HE染色原理
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组织学名词解释1.HE染色(原理)为苏木精-伊红染色法的简称,是最常用的组织学染色方法,苏木精为碱性染料,主要使细胞核内的染色质与细胞质内的核糖体着紫蓝色;伊红为酸性染料,主要使细胞质和细胞间质中的成分呈红色。
因此,HE染色法可将组织中各种细胞和细胞间质成分显示出来。
2.异染性当用蓝色碱性染料甲苯胺蓝进行染色时,组织中的糖胺多糖成分被染成紫红色,并非染成蓝色,这种色变现象称为异染性。
3.微绒毛(定义、结构、功能)是上皮细胞游离面的细胞膜和细胞质伸出的微细指状突起。
光镜下的纹状缘和刷状缘即由微绒毛构成。
电镜下,可见微绒毛的表面为细胞膜,中轴的细胞质含有许多纵行的微丝。
微丝上端伸到微绒毛顶部,下端插入细胞质中并附着于细胞质的终末网。
其收缩可使微绒毛伸长或缩短。
微绒毛可扩大细胞表面的接触面积,促进细胞的吸收功能。
4.连接复合体(定义)在相邻细胞间只要有两个或两个以上连接同时存在,则成为连接复合体。
各种细胞连接常可同时存在。
5.浆细胞(光电镜结构特点、功能)光镜下,浆细胞大多数呈锥体形或柱状,细胞核圆形,位于细胞中央或靠近基底部。
细胞基底部的细胞质呈强嗜碱性,顶部细胞质内聚集着许多圆形分泌颗粒,HE染色呈红色。
电镜下,细胞基底部有密集平行排列的粗面内质网,并有许多线粒体分布于内质网扁囊之间,细胞核上方具有发达的高尔基复合体。
有分泌蛋白质的功能。
6.分子筛(具体分子组成、功能)以蛋白多糖的立体构型为主体。
糖蛋白在基质中形成许多有微孔隙的结构,称为分子筛。
分子筛具有屏障作用,小于其孔径的物质(如O2、CO2及营养物质)可以自由通过;而大于其孔径的物质(如细菌)不能通过。
7. 软骨囊(组成、特点)在软骨陷窝的周缘,特别是在新生的软骨中,包围在一组陷窝或陷窝外,呈强嗜碱性(并具有异染性的特点)的部分称软骨囊,它是新生的软骨基质,含硫酸软骨素较多。
8. 骨单位(别称、定义、结构组成)又称哈佛斯系统,由哈佛斯骨板与哈佛斯管共同组成。
HE染⾊HE染⾊实验步骤及常见问题解析⼀、HE染⾊HE染⾊全名为苏⽊精(hematoxylin)和伊红(eosin)染⾊⽅法,是最基本的也是最重要的病理学染⾊技术。
⼀张质上乘的HE切⽚是病理医⽣得以做出正确诊断的关键。
HE染⾊是⽬前国内外病理诊断上⼴泛采⽤的常规染⾊⽅法。
切⽚质量的好坏,可直接影响疾病诊断的及时与准确性。
因此,能制作出⼀张⾼质量的HE染⾊切⽚,是必须掌握的技术之⼀。
⼆、染⾊原理1.细胞核染⾊原理:苏⽊精为碱性天然染料,可使细胞核着⾊。
细胞核内染⾊质的成分主要是DNA,在DNA的双螺旋结构中,两条核苷酸链上的磷酸基向外,使DNA双螺旋的外侧带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏⽊精碱性燃料以离⼦键或氢键结合⽽被染⾊。
苏⽊精在碱性溶液中呈蓝⾊,所以细胞核被染成蓝⾊。
2.细胞浆染⾊原理:细胞浆内主要成分是蛋⽩质,为两性化合物、细胞浆的染⾊与pH值有密切关系,当pH调到蛋⽩质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染⾊。
当pH调到6.7-6.8时,⼤于蛋⽩质的等电点pH值,表现酸性电离,⽽带负电荷的阴离⼦,可被带正电荷的染料染⾊,现时胞核也被染⾊,核和胞浆难以区分。
因此必须把pH调⾄胞浆等电点以下,在染液中加⼊醋酸使胞浆带正电荷(阳离⼦),就可被带负电荷(阴离⼦)的染料染⾊。
伊红Y是⼀种化学合成的酸性染料,在⽔中离解成带负电荷的阴离⼦,与蛋⽩质的氨基正电荷(阳离⼦)结合⽽使细胞浆染⾊,细胞浆、红细胞、肌⾁、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红⾊或粉红⾊,与蓝⾊的细胞核形成鲜明的对⽐。
