Allprep DNA-RNA-protein分提试剂盒操作方法及步骤说明书6页word文档

RNA/DNA/Protein Purification Products from MACHEREY-NAGELRNA/DNA/Protein Mini spin kitMaximum output – in one procedure NucleoSpin® TriPrepSimultaneous extraction ofTotal RNAGenomic DNATotal proteinfrom one unsplit sample MNMACHEREY-NAGEL O n e P r e p–T hr e e r e s u l t s!NucleoSpin ® TriPrepParallel isolation of RNA, DNA, and protein for most significant gene expression profilingOne Prep – Three resultsTotal RNA of superior quality – for reliable RT-PCR and all common downstream applications Genomic DNA of high purity – ready-to-use for e.g. PCR, sequencing, restriction enzyme digestion T otal protein in high recovery – directly suitable for quantification, SDS-PAGE, and Western blot analysis Rely on your experiments RNA/DNA/protein extracted from one unsplit sample – direct correlation – no variations Save your timeParallel isolation of RNA, DNA, and protein within one hourSave precious sample materialMaximum output – isolate three analytes from one sample High sensitivity – ideal for small and limited samplesProcedurehomogenizationof samplecell lysisfiltration of lysate NucleoSpin bind DNA/RNAProtein in flow-throughProtein purificationprecipitate protein (Protein Precipitator)wash protein pellet redissolve pellet in Protein Solving Buffertotal ProteinRNA purification digest residual DNA (rDNase incubation at RT)wash RNA elute RNADNA purificationwash DNA elute DNAtotal DNA DNA bound to silica membrane RNA bound to silica membrane total RNASample Material Sample Amount Lane Human cells (HeLa) 106 cells 1Mouse liver 3 mg 2Fish (Zebrafish) 1 larvae 3Plant root 100 mg 4Plant leave 100 mg 5Yeast 108 cells 6Bacteria 109 cells 7Product at-a-glanceTechnologySilica-membrane technology Sample material ≤ 5 x 106 cells≤ 30 mg human/animal tissue≤ 100 mg plant tissue Typical yield DNA ≤ 6 μg RNA ≤ 70 μgProtein ≤ 1,200 μg Typical Ratio A 260/A 280 DNA 1.7 – 1.9RNA 1.9 – 2.1 Preparation time RNA/DNA/protein ~ 60 – 75 min RNA/DNA ~ 45 minProtein ~ 35 minApplication dataRNA/DNA/protein extraction from a large variety of starting materialsRNA, DNA, and pr otein were isolated in parallel from the same source. The range of starting materialscovers tissues, cells, plant materials, yeast, and bacteria.Total DNA of high molecular weight and purity DNA was eluted in 100 μl DNA Elute buffer. A 260/A 280 ratios are in the range of 1.81 – 1.94.DNA analyzed on 1% TAE agarose gel electrophoresis*III; Fermentas), Lanes 1-7: see table belowTotal RNA of high structural integrityRNA was eluted in 50 μl RNase-free H 2O.The RNA integrity number (RIN) was measured for all mammalian samples.RIN was 9.5 for HeLa cell RNA and 8.9 for mouse liver RNA.RNA analyzed on Agilent 2100 Bioanalyzer/RNA 6000 Nano Kit*Lane L: RNA Ladder (RNA 6000 Nano Marker; Agilent), Lanes 1-7: see table belowL 1 2 3 4 5 6 7Protein Solving Buffer .The proteins are ready to use in SDS-PAGE analysis, as well as for Lane L: Protein ladder (low molecular weight marker; GE), Lanes 1-7: see table below* Figures are compiled from different gels and runs, aligned to the corresponding length markersHigh quality RNA, DNA, and proteinfrom the same sourcePerfectly suitable for gene expression profilingL 1 2 3 4 5 6 7NucleoSpin ® TriPrepOrdering informationPrepsTriPrep*10/50/250 Mini spin kit for the simultaneous isolation of total RNA, genomic DNA, and total protein from a wide variety of unsplit samples.Protein Quantification Assay50/250 RNA/Protein10/50/250 Mini spin kit for the simultaneous isolation of total RNA and Protein from unsplit samples. Including rDNAse and shredders.Mini spin columns – XS designRNA XS10/50/250 Mini spin kit for the isolation of highly concentrated total RNA from extremely small amount of starting material. Elution down to 5 μl.RNA/DNA Buffer set*100 Buffer set for the simultaneous isolation of RNA and DNA from unsplit samples. To be used in combination with NucleoSpin ® RNA II, RNA Plant, NucleoSpin ® RNA/Protein kits./bioanalysis for detailed information Your local distributor:Accurate and reliableProtein concentration down to 0.001 μg/μl Correlation coefficient of 0.97 – 1.00Protein quantification made easy!。

