HE染色步骤
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he染色法步骤
HE 染色法呀,那可是病理实验中的大明星呢!咱就来好好唠唠这
个神奇的 HE 染色法步骤。
首先呢,得准备好切片,这就好比要给一个小宝贝打扮,得先把它
摆好位置不是。
切片要切得薄厚均匀,就像切面条一样,不能有的粗
有的细。
然后就是脱蜡啦,这就好像给小宝贝洗个澡,把身上那些脏脏的蜡
质都洗掉,让它干干净净的。
接下来就是水化,让切片充分吸收水分,变得润润的,就像我们人
要多喝水一样,这样才能保持活力呀。
再之后就是染色啦,苏木精就登场咯!它就像个魔法师,能把细胞
核染得蓝蓝的,可神奇啦!你想想,细胞核就像是小宝贝的眼睛,得
炯炯有神才行呢。
染完细胞核,该染细胞质啦,伊红来啦!它能让细胞质变得红红的,这下可好啦,细胞核和细胞质就分得清清楚楚啦,就像白天和黑夜一
样分明。
染完色可还没完事儿呢,还得脱水呀,把多余的水分去掉,不然可
就湿漉漉的不好看啦。
然后是透明,让切片变得亮晶晶的,就像给小宝贝穿上了一件漂亮
的水晶衣服。
最后就是封片啦,把切片保护起来,让它能一直美美的。
你说这 HE 染色法是不是很有意思呀?就像给切片化了个妆,让我
们能更清楚地看到细胞的结构和形态。
这可是病理诊断的重要手段呢!如果没有它,我们怎么能知道细胞有没有生病呀?是不是很重要呢?
所以呀,一定要好好掌握这个 HE 染色法的步骤,这样才能让我们更好地了解病理世界呀!。
HE 染色的步骤
待干燥后的切片进行HE 染色,具体操作如下:1、脱蜡:室温条件下,将切片
夹于弹簧夹上,然后置于二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ(各10 min)→无水乙醇:二甲苯(1:1、3 min);2、下行梯度酒精复水:无水乙醇Ⅰ→无水乙醇Ⅱ→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇(各3
~
5 min);3、苏木素染色:将脱水后的切片置于苏木素内染
色(15 min),然后蒸馏水洗涤 2 次;4、盐酸分化:用0.25%盐酸快速分化;5、蓝化:将切片置于30℃左右的自来水中蓝化(20 min);6、上行梯度酒精脱水:50% 乙醇→70%乙醇→85%乙醇→95%乙醇(各3
~
5 min);7、伊红染色:将切片置于伊红染
液中染色(15S);8、脱水:95%乙醇(5 min)→无水乙醇Ⅰ(10 min)→无水乙醇Ⅱ(10 min)→无水乙醇:二甲苯(1:1、3 min)9、透明:二甲苯Ⅰ(10 min)→
二甲苯Ⅱ(10 min);10 、封片:用中性树脂胶将切片封好即可。
HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。
㈠染色程序1.石蜡切片HE染色(常规HE染色)(1)二甲苯Ⅰ 5~10min(2)二甲苯Ⅱ 5~10min(3)无水乙醇Ⅰ 1~3min(4)无水乙醇Ⅱ 1~3min(5)95%乙醇Ⅰ 1~3min(6)95%乙醇Ⅱ 1~3min(7)80%乙醇 1min(8)蒸馏水 1min(9)苏木素液染色 5~10min(10)流水洗去苏木素液 1min(11)1%盐酸-乙醇 1~3s(12)稍水洗 1~2s(13)返蓝(用温水或1%氨水等) 5~10s(14)流水冲洗 1~2min(15)蒸馏水洗 1~2min(16)0.5%伊红液染色 1~3min(17)蒸馏水稍洗 1~2s(18)80%乙醇 1~2s(19)95%乙醇Ⅰ 2~3min(20)95%乙醇Ⅱ 2~3min(21)无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3~5min(22)无水乙醇Ⅱ 3~5min(23)石炭酸-二甲苯 3~5min(24)二甲苯Ⅰ 3~5min(25)二甲苯Ⅱ 3~5min(26)二甲苯Ⅲ 3~5min(27)中性树胶封固注:①(12)和(13)项可省去,但(14)的冲水时间需延长至10~15min(细胞核显示更清晰)。
②(23)项可用无水乙醇代替;北方地区可省略。
2.冰冻切片HE染色(1)冰冻切片固定 10~30s(2)稍水洗 1~2s(3)苏木素液染色(60℃) 30~60s(4)流水洗去苏木素液 5~10s(5)1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1~3s(6)稍水洗 1~2min(7)返蓝(用温水或1%氨水等) 5~10s(8)流水冲洗 15~30s(9)0.5%伊红液染色 1~2min(10)蒸馏水稍洗 1~2min(11)80%乙醇 1~2min(12)95%乙醇 1~2min(13)无水乙醇Ⅰ 1~2min(14)无水乙醇Ⅱ 1~2min(15)石炭酸-二甲苯 2~3min(16)二甲苯Ⅰ 2~3min(17)二甲苯Ⅱ 2~3min(18)中性树胶封固注:①(7)和(8)项可省去,但(9)的冲水时间需延长至10~15min(细胞核显示更清晰)。
组织固定及HE染色步骤
1、固定:刚取的新鲜组织块经福尔马林溶液固定48小时(一般固定2天)
2、用镶子取出放到大的蜡盒上,用刀片切成1*0.5厘米的小块,用小白蜡盒包上,放入80%
的乙醇中过夜
3、脱水:第二天早上8点,把蜡盒依次放入95% I的乙醇中(3h)— 95%II的乙醇中(3h)
—100% I的乙醇中(3h)— 100%II的乙醇中(过夜)
4、透明:第二天早8点从100%11的乙醇中取出小蜡盒放到二甲苯1、二甲苯II中各30 分钟
5、浸蜡:放入蜡缸中I、II、IIL中各浸泡30分钟
6、包埋
7、切片
8、烤片
HE染色
