实验讲义：食品中山梨酸 苯甲酸的测定

分析步骤

1 样品处理 1.1 汽水：称取5.00～10.0g样品，放入小烧杯中，微温搅拌除去二 氧化碳，用氨水1＋1调pH约7。加水定容至10～20mL，经滤膜 0.45μm过滤。 1.2 果汁类：称取5.00～10.0g样品，用氨水1＋1调pH约7，加水定 容至适当体积，离心沉淀，上清液经滤膜0.45μm过滤。 1.3 配制酒类：称取10.0g样品，放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇， 用氨水1＋1调pH约7，加水定容至适当体积，经滤膜0.45μm过滤。 2 高效液相色谱参考条件 2.1 色谱柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不锈钢柱。 2.2 流动相：甲醇：乙酸铵溶液0.02m0l/L5：95。 2.3 流速：1mL/min。 2.4 进样量：10μL。 2.5 检测器：紫外检测器，波长230μm，灵敏度0.2AUFS。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
计算

式中式中：X2——样品中苯甲酸或山梨酸的含量， g/kg； m3——进样体积中苯甲酸或山梨酸的质量，mg； V4——进样体积，mL； V3——样品稀释液总体积，mL； m4——样品质量，g。

注意事项




1.使用过程中应注意机器是否有异常情况的发生（声 音），压力是否过高（超过200Bar不可再做实验）， 流动相是否流空、废液瓶是否已满等等。 2.所需玻璃仪器和容器，每次临用前需要用纯水清洗干 净后，再用无水乙醇冲洗三次，阴（烤）干、冷却后 方可使用。 先抽滤、后超声（10-15分钟） 3.进样针每次改进不同样品或对照品时，需用色谱甲醇 涮洗五次以上，涮洗位置要超过进样量位置。 4.实验完毕后用甲醇冲洗一小时，如果流动相中含有酸 或缓冲盐，则先用新鲜纯水冲洗0.5小时，再用甲醇冲 洗一小时。

项目五用高效液相色谱法检测物质任务一食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的测定（液相色谱法）单元一液相色谱分离原理和液相色谱仪的基本组成教学内容苯甲酸和山梨酸是我国目前最常用的食品防腐剂，广泛应用于各种果汁饮料中，以防止其变质。

但如果防腐剂的含量超过标准限度，或者长期饮用含有防腐剂的饮料，则会对人体健康造成不得影响，因此检测果汁中的苯甲酸和山梨酸含量是非常有必要的。

表GB2760-2007国家食品添加剂使用卫生标准抑制物质腐败的药剂。

即对以腐败物质为代谢底物的微生物的生长具有持续的抑制作用。

重要的是它能在不同情况下抑制最易发生的腐败作用，特别是在一般灭菌作用不充分时仍具有持续性的效果。

对纤维和木材的防腐用矿油、煤焦油、丹宁，对生物标本用甲醛、升汞、甲苯、对羟基苯甲酸丁酯、硝基糠腙衍生物或香脂类树脂。

在食品中使用防腐剂受到限制，因此多靠干燥、腌制等一些物理的方法。

特殊的防腐剂有乙酸等有机酸、以油酸脂为成分的植物油、芥子等特殊的精油成分。

对于生物体的局部（如人体表面或消化道），可以根据具体条件采用各种防腐剂（如碘仿、水杨酸苯酯、苯胺染料或吖啶类色素等）。

我国规定使用的防腐剂有苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸、山梨酸钾、丙酸钙等25种。

防腐剂应具备的几个条件：1、性质较稳定：加入到食品中后在一定的时期内有效，在食品中有很好的稳定性2、低浓度下具有较强的抑菌作用3、本身不应具有刺激气味和异味4、不应阻碍消化酶的作用，不应影响肠道内有益菌的作用5、价格合理，使用较方便。

防腐剂的作用机理：1、能使微生物的蛋白质凝固或变性，从而干扰其生长和繁殖。

2、防腐剂对微生物细胞壁、细胞膜产生作用。

由于能破坏或损伤细胞壁，或能干扰细胞壁合成的机理，致使胞内物质外泄，或影响与膜有关的呼吸链电子传递系统，从而具有抗微生物的作用。

3、作用于遗传物质或遗传微粒结构，进而影响到遗传物质的复制、转录、蛋白质的翻译等。

4、作用于微生物体内的酶系，抑制酶的活性，干扰其正常代谢。

食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法本标准规定了酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸苯甲酸含量的测定方法。

