HE染色步骤

HE 染色的步骤
待干燥后的切片进行HE 染色，具体操作如下：1、脱蜡：室温条件下，将切片
夹于弹簧夹上，然后置于二甲苯Ⅰ→二甲苯Ⅱ（各10 min）→无水乙醇：二甲苯（1：1、3 min）；2、下行梯度酒精复水：无水乙醇Ⅰ→无水乙醇Ⅱ→95%乙醇→85%乙醇→70%乙醇→50%乙醇（各3
~
5 min）；3、苏木素染色：将脱水后的切片置于苏木素内染
色（15 min），然后蒸馏水洗涤 2 次；4、盐酸分化：用0.25%盐酸快速分化；5、蓝化：将切片置于30℃左右的自来水中蓝化（20 min）；6、上行梯度酒精脱水：50% 乙醇→70%乙醇→85%乙醇→95%乙醇（各3
~
5 min）；7、伊红染色：将切片置于伊红染
液中染色（15S）；8、脱水：95%乙醇（5 min）→无水乙醇Ⅰ（10 min）→无水乙醇Ⅱ（10 min）→无水乙醇：二甲苯（1：1、3 min）9、透明：二甲苯Ⅰ（10 min）→
二甲苯Ⅱ（10 min）；10 、封片：用中性树脂胶将切片封好即可。

HE染色步骤：
事先准备好盖玻片
1.脱蜡：脱蜡二甲苯Ⅰ、Ⅱ各10min
2.覆水：100%（Ⅰ、Ⅱ）、90%、80%、70%酒精各5min，自来水冲洗5min×3
3.苏木精染色5min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。

4.5%乙酸分化1min，流水冲洗。

（用吸管滴加乙酸，布满玻片上的组织即可，分化后颜色
变浅了一些，成为蓝色）
5.返蓝：返蓝液（实验室没有，也可不用）
6.伊红染色1min（根据染色情况，可以适当增加或减少染色时间），流水冲洗。

7.脱水：70%、80%、90%、100%酒精各10s，二甲苯1min（可以在通风橱自然晾干再封
片，约5min左右）
8.滴上中性树胶，封片。

（用吸管滴上一滴即可，尽量少滴，但压片后要将组织全部覆盖
完，避免中间有气泡）。

HE染色是应用最广泛的组织病理学常规染色技术。

㈠染色程序1．石蜡切片HE染色（常规HE染色）（1）二甲苯Ⅰ 5～10min（2）二甲苯Ⅱ 5～10min（3）无水乙醇Ⅰ 1～3min（4）无水乙醇Ⅱ 1～3min（5）95%乙醇Ⅰ 1～3min（6）95%乙醇Ⅱ 1～3min（7）80%乙醇 1min（8）蒸馏水 1min（9）苏木素液染色 5～10min（10）流水洗去苏木素液 1min（11）1%盐酸-乙醇 1～3s（12）稍水洗 1～2s（13）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（14）流水冲洗 1～2min（15）蒸馏水洗 1～2min（16）0.5%伊红液染色 1～3min（17）蒸馏水稍洗 1～2s（18）80%乙醇 1～2s（19）95%乙醇Ⅰ 2～3min（20）95%乙醇Ⅱ 2～3min（21）无水乙醇Ⅰ &, nbsp; 3～5min（22）无水乙醇Ⅱ 3～5min（23）石炭酸-二甲苯 3～5min（24）二甲苯Ⅰ 3～5min（25）二甲苯Ⅱ 3～5min（26）二甲苯Ⅲ 3～5min（27）中性树胶封固注：①（12）和（13）项可省去，但（14）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。