3.分化作⽤:染⾊后,⽤某些特定的溶液将组织过多结合的染⾊剂脱去,这个过程称为分化作⽤,所⽤的溶液称为分化液。
在HE染⾊中⽤0.5%盐酸⼄醇作为分化液,因酸能破坏苏⽊精的醌型结构,使组织与⾊素分离⽽褪⾊。
经苏⽊精染⾊后,必须⽤0.5%盐酸⼄醇分化,使细胞核过多结合的苏⽊精染料和细胞浆吸附的苏⽊精染料脱去,在进⾏伊红染⾊,才能保证细胞核与细胞浆染⾊的分明。
组织he染色的原理染色体染色是指通过特定染料对染色体进行染色的过程。
染色体染色的原理主要涉及到染料与染色体之间的相互作用。
染料会通过与染色体上存在的DNA、RNA、蛋白质等分子结构发生特定的相互作用来实现染色作用。
在染色体染色的过程中,通常会使用一种或多种染料,包括核染剂、碱性染料和荧光染料。
1. 核染剂染色原理:核染剂是指能够与DNA结构相互作用的染料。
核染剂主要是通过静电相互作用结合到DNA的底物上。
染色体上的DNA碱基中有高达35%以上的含氮碱基,其中较多的是腺嘌呤(A)和胸腺嘧啶(T),较少的是鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。
核染剂通常是阳离子,它们与DNA中的阴离子结合,形成染色体上显著的染色区域。
核染剂通过静电相互作用与DNA结合后,会使染色体在显微镜下呈现颜色,从而实现染色。
2. 碱性染料染色原理:碱性染料是与DNA分子的磷酸含量相互作用的染料。
DNA分子上的磷酸基团带有负电荷,而碱性染料则带有正电荷。
当碱性染料与DNA分子中的磷酸基团相互作用时,由于相互之间的电荷吸引作用,染料会结合到染色体上,从而实现染色。
3. 荧光染料染色原理:荧光染料是指能够发射荧光的染料。
荧光染料通常通过与DNA或RNA分子结合后,发生能级跃迁,从而发出光信号。
荧光染料可以通过荧光显微镜观察到,从而实现染色。
荧光染料常常用于细胞、组织或胚胎中标记特定的DNA、RNA 或蛋白质,以获取有关它们位置和功能的信息。
在染色体染色的实验操作中,需要适当的处理样本,以便染料与染色体有效结合。
通常情况下,样本需要进行固定、脱水、染色等处理步骤。
染色体染色的结果要依赖于染色剂的选择、使用条件、操作技巧等多个因素。
总结来说,染色体染色的原理是通过染料与染色体上存在的分子结构相互作用,实现对染色体的染色。
核染剂通过静电相互作用与DNA结合,碱性染料则与DNA分子中的磷酸基团相互作用,荧光染料则发生能级跃迁并发出光信号。
这些作用使得染色体能够在显微镜下呈现颜色或发出荧光,从而实现染色的效果。
he染色法在皮肤切片的应用
HE染色法,全称为苏木精-伊红染色法,是一种常用的组织学染色技术。
在皮肤切片的应用中,HE染色法主要用于观察和诊断皮肤组织的结构和病理
变化。
HE染色法的原理主要是基于两种染料的特性:苏木精染液是碱性的,能使
细胞核内的染色质和胞质内的核糖体着紫蓝色;而伊红染料是酸性的,能使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。
在皮肤切片制备过程中,首先要将皮肤组织固定、切片和脱蜡。
然后,将切片浸入苏木精染液中染色一段时间,再用水冲洗以去除多余的染料。
接下来,将切片置于伊红染液中染色,然后再用水冲洗。
这一系列步骤可以使切片呈现出不同的颜色,便于观察和诊断。
在染色完成后,将切片置于显微镜下观察,可以清晰地看到皮肤组织的各种细胞结构和形态,如角质层、表皮层、真皮层等。
同时,通过对切片的病理学分析,可以诊断出各种皮肤疾病,如皮肤癌、湿疹、银屑病等。
总之,HE染色法在皮肤切片的应用中具有重要的作用,它可以帮助病理学家和皮肤科医生更好地了解皮肤组织的结构和病理变化,为疾病的诊断和治疗提供重要的依据。