rna提取试剂盒的提取流程及注意事项下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

文档下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用，谢谢！本店铺为大家提供各种类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，想了解不同资料格式和写法，敬请关注！Download tips: This document is carefully compiled by this editor. I hope that after you download it, it can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you! In addition, this shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!RNA提取试剂盒的提取流程及注意事项RNA提取是分子生物学实验中常见的一项操作，而RNA提取试剂盒则是简化这一过程的重要工具。

蛋白质提取常用试剂及操作方法一、原料选择和前处理（一）原料的选择早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。

但至目前经常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料，因而对提取要求更复杂一些。

原料的选择主要依据实验目的定。

从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成本低的原料。

尽量要新鲜原料。

但有时这几方面不同时具备。

含量丰富但来源困难，或含量来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。

一般要注意种属的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。

要事前调查制备的难易情况。

若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。

如利用胰蛋白酶水解蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。

但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属必须一定。

研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。

可能时尽量用全年均可采到的原料。

对动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。

（二）前处理1.细胞的破碎材料选定通常要进行处理。

要剔除结缔组织及脂肪组织。

如不能立即进行实验，则应冷冻保存。

除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。

不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难易不一，使用方法也不完全相同。

如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。

⑴机械方法主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。

常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间隔只有十分之几毫米，对细胞破碎程度较高速捣碎机高，机械切力对分子破坏较小。

总RNA提取试剂盒操作流程试剂配制：DNA酶1：将550ul无核酶水加入DNA酶1瓶中，分装32瓶，每瓶,可用3次。

注意，轻轻混匀，不要震荡。

置于-20度保存，避免反复冻融，不宜超过3次以上。

RNA裂解液：将1-硫代甘油按2%（V/V）加入RNA 裂解液中，可在4度保存6个月。

RNA洗液：将70ml无水乙醇加入到40mlRNA洗液中。

步骤：1、贴壁细胞裂解物的制备。

胰酶消化离心后得细胞悬浮液，取*103-5*106 细胞，离心后收集细胞沉淀。

（不同样品最适起始用量和裂解液、稀释液的使用量。

悬浮或贴壁细胞*103-5*106使用量，裂解液300ul,稀释液300ul。

）2、加入300ul的RNA裂解液，吹打混匀，移至管中二RNA提取1、加入300ul的RNA稀释液，用移液枪混匀，室温放置3-5分钟，（如果样品比较珍贵，可以选择裂解物加入稀释液后70℃下加热3分钟，可以提高RNA的得率）2、以最大速度离心5分钟，吸取上清液置于另一管中3、加入倍上层清液体积的无水乙醇，移液器吹打3-4次，混匀，4、取出离心柱/细心管（离心柱已安放在收集管上），将混合物移至离心柱中，如果混合物体积过大，可分2次上样过柱。

*g离心1分钟，弃掉滤液5、加入600ulRNA洗液，*g离心45秒，弃掉滤液6、配置DNA酶1孵育液，DNA酶1缓冲液5ul+dna酶1 液5ul+无核酶水40ul.注意轻轻混匀，不要震荡。

