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小鼠骨髓来源内皮祖细胞体外诱导培养及分化特征武钧;李建芳;瞿颖;陈雪华;汤耀卿【摘要】AIM: To investigate the culture method and differentiation characteristics of endothelial progenitor cells ( EPCs ) derived from mouse bone marrow.METHODS: Bone marrow mononuclear cells were isolated from BALB/c mice by density gradient centrifugation and cultured in fibronectin - coated dishes with EGM - 2 medium.The phenotypic characteristics were determined by immunofluorescence and fluorescence - activated cell sorter.The proliferation and migration capacities were detected by MTT and Transwell assays, respectively.RESULTS: While the cells were cultured in vitro, the expression of CD133, SCA - 1 and CD117 between day 4 and day 14 decreased from 11.05％ , 29.32％ and 16.45％ to 2.29％ , 7.82％ and 3.92％ , respectively.Nevertheless, VEGFR - 2, CD31, VE - cadherin, eNOS and vWF increased from 12.21％ , 8.43％ , 18.27％ , 7.11％and 32.61％ to 62.13％ , 32.96％ , 67.73％ , 27.89％ and 82.16％ , respectively.The capacities of uptaking acLDL and binding UEA - Ⅰ increased from 57.18％ to 86.70％.Under the concentration gradient of VEGF from 0 μg/L to 80 μg/L, the capacities of proliferation and migration increased by 58.03％ and 33.83％ respectively.CONCLUSION: EPCs derived from mouse bone marrow can be cultured in EGM -2 medium supplemented with proper growth factors.With the differentiation, EPCs loss their stem cell markers and express endothelial specific markers gradually.VEGF plays an important role in promoting proliferation andmigration of EPCs in a dose - dependent manner.%目的:研究小鼠骨髓来源内皮祖细胞(EPCs)的体外培养方法及体外分化特征.方法:采用梯度离心法分离小鼠骨髓单个核细胞并进行诱导培养,用流式细胞术和免疫细胞化学对细胞表型特征进行检测,分别采用MTT和Transwell方法对其增殖、迁移能力进行检测.结果:体外培养4 d至14 d,CD133、SCA-1及CD117的表达率分别从11.05%、29.32%及16.45%降至2.29%、7.82%及3.92%;而VEGFR-2、CD31、VE-cadherin、eNOS及vWF的表达率分别从12.21%、8.43%、18.27%、7.11%及32.61%增加至62.13%、32.96%、67.73%、27.89%及82.16%;吞噬acLDL和结合UEA-I 的细胞从57.18%增加至86.70%.在0 μg/L至80 μg/L VEGF浓度梯度下,细胞增殖率和迁移率分别增加58.03%和33.83%.结论:EGM-2内皮培养基可稳定培养小鼠骨髓来源EPCs,培养过程中其干细胞标志物表达逐渐降低,而内皮细胞标志物表达及特性不断增加,VEGF可显著促进其增殖和迁移.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2011(027)006【总页数】6页(P1121-1126)【关键词】内皮祖细胞;体外培养;分化特征【作者】武钧;李建芳;瞿颖;陈雪华;汤耀卿【作者单位】上海交通大学医学院附属瑞金医院SICU,上海,200025;上海市消化外科研究所,上海,200025;上海市消化外科研究所,上海,200025;上海市消化外科研究所,上海,200025;上海交通大学医学院附属瑞金医院SICU,上海,200025【正文语种】中文【中图分类】R363自Asahara等［1］发现内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)以来，EPCs成为新生血管生成研究领域的焦点，其在血管内皮损伤修复方面有广阔的应用前景。
大鼠脊髓神经干细胞的分离培养与鉴定
王小飞;富赛里;王惠民;陈建;陆佩华
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2006(046)001
【摘要】探讨胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)的分离培养和鉴定方法.采用无血清培养液,从胚胎大鼠脊髓分离和培养NSCs,应用3H-TdR掺入技术和免疫荧光技术进行细胞自我更新能力、巢蛋白表达和多向分化潜能的鉴定.结果表明,从E16胚胎大鼠脊髓分离培养的细胞具有NSCs特征,可在体外增殖存活,经1%胎牛血清诱导可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.认为从胚胎大鼠脊髓成功分离培养的NSCs可在体外稳定地培养和传代,是研究细胞移植和基因治疗的理想细胞来源.【总页数】3页(P23-25)
【作者】王小飞;富赛里;王惠民;陈建;陆佩华
【作者单位】南通大学附属医院,江苏,南通,226001;上海第二医科大学;上海第二医科大学;南通大学附属医院,江苏,南通,226001;南通大学附属医院,江苏,南通,226001;上海第二医科大学
【正文语种】中文
【中图分类】R331
【相关文献】
1.胎鼠脊髓神经干细胞的分离培养、鉴定与诱导分化 [J], 雷德强;赵洪洋;邓兴力;刘如恩;张方成