he染色的原理
染色的原理是利用染料分子与纤维分子之间的相互作用力,将染料分子牢固地固定在纤维上,使其能够具有持久的染色效果。
一种常用的染色原理是亲合染色原理。
亲合染料具有与纤维分子相似的结构和化学性质,因此它们能够与纤维分子发生相互作用并结合。
其中最常见的相互作用力有氢键、范德华力、离子键等。
这些力能够使染料分子与纤维分子之间形成强有力的结合,从而将染料固定在纤维上。
另一种常用的染色原理是离子交换染色原理。
纤维表面通常带有带电离子交换基团,如羟基、胺基等。
染料分子通常带有相反电荷的离子,这些离子能够与纤维表面的离子交换,从而使染料分子与纤维之间形成离子键结合。
离子交换染色原理通常用于染色天然纤维,如棉花、亚麻等。
此外,还存在其他染色原理,如还原染色原理、金属盐络合染色原理等。
不同的染色原理适用于不同类型的纤维和染料,选用合适的染色原理能够提高染色效果和染色牢度。
总之,染色的原理是通过染料与纤维间的相互作用力,使染料牢固地固定在纤维上,实现染色效果。
he染色原理
染色原理是一种常见的染色技术,通过将染料与待染物质发生化学反应,使其颜色发生改变。
染料可以是有机染料或无机染料,常见的有亚碱性染料、酸性染料和单胺染料等。
在染色过程中,染料溶液与待染物质接触并吸附于其表面。
染料与待染物质之间的化学反应取决于它们的特性及相互作用。
例如,某些染料具有亲和力,能够与待染物质形成氢键或离子键等化学键,使染料能够紧密地附着于待染物质表面。
而不同类型的染料与待染物质之间的相互作用方式也不尽相同。
亚碱性染料主要与纤维素物质发生键合作用,如与纤维素的羟基或胺基反应,从而实现染色。
酸性染料则常常通过与待染物质的阳离子发生作用,如与纤维素的阳离子结合。
而单胺染料主要与待染物质表面上的羧基或酚基等进行化学反应。
除了化学反应,还有其他因素可能影响染色效果。
温度、pH 值、染料浓度和反应时间等都可以影响染色的效果。
此外,不同类型的待染物质,如纤维素、蛋白质或金属等,对染料的吸附和反应也有一定差异。
综上所述,染色原理是通过染料与待染物质间的化学反应,使其颜色发生改变。
此过程受到染料特性、待染物质特性及相互作用方式的影响,同时也受到温度、pH值等条件因素的调节。
HE的染色基本原理染色是一种将颜色添加到材料中的过程,常用于纺织品、纸张、木材和生物组织等的着色。
染色的基本原理可以分为两种方法:物理染色和化学染色。
1.物理染色物理染色是将颜色粒子或染料颗粒直接添加到材料表面的染色过程。
这种染色方法通常适用于纺织品等的染色。
物理染色的基本原理是,染料分子和纺织品表面之间的物理吸附作用。
在染色过程中,染料溶液中的染料分子会沉积到纺织品表面,并与纤维物质发生吸附作用,使颜色得以附着在纤维上。
这种吸附作用可以是静电作用、范德华力等物理相互作用的结果。
在物理染色中,纺织品的质地和纤维表面的特性都会影响染色效果。
染料颗粒的大小和形状、染料浓度、染料与纤维物质之间的亲和力等因素也会影响染色效果。
通过调整这些参数,可以控制染色的颜色强度和均匀度。
2.化学染色化学染色是将染料颜料通过化学反应与材料结合的染色方法。
这种染色方法常用于纸张、木材、皮革和生物组织等材料的染色。
化学染色的基本原理是,染料颗粒中的染料分子通过化学反应与材料表面结合。
这些反应可以是酸碱中和反应、络合反应、氧化还原反应等。
通过这些反应,染料分子与材料表面形成化学键,从而使染料颜色牢固地附着在材料上。
在化学染色中,染料的选择和处理过程非常重要。
不同的染料在不同材料上的染色效果可能会有很大差异。
因此,需要根据材料的特性和所需的染色效果来选择合适的染料和染色方法。
总结起来,染色的基本原理可以通过物理染色和化学染色两种方法实现。
