环磷酸腺苷的研究进展

。1 98 6 年， 我国 的研 究者又 探索 了新 的溶 剂系 统。2 . 的 4 -吗 啡啉-N ， N -二 环 己基 眯 溶 解 于
� 5 的 5 -A MP 和 2 在兔子的腹膜巨噬细 胞中，A M P 浓度 的增高 会明 显抑 制过
氧化物的产生， 提示环磷酸腺苷可以在医疗 � � 上用作过氧 化物 40 L 的乙二醇单甲醚中 与含 4 DC C 的 450 L 乙二 醇单甲
［7 ］
调节、 表 达、 信号传递均有影响 （5 /
。当 小 鼠 被 注 射 A M P
1 0 0 体重） 时， 发 现磷、 钠 的排泄 量显 著增高，
［8 ］
当剂量增大时， 血浆中 A M P 的浓度 也增高， 说明了 A M P 对
肝、 肾的影响 � 。在肾上皮细胞中，A MP 抑制了一氧化氮的 了多种植物中 A M P 的含量
7 H 2 O 0 .0 2 % ， 蛋白胨 0.4 % ， 酵母粉 0.0 2 % ，
� ） 。 A M� P� 含 量� 增 高， 则 显著 降低快 眼动 期睡 培养液中 A M P 的浓度为 3.9 /1 50 L［2 0］。 . 从天然产物中提取 A M P 的多种 生 理 活 性引 起 了 人 们 的 关 注， 寻找富含 A M P 的动、 植物组织成为 热点。动 物的脑、 肾等多种 细胞中 均含有， 但含量均很小。所以， 人们把目 光投向了植物， 测定 ：
杏
A
e ac a
a
La .
< 75 .0 0
He a Ka a c e Aa e
.
薄层层析 植物提取 c AM P 的含量在 30 % 以上时， 可以用薄 层层析
进行检测及纯化。以硅胶为固定相， 苯- 乙酸乙酯- 甲醇 （ 1 :1 : 3） ， 作为展开剂， 紫外灯下检识 （ R f 0 .75 ） ， 出现黑色 斑点。用
对右冠状动脉疾病、 二尖瓣回流 （
） 、 扩 张性
物质对反应物的溶 解性与 吡啶 相似， 但 由于其 沸点 较高， 在 反应后处理阶 段进行浓缩时， 不 易 除 尽， 使产物 难于提 纯
［1 8 ］
心疾病、 原发 性心肌病 作用 的机 理， 认 为 A M P 浓度 的变 化
［2 ］ 改变了钙泵的控制 ； 对免疫 系统 的影响 方面， 研 究者 发现
［2 7 ］ 此方法纯化可将 c AM P 含量提高至 9 0 % 以上 。
5 9 个品种后的平均值， 最高值为 15 2 .0 0
。除了直接测定 等人
植物中的含量， 人们还试图 通过植 物组 织培养 来提 高 c AM P 的含量， 以期 使从植物中提 取 c AM P 成 为可行。 A 悬浮培养了黑麦草 （ e a
称 A M P） 是核苷酸的衍 生物， 为蛋 白激酶致 活剂， 是有 机体
度的增长引 起酪 氨酸 羟 化酶 基因 表 达的 增长， 增长 是通 过
［1 2 ］ 中广泛存在的一种具有生理活性的重要物质， � � � � � 由 � � � A T P 在腺苷 R N A 转录过程实现的 。 脑白质肾上腺萎 缩症 （ -
中国现代应用药学杂志 � � � 2 005 年 � � 8 � � 月第 � � � 2 2 卷第 � 7 期 C J M A P， 2 005 A ， V .2 2 N .7
值是测得
597
表
植物中 c AM P 的含量 T ec AM P c
植物名称
高效液相色谱 法具有方便、 迅速、 所需样品量少的优 点。 f a 将含有 c AM P 的植物 干燥 制成 粉末， 水 浴提 取后， 取 其上 清
V C fe a L.X.V .a e a e Ma b P f a M e P . R . . 5 0 0 0 .0 0 2 32 5 .0 0 336 .0 0
� � � � � � � � � ， A a a e ）色 谱 柱， 流动相为 5 0 / L KH2 P O 4 -CH3 大枣 Z ba M . 380 5 0 .0 0
