下载文档原格式
大鼠环磷酸腺苷(cAMP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T20pg/ml-600pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中环磷酸腺苷(cAMP)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠环磷酸腺苷(cAMP)水平。
用纯化的大鼠环磷酸腺苷(cAMP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入环磷酸腺苷(cAMP)，再与HRP标记的环磷酸腺苷(cAMP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的环磷酸腺苷(cAMP)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠环磷酸腺苷(cAMP)浓度。
试剂盒组成标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
环磷酸腺苷cAMP的生理功能环磷酸腺苷是一种环状核苷酸，（yclicAdenosinemonophosphate）简写为cAMP，亦称“腺苷-3’，5’-环化一磷酸”，“环化腺核苷一磷酸”，“环腺一磷”。
cAMP 是由三磷酸腺苷（ATP）脱掉两个磷酸分子后环化反应而成。
细胞膜受体在神经递质分子或激素分子作用下，可促进细胞合成cAMP，进而调节细胞的生理活动和物质代谢。
激素类被称为细胞的“第一信使”，而cAMP则称其为“第二信使”。
含氮类激素一般与细胞膜受体结合诱导生成第二信使，将信号转导入细胞内。
固醇类甾体激素一般直接通过膜进入细胞与细胞质内的受体结合，然后进入细胞核发挥其作用。
标签：环磷酸腺苷cAMP信使含氮类激素甾体激素一、cAMP的分子作用机制激素是一类微量的化学信息分子，由机体内一部分细胞产生，通过扩散、体液运送至另外一部分细胞，并起到代谢调节控制的作用。
因此，被称为“第一信使”。
而环腺苷酸（cAMP）是在细胞受到胞外化学信息分子刺激，如激素分子或神经递质分子并与细胞膜上的受体结合形成复合体，然后激活细胞膜上G蛋白，被激活的Gs-蛋白再激活细胞内膜上的腺苷酸环化酶（AC），催化ATP脱去两个磷酸分子，再经过环化反应生成cAMP。
当细胞质中cAMP合成增多时，又激活细胞质内的其他蛋白酶而发挥作用。
因此，cAMP被称为“第二信使”。
cAMP广泛而微量地分布于生物体细胞中，属于信号传导的第二信使。
cAMP 作为第二信使，通过激活激酶A（PKA——proteinkinaseA）（cAMP依赖性蛋白激酶），使靶细胞质内的蛋白酶磷酸化而被激活，从而调节控制细胞生物化学反应速率。
cAMP最终又被磷酸二酯酶（PDE）水解成5’-AMP而失活。
cAMP 在细胞内合成和分解过程都依赖Mg2+的存在。
AC和PDE以两个不同的方向调节细胞内cAMP浓度，从而影响细胞、组织、器官的功能。
当腺苷酸环化酶AC 的活性升高时，cAMP浓度升高；当磷酸二酯酶PDE浓度增高时，cAMP浓度降低。
环磷腺苷制剂在关节炎治疗中的作用机制解析环磷腺苷（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）是一种重要的细胞信号分子，参与多种生理过程的调控，其中包括免疫反应和炎症过程。
关节炎是一类炎症性关节疾病，常表现为关节疼痛、肿胀和功能障碍等症状。
环磷腺苷制剂是一类用于关节炎治疗的药物，通过调节细胞内cAMP水平，发挥其抗炎和免疫调节作用。
本文将对环磷腺苷制剂在关节炎治疗中的作用机制进行详细解析。
首先，环磷腺苷制剂能够影响炎症反应过程。
炎症是关节炎发展的核心机制，通过一系列炎症细胞和炎症因子的参与，导致关节组织的破坏和炎症介质的释放。
环磷腺苷制剂能够抑制炎症因子的释放和炎症细胞的活化，从而减轻炎症反应，缓解关节炎症状。
具体来说，环磷腺苷能够通过激活腺苷酸环化酶（adenylate cyclase），将腺苷酸转化为cAMP。
cAMP能够抑制炎症细胞的前列腺素合成酶（cyclooxygenase）活性，降低前列腺素E2（PGE2）等炎症介质的产生，从而减轻炎症反应。
此外，cAMP还能够抑制白细胞腈激酶（leukocyte elastase）和巨噬细胞型前脂蛋白酶（prolactin cycloprotease）等炎症因子的合成，发挥抗炎作用。
其次，环磷腺苷制剂能够调节免疫反应。
免疫反应在关节炎的发展中起到重要作用，免疫细胞的活化和炎症介质的释放都与关节炎的发病相关。
环磷腺苷能够通过抑制免疫细胞的活化和炎症介质的产生，达到调节免疫反应的效果。
具体来说，环磷腺苷通过抑制cAMP信号通路上的负调节因子磷酸酶4（phosphodiesterase 4，PDE4）的活性，增加cAMP的浓度。
cAMP能够抑制T细胞和B细胞的活化，减少炎症细胞的产生和炎症因子的释放，从而抑制免疫反应。
此外，cAMP还能够增加免疫抑制性细胞（如调节性T细胞和抑制性巨噬细胞）的活性，发挥免疫调节作用，改善关节炎的免疫失衡状态。
迪信泰检测平台
环磷酸腺苷（cAMP）检测
环磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate, cAMP)，又称为环化腺核苷一磷酸、环腺一磷，是细胞内参与调节物质代谢和生物学功能的重要物质，是生命信息传递的“第二信使”。
在体内可以促进心肌细胞的存活，增强心肌细胞抗损伤、抗缺血和缺氧能力；促进钙离子向心肌细胞内流动，增强磷酸化作用，促进兴奋-收缩偶联，提高心肌细胞收缩力，增加心输出量；同时还扩张外周血管，降低心脏射血阻抗，减轻心脏前后负荷，增加心排出量，改善心功能。
迪信泰检测平台采用高效液相色谱(HPLC)和液相质谱联用(LC-MS)，可高效、精准
的检测cAMP的含量变化。
此外，迪信泰检测平台还提供其他信号分子系列检测服务，以满足您的不同需求。
对于常见核苷酸，可配合标样进行检测，对于稀有的核苷酸，如提供标准样品，可提供定制检测。
HPLC和LC-MS测定cAMP样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关质谱参数（中英文）。
3. 质谱图片。
4. 原始数据。
5. cAMP含量信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
环磷腺苷制剂对免疫系统的影响和调节环磷腺苷制剂（cAMP）是一种重要的细胞信号分子，它在免疫系统中发挥着调节和影响的作用。
环磷腺苷制剂通过调节免疫细胞的活性、增强免疫功能、抑制炎症反应等多种机制，对免疫系统产生积极的影响。
本文将深入探讨环磷腺苷制剂对免疫系统的影响和调节。
首先，环磷腺苷制剂对免疫细胞的调节起到了关键作用。
在免疫系统中，各种类型的免疫细胞（如T细胞、B细胞、巨噬细胞等）发挥着不同的免疫功能。
环磷腺苷制剂能够通过影响这些免疫细胞的活性和功能，调节免疫系统的整体反应。
例如，研究表明环磷腺苷制剂能够增加抗原递呈细胞（如树突状细胞）的成熟和功能，从而增强免疫细胞的抗原呈递能力。
此外，环磷腺苷制剂还能够抑制炎症调节细胞的活性，减轻炎症反应，促进免疫系统的平衡发展。
其次，环磷腺苷制剂对免疫功能的调节是通过影响细胞内的信号传导途径实现的。
细胞内的信号传导途径是细胞内信息传递的重要机制，它能够调节细胞的生理功能和免疫反应。
环磷腺苷制剂通过激活转化酶腺苷酸环化酶（adenylate cyclase），增加细胞内环磷腺苷（cAMP）的水平，从而调节细胞内信号传导途径的活性。
具体来说，环磷腺苷制剂能够通过调节cAMP依赖的蛋白激酶A（protein kinase A）的活性，影响细胞内的信号传导分子和转录因子的磷酸化状态，从而调节细胞的功能和免疫反应。
这种调节作用在免疫系统中起到了重要的作用。
此外，环磷腺苷制剂还能够调节免疫系统的平衡发展，保持免疫系统的正常功能。
免疫系统的平衡发展是免疫系统能够健康运行的重要条件，它能够保持免疫细胞的数量和功能的平衡，保护机体免受外界病原体的侵袭。
环磷腺苷制剂通过调节免疫细胞的活性和功能，增强机体的免疫应答能力，提高机体对外界病原体的抵抗力，从而维持免疫系统的平衡发展。
另外，环磷腺苷制剂对免疫系统的调节还能够应用于治疗免疫相关疾病。
免疫相关疾病如自身免疫性疾病、变态反应等与免疫系统的紊乱有关。
环磷酸腺苷的功能主治简介环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate，简称cAMP）是细胞内的一种重要信号分子，具有调节细胞功能的作用。
它的产生与酶类的调节、离子通道的打开和细胞内钙浓度的调节等过程密切相关。
环磷酸腺苷在许多生物过程中发挥着重要的功能，包括细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡等。
本文将介绍环磷酸腺苷的多种功能主治。
功能主治1. 调节细胞增殖环磷酸腺苷在细胞增殖中起到重要的调节作用。
cAMP可以通过激活一系列的蛋白激酶来促进细胞增殖。
它能够刺激DNA合成，促进细胞分裂，并且对肿瘤细胞的增殖有一定的抑制作用。
2. 调节细胞分化环磷酸腺苷参与调节细胞分化的过程。
研究发现，cAMP能够影响许多细胞的分化状态，进而影响细胞的功能和表型。
例如，在神经系统中，cAMP可以促进神经元的分化和突触的形成。
3. 调节细胞凋亡环磷酸腺苷在细胞凋亡中扮演重要角色。
研究表明，cAMP能够抑制细胞凋亡的过程，延缓细胞的死亡速度。
这一特性使其在治疗某些疾病，如神经退行性疾病和心脑血管疾病中具有潜在的应用前景。
4. 调节离子通道环磷酸腺苷能够调节细胞膜上的离子通道，影响细胞内外离子的流通。
通过激活或抑制离子通道，cAMP可以调节细胞的电生理过程，如细胞的膜电位和细胞内钙离子浓度等。
这对于维持正常的细胞功能和信号传导至关重要。
5. 调节酶类活性环磷酸腺苷能够通过激活或抑制一系列酶类的活性来调节细胞的代谢过程。
例如，cAMP能够激活蛋白激酶A（protein kinase A），进而影响细胞内多种酶的活性，从而调控细胞的能量代谢、脂肪酸代谢等过程。
6. 调节免疫反应环磷酸腺苷参与调节免疫反应的过程。
研究发现，cAMP能够调节免疫细胞的活性和功能，影响炎症反应的程度和持续时间。
它能够影响免疫细胞的毒杀效应、细胞因子的产生等过程，进而调节机体的免疫反应。
总结环磷酸腺苷在细胞功能调节中起着重要的作用。