物理染色是通过染料颗粒的物理吸附作用将颜色添加到材料表面,而化学染色则是通过染料颗粒与材料表面的化学反应将颜色牢固地结合在一起。
这些染色方法可以根据不同的材料和染色效果来选择和调整,以获得理想的染色效果。
HE的染色基本原理染色是一种将颜色添加到织物或其他物质上的过程,使其变得有吸引力或增加它们的价值。
衣物和其他织物通过染色来改变它们的外观,使它们具有各种颜色和图案。
染色可以通过各种方法进行,其中最常见的是化学染料的使用。
染色的基本原理是将染料分子添加到纺织品的纤维中,从而改变它们的颜色。
染料分子具有可以吸收特定波长的光的能力,这就是我们所看到的颜色。
当光线照射到染过色的纤维上时,非吸收的波长会被反射,被我们的眼睛所感知。
染料分子主要有两部分组成:染料色基和染料基团。
染料色基是染料分子的主要部分,它能够吸收特定波长的光并反射其他波长的光。
染料基团是染料分子的其余部分,它们通过与纤维表面进行化学反应来将染料固定在纤维上。
染料的选择非常重要,它必须具有以下特性:1.溶解性:染料必须能够溶解在适当的溶剂中,以便能够均匀地添加到纤维中。
2.对纤维的亲和性:染料必须与纤维表面相互作用,以确保染料固定在纤维上,并具有良好的耐久性和抗褪色性。
3.光稳定性:染料必须具有良好的耐光性,以避免在暴露于阳光下时褪色。
4.色彩鲜艳:染料必须具有鲜艳的颜色,而且在染色过程中不会发生色彩变化。
染色的过程通常涉及以下步骤:1.清洗和预处理:纺织品通常在染色前需要进行清洗和预处理,以去除杂质和预处理剂,并提高染色效果。
2.染料配制:染料通常在水中或其他溶剂中配制,并添加适当的助剂和扩散剂,以确保染料在纤维中的分散性和渗透性。
3.染色过程:纺织品通常通过浸泡、滚煮、喷洒或者印花等方式来进行染色。
染料分子通过与纤维表面进行化学反应或物理吸附而固定在纤维上。
4.后处理:染过色的纺织品通常需要进行后处理以确保染料的稳定性,并去除剩余的染料和其他杂质。
染色技术在不断发展,带来了许多创新和改进,以提高染色效果和减少对环境的影响。
例如,染料的纳米粒子被用于增加颜色的亮度和耐光性,生物染料被用于降低化学品的使用量和对环境的影响。
另外,电子束染色和激光染色等新技术也正在被开发和应用。
HE染色原理详解1. 引言HE(Hematoxylin and Eosin)染色是一种广泛应用于组织切片染色的方法。
它是组织学研究中最常用的染色方法之一,可以用于观察和识别不同类型的组织细胞、细胞器和细胞组分,对于发现和诊断疾病具有重要的意义。
本文将详细介绍HE染色的基本原理以及每个步骤的具体操作。
2. HE染色基本原理HE染色使用两种染料,即天青(Hematoxylin)和伊红(Eosin)。
天青染色核酸物质,如细胞核和核染色质;伊红则染色细胞质和细胞器。
这两种染料相互作用,形成了HE染色效果。
2.1 天青(Hematoxylin)染色原理天青是一种天然染料,通过与组织中的阴离子基团结合而发生染色反应。
天青与酸性物质结合形成的盐类在碱性条件下呈现出蓝色或紫色,使得细胞核等含有核酸的区域染色深蓝色。
天青染色可以分为以下几个步骤:1.组织固定:将待染的组织标本进行固定,一般使用10%中性缓冲福尔马林。
2.脱水:将组织标本通过逐渐浓度递增的酒精溶液进行脱水处理。
3.清洁:用去嵌剂的醛固定液对组织标本进行处理。
4.蜡包埋:将组织标本放入熔蜡中,使其浸透均匀。
5.切片:用梯度旋转切片机切取薄片。
6.抗静电:使用正电极处理切片以减少静电。
7.染色:将切片浸入天青染料中,使其染色蓝色。
8.除碱:用醋酸或其他酸性溶液将切片除去多余的天青染料。
9.脱水:逆序使用乙醇溶液将切片脱水。
10.透明:用透明度递增的有机溶剂对切片进行透明化处理。
11.封片:将切片放入玻璃片中,并用固定剂固定。
2.2 伊红(Eosin)染色原理伊红是一种酸性染料,其分子中含有阳离子染色基团。