二甲苯 I (30min)—二甲苯II (30min)一100% I 的乙醇中(lOmin)一 100%II 的乙醇中(lOmin) 95%的乙醇中(5min)— 90%的乙醇中(5min)— 80%的乙醇中(5min)—自来水缸中浸泡5min —苏木精染核5min —水洗一1%的盐酸酒精分化一水洗一弱氨水返蓝一水洗一镜下观察一伊红染质(15min)—水稍洗一80%的乙醇、95%的乙醇I、95% 的乙醇II中各过一下即可一100% I的乙醇中(5min)— 100%II的乙醇中(lOmin)—二甲苯I (lOmin)一二甲苯II (lOmin)一中性树胶封片
免疫组化步骤
切片常规脱蜡至水洗预处理(热修复或酶消化)阻断3%的H202 PBS洗封闭加一抗(鼠或兔抗人) PBS洗加二抗(生物素标记IgG鼠或兔))PBS洗加三抗(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)PBS洗DAB(AEC或BCIP/NBT)显色水洗复染核水洗弱氨水返兰水洗脱水透明封片。
he染色的操作流程原理下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成,希望大家下载以后,能够帮助大家解决实际的问题。
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将组织样本迅速放入固定液中,以防止组织自溶和腐败。
HE染色试剂配置A:~1%的伊红酒精溶液:称取伊红~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状;以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可100毫升溶解;B:苏木素染液配方:配制3000ml,可按比列减少苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠冰醋酸120ml甘油900ml配制方法:将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠;C:1%盐酸酒精分化液:将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可;染色流程1二甲苯Ⅰ15min2二甲苯Ⅱ15min3二甲苯:无水乙醇=1:12min4100%乙醇Ⅰ5min5100%乙醇Ⅱ5min680%乙醇5min7蒸馏水5min8苏木精液染色5min9流水稍洗去苏木精液1-3s101%盐酸乙醇1-3s11稍水洗10-30s12蒸馏水过洗1-2s13%伊红液染色1-3min14蒸馏水稍洗1-2s1580%乙醇稍洗1-2s1695%乙醇Ⅰ2-3s1795%乙醇Ⅱ3-5s18无水乙醇5-10min19石炭酸二甲苯5-10min20二甲苯Ⅰ2min21二甲苯Ⅱ2min22二甲苯Ⅲ2min23中性树胶封固注:①第11、12步可省去,13步冲水时间需延长至20-30min;②第21步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;冷冻切片HE染色步骤:1冰冻切片固定10~30s2稍水洗1~2s3苏木精液染色60℃30~60s4流水洗去苏木精液5~10s51%盐酸乙醇1~3s6稍水洗1~2s7促蓝液返蓝5~10s8流水冲洗15~30s9%曙红液染色30~60s10蒸馏水稍洗1~2s1180%乙醇1~2s1295%乙醇1~2s13无水乙醇1~2s14石炭酸二甲苯2~3s15二甲苯Ⅰ2~3s16二甲苯Ⅱ2~3s17中性树胶封固;注:第14步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;染色结果:细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色;4.12切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖;如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色;切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水;石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去;染色评定标准:1切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕;2染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观;4 染色结果编辑细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色;细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色;胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色;着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变;例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染;胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深;Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一;试剂:Regaud 氏苏木精:苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml;将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用;Masson丽春红酸性复红液:丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml; %冰醋酸水溶液:冰醋酸 ml,蒸馏水100 ml;1%磷钼酸水溶液:磷钼酸1g,蒸馏水100 ml;苯胺蓝水溶液:苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml;1%光绿水溶液:光绿 1g,蒸馏水100 ml;Masson三色法步骤1.