［1 7 ］ 横纹肌的疲劳程 度。临床 实践证 明病 人由于 � � � � 骨骼 � � � � 肌疲 劳造 对环境有污 染 。又 有 人 采 用 了二 甲 基 甲 酰 胺 （ ［1 ］ � � � � � � � � � � � � � � � � � ） 、 二甲基 亚砜 （D ） 为溶 剂， 这两 种 成的心脏病得到了 缓解 。 M L 等人 研究 了 A M P
［3 ］ 过度产生的保护剂 � 。 � B L 等人研究了 � A M P 对脑的 醚溶液在 1 2 0 滴加反 应， 回流 1 ， 降温， 加金 属钠 调 H 至
作用， 在小鼠 � 的后海 马区 两侧注 入 1 .2 5� 的 A M P 及其 他 碱性， 继 续回流 3 。蒸干 溶剂， 将 产 物溶 于水 后 过滤， 再用 辅助兴奋剂， 使细胞内 A M P 浓度 升高， � 经 过不 � 同时 间的 训 50 L 乙醚萃取三次水层 减压浓缩， 用 浓盐酸 调 H 至 1 2 ， 练后， 测 试 结 果 显 示 其 记 忆 程 度 衰 退。证 实 海 马 细 胞 中 A M P 的浓度影响着记忆 固化 小鼠进行行为测试， 将 其分为
［2 9 ］ 的二甲苯溶液） 的计 数瓶中， 进行液闪计数 。
梨 P b e c ede R� e d. < 15 .0 0 � � � � � � 冰浴中 2 3 ， 加入 冰冷的 洗涤缓 冲液 （2 0 / L H7 . 5 的 李 P d e c a L. 115 .0 0
� 上抽滤， 80
桃 西瓜 向日葵愈伤组织 伽蓝 龙舌兰 A da e c a L. ec e M . < 15 .0 0 < 75 .0 0 1.8-12 .7 2 -6 1 L c e c
［1 5］
激酶的活性
， 还 可抑 制支 气管 哮喘 的炎 症。临床 还用 于 。
牛皮癣的治疗 制备方法
［1 6］
化学合成
� � � S 等人在 1 961 年合成 了 A M P， 此 法主要 是用 5 -核 研究， 涉 及疾病治疗、 信号表达、 基因复制等方 � 面。环磷酸腺 苷 （ A M P） 可以通过化学合成、 生物发酵、 天 然产物分离 � � � � � � 提取 苷酸和 4 -吗啡啉-N ， N -二环己基眯在 吡啶中用 DC C （D � � � � � � � � � � � -C ）作脱水剂进行脱水 反应， 而使 5 -腺 苷酸 等方法获得。 生理活性 A M P 的胞内浓度增高有利于改善心脏内心肌、 骨骼肌、 发生内酯化， 为避免分 子间的 反应， 反 应必须 在高 度稀 释条 件下进行， 因而要 用大量无水吡啶， 吡 啶对人体 危害很大， 并
很多酶催化的反应具有调节作用， � 可调节与 细胞内贮藏 的糖 此可用于该病 的治疗 。 A M P 还 可促 进口腔 角质 细胞 的 和脂肪反应的一系列酶的活性， 对蛋白质的 生物合成也 具有 调节控制作 用。可 广泛 参 与细 胞 功能 的调 节， 能 舒 张平 滑 肌、 扩 张血管、 改 善肝功 能、 促 进神经 再生、 抑制皮 肤外 层细 胞分裂和转化异常 细胞 的功能、 促 进呼 吸链氧 化酶 的活性、 改善心肌缺氧等。国外对其生理活性、 作用 机理进行了 大量 .
� � 活化酶催化下生成， 是细胞内传递激素和递 质作用的中 介因 ） 是 一 种 遗 传 的 脂 肪 酸 代 谢 紊 乱 疾 病。 增 高 子， 因此被称为 “ 第二信使” 。其灭活酶为磷酸二脂 酶。它对 A M P 的浓度则可激发过氧化物酶体的活性， 反之则抑制， 因
［1 3 ］ ［1 4］ 增殖 ， 抑制小鼠的 主动脉 平滑 肌细 胞中 分裂 素活 化蛋 白
酸枣
� � � 本岛 津 ） 在波长 2 5 4 处 于 室 温 下 检 测， 16 君迁子 � D L. � 10 0 0 0 .0 0
北醇葡萄 水栒子 苹果
峰 .
