HE染色的步骤及方法

HE染色试剂配置A：0.5~1%的伊红酒精溶液：称取伊红Y0.5~1g，加少量蒸馏水溶解后，再滴加冰醋酸直至浆糊状。

以滤纸过滤，将滤渣在烘箱中烤干后，以95%酒精（即工业酒精，如果不怕浪费，用无水乙醇配制也可）100毫升溶解。

B：苏木素染液配方：(配制3000ml，可按比列减少)苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠1.2g冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水，溶解后将甘油倾入一起混合，最后加入冰醋酸和碘酸钠。

C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可。

染色流程(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2)二甲苯（Ⅱ）15min（3）二甲苯：无水乙醇=1:12min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5min(8)苏木精液染色5min(9)流水稍洗去苏木精液1-3s(10)1%盐酸乙醇1-3s(11)稍水洗10-30s(12)蒸馏水过洗1-2s(13)0.5%伊红液染色1-3min(14)蒸馏水稍洗1-2s(15)80%乙醇稍洗1-2s(16)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(17)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(18)无水乙醇5-10min(19)石炭酸二甲苯5-10min(20)二甲苯（Ⅰ）2min(21)二甲苯（Ⅱ）2min(22)二甲苯（Ⅲ）2min(23)中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

*冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30s（2）稍水洗1～2s（3）苏木精液染色（60℃）30～60s（4）流水洗去苏木精液5～10s（5）1%盐酸乙醇1～3s（6）稍水洗1～2s（7）促蓝液返蓝5～10s（8）流水冲洗15～30s（9）0.5%曙红液染色30～60s（10）蒸馏水稍洗1～2s（11）80%乙醇1～2s（12）95%乙醇1～2s（13）无水乙醇1～2s（14）石炭酸二甲苯2～3s（15）二甲苯（Ⅰ）2～3s（16）二甲苯（Ⅱ）2～3s（17）中性树胶封固。

He染色介绍苏木精—伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ，简称HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

染色分类易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia ) 。

组织内的蛋白质构成蛋白质的氨基酸的种类很多，它们有不同的等电点。

在普通染色法中，染色液的酸碱度为pH6左右，细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色，这些物质称为嗜碱性。

而细胞质中的其它蛋白质如红细胞中的血红蛋白、嗜酸粒细胞的颗粒及胶原纤维和肌纤维等被酸性染料染色，这些物质称为嗜酸型。

如果改变染色液的酸碱度，pH值升高时，则原来被酸性染料染色的物质可变为嗜碱性；pH值降低时，原来被碱性染料染色的物质则可变为嗜酸性。

所以说染色液的pH值可以影响染色的反应。

去氧核糖核酸（DNA）两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键结合而被染色。

苏木精在碱性溶液中称蓝色，所以细胞核被染成蓝色。

伊红Y是一种化学合成的酸性染料，在水中离解成带负电荷的阴离子，与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色，细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色，与蓝色的细胞核形成鲜明对比。

伊红是细胞浆的良好染料。

由于组织或细胞的不同成分对苏木精的亲和力不同及染色性质不一样。

经苏木精染色后，细胞核及钙盐粘液等呈蓝色，可用盐酸酒精分化和弱碱性溶液显蓝，如处理适宜，可使细胞核着清楚的深蓝色，胞浆等其它成分脱色。

再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。

故各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。

染色结果细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。

HE染色步骤：
事先准备好盖玻片
1.脱蜡：脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min
2.覆水：100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5min，自来水冲洗5min×3
3.苏木精染色5min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。

4.5%乙酸分化1min，流水冲洗。

（用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色
变浅了一些，成为蓝色）
5.返蓝：返蓝液（实验室没有，也可不用）
6.伊红染色1min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。

7.脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10s，二甲苯1min（可以在通风橱自然晾干再封
片，约5min左右）
8.滴上中性树胶，封片。

（用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖
完，避免中间有气泡）。

组织固定及HE染色步骤
1、固定：刚取的新鲜组织块经福尔马林溶液固定48小时（一般固定2天）
2、用镶子取出放到大的蜡盒上，用刀片切成1*0.5厘米的小块，用小白蜡盒包上，放入80%
的乙醇中过夜
3、脱水：第二天早上8点，把蜡盒依次放入95% I的乙醇中（3h）— 95%II的乙醇中（3h）
—100% I的乙醇中（3h）— 100%II的乙醇中（过夜）
4、透明：第二天早8点从100%11的乙醇中取出小蜡盒放到二甲苯1、二甲苯II中各30 分钟
5、浸蜡：放入蜡缸中I、II、IIL中各浸泡30分钟
6、包埋
7、切片
8、烤片
HE染色
二甲苯 I （30min）—二甲苯II （30min）一100% I 的乙醇中（lOmin）一 100%II 的乙醇中（lOmin） 95%的乙醇中（5min）— 90%的乙醇中（5min）— 80%的乙醇中（5min）—自来水缸中浸泡5min —苏木精染核5min —水洗一1%的盐酸酒精分化一水洗一弱氨水返蓝一水洗一镜下观察一伊红染质（15min）—水稍洗一80%的乙醇、95%的乙醇I、95% 的乙醇II中各过一下即可一100% I的乙醇中（5min）— 100%II的乙醇中（lOmin）—二甲苯I （lOmin）一二甲苯II （lOmin）一中性树胶封片
免疫组化步骤
切片常规脱蜡至水洗预处理（热修复或酶消化）阻断3%的H202 PBS洗封闭加一抗（鼠或兔抗人） PBS洗加二抗（生物素标记IgG鼠或兔））PBS洗加三抗（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）PBS洗DAB（AEC或BCIP/NBT）显色水洗复染核水洗弱氨水返兰水洗脱水透明封片。

he染色的操作流程原理下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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将组织样本迅速放入固定液中，以防止组织自溶和腐败。

