------------------------------------------------------------------------------------------1 实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量2 实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量-----------------------------------------2 实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量-----------------------------------------------------------------------------------3 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定--------------------------------------------------------------------------------------4 实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别-------------------------------------------------4 实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量-----------------------------------------------------------------------------5 实验八维生素B1注射液的含量测定------------------------------------------------------------------------------------------5 实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量-------------------------------------------------------------------------6 实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量--------------------------------------------------------------------------------------6实验一 甲硝唑片溶出度的测定1. 何为溶出度？哪些类型药物需做溶出度实验？溶出度：是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。

一、目的：制订详尽的工作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。

二、范围：适用于原料药磺胺嘧啶成品的标准操作程序。

三、职责：1. 检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；2. 化验室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。

四、内容：1. 性状：取1g样品于洁净的玻璃皿上观察，本品应为白色、黄白色或粉白色结晶粉末或晶体。

溶解度：本品在稀酸和稀碱液中溶解，在96%乙醇和丙酮中微溶，在水中不溶。

2. 鉴别：2.1 红外鉴别：2.1.1 仪器：红外分光光度计2.1.3试剂：光学溴化钾、磺胺嘧啶对照品2.1.3 测试方法：按《XYK/SOP-QC7040红外分光光度法检查操作规程》操作，本品的红外光吸收图谱应与对照品的图谱一致。

2.2 薄层色谱：2.2.1 仪器：干燥箱、硅胶G薄层板、三用紫外仪、电子天平2.2.2 试剂：氨水、硝基甲烷、二恶烷、甲醇、磺胺嘧啶对照品2.2.3 测试方法：混合溶剂：浓氨水：甲醇（4:96）测试溶液：溶解20mg样品于3ml混合溶剂并稀释至5ml对照溶液：溶解20mg磺胺嘧啶对照品于3ml混合溶剂中并稀释至5ml展开剂：稀氨水-水-硝基甲烷-二恶烷（3:5:40:50）稀氨水:取浓氨溶液（25%~30% m/m）41g，用水稀释至100ml（100g/L~104g/L NH3）。

照《XYK/SOP-QC7024薄层色谱法检查操作规程》检查，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以稀氨水-水-硝基甲烷-二恶烷（3:5:40:50）为展开剂，展开至板的3/4后，在105℃下干燥，在254nm的紫外灯下检查，供试品溶液与对照溶液薄层板上的主斑点的大小和位置应保持一致。

2.3 熔点：2.3.1 仪器:熔点仪、油浴锅、干燥箱2.3.2 试剂：硅油、甲苯2.3.3 测定方法：取样品3.0g置于干燥洁净的试管中，将试管以45°倾斜浸泡在270℃的硅油中，样品将会分解形成白色或者黄白色的升华物，取升华物加入甲苯进行重结晶，结晶物在100℃条件下干燥，按XYK/SOP-QC7036熔点检验操作规程测定，其熔点应为123～127℃。