［2 8］
。 竞争蛋白法
将待测样或标酸盐溶液） ， 终止反应， 将反 应液滴加在处理好的微 孔滤膜 烘干滤膜， 将其放在盛有闪烁液 （P P O 和 P O P O P
［5 ］ 量和动物的行为方式相关 。 研究证明 A M P 可以刺激神经
为： 葡萄 糖 0 .5% ， K H 2 PO 4 0 .6% ， K2 H P O 4 1 .4 % ， （ NH 4 ） 2 SO
4
4
� 0.2 % ， M SO 产生胆碱能 作用， 从 而影 响 快眼 动 期睡 眠 （ ［6 ］ 眠 。同时 A M P 对髓鞘 的形 成、 破碎、 修 复及 髓鞘 基因 的
.
其它分析方法
酶联免疫法是利用生物获得半抗 原， 进 行荧光检 测的方 ） 胚 乳组 织， 发现内 源 c AM P 的 ［30 ］ � � � 法， 该 法具有灵敏度高、 需样品量少的特点 。S e e 等人 ［ 2 3］ � 浓度在 3-1 4 / 鲜 重之 间 变化 。J 等 人 通过 烟 � � � � � � � � � � � � � � � � 建立了荧光 比 率 成 像 （F ec ec e a a ） 方 法。将 ［ 2 4］ 草组织培养， 获得了 90 -1 30 c AM P / 鲜 重 。B 和 c AM P 标记上荧光物质， 根据其 荧光变 化的强 弱测 量其 浓度 e 将四季豆秧苗培 养 6 d 后， 用结 合蛋 白测 定法 测得 其 ［31 ］ 变化， 可以不破碎 细胞， 有利 于了解 胞内生 理活动 。毛细 ［2 5 ］ 内源性 c AM P 含量为 2 .2 / 干重 。但是 V a O c e e 管电泳和 紫外联 用可以 把 c AM P 和 c GM P、 c IM P 分开， 2 2 KV 等人质疑了该结果。他们将四季豆 （P a e a L. ） 的 � � � � � 下操作上柱 展开 30 ， 在 2 10 波 长处 检测 出 峰， 但该 方 种子在 2 1 ， 80 % 的湿度条件下 播种， 秧苗生 长时， 1 2 白炽 ［32 ］ 法设备昂贵 。 灯照射， 12 处于黑暗， 反复 交替。培 养 6 d 后， 将秧苗浸 泡在 展望 乙醇和水中， 于液氮 中冷 冻， 然 后将 其冻 干。同时还 对照 培 c AM P 具有广泛的生理活 性， 它是 当前分 子生 物学 研究 养了低等植物绿藻 （C e a . ）。采用的培 养基为： KNO 3 的重要 内容之一 ， 据 医学临 床证明， 它与 牛皮癣、 冠 心病、 气 10 / L， KH2 P O 4 0 . 2 1 / L， M SO 4 2 H2 O7 0 / L， Z 喘、 高血 压、 糖尿病以及恶性肿瘤关系 十分密切， 在蛋 白质的 SO 4 0 . 1 4 / L， C SO 4 5 H2 O3. 1 6 � / L， M SO 4 H2 合成中， 基因的转录和翻译都受 c AM P 的影 响。它控制 遗传 O1 0 � / L， C（ a N O 3） 6H 2 O2 . 34 / L， （ N H4 ） 2 6 M 7 O 24 信息， 起着 “ 第二信使” 的作 用， 并 影响许 多酶的 活性和 细胞 4H 2 O 0 .14� / L， Ca C 2 40 � / L， 柠檬酸 铁 2 0 � / L， 柠 的代谢过程。研究工作 和医学 临床 试验 均需大 量的 c AM P 。 檬酸 30 � / L。培养两 周 后， 得到 培 养物， 离 心， 将 沉淀 冻 但化学合成所用溶 剂有一 定毒 性， 易污 染环境， 生 物发 酵受 干。然后将这两种 混合物 经过 多步 前处理 后， 用木炭 吸附， 菌种限制且难以分离， 而植物尤其是 大枣中 c AM P 含量 是目 采用聚乙烯吡咯烷酮 （P V P ） 和 D e 柱层析， 再通过制 备级 前所知中最高的， 如何从天然产物中分离出纯度高的 c AM P ， 高效液相色谱 （H P LC ） 纯化， 得到 c AM P 。通过分析级高效液 是当前研究的所要解决的问题。 相色谱和结合 蛋 白两 种方 法 测定， 确 定 了四 季豆 秧 苗中 的 c AM P 含量为 13.6 92 粉于 5 / 干重