环磷腺苷是一种核苷酸类药物1. 简介环磷腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，简称cAMP）是一种重要的核苷酸类药物，被广泛应用于生物医学研究和临床治疗领域。
它由三个组分构成，包括一个腺嘌呤核糖、一个磷酸基团以及一个环状的腺苷酸环糊精。
2. 药理作用环磷腺苷在细胞内起着调节信号传导的重要作用。
它通过与细胞内的cAMP受体结合，激活细胞内的蛋白激酶A（PKA），从而调节细胞内的基因表达、蛋白质合成以及细胞功能。
cAMP的主要作用机制包括下调细胞内钙离子浓度，促进蛋白激酶C（PKC）的活化，以及影响细胞内的转录和翻译过程。
3. 生物医学应用3.1. 细胞信号传导研究cAMP广泛应用于细胞信号传导研究领域，主要用于研究细胞内信号分子的作用机制以及其对细胞功能的调节作用。
研究表明，cAMP在细胞增殖、分化、凋亡等方面发挥重要调节作用，因此对于了解细胞功能、疾病发生机制以及药物筛选具有重要意义。
3.2. 心血管疾病治疗cAMP在心血管系统中具有重要的生理作用。
研究发现，cAMP可以通过调节肌细胞的收缩和舒张，影响心脏的收缩力和心率。
因此，在心血管疾病治疗中，cAMP类药物被广泛应用于治疗心衰、心律失常等疾病。
3.3. 哮喘治疗哮喘是一种常见的慢性呼吸道疾病，cAMP类药物可通过扩张支气管平滑肌，促进支气管扩张，减轻哮喘症状。
在哮喘治疗中，cAMP类药物常用于舒张支气管，以缓解呼吸困难和阻塞性症状。
4. 临床应用环磷腺苷类药物已经在临床上得到广泛应用。
其中，环磷腺苷类药物主要应用于以下方面：4.1. 心血管疾病治疗环磷腺苷类药物可通过激活细胞内的cAMP受体，调节心血管系统的功能，改善心脏功能，用于治疗心力衰竭、心绞痛等心血管疾病。
4.2. 哮喘治疗由于cAMP类药物具有扩张支气管的作用，可缓解哮喘症状，因此在哮喘治疗中广泛应用。
4.3. 神经系统疾病治疗环磷腺苷类药物对神经系统具有重要影响，可通过调节神经递质的释放、神经元的兴奋性以及神经元的生长发育等方面发挥作用，因此在神经系统疾病治疗中有一定的应用价值。
缺血预处理时环磷酸腺苷含量及其依赖蛋白激酶活性的变化韩宏光;汪曾炜;张南滨;朱洪玉;王辉山;姜辉【期刊名称】《心血管康复医学杂志》【年(卷),期】2007(16)6【摘要】目的:应用大鼠在体缺血/再灌注模型,探讨心肌缺血预处理程序(PC)中环磷酸腺苷(cAMP)含量及cAMP依赖蛋白激酶(PKA)活性的变化及意义.方法:选择36只SD大鼠,进一步分为PC1-、2-、3-(缺血)组和PC1+、2+、3+(再灌注)组.用手术套管法造成左冠状动脉主干缺血及再灌注.损伤后取心脏用放射免疫法测cAMP水平,生化法测PKA活性变化.结果:心肌缺血预处理程序中cAMP含量及PKA活性随缺血及再灌注呈周期性波动.在5 min缺血预处理时表现为反复明显增高,而在间隔的再灌注程序中恰呈相反改变,明显下降.再预处理程序中,5 min缺血期相对于同一周期中的5 min再灌注期,cAMP含量及PKA活性均有显著差异(P＜0.01).结论:cAMP及PKA的周期性波动变化可能是激发心肌缺血预适应(IP)的机制之一,cAMP可能在预处理保护作用中起重要作用.【总页数】4页(P540-543)【作者】韩宏光;汪曾炜;张南滨;朱洪玉;王辉山;姜辉【作者单位】沈阳军区总医院心血管外科,辽宁,沈阳,110016;沈阳军区总医院心血管外科,辽宁,沈阳,110016;沈阳军区总医院心血管外科,辽宁,沈阳,110016;沈阳军区总医院心血管外科,辽宁,沈阳,110016;沈阳军区总医院心血管外科,辽宁,沈阳,110016;沈阳军区总医院心血管外科,辽宁,沈阳,110016【正文语种】中文【中图分类】R541.409【相关文献】1.急性低氧对大鼠脑组织钙调素含量及其依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响 [J], 谢印芝2.原代培养海马神经元周期素依赖性蛋白激酶5及其活性在低氧环境中的变化 [J], 付剑亮;邵福源;宋莉莉3.肝脏缺血预处理过程中蛋白激酶C活性的变化 [J], 潘明新;孔凡东;张翌;李爱辉;王海澜;高毅4.缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性的变化[J], 韩宏光;汪曾炜;张南滨;朱洪玉;王辉山;姜辉5.氯丙烯对神经细胞内Ca^(2+),游离钙调蛋白,环腺苷酸含量和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的影响 [J], 谢克勤;孙克任;高树君;张磊因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
环磷腺苷纯化工艺研究报告环磷腺苷纯化工艺研究报告摘要：环磷腺苷（cAMP）是一种重要的生物介质，对细胞内的生物化学反应起着关键作用。
为了获得高纯度的cAMP，我们研究了一种先进的纯化工艺。
该工艺包括提取、分离和纯化三个步骤。
通过对各步骤的优化和改进，我们成功地开发了一种高效、高纯度的环磷腺苷纯化工艺。
关键词：环磷腺苷，纯化工艺，提取，分离，高纯度1. 引言环磷腺苷是一种鸟苷酸类似物，存在于所有真核生物和许多原核生物中。
它在生物体内起着调节细胞信号传导和调控细胞内混乱的作用。