②（23）项可用无水乙醇代替；北方地区可省略。

2．冰冻切片HE染色（1）冰冻切片固定 10～30s（2）稍水洗 1～2s（3）苏木素液染色（60℃） 30～60s（4）流水洗去苏木素液 5～10s（5）1%盐酸-乙醇 &n, bsp; &nbs, p; &nb, sp; 1～3s（6）稍水洗 1～2min（7）返蓝（用温水或1%氨水等） 5～10s（8）流水冲洗 15～30s（9）0.5%伊红液染色 1～2min（10）蒸馏水稍洗 1～2min（11）80%乙醇 1～2min（12）95%乙醇 1～2min（13）无水乙醇Ⅰ 1～2min（14）无水乙醇Ⅱ 1～2min（15）石炭酸-二甲苯 2～3min（16）二甲苯Ⅰ 2～3min（17）二甲苯Ⅱ 2～3min（18）中性树胶封固注：①（7）和（8）项可省去，但（9）的冲水时间需延长至10～15min（细胞核显示更清晰）。

组织固定及HE染色步骤
1、固定：刚取的新鲜组织块经福尔马林溶液固定48小时（一般固定2天）
2、用镶子取出放到大的蜡盒上，用刀片切成1*0.5厘米的小块，用小白蜡盒包上，放入80%
的乙醇中过夜
3、脱水：第二天早上8点，把蜡盒依次放入95% I的乙醇中（3h）— 95%II的乙醇中（3h）
—100% I的乙醇中（3h）— 100%II的乙醇中（过夜）
4、透明：第二天早8点从100%11的乙醇中取出小蜡盒放到二甲苯1、二甲苯II中各30 分钟
5、浸蜡：放入蜡缸中I、II、IIL中各浸泡30分钟
6、包埋
7、切片
8、烤片
HE染色
二甲苯 I （30min）—二甲苯II （30min）一100% I 的乙醇中（lOmin）一 100%II 的乙醇中（lOmin） 95%的乙醇中（5min）— 90%的乙醇中（5min）— 80%的乙醇中（5min）—自来水缸中浸泡5min —苏木精染核5min —水洗一1%的盐酸酒精分化一水洗一弱氨水返蓝一水洗一镜下观察一伊红染质（15min）—水稍洗一80%的乙醇、95%的乙醇I、95% 的乙醇II中各过一下即可一100% I的乙醇中（5min）— 100%II的乙醇中（lOmin）—二甲苯I （lOmin）一二甲苯II （lOmin）一中性树胶封片
免疫组化步骤
切片常规脱蜡至水洗预处理（热修复或酶消化）阻断3%的H202 PBS洗封闭加一抗（鼠或兔抗人） PBS洗加二抗（生物素标记IgG鼠或兔））PBS洗加三抗（链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶）PBS洗DAB（AEC或BCIP/NBT）显色水洗复染核水洗弱氨水返兰水洗脱水透明封片。