伊红可与细胞质内的嗜多染色质、酸性粒细胞内的颗粒以及胶原纤维等物质结合,形成染色沉淀,使细胞质等区域呈红色。
伊红染色可以分为以下几个步骤:1.脱蜡:将切片放入去蜡剂中,去除组织标本中的蜡质。
2.脱水:使用递减浓度的酒精溶液对切片进行脱水处理。
3.染色:将切片浸入伊红染料中,使其染色红色。
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析病理学是医学领域中一门非常重要的学科,其在疾病诊断、治疗和研究方面发挥着重要作用。
病理技术是病理学的重要支撑,而HE染色技术作为病理技术中的一种重要方法,在病理诊断中有着不可替代的作用。
本文旨在分析病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果,以期更好地认识和理解该技术在病理学中的重要性。
一、HE染色技术的基本原理HE染色是指用苏木素(hematoxylin)和伊红(eosin)染色的一种组织染色技术。
HE 染色的原理是利用苏木素染色细胞核,使其呈蓝色或紫色;而用伊红染色细胞浆,使其呈红色。
这样就能通过显微镜观察到组织细胞核和胞质的细微结构变化。
在组织学和病理学中,HE染色技术被广泛应用于各种组织和细胞的检测和研究。
1. 显微镜下观察细胞结构HE染色是病理学中常用的一种染色方法,通过对组织和细胞进行HE染色后,可以在显微镜下看到组织细胞核和细胞浆的细微结构,包括细胞核的形态、大小、染色性质等。
这对于病理诊断和病变性质的判断非常重要。
2. 判断组织的形态和结构HE染色可以清晰地显示组织的形态和结构,包括细胞排列的方式、细胞的形态和大小等。
这对于诊断肿瘤、炎症和其他病变具有重要意义。
3. 评估组织的病变程度通过HE染色,可以评估组织的病变程度,包括组织的变性、坏死、增生和炎症等,为病理诊断提供重要的依据。
4. 指导临床治疗通过HE染色,可以判断肿瘤的类型、分级和预后,指导临床治疗方案的制定,对于提高治疗效果至关重要。
5. 与其他染色方法相结合HE染色可以与其他染色方法相结合,如免疫组化染色、特殊染色等,可以进一步提高病理诊断的准确性和可靠性。
1. 提高病理诊断准确性HE染色可以清晰地显示组织结构和形态,有利于病理学家对组织细胞的观察和分析,提高了病理诊断的准确性。
特别是在对肿瘤、炎症等病变的鉴定上,HE染色的应用效果非常显著。
2. 丰富病理诊断信息HE染色对病理学家提供了丰富的诊断信息,包括组织结构、细胞形态、病变程度等,有利于全面了解病理病变的性质和特点,为临床治疗提供可靠的依据。
病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果分析随着医学技术的不断进步,病理诊断技术也在不断完善,其中病理技术HE染色在病理诊断中的应用效果备受医学界的关注。
HE染色是指利用血红蛋白与铁盐能在细胞和组织的细胞核、胞质内着色,使细胞和组织的结构、形态更加清晰可见,从而能够更准确地进行病理诊断。
本文将从HE染色的原理特点、在病理诊断中的应用效果以及存在的问题和改进方向进行分析和总结。
一、HE染色的原理特点HE染色即用铁溪混合液染色分为爱氏染色、壹氐染色和伊利染色。
HE染色的染色效果与细胞核和细胞浆之间的相对亲疏相关。
细胞核中富含DNA(蓝色)对铁盐化合物具有亲和力;细胞浆中富含蛋白质和糖类等物质与铁盐结合后生成深紫色沉淀颜色(粉红色)。
所以HE染色染出的是细胞核蓝色,细胞质粉红色。
HE染色技术简便、染色后组织学特点可欣赏明确、染色时间短、显色快(仅需10~15min)并且不易渗透出现表面伪色等特点,能染出出色的细胞核染色、细胞浆染色、胞外染色和不同细胞内结构和细胞器形成表现等。
1.能明显显示组织学结构和细胞的外形特征。