研究表明，cAMP参与调节许多重要的生理过程，包括代谢调控、细胞生长和分化等。
因此，获得高纯度的cAMP对于进一步深入研究其生物功能具有重要意义。
2. 提取步骤的优化在该研究中，我们使用了一种提取剂来从生物样品中提取cAMP。
我们优化了提取步骤的条件，包括提取剂的浓度、提取时间和提取温度。
经过一系列试验和对结果的分析，我们选择了最佳的提取条件：提取剂浓度为50 g/L，提取时间为2小时，提取温度为25℃。
这些条件下，我们获得了最高的提取效率。
3. 分离步骤的改进在提取步骤后，我们进行了cAMP的分离。
最初，我们使用了氯仿/甲醇（2:1）的溶剂体系来分离cAMP。
然而，我们发现该体系无法有效地去除样品中的杂质。
因此，我们改进了分离步骤，并引入了一种新的溶剂体系：丙酮/乙酸酯/甲醇（1:1:2）。
通过这种溶剂体系，我们成功地去除了大部分杂质，得到了较为纯净的cAMP样品。
4. 纯化步骤的优化纯化是获得高纯度cAMP的关键步骤。
我们优化了纯化步骤的条件，包括树脂选择、溶剂体系和洗脱条件等。
经过多次试验和对结果的分析，我们选择了最佳的纯化条件：选择了一种特定的陶瓷树脂作为分离材料，采用2%甲醇作为洗脱溶剂，以保证纯化效果最佳。
经过纯化步骤，我们获得了高纯度的cAMP。
5. 结论通过优化和改进提取、分离和纯化步骤，我们成功地开发了一种高效、高纯度的环磷腺苷纯化工艺。
环磷腺苷制剂在结缔组织病治疗中的潜力环磷腺苷（cAMP）是一种重要的生物分子，在细胞内发挥着调节信号传导和调控细胞功能的重要作用。
结缔组织病是一组由免疫系统异常引起的自身免疫性疾病，包括类风湿关节炎、系统性红斑狼疮和硬皮病等。
近年来，环磷腺苷制剂作为一种新的治疗策略在结缔组织病治疗中引起了广泛的关注。
环磷腺苷制剂的作用机制主要是通过增加细胞内的cAMP水平，从而调节细胞信号传导途径和改变细胞功能。
cAMP通过激活蛋白激酶A（PKA）和调节蛋白激酶G（PKG）等信号通路，参与调节细胞的增殖、分化、凋亡和免疫反应等多个生物学过程。
结缔组织病的发病机制复杂，涉及多个细胞类型和信号通路的异常活化，因此，通过调节细胞内的cAMP水平来干预这些异常变化，有望实现结缔组织病的治疗。
目前，环磷腺苷制剂在结缔组织病治疗中已经取得了一些进展。
研究发现，环磷腺苷制剂能够改善患者的症状和体征，减轻关节疼痛和肿胀，并且能够改善患者的生活质量。
此外，环磷腺苷制剂还能够抑制炎症反应和自身免疫反应，减少免疫细胞的活化和浸润，从而减轻组织损伤和炎症反应。
环磷腺苷制剂在结缔组织病治疗中的潜力不仅体现在其治疗效果上，还体现在其对患者的安全性和耐受性。
临床研究显示，环磷腺苷制剂在短期使用过程中安全性较好，常见的不良反应包括恶心、腹泻和头痛等，通常是轻度和可逆的。
此外，环磷腺苷制剂不会引起明显的免疫功能抑制，不会增加患者的感染风险和恶性肿瘤的发生率，是一种相对安全的治疗选择。
然而，环磷腺苷制剂在结缔组织病治疗中还存在一些挑战和问题需要解决。
一方面，当前的研究主要集中在小样本、短期观察和单中心的临床试验中，对于长期疗效和安全性的评估还不够充分。
另一方面，环磷腺苷制剂的具体作用机制和药效评价指标仍然不明确，需要进一步的基础和临床研究来验证。
此外，环磷腺苷制剂的制剂和用药方案也需要进一步优化和个体化，以提高治疗效果和减少不良反应。
总结来说，环磷腺苷制剂作为一种新的治疗策略，在结缔组织病治疗中具有潜力。
本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断大鼠（Rat）环磷酸腺苷（cAMP）ELISA检测试剂盒使用说明书试剂盒货号：DG20165D-96T 检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被环磷酸腺苷（cAMP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的环磷酸腺苷（cAMP）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体-HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无终止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.75、1.5、3、6、12nmol/L试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
结果判断绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最低检测浓度小于0.1nmol/L。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
说明由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。
1.最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。
2.不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。
3.只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。