HE染色试剂配置A：~1%的伊红酒精溶液：称取伊红~1g,加少量蒸馏水溶解后,再滴加冰醋酸直至浆糊状;以滤纸过滤,将滤渣在烘箱中烤干后,以95%酒精即工业酒精,如果不怕浪费,用无水乙醇配制也可100毫升溶解;B：苏木素染液配方：配制3000ml,可按比列减少苏木精6g无水乙醇100ml硫酸铝钾150g蒸馏水2000ml碘酸钠冰醋酸120ml甘油900ml配制方法：将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水,溶解后将甘油倾入一起混合,最后加入冰醋酸和碘酸钠;C：1%盐酸酒精分化液：将1毫升浓盐酸加入99毫升70%酒精中即可;染色流程1二甲苯Ⅰ15min2二甲苯Ⅱ15min3二甲苯：无水乙醇=1:12min4100%乙醇Ⅰ5min5100%乙醇Ⅱ5min680%乙醇5min7蒸馏水5min8苏木精液染色5min9流水稍洗去苏木精液1-3s101%盐酸乙醇1-3s11稍水洗10-30s12蒸馏水过洗1-2s13%伊红液染色1-3min14蒸馏水稍洗1-2s1580%乙醇稍洗1-2s1695%乙醇Ⅰ2-3s1795%乙醇Ⅱ3-5s18无水乙醇5-10min19石炭酸二甲苯5-10min20二甲苯Ⅰ2min21二甲苯Ⅱ2min22二甲苯Ⅲ2min23中性树胶封固注：①第11、12步可省去,13步冲水时间需延长至20-30min;②第21步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;冷冻切片HE染色步骤：1冰冻切片固定10～30s2稍水洗1～2s3苏木精液染色60℃30～60s4流水洗去苏木精液5～10s51%盐酸乙醇1～3s6稍水洗1～2s7促蓝液返蓝5～10s8流水冲洗15～30s9%曙红液染色30～60s10蒸馏水稍洗1～2s1180%乙醇1～2s1295%乙醇1～2s13无水乙醇1～2s14石炭酸二甲苯2～3s15二甲苯Ⅰ2～3s16二甲苯Ⅱ2～3s17中性树胶封固;注：第14步如果不用石炭酸二甲苯,可改用无水乙醇;染色结果：细胞核蓝色,胞质、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈深浅不一的红色;4．12切片脱水透明切片经HE染色后,要彻底脱水透明,才能用中性树胶封盖;如果脱水不彻底,封片后呈白色雾状,镜下观察模糊不清,且容易褪色;切片1-2级无水乙醇脱水,也可使用石碳酸二甲苯进行脱水;石碳酸有较强脱水能力,但长时间可使切片脱色,因此要经过多次二甲苯以使石碳酸完全除去;染色评定标准：1切片完整,厚度4-6微米,厚薄均匀,无皱褶无刀痕；2染色核浆分明,红蓝适度,透明洁净,封裱美观;4 染色结果编辑细胞核被苏木精染成鲜明的蓝色,软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色,粘液呈灰蓝色;细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色,胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色;胶原纤维呈淡粉红色,弹力纤维呈亮粉红色,红血球呈橘红色,蛋白性液体呈粉红色;着色情况与组织或细胞的种类有关,也随其生活周期及病理变化而改变;例如,很多细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱,当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染;胶原纤维在老化和出现透明变性时,伊红着色由浅变深;Masson染色,用于显示组织中纤维的染色方法之一;试剂：Regaud 氏苏木精：苏木精1g,95%酒精10ml,甘油10ml,蒸馏水80ml;将苏木精加入蒸馏水内加温溶解,冷却后加入酒精和甘油,放数日后即可应用;Masson丽春红酸性复红液：丽春红,酸性复红,蒸馏水99ml,冰醋酸1ml; %冰醋酸水溶液：冰醋酸 ml,蒸馏水100 ml;1%磷钼酸水溶液：磷钼酸1g,蒸馏水100 ml;苯胺蓝水溶液：苯胺蓝2g,蒸馏水98 ml,冰醋酸2 ml;1%光绿水溶液：光绿 1g,蒸馏水100 ml;Masson三色法步骤1．石蜡切片脱蜡至水;2．铬化处理或去汞盐沉淀甲醛固定的组织此步可略;3．依次自来水和蒸馏水洗;4．用Regaud苏木精染液或Weigert苏木精液染核5-10min;5．充分水洗,如过染可盐酸酒精分化;6．蒸馏水洗;7．用Masson 丽春红酸性复红液5-10min;8．以2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;9． 1%磷钼酸水溶液分化3-5min;10. 不经水洗,直接用苯胺蓝或光绿液染5min;11．以%冰醋酸水溶液浸洗片刻;12．95%酒精、无水酒精、二甲苯透明、中性树胶封固;结果：胶原纤维、粘液、软骨呈蓝色如光绿液染色为绿色,胞浆、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色,胞核黑蓝色;体会与说明：1．控制好染色步骤;2．组织固定起着很重要的作用,根据不同的固定液可延长或缩短染色时间; 3．%冰醋酸水溶液洗,可使色调清晰鲜艳;4．磷钼酸水溶液对丽春红、酸性复红有分化作用,分化时镜下控制, 肌纤维和纤维素呈红色,胶原纤维呈淡粉红色即可;天狼猩红染色试剂配制1天狼星红饱和苦昧酸液 O．5％天狼星红10ml,苦味酸饱和液90ml;2天青石蓝液天青石蓝B1．25g．铁明矾1．25g,蒸馏水250ml;溶解煮沸、待冷却过滤加入甘油30ml,然后再加入浓盐酸0．