（这是提取一管RNA需要的量）7、加入50ulDNA酶1孵育液到吸附膜中央，室温放置15分钟8、加入600ulRNA 洗液，*g离心45秒，弃掉滤液。

将离心柱重新安置于收集管上，*g离心2分钟9、将离心柱转移到洗脱管上，在离心柱膜中央加入50-200ul无核酶水，室温下静置2分钟，*g离心1分钟。

将RNA保存在-70℃。

10、温馨提示，如果将第一次洗脱下来的洗脱液重新加回到离心柱中央，室温下静置2分钟，*g离心1分钟，再次洗脱RNA，可以提高RNA的得率。

碧云天rna提取试剂盒说明书
本试剂盒根据全血特点采用几个快速步骤提取基因组dna。

首先红细胞裂解液裂解去除不含dna的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组dna，
然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组dna通过异丙醇沉淀并重溶解于dna溶解液。

产品特点：
从十几个配方中优选出的红细胞裂解液配方，裂解快速完全。

不需要使用有毒的苯酚等试剂。

快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

结果稳定，产量高（典型的产量300µl全血可提取出4-15µg），od260/od280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50kb-150kb，可直接用于构建文库、pcr、southern-blot和各种酶切反应。

DNA提取仔细看试剂盒说明书！使用前：1.在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇（加入量看瓶标签）2.若缓冲液GA或GB有沉淀，37℃水浴溶解，摇匀后使用简要步骤如下：1.冻存全血37℃快速融化，取200μL血液加20μL Proteinase K溶液，混匀。

2.加200μL缓冲液GB，颠倒混匀数次，70℃放置10min，溶液应变清亮，瞬时离心。

3.加200μL无水乙醇，振荡混匀15s，可能会有絮状沉淀，瞬时离心。

4.将所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱CB3（吸附柱放入收集管），12000rpm（~13400g）离心30s，弃废液。

5.向CB3中加入500μL缓冲液GD（检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400g）离心30s，弃废液。

6.向CB3中加入600μL漂洗液PW（检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400g）离心30s，弃废液。

7.重复步骤6.8.将CB3放回收集管，12000rpm（~13400g）离心2min，弃废液。

将CB3置于室温放置数分钟，以挥发残留的乙醇。

9.将CB3转入一1.5mL Ep管，向吸附膜中间部位悬空滴加50μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12000rpm（~13400g）离心2min，备用。

DNA/RNA浓度测定使用仪器：ND-1000使用方法：1.保持检测区域的清洁。

准备无RNA酶水，使用前润洗点样区1-2次。

2.打开软件，在点样区滴加1μL无RNA酶水，选择核酸种类（DNA/RNA），设置blank。

3.滴加1μL待测样本，记录浓度和纯度。

4.用纸巾擦去样品，再用无RNA酶水清洗1-2次。

5.关闭软件，关闭电脑，将机器盖上防尘布。

DNA PCR扩增反应体系：模板DNA 500ng10*buffer 2.5 μL25mM MgCl2 1.5 μL2.5mM dNTP 2μL10μM引物各0.4μLTaq酶0.25μL补水至25ul反应条件：95℃3min，（94℃30s，60℃30s，72℃30s），35个循环，72℃5minPCR产物2%琼脂糖凝胶电泳1.小胶（1/4）25mL ,中胶（1/2）50 mL ,大胶 100 mL。

RNA提取的操作步骤准备试剂：氯仿，异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC 处理过的水配制)操作步骤:1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。

样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm 直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。

TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。

TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。

加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。

一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。

离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。

处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。

取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。

样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。

RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。

用异丙醇沉淀水相中的RNA。

每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。

Trizol法RNA提取实验操作步骤、注意事项及问题指南（破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA）1 试剂：三氯甲烷（氯仿），异丙醇，75℅乙醇，无RNase的水、Trizol reagent2 材料与仪器：EP管匀浆器移液枪漩涡振荡器低温高速冷冻离心机冰袋电泳仪琼脂糖凝胶超净工作台3 操作步骤：3.1 准备工作A 玻璃匀浆器、75℅乙醇预冷，离心机预冷至4℃打开超净工作台紫外灯15分钟以上B 用酒精擦拭台面EP管标记3.2. 匀浆处理1 取一定量的纯化过的孢子悬浮液，12000rpm ，离心5min，弃上清a 或者用匀浆仪进行匀浆处理，悬浮液不经离心，直接加0.5ml Trizol reagent于冰上充分匀浆悬浮液样品体积一般不要超过Trizol体积的10%.，然后再加入0.5ml Trizol 冲洗匀浆器，转移至1.5ml EP管中b 直接在悬浮液中加入Trizol裂解细胞，加1ml Trizol.用取样器吹打几次.（离心取细胞，每5-10×106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml Trizol。

加Trizol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。

一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理）2 1ml Trizol Reagent，震荡混匀3. 将匀浆样品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白复合物完全分离。

4. 可选步骤:4 ℃12 000rpm离心10min，取上清。

如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。

离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。

处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。

取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。

5. 每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，盖好管盖，在漩涡振荡器上震荡15s，室温放置3min。

如不能涡旋混匀，可手动颠倒混匀2min代替。

6. 4 ℃12 000rpm，离心10-15min，样品会分成三层：红色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600ul，约为所用Trizol试剂的60%）转移到新管中。

总蛋白提取试剂盒说明书总蛋白提取试剂盒(Total Protein Extraction Kit)P1250：蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提, 100 extractions)描述：从组织细胞中提取总蛋白是Western Blot的关键步骤。

实体软组织如脑脊髓富含磷脂，神经血管含大量结缔组织，而脂肪则有大量油脂，常规的方法难以有效从这些组织提取蛋白。

本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整的解决方案。

用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或直接用裂解-结合缓冲液重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心、干燥后即可得到总蛋白。

蛋白沉淀溶解后用常规方法进行蛋白定量。

提取过程可在30-60分钟内完成，可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备，极为简便高效。

通常一次提取10-100mg 组织所获得的总蛋白可进行几十到上百次分析如蛋白质电泳、Western Blot、免疫共沉淀。

组成 1. 裂解-结合缓冲液100 ml 2. 抽提试剂100 ml每毫升裂解缓冲液和抽提试剂可提取10-100mg组织或1 ? 107细胞。

试剂盒的裂解缓冲液是过量的。

适用各种实体软组织(> 1 mg)，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道组织、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等，以及各种原代细胞和永生化细胞系。

保存：室温或4oC保存2年固体组织蛋白提取1.每10-100mg固体组织剪碎后加入0.5-1 ml裂解液，放入玻璃匀浆器内上下手动匀浆15次；或用高速机械匀浆器12,000 rpm 破碎组织。

注意：初始组织的量应在10-100mg范围。

肝肾组织蛋白含量高，提取时应加较少量的组织，否则形成的蛋白膜厚、致密且难溶。

少量小的未破碎组织不影响后续抽提。

2.仅取0.5ml组织匀浆液转移到1.5ml离心管，弃去剩余的组织匀浆液。

每0.5ml组织匀浆液加入2倍体积的(1ml)抽提试剂充分混匀。

室温或4oC静置10分钟，偶尔晃动。

试剂盒组成、储存、稳定性：试剂盒组成保存50次(RN2201) 裂解液VLB 室温20 mlPoly Carrier -20℃200μl去蛋白液RE 室温25 ml漂洗液RW 室温10 ml第一次使用前按说明加指定量乙醇RNase-free H2O 室温10 mlRNase-free吸附柱RA和收集管室温50套室温储存12个月不影响使用效果，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液，包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。

该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求，如病毒RNA：HCV（丙肝病毒）,HIV（艾滋病毒）,和HTLV（人类嗜T淋巴细胞病毒）；病毒DNA：HBV（乙肝病毒）和CMV（巨细胞病毒）等等。

病毒裂解后，DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Poly Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。

纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR/RT-PCR分析。

产品特点：1.不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度，提取的病毒DNA/RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

注意事项：1.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。

3.裂解液VLB和去蛋白液RE中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。