只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。
4.本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
5.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
6.若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。
7.某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。
FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.Rat cyclic adenosine monophosphate(cAMP)ELISA Kit instruction Intended useThis cAMP ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of cAMP in the sample,this cAMP ELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus cAMP concentration.The concentration of cAMP in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Sample collection and storagesSerum-Use a serum separator tube and allow samples to clot for30minutes before centrifugation for10 minutes at approximately3000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cyclesPlasma-Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant.Centrifuge samples for30minutes at 3000×g at2-8℃within30minutes of collection.Store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids-Remove particulates by centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at-20℃or-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.Materials required but not supplied1.Standard microplate reader(450nm)2.Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.37℃incubatorPrecautions1.Do not substitute reagents from one kit to another.Standard,conjugate and microplates are matched for optimal e only the reagents supplied by manufacturer.2.Do not remove microplate from the storage bag until needed.Unused strips should be stored at2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3.Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature(20-25°C) Materials suppliedName96determinations48determinationsMicroelisa stripplate12*8strips12*4stripsStandard0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent 6.0ml 3.0mlHRP-Conjugate reagent10.0ml 5.0ml20X Wash solution25ml15mlChromogen Solution A 6.0ml 3.0mlChromogen Solution B 6.0ml 3.0mlStop Solution 6.0ml 3.0mlClosure plate membrane22User manual11Sealed bags11Standard(S0→S5)concentration was followed by:0,0.75,1.5,3,6,12nmol/LReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water1:20.Assay