5ml;染色步骤1中性甲醛液固定组织,石蜡切片,常规脱蜡至水;2人大青石蓝液染5一lOmin;3蒸馏水洗3次;4天狼星红饱和苦昧酸浓染15-30min5无水乙醇直接分化与脱水;Devil二甲苯透明,中性树胶封固;注意事项1细胞核里染色可以用Harris苏木素染色液谈染;2染色封固后的切片,须及时用偏光显微镜进行观察和照相已保持鲜艳的色彩注：在偏光显微镜下可以观察到四种类型的胶原纤维;l型胶原纤维：紧密排列,显示很强的双折光性,呈黄色或红色的纤维oll型胶原纤维：显示弱的双折光,呈多种色彩的疏松网状分布;皿型胶原纤维：显示弱的双折光,呈绿色的细纤维;lv型胶原纤维：显示弱的双折光的基膜,呈淡黄色;免疫组化步骤ABC法1;4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液4℃中过夜;蜡块制作;切片,贴片;清洗5min×3后；2;加入配好的%的过氧化氢甲醇溶液甲醇80ml＋ 100ml＋30%过氧化氢30min,以消除内源性过氧化物酶的影响,清洗5min×3；3;加入配好的% Triton X10030% Triton X100＋ 100ml30min,以增加细胞的通透性,清洗5min×3；4;加入用血清稀释液牛血清白蛋白＋ 100ml＋叠氮纳稀释的一抗,4℃存放24-48h；吸去抗体,洗5min×3；5;加入稀释的的二抗,室温孵育2h;洗5min×3；6;加入ABC复合物之类的抗体,室温孵育2h,洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；7;加入显色液,进行免疫组织化学显色,时间一般不超过30min,可不时在显微镜下进行观察,待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液,用蒸馏水迅速冲三次后加入终止反应；8;梯度酒精脱水之后,封片,拍照;免疫组化SP法步骤：SPstreptavidin-perosidase法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法.按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等;按染色步骤可分为直接法又称一步法和间接法二步、三步或多步法；按结合方式可分为抗原—抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶PAP法和亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物ABC法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法等,其中SP法是最常使用的方法;一般的sp法步骤啊,具体如下：1.烤片,68℃,20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min,PBS冲洗3X5min；4. 抗原修复:置枸橼酸缓冲液PH 中用煮沸95℃,15－20min,自然冷却20min 以上,再用冷水冲洗缸子,加快冷却至室温,PBS冲洗3X5min;5. 正常羊血清工作液封闭,37℃10 min,倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜,PBS冲洗3X5min用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照；滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液,37℃孵育30min, PBS 冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色,自来水充分冲洗后,苏木素复染,常规脱水,透明,干燥,封片;免疫组化Elivision二步法：1石蜡切片置于67℃烘箱中,烘片2小时,脱蜡至水,用的PBS冲洗三次,每次3分钟3×3’;2取一定量pH=柠檬酸盐缓冲液,加入微波盒中,微波加热至沸腾,将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温塑料切片架上,放入已沸腾的缓冲液中,中档微波处理10分钟,取出微波盒流水自然泠却,从缓冲液中取出玻片,先用蒸馏水冲洗两次,之后用PBS冲洗2×3’;注：不是所有的抗体都需要微波修复的,视具体情况而定3每张切片加1滴3% H2O2,室温下孵育10分钟,以阻断内源性过氧化物酶的活性;PBS冲洗3×3’;4除去PBS液,每张切片加1滴相应的第一抗体相应稀释倍数,室温下孵育2小时;5PBS冲洗3×5’;除去PBS液,每张切片加1滴聚合物增强剂试剂A,室温下孵育20分钟;PBS冲洗3×3’;6除去PBS液,每张切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物试剂B,室温下孵育30分钟;PBS冲洗3×5’7除去PBS液,每张切片加1滴新鲜配制的DAB液,显微镜下观察5分钟;8苏木素复染,%HCl分化,自来水冲洗,蓝化,切片经梯度酒精脱水干燥,二甲苯透明,中性树胶封固,晾干后观察;注：即用型第二代免疫组化Elivision plus广谱试剂盒,购自福州脉新生物技术开发有限公司;包括：生物素化抗兔二抗、亲和素Reagent A、生物素－辣根过氧化物酶Reagent B、二氨基联苯胺DAB脱钙剂的配置10%EDTA的配置：1加热水浴锅到65℃2称取NaOH11g加到900mlddH2O中3再加入EDTA-Na2100g至水中；4水浴加热,搅拌至透明溶解5加入Na2HPO46g,NaH2PO4,NaCl9g;蒸馏水定容至1000ml 6调节pH值至~,室温或4度保存。