本标准适用于酱油、水果汁、果酱等食品中山梨酸苯甲酸含量的测定。

最低检出浓度：气相色谱法最低检出量为1 g，用于色谱分析的样品为1g时，最低检出浓度为1mg/kg。

第一篇气相色谱法2 原理样品酸化后，用乙醚提取山梨酸、苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。

3 试剂3.1 乙醚：不含过氧化物。

3.2 石油醚：沸程30～60℃。

3.3 盐酸。

3.4 无水硫酸钠。

3.5 盐酸1+1：取100mL盐酸，加水稀释至200mL。

3.6 氯化钠酸性溶液40g/L：于氯化钠溶液40g/L中加少量盐酸1+1酸化。

3.7山梨酸、苯甲酸标准溶液：准确称取山梨酸、苯甲酸各0.2000g，置于100mL容量瓶中，用石油醚 **3+1混合溶剂溶解后并稀释至刻度。

此溶液每毫升相当于2.0mg山梨酸或苯甲酸。

3.8山梨酸、苯甲酸标准使用液：吸取适量的山梨酸、苯甲酸标准溶液，以石油醚-**3+1混合溶剂稀释至每毫升相当于50，100，150，200，250mg山梨酸或苯甲酸。

4 气相色谱仪：具有氢火焰离子化检测器。

5 分析步骤5.1 样品提取称取2.50g事先混合均匀的样品，置于25mL带塞量筒中，加0.5mL盐酸1+1酸化，用15，10mL**提取两次，每次振摇1min，将上层乙醚提取液吸入另一个25mL带塞量筒中。

合并**提取液。

用3mL氯化钠酸性溶液40g/L洗涤两次，静止15min，用滴管将**层通过无水硫酸钠滤入25mL容量瓶中。

加乙醚至刻度，混匀。

准确吸取5mL**提取液于5mL带塞刻度试管中，置40℃水浴上挥干，加入2mL石油醚-**3+1混合溶剂溶解残渣，备用。

5.2 色谱参考条件5.2.1：玻璃柱，内径3mm，长2m，内装涂以5%m/mDEGS+1%m/mH3PO4固定液的60～80目Chromosorb WAW。

实验十七、酱油中山梨酸、苯甲酸的测定1、目的与要求掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。

2、原理样品中的苯甲酸在酸性条件下蒸馏，馏出液剧烈氧化除去杂质，再次蒸馏后，所得苯甲酸在220nm处有最大吸收，它的吸光度与浓度的关系符合比尔定律，因此可以据此定量测定。

同时山梨酸在酸性条件下也能随水蒸汽一起蒸馏出来，可在酸性溶液中，用蒸汽蒸馏的方法将样品中的山梨酸蒸馏出来，并除去非挥发性的干扰物质。

山梨酸在弱氧化条件下氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸反应，生成红色的化合物。

其颜色的深浅与山梨酸含量成正比，可以比色测定之。

3、仪器与试剂3.1 仪器3.1.1 蒸馏设备。

3.1.2 紫外可见分光光度计。

3.2 试剂3.2.1 无水硫酸钠。

3.2.2 85%正磷酸。

3.2.3 0.034mol/L重铬酸钾溶液：溶解4.9g重铬酸钾于水中，稀释到500mL。

3.2.4 2mol/L硫酸溶液：稀释66.5mL浓硫酸至500mL。

3.2.5 氢氧化钠溶液：1mol/L、0.1mol/L、0.01mol/L。

3.2.6 0.5%重铬酸钾溶液。

3.2.7 0.5%硫代巴比妥酸溶液：称取硫代巴比妥酸0.5g，加入20mL水，再加1mol/L 氢氧化钠溶液10mL，用玻璃棒搅拌使之溶解，然后加入1mol/L盐酸11mL，用水稀释至100mL，摇匀。

3.2.8 0.15mol/L硫酸：取浓硫酸1mL加入到100mL水中，并用用水稀释至120mL。

3.2.9 山梨酸标准溶液：精密称取在105℃干燥至恒量的山梨酸0.0500g用0.1mol/L 氢氧化钠溶液溶解后，移入500mL容量瓶中，加0.1mol/L 氢氧化钠溶液至刻度，摇匀，每毫升含山梨酸100μg。

临用时取1mL置于50mL容量瓶中，加入0.01mol/L氢氧化钠溶液到刻度，摇匀，每毫升含山梨酸2μg。

3.2.10 苯甲酸标准溶液：准确称量经过干燥的苯钾酸0.1000g，溶于0.1mol/L氢氧化钠溶液中，以水定容至1000mL，每毫升溶液相当于苯甲酸0.1mg。