procedure1.Prepare all re a g e n t s before starting assay procedure.It is recommended that all Standards and Samples beadded in duplicate to the Microelisa Stripplate.2.Add standard:Set Standard wells,testing sample wells.Add standard50μl to standard well.3.Add Sample:Add testing sample10μl then add Sample Diluent40μl to testing sample well;Blank well doesn’t add anyting.4.Add100μl of HRP-conjugate reagent to each well,c over with an adhesive strip and incubate for60minutes at37°C.5.Aspirate each well and wash,repeating the process four times for a total of five washes.Wash by filling each well with Wash Solution(400μl)using a squirt bottle,manifold dispenser or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper towels.6.Add chromogen solution A50μl and chromogen solution B50μl to each well.Gently mix and incubate for15 minutes at37°C.Protect from light.7.Add50μl Stop Solution to each well.The color in the wells should change from blue to yellow.If the color in the wells is green or the color change does notappear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.8.Read the Optical Density(O.D.)at450nm using a microtiter plate reader within15minutes. Calculation of results1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample.The standard curve is generatedby plotting the average O.D.(450nm)obtained for each of the six standard concentrations on the vertical(Y) axis versus the corresponding concentration on the horizontal(X)axis.2.First,calculate the mean O.D.value for each standard and sample.All O.D.values,are subtracted by themean value of the zero standard before result interpretation.Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3.To determine the amount in each sample,first locate the O.D.value on the Y-axis and extend a horizontalline to the standard curve.At the point of intersection,draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4.Any variation in operator,pipetting and washing technique,incubation time or temperature,and kit age cancause variation in result.Each user should obtain their own standard curve.5.The sensitivity by this assay is0.1nmol/L6.Standard curveStorage：2-8℃.validity：six months.FOR RESEARCH USE ONLY;NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFOREBEGINNING!。