HE染色步骤1．将于60℃烤箱中的烤片取出后立即放入二甲苯Ⅰ（透明）中15min，若切片已放置已久，则在浸二甲苯之前需将切片在60℃烤箱中烤2h以上；2．将切片于二甲苯Ⅱ15min，应观察到组织切片呈透明状，否则继续浸于二甲苯中；3．切片浸于1/2酒精+1/2二甲苯5min；4．将切片从二甲苯中取出稍甩掉二甲苯，于梯度乙醇中脱去二甲苯：无水乙醇Ⅰ5min→无水乙醇Ⅱ5min →95%酒精5 min→90%酒精5min→80%酒精5min→70%酒精5min；5．切片从70%酒精取出后稍冲洗：浸洗于蒸馏水Ⅰ5min →蒸馏水Ⅱ5min；6．蒸馏水浸洗后稍甩干水分用苏木精染色约15min；7．苏木精染色后用自来水冲洗(稍洗)；8．冲洗后用1%盐酸酒精（99毫升70%酒精+1毫升浓HCl）镜检分化，操作时可以按先浸10S后用自来水稍冲洗，吸水纸吸掉水珠后镜检，若观察到细胞质部分染色很浅而核仍较深则自来水冲洗约15分钟（时间可为几分钟至1小时不等，以充分洗掉HCl），否则分化不全时则继续学浸于盐酸酒精中至20S、30S等直至达到满意染色。