HE染色能够染色出细胞核、胞浆和胶原纤维等结构,使组织学结构和细胞的外形特征变得更加清晰可见。
2.对癌细胞具有明显的染色特点。
在病理诊断的过程中,对于癌细胞的鉴别分析具有重要意义。
HE染色能够使癌细胞的细胞核变得更加明显,从而帮助医生进行更准确的诊断。
3.能够提供更多的信息。
HE染色可以染出不同颜色的细胞核、胞浆等结构,使医生可以更加全面地观察组织学结构,提供更多的信息来指导病理诊断。
4.具有较好的稳定性和重复性。
HE染色具有较好的稳定性和重复性,能够使染色结果保持一定的一致性,有利于医生进行病理诊断。
5.对于一些疾病的诊断有重要意义。
HE染色在一些疾病的诊断中具有重要的应用价值,例如肿瘤、炎症和纤维化等。
三、存在的问题和改进方向1.染色效果不稳定。
HE染色在染色过程中容易受到环境、操作等因素的影响,染色效果不稳定。
HE染色观察细胞形态变化1.2.3.1 HE染色的原理(1)苏木精染细胞核的基本原理:苏木精被氧化后成为苏木红,加入媒染剂后成为带正电荷的紫蓝色的强盐基性色素,作用如碱性染料,是一种染细胞核的优良染料。
细胞核内的染色质主要是脱氧核糖核酸(DNA),DNA的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精染料以离子键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以含碱性物质的细胞核被染成蓝色。
(2)伊红染细胞质的染色原理:伊红为酸性染料。
细胞内的主要成分是蛋白质,是两性化合物,细胞质的染色与pH值有密切关系,蛋白质等电点的pH值为4.7~5.0,此时细胞质对外部显电中性,既不被碱性染料着色,也不被酸性染料着色。
只有当染液中的pH值低于胞质等电点时,使胞质在酸性液体中带正电荷,就可被带负电荷(阴离子)的染料着色。
伊红在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷结合而使细胞质染色。
细胞质、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等均可被染成颜色深浅不同程度的红色或粉红色,与细胞核的蓝色形成鲜明对比。
1.2.3.2 常用染色试剂的配制(1)1%的盐酸酒精:用移液管吸取浓盐酸1ml于99mL的70%乙醇中,并用玻璃棒搅拌均匀。
(2)酒溶性伊红:称取伊红5g溶于1000ml 70%~90%的乙醇中,并滴加冰醋酸10滴,搅拌完全溶解。
(3)爱氏苏木精染液:将2g苏木精溶于少量95%酒精中,加10ml冰醋酸后搅拌,加速其溶解;然后加入100 ml甘油将95%酒精补足(95%的酒精共用100 ml);将5g钾矾研碎,溶于100ml温水中,将其溶液一滴滴地加入染色剂中,并不断搅动;加入0.2g碘酸钠,待样液变为紫红色时便可使用。
1.2.3.3 操作步骤细胞涂片的制作:用PBS洗涤培养制备好的MCF-7细胞,在1000r/min的转速下离心3次,每次5min,并调整细胞数为5.0×106 个细胞/mL,取10~20μL细胞悬液滴于载玻片上,再滴加同体积的3.7%的甲醛溶液固定细胞,室温下空气干燥30min,供染色备用。
苏木精-伊红染色方法
苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法,简称HE染色方法,是细胞与组织学最广泛的染色方法。
一、HE染色的基本原理
理。
理离子,可被带正电荷的染料染我以,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。
因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细.
胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
用苯的作(三)、二甲烤片后切片进入二甲苯是脱蜡的作用。
组织处理和染色后进。
用。
用在脱蜡经酒精处理之后,水洗切片,是为了苏木精染液能更好的
进入细胞核中去,使细胞核染色均匀。
液染的合结片切与未去洗为是用作洗水的后之色染.
分化以后的水洗则是为了除去分化液和脱下的染料,中止分化作用。
在伊红染色之后也可以水洗,是为了减少伊红染液进入脱水的酒精中。
用作化和蓝六()分化
用。
用。
苏木精-伊红染色方法
苏木精(hematoxylin)和伊红(eosin)染色方法,简称HE染色方法,是细胞与组织学最广泛的染色方法。
一、HE染色的基本原理
(一)细胞核染色的原理
细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的双螺旋结构中,两边链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键结合而被染色。
苏木精在碱性溶液中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
(二)细胞浆染色的原理
细胞浆内主要成分是蛋白质,为两性化合物、细胞浆的染色与pH 值有密切关系,当pH调到蛋白质等电点4.7-5.0时,胞浆对外不显电性,此时酸或碱性染料不易染色。
当pH调到6.7-6.8时,大于蛋白质的等电点pH值,表现酸性电离,而带负电荷的阴离子,可被带正电荷的染料染我以,现时胞核也被染色,核和胞浆难以区分。
因此必须把pH调至胞浆等电点以下,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。
伊红Y是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织,嗜伊红颗料等被感染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。
(三)、二甲苯的作用
烤片后切片进入二甲苯是脱蜡的作用。
组织处理和染色后进入二甲苯是透明作用。
组织处理的透明是为了石蜡能进入到细胞中去,染色后透明是为了使细胞的折光率与玻璃相同,以便显微镜观察。
(四)、酒精的作用
酒精用于苏木精染色前由高浓度至低浓度是为了洗脱用于脱蜡的二甲苯。
伊红染色以后的酒精由低浓度至高浓度酒精逐渐过度是为了彻底脱去组织中的水份。
(五)、水洗的作用
在脱蜡经酒精处理之后,水洗切片,是为了苏木精染液能更好的进入细胞核中去,使细胞核染色均匀。
染色之后的水洗作用是为洗去未与切片结合的染液。
分化以后的水洗则是为了除去分化液和脱下的染料,中止分化作用。
在伊红染色之后也可以水洗,是为了减少伊红染液进入脱水的酒精中。
(六)分化和蓝化作用
1、分化作用
苏木精染色之后,先用水洗去未结合在切片中的染液。
然后用分化液1%盐酸酒精脱去细胞核中结合过多的染料和细胞浆中吸附
的染料,这个过程称为染色的分化作用。
2、蓝化作用
分化之后苏木精在酸性条件下处于红色离子状态,在碱性条件下则处于蓝色离子状态,而呈蓝色。
所以分化之后用水洗除去酸而中止分化再用温水或弱碱性水使染上苏木精的细胞核变蓝色,称蓝化作用,以自来水浸洗或温水变蓝为佳。