HE染色法是苏木精（hematoxylin）和伊红（eosin）的首个字母缩写。

苏木精是碱性染料，使细胞核染色质和胞质内的核糖体呈紫蓝色。

伊红是酸性染料，使细胞质和细胞外基质中带较强碱基的蛋白质成份着红色。

常规he染色步骤：(1)二甲苯（Ⅰ）15min(2) 二甲苯（Ⅱ）15 min（3）二甲苯：无水乙醇=1:1 2min(4)100%乙醇（Ⅰ）5min(5)100%乙醇（Ⅱ）5 min(6)80%乙醇5min(7)蒸馏水5 min(8)苏木精液染色5 min(9) 流水稍洗去苏木精液1-3 s(10) 1%盐酸乙醇1-3 s(11) 稍水洗10-30 s(12)蒸馏水过洗1-2 s(13) 0.5%伊红液染色1-3 min(14) 蒸馏水稍洗1-2 s(15) 80%乙醇稍洗1-2 s(16) 95%乙醇（Ⅰ）2-3 s(17) 95%乙醇（Ⅱ）3-5 s(18) 无水乙醇5-10 min(19) 石炭酸二甲苯5-10 min(20) 二甲苯（Ⅰ）2 min(21) 二甲苯（Ⅱ）2 min(22) 二甲苯（Ⅲ）2 min(23) 中性树胶封固注：①第（11）、（12）步可省去，（13）步冲水时间需延长至20-30min。

②第（21）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。

冷冻切片HE染色步骤：（1）冰冻切片固定10～30 s（2）稍水洗1～2 s（3）苏木精液染色（60℃）30～60 s（4）流水洗去苏木精液5～10 s （5）1%盐酸乙醇1～3 s （6）稍水洗1～2 s（7）促蓝液返蓝5～10 s （8）流水冲洗15～30 s （9）0.5%曙红液染色30～60 s （10）蒸馏水稍洗1～2 s （11）80%乙醇1～2 s （12）95%乙醇1～2 s （13）无水乙醇1～2 s （14）石炭酸二甲苯2～3 s （15）二甲苯（Ⅰ）2～3 s （16）二甲苯（Ⅱ）2～3 s （17）中性树胶封固。

HE染色液的配制：Harris苏木素：甲液苏木素0.9克100%酒精10 ml乙液铵（或钾）明矾20 克蒸馏水200ml然后加入氧化汞0.5克甲液加乙液加热煮沸后离开火焰缓缓加入氧化汞，玻棒搅拌，然后烧杯于冷水速冷，第二天过滤（夜），临用前加几滴醋酸（100ml加入0.25克）对核着色效果更好。

伊红1%：1g溶于10ml蒸馏水，溶解后逐滴加冰醋酸，边滴边搅拌，至糊状时，再加数毫升蒸馏水，继续逐滴加冰醋酸至沉淀不再增加时过滤，滤纸放入温箱（50-60）过夜，烘干物用100 毫升85%酒精溶解。

1.切片：将切片刀磨好，装到机上，将预定使用的刀部位移至蜡块下方，刀的倾斜角为30度，调整切片机厚度为6um，右手摇片扒，左手持一毛笔拖住蜡带，随切片机的转动轻轻把蜡带拉开，用毛笔拖住蜡带，挑断后顺序放在纸上。

（切片时，放入-20度冰箱中冻一下再切，效果比较好）2.摊片：41-42度，将预先切开的蜡片摊于水面上，使蜡片受热自然张开浮在水面上，也可用细针帮助张开皱褶，用经过APES处理过的载玻片伸入水中把蜡片移至玻片上，拨正位置。

注：2%APES前期处理载玻片的方法第一缸：4ml APES + 196 ml丙酮，配成2%的APES液，1.5-2 min第二缸：200ml丙酮（I）2min，震荡第三缸：200ml丙酮（II）2min，震荡第四缸：200ml蒸馏水（I）5min第五缸：200ml蒸馏水（II）5min自然风干，备用3.烘片：8h4.HE染色步骤二甲苯脱蜡(1)(2)5～10min(冬天10～20min)→100％酒精1 min→95％酒精1 min→85％酒精1 min→70％酒精1 min→50％酒精1 min→蒸馏水1–3 min(苏木精时水擦干)→苏木精染色1–2 min→自来水冲洗3–5 min(酚化分化3–5 min)→蒸馏水洗3–10min →70％酒精1–2 min→85％酒精2min→伊红20s→95％酒精→100％酒精(1)(2) 1～2min→二甲苯(1)(2)5～10min→封片。

he染色的操作流程
微染色（Micro-dyeing）是一种新型制革工艺，它以小分子染料的定量
给色的方式为牛副色革料定色。

它具有色彩可控、无需破坏革料正常
结构、染色后无残留环境污染物等优点，是一种理想的染色技术。

微染色的操作流程：
1、进料准备：把要染色的革料放入调色柜，并将染料和溶剂按配方比
例预先放入调色柜。

2、革料配色：调整染料颜色，采用比例法给予染色革料所需色彩，然
后用滤网将染料颗粒过滤掉，准备染色溶液。

3、微染色：把染色溶液灌注到沙包上，在固定的温度、湿度、PH值
及染料浓度下，将革料进行微电解印染，使染料能够附着在革料表面，完成配色。

4、烘干/洗涤：烘干革料，以去除多余的染料，再进行洗涤以固定染色。

5、检查：检查色彩是否符合图片，整体色彩过渡良好，并符合客户要求。

6、包装：完成染色后，就可以进行包装了，将染色后的革料包装起来，以便顺利的运输出去。