9．冲洗后判断染色，浸入1%氨水酒精（99毫升70%酒精+1毫升浓氨水）迅速（约几s至半分钟不等，不同的组织情况不同，需进行摸索）取出用蒸馏水冲洗后于蒸馏水Ⅰ(3min) →蒸馏水Ⅱ(3min)；10．甩干水分，1%伊红(水溶性伊红Y 1g溶于100毫升85%酒精)染色约3min，若着色困难可在每100毫升染液中加入1～2滴冰醋酸，使易着色且不易脱色；11．70%酒精稍冲洗切片将伊红洗掉，之后则梯度乙醇浸洗（脱水作用）：70%酒精(1 min) →80%酒精(1min) →90%酒精(3min) →95%酒精(2min) （此段时间应尽量缩短，因伊红易在95%酒精中脱色）→无水酒精Ⅰ(5min) →无水酒精Ⅱ(5min) ；12．1/2二甲苯+1/2酒精(5min) →二甲苯Ⅰ(5min) →二甲苯Ⅱ(15min)；13．将染色完成的切片取出，确保二甲苯未干燥，迅速用移液枪吸取树胶滴在组织上，盖上盖玻片，待凝固后观察结果。

HE染色法名词解释1. 引言在细胞学和组织学研究中，染色技术是一种非常重要的方法，可以通过染色剂将细胞和组织的结构及其组成部分可视化。

HE染色法（Hematoxylin and Eosin staining）是一种常用的染色方法，被广泛应用于组织学和病理学领域。

本文将对HE染色法进行详细解释。

2. HE染色法的原理HE染色法是通过对细胞和组织中的酸性成分和碱性成分进行染色，以区分它们的分布和结构。

该方法结合了两种染色剂：血红木素（Hematoxylin）和红精（Eosin）。

2.1 血红木素染色血红木素染色的目的是染色细胞核和呈碱性的细胞质。

血红木素是从天然产物血树中提取得到的紫色染料，它对酸性物质有亲和力。

在HE染色法中，血红木素溶液通常是呈酸性的，它可以与细胞核中的核酸结合形成复合物，使细胞核染上紫色。

另外，细胞内已染色的AB-PAS（Alcian Blue–Periodic Acid-Schiff）阳性物质也能与血红木素反应，被染成紫色。

2.2 红精染色红精染色的目的是给细胞胞质和特定细胞成分染色，以鉴别组织中的细胞类型和组织结构。

红精是一种酸性的有机染料，它对蛋白质和细胞膜等酸性物质有亲和力。

在HE染色中，红精溶液通常是呈碱性的，它可以与细胞胞质和胶原纤维等酸性成分反应，使其染上红色。

3. HE染色法的步骤HE染色法通常包括以下步骤：3.1 组织固定首先，需要将待染色的组织标本经过固定处理，使组织中的细胞和结构保持在染色过程中的原始状态。

常用的固定剂有福尔马林和乙醛溶液等。

3.2 组织脱水固定后的组织需要进行脱水处理，以使组织中的水分逐渐被有机溶剂代替。

常用的有机溶剂有乙醇和二甲苯等。

组织脱水的目的是为了使组织中的脂质和有机物质逐渐转变为透明状态，为后续的染色提供条件。

3.3 组织浸渍在脱水之后，需要将组织标本浸入熔蜡中，使其浸透均匀并变得硬化。

这个步骤被称为组织浸渍。

3.4 组织切片组织浸渍后，需要将标本切割成薄片，通常为5-7μm厚。

惯例HE染色步调之阳早格格创做（1）二甲苯（Ⅰ） 510 min(2) 二甲苯（Ⅱ） 510 min(3) 95%乙醇（Ⅰ） 13 min （4）95%乙醇（Ⅱ） 13 min （5）80%乙醇 1 min （6）蒸馏火 1 min （7）苏木粗液染色 515 min(8 ) 流火稍洗去苏木粗液 13 s(9) 1%盐酸乙醇 13 s(10) 稍火洗 1030 s(11)促蓝液返蓝 1030 s(12) 流火清洗 1015 min （13）蒸馏火过洗 12 s(14) 0.5%曙黑液染色 13 min(15) 蒸馏火稍洗 12 s(16) 80%乙醇稍洗 12 s(17) 95%乙醇（Ⅰ） 35min(18) 95%乙醇（Ⅱ） 35 min(19) 无火乙醇 510 min(20) 无火乙醇 510 min(21) 二甲苯（Ⅰ） 35 min(22) 二甲苯（Ⅱ） 25 min(23) 二甲苯（Ⅲ） 35 min(24) 中性树胶启固截止：细胞浆红色，细胞核蓝紫色.