石蜡切片脱蜡至水;2.铬化处理或去汞盐沉淀甲醛固定的组织此步可略;3.依次自来水和蒸馏水洗;4.用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min;5.充分水洗,如过染可盐酸酒精分化;6.蒸馏水洗;7.用Masson 丽春红酸性复红液5-10min;8.以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;9. 1%磷钼酸水溶液分化3-5min;10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min;11.以%冰醋酸水溶液浸洗片刻;12.95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固;结果:胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色如光绿液染色为绿色,胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色;体会与说明:1.控制好染色步骤;2.组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间; 3.%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳;4.磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可;天狼猩红染色试剂配制1天狼星红饱和苦昧酸液 O.5%天狼星红10ml,苦味酸饱和液90ml;2天青石蓝液天青石蓝B1.25g.铁明矾1.25g,蒸馏水250ml;溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml,然后再加入浓盐酸0.5ml;染色步骤1中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;2人大青石蓝液染5一lOmin;3蒸馏水洗3次;4天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min5无水乙醇直接分化与脱水;Devil二甲苯透明,中性树胶封固;注意事项1细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染;2染色封固后的切片,须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注:在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维;l型胶原纤维:紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维:显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;皿型胶原纤维:显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;lv型胶原纤维:显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色;免疫组化步骤ABC法1;4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液4℃中过夜;蜡块制作;切片,贴片;清洗5min×3后;2;加入配好的%的过氧化氢甲醇溶液甲醇80ml+ 100ml+30%过氧化氢30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,清洗5min×3;3;加入配好的% Triton X10030% Triton X100+ 100ml30min,以增加细胞的通透性,清洗5min×3;4;加入用血清稀释液牛血清白蛋白+ 100ml+叠氮纳稀释的一抗,4℃存放24-48h;吸去抗体,洗5min×3;5;加入稀释的的二抗,室温孵育2h;洗5min×3;6;加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,洗5min×3;蒸馏水迅速冲三次;7;加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入终止反应;8;梯度酒精脱水之后,封片,拍照;免疫组化SP法步骤:SPstreptavidin-perosidase法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等;按染色步骤可分为直接法又称一步法和间接法二步、三步或多步法;按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶PAP法和亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物ABC法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法等,其中SP法是最常使用的方法;一般的sp法步骤啊,具体如下:1.烤片,68℃,20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水;二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶:3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min;4. 抗原修复:置枸橼酸缓冲液PH 中用煮沸95℃,15-20min,自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min;5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照;滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS 冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片;免疫组化Elivision二步法:1石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用的PBS冲洗三次,每次3分钟3×3’;2取一定量pH=柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’;注:不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定3每张切片加1滴3% H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3×3’;4除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体相应稀释倍数,室温下孵育2小时;5PBS冲洗3×5’;除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂试剂A,室温下孵育20分钟;PBS冲洗3×3’;6除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物试剂B,室温下孵育30分钟;PBS冲洗3×5’7除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液,显微镜下观察5分钟;8苏木素复染,%HCl分化,自来水冲洗,蓝化,切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察;注:即用型第二代免疫组化Elivision plus广谱试剂盒,购自福州脉新生物技术开发有限公司;包括:生物素化抗兔二抗、亲和素Reagent A、生物素-辣根过氧化物酶Reagent B、二氨基联苯胺DAB脱钙剂的配置10%EDTA的配置:1加热水浴锅到65℃2称取NaOH11g加到900mlddH2O中3再加入EDTA-Na2100g至水中;4水浴加热,搅拌至透明溶解5加入Na2HPO46g,NaH2PO4,NaCl9g;蒸馏水定容至1000ml 6调节pH值至~,室温或4度保存。
HE染色步骤1.将于60℃烤箱中的烤片取出后立即放入二甲苯Ⅰ(透明)中15min,若切片已放置已久,则在浸二甲苯之前需将切片在60℃烤箱中烤2h以上;2.将切片于二甲苯Ⅱ15min,应观察到组织切片呈透明状,否则继续浸于二甲苯中;3.切片浸于1/2酒精+1/2二甲苯5min;4.将切片从二甲苯中取出稍甩掉二甲苯,于梯度乙醇中脱去二甲苯:无水乙醇Ⅰ5min→无水乙醇Ⅱ5min →95%酒精5 min→90%酒精5min→80%酒精5min→70%酒精5min;5.切片从70%酒精取出后稍冲洗:浸洗于蒸馏水Ⅰ5min →蒸馏水Ⅱ5min;6.蒸馏水浸洗后稍甩干水分用苏木精染色约15min;7.苏木精染色后用自来水冲洗(稍洗);8.冲洗后用1%盐酸酒精(99毫升70%酒精+1毫升浓HCl)镜检分化,操作时可以按先浸10S后用自来水稍冲洗,吸水纸吸掉水珠后镜检,若观察到细胞质部分染色很浅而核仍较深则自来水冲洗约15分钟(时间可为几分钟至1小时不等,以充分洗掉HCl),否则分化不全时则继续学浸于盐酸酒精中至20S、30S等直至达到满意染色。
9.冲洗后判断染色,浸入1%氨水酒精(99毫升70%酒精+1毫升浓氨水)迅速(约几s至半分钟不等,不同的组织情况不同,需进行摸索)取出用蒸馏水冲洗后于蒸馏水Ⅰ(3min) →蒸馏水Ⅱ(3min);10.甩干水分,1%伊红(水溶性伊红Y 1g溶于100毫升85%酒精)染色约3min,若着色困难可在每100毫升染液中加入1~2滴冰醋酸,使易着色且不易脱色;11.70%酒精稍冲洗切片将伊红洗掉,之后则梯度乙醇浸洗(脱水作用):70%酒精(1 min) →80%酒精(1min) →90%酒精(3min) →95%酒精(2min) (此段时间应尽量缩短,因伊红易在95%酒精中脱色)→无水酒精Ⅰ(5min) →无水酒精Ⅱ(5min) ;12.1/2二甲苯+1/2酒精(5min) →二甲苯Ⅰ(5min) →二甲苯Ⅱ(15min);13.将染色完成的切片取出,确保二甲苯未干燥,迅速用移液枪吸取树胶滴在组织上,盖上盖玻片,待凝固后观察结果。
HE染色液的配制:Harris苏木素:甲液苏木素0.9克100%酒精10 ml乙液铵(或钾)明矾20 克蒸馏水200ml然后加入氧化汞0.5克甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞,玻棒搅拌,然后烧杯于冷水速冷,第二天过滤(夜),临用前加几滴醋酸(100ml加入0.25克)对核着色效果更好。
伊红1%:1g溶于10ml蒸馏水,溶解后逐滴加冰醋酸,边滴边搅拌,至糊状时,再加数毫升蒸馏水,继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤,滤纸放入温箱(50-60)过夜,烘干物用100 毫升85%酒精溶解。
1.切片:将切片刀磨好,装到机上,将预定使用的刀部位移至蜡块下方,刀的倾斜角为30度,调整切片机厚度为6um,右手摇片扒,左手持一毛笔拖住蜡带,随切片机的转动轻轻把蜡带拉开,用毛笔拖住蜡带,挑断后顺序放在纸上。
(切片时,放入-20度冰箱中冻一下再切,效果比较好)2.摊片:41-42度,将预先切开的蜡片摊于水面上,使蜡片受热自然张开浮在水面上,也可用细针帮助张开皱褶,用经过APES处理过的载玻片伸入水中把蜡片移至玻片上,拨正位置。