转：惯例HE染色步调（1）二甲苯（Ⅰ） 510 min(2) 二甲苯（Ⅱ） 510 min(3) 95%乙醇（Ⅰ） 13 min（4）95%乙醇（Ⅱ） 13 min （5）80%乙醇 1 min（6）蒸馏火 1 min（7）苏木粗液染色 515 min(8 ) 流火稍洗去苏木粗液 13 s(9) 1%盐酸乙醇 13 s(12) 流火清洗 2030min（13）蒸馏火过洗 12 s(14) 0.5%曙黑液染色 13 min(15) 蒸馏火稍洗 12 s(16) 80%乙醇稍洗 12 s(17) 95%乙醇（Ⅰ） 23 s(18) 95%乙醇（Ⅱ） 35 s(19) 无火乙醇 510 min(20) 石冰酸二甲苯无火乙醇 510 min(21) 二甲苯（Ⅰ） 2 min(22) 二甲苯（Ⅱ） 2 min(23) 二甲苯（Ⅲ） 2 min(24) 中性树胶启固注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲火时间需延少至2030min.②第（20）步如果没有必石冰酸二甲苯，可改用无火乙醇.1．与材构制块，经牢固后，惯例石蜡包埋，4μm切片.2．切片惯例用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至火洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏火洗2min.（各二次，而后把火吸搞） 3．苏木素染色5min，自去火清洗.（吸搞火） 4．盐酸乙醇瓦解30s（提插数下）. 5．自去火浸泡15min或者温火（约50℃）5min.（吸搞火） 6．置伊黑液2min. 7．惯例脱火，透明，启片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min（简略）→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂启固.HE染色步调一、HE染液的配制：1、 Harris苏木素：称与苏木素粗 1g硫酸铝钾 20g量与无火乙醇 10ml蒸馏火 200ml苏木素溶于无火乙醇，钾明矾溶于蒸馏火，二者混同后煮沸，离火，加进氧化汞，用玻棒搅拌，试剂形成深紫色，坐时移进热火赶快热却，静置一夜，过滤，棕色小磨心试剂瓶稀启保存.使用前加进5%冰乙酸4ml（或者冰乙酸3滴）.量与 95%乙醇 25ml蒸馏火 75ml先与少量蒸馏火加进伊黑，用玻棒将伊黑碾碎并搅溶，再加进局部蒸馏火，实足溶解后，再加进乙醇，末尾加进冰乙酸1滴.红色小磨心试剂瓶稀启保存.3、1%盐酸火溶液：盐酸 3ml蒸馏火 297ml混匀，红色试剂瓶保存.4、中性树胶启片剂：往125ml棕色滴瓶中倒进中性树胶若搞，加进二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稀度即可.试剂二甲苯 1瓶 Harris苏木素染液无火乙醇 2瓶 1%盐酸火溶液95%乙醇 2瓶 0.5%伊黑(火溶性)染液中性树胶启片剂二、染色步调1、电吹风吹片或者烤片，至溶蜡；2、进二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸火纸吸搞液体；3、进二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸火纸吸搞液体；4、进100%乙醇（I）5分钟，用吸火纸吸搞液体；5、进100%乙醇（II）5分钟，用吸火纸吸搞液体；6、进95%乙醇3分钟；7、进流火2分钟，用吸火纸吸搞火分；8、 Harris苏木素染色 4~8分钟；9、自去火稍洗；10、1%盐酸火溶液瓦解5~10秒（切片由蓝变黑）；11、自去火洗返蓝15~30分钟；12、0.5%伊黑(火溶性)染色30秒~1分13、95%乙醇（I）脱火5分钟，用吸火纸吸搞液体；14、95%乙醇（II）5分钟，用吸火纸吸搞液体；15、进100%乙醇（I）5分钟，用吸火纸吸搞液体；16、进100%乙醇（II）2分钟，用吸火纸吸搞液体；17、进二甲苯（I）中透明23分钟，用吸火纸吸搞液体；18、进二甲苯（II）中透明5分钟；19、中性树胶启片.20、镜下瞅察截止：细胞核深蓝色，胞浆及纤维构制呈深浅没有等的红色.三、注意事项1、苏木素染色时间应根据染液的新陈或者陈旧、及着色力决断.2、盐酸瓦解要妥当，瓦解缺累，会核、浆同染，瓦解过分会制成核染色过浅.3、火洗蓝化时间应充分，以防褪色.4、启片后，玻片应即时揭上标签并写上编号.。