注:2%APES前期处理载玻片的方法第一缸:4ml APES + 196 ml丙酮,配成2%的APES液,1.5-2 min第二缸:200ml丙酮(I)2min,震荡第三缸:200ml丙酮(II)2min,震荡第四缸:200ml蒸馏水(I)5min第五缸:200ml蒸馏水(II)5min自然风干,备用3.烘片:8h4.HE染色步骤二甲苯脱蜡(1)(2)5~10min(冬天10~20min)→100%酒精1 min→95%酒精1 min→85%酒精1 min→70%酒精1 min→50%酒精1 min→蒸馏水1–3 min(苏木精时水擦干)→苏木精染色1–2 min→自来水冲洗3–5 min(酚化分化3–5 min)→蒸馏水洗3–10min →70%酒精1–2 min→85%酒精2min→伊红20s→95%酒精→100%酒精(1)(2) 1~2min→二甲苯(1)(2)5~10min→封片。
he染色的操作流程
微染色(Micro-dyeing)是一种新型制革工艺,它以小分子染料的定量
给色的方式为牛副色革料定色。
它具有色彩可控、无需破坏革料正常
结构、染色后无残留环境污染物等优点,是一种理想的染色技术。
微染色的操作流程:
1、进料准备:把要染色的革料放入调色柜,并将染料和溶剂按配方比
例预先放入调色柜。
2、革料配色:调整染料颜色,采用比例法给予染色革料所需色彩,然
后用滤网将染料颗粒过滤掉,准备染色溶液。
3、微染色:把染色溶液灌注到沙包上,在固定的温度、湿度、PH值
及染料浓度下,将革料进行微电解印染,使染料能够附着在革料表面,完成配色。
4、烘干/洗涤:烘干革料,以去除多余的染料,再进行洗涤以固定染色。
5、检查:检查色彩是否符合图片,整体色彩过渡良好,并符合客户要求。
6、包装:完成染色后,就可以进行包装了,将染色后的革料包装起来,以便顺利的运输出去。
常规HE染色步骤
(1)二甲苯(Ⅰ) 5-10 min
(2) 二甲苯(Ⅱ) 5-10 min
(3) 95%乙醇(Ⅰ) 1-3 min (4)95%乙醇(Ⅱ) 1-3 min (5)80%乙醇 1 min
(6)蒸馏水 1 min (7)苏木精液染色 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(10) 稍水洗 10-30 s
(11)促蓝液返蓝 10-30 s
(12) 流水冲洗 10-15 min (13)蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇(Ⅰ) 3-5min
(18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 min
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 无水乙醇 5-10 min
(21) 二甲苯(Ⅰ) 3-5 min
(22) 二甲苯(Ⅱ) 2-5 min
(23) 二甲苯(Ⅲ) 3-5 min
(24) 中性树胶封固
结果:细胞浆红色,细胞核蓝紫色。
冰冻切片步骤
(1)二甲苯(Ⅰ) 5-10 min
(2) 二甲苯(Ⅱ) 5-10 min
(3) 95%乙醇(Ⅰ) 1-3 min
(4)95%乙醇(Ⅱ) 1-3 min
(5)80%乙醇 1 min
(6)蒸馏水 1 min
(7)苏木精液染色 5-15 min
(8 ) 流水稍洗去苏木精液 1-3 s
(9) 1%盐酸乙醇 1-3 s
(10) 稍水洗 10-30 s
(11)促蓝液返蓝 10-30 s
(12) 流水冲洗 10-15 min
(13)蒸馏水过洗 1-2 s
(14) 0.5%曙红液染色 1-3 min
(15) 蒸馏水稍洗 1-2 s
(16) 80%乙醇稍洗 1-2 s
(17) 95%乙醇(Ⅰ) 2-3 s
(18) 95%乙醇(Ⅱ) 3-5 s
(19) 无水乙醇 5-10 min
(20) 石炭酸二甲苯 5-10 min
(21) 二甲苯(Ⅰ) 2 min
(22) 二甲苯(Ⅱ) 2 min
(23) 二甲苯(Ⅲ) 2 min
(24) 中性树胶封固
注:①第(10)、(11)步可省去,(12)步冲水时间需延长至20-30min。
②第(20)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
* 冷冻切片HE染色步骤:
(1)冰冻切片固定 10~30 s
(2)稍水洗 1~2 s
(3)苏木精液染色(60℃) 30~60 s
(4)流水洗去苏木精液 5~10 s
(5)1%盐酸乙醇 1~3 s
(6)稍水洗 1~2 s
(7)促蓝液返蓝 5~10 s
(8)流水冲洗 15~30 s
(9)0.5%曙红液染色 30~60 s
(10)蒸馏水稍洗 1~2 s
(11)80%乙醇 1~2 s
(12)95%乙醇 1~2 s
(13)无水乙醇 1~2 s
(14)石炭酸二甲苯 2~3 s
(15)二甲苯(Ⅰ) 2~3 s
(16)二甲苯(Ⅱ) 2~3 s
(17)中性树胶封固。
注:第(14)步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇。
染色结果:细胞核蓝色、胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色。
4.12 切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖,。
如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色。
切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水。
石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去。