2.新生大鼠脊髓源性神经干细胞的分离培养及分化鉴定 [J], 张殿君;刘一;付长峰;宿晓云;王芳;李相军
3.无血清悬浮分离培养法分离、培养、鉴定脊髓源性神经干细胞 [J], 李军;徐大波;付强;刘彦斌;
4.无血清悬浮分离培养法分离、培养、鉴定脊髓源性神经干细胞 [J], 李军;徐大波;付强;刘彦斌
5.新生大鼠脊髓神经干细胞的分离培养及鉴定 [J], 胡建石;郑志竑;林玲;林建银因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠原代脑微血管内皮细胞体外分离与培养的实验研究李振;刘云会;薛一雪;刘丽波;王萍【期刊名称】《中国医科大学学报》【年(卷),期】2012(41)10【摘要】目的探讨获取大鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)的简单、有效方法,为构建体外血肿瘤屏障(BTB)模型提供材料.方法采集出生3～5 d的Wistar胎鼠大脑皮质,应用酶消化法及葡聚糖离心法获得脑微血管段后,接种于培养皿中进行原代培养,采用倒置显微镜对所培养的细胞进行形态学观察；以Ⅷ因子相关抗原免疫组化染色法鉴定细胞；将BMEC与C6脑胶质瘤细胞共培养,构建体外BTB模型,并采用免疫组化法和免疫荧光法检测BMEC间紧密连接相关蛋白occludin的表达.结果体外培养2h时脑微血管段贴壁,12～48 h见圆形生发中心形成,2～3d单层内皮细胞自生发中心长出,4～5 d见较大单层内皮细胞团,5～7 d可见融合成片的内皮细胞单层,外观呈“铺路石”样；第Ⅷ因子免疫组化结果显示“铺路石”样细胞胞质呈棕黄色染色；紧密连接相关蛋白occludin的免疫组化和荧光结果证明共培养的BMEC间表达BTB的特性.结论本方法能成功地进行大鼠原代BMEC培养,构建大鼠体外BTB模型,进而应用于BTB的生理、生化及药理学研究.%Objective To explore a simple and reprodueable method lor the in vitro isolation and eulture of rat brain microvascular endothelial cells (BMEC), so as to provide materials for the construction of in vilro blood tumor barrier ( BTB) models. Methods Relative!* pure cerebral microvessel fragments were obtained from the cortex of 3-5 days old wistar rats through dissection,enzyme digestion,and dex-tran centrifugation. Then, these fragments were seededon dishes for primary culture. The morphology of BMEC was observed under an invert microscope. BMEC were identified by immunohistoehemistry with factor VIII-associated antigen. In vitro BTB models were constructed by co-cultivation of BMEC with C6 glioma cells. The expression of tight junction-related protein oeeludin in BMEC of BTB was measured by immunohistoehemistry and immunofluoreseence. Results Segments of cerebral microvessels adhered to the dishes after 2 hours of in vitro cultivation , which consisted of round growth-centers after 12-48 hours of cultivation. Single cells then grew out from these growth-centers after 2-3 days of cultivation. Alter another 4-5 (lays, clusters of cell monolayer appeared around the growth-centers. Ultimately, cells arranged as pebble-stone like in compact monolayer on day 5-7. Immunohistoehemistry results showed positive staining of VII] factor antibody in the cytoplasm of cultural cells. Immunohistoehemistry and immunofluoreseence staining of oeeludin confirmed that the BMEC co-cultured with C6 glioma cells expressed the characteristics of BTB. Conclusion A relatively pure primary cultures of BMEC were established in this study. These BMEC could be used to develop in vitro BTB model systems for the physiology, biochemistry and pharmacology studies of BTB.【总页数】4页(P873-876)【作者】李振;刘云会;薛一雪;刘丽波;王萍【作者单位】中国医科大学附属盛京医院神经外科,沈阳 110004;中国医科大学附属盛京医院神经外科,沈阳 110004;中国医科大学基础学院神经生物学教研室,沈阳110001;中国医科大学基础学院神经生物学教研室,沈阳110001;中国医科大学基础学院神经生物学教研室,沈阳110001【正文语种】中文【中图分类】Q813.11【相关文献】1.大鼠骨髓间充质干细胞的体外分离与原代培养 [J], 张勇;程敬亮;李华丽;王娟;赵天春2.体外分离、培养大鼠脑微血管内皮细胞的若干问题 [J], 鲍欢;包仕尧;张志琳3.大鼠肾小管上皮细胞分离及其体外原代培养 [J], 张元元;郭艳;王光明4.体外灌注法分离大鼠肝脏Kupffer细胞及原代培养 [J], 曾仲;黄汉飞;宋飞;段键5.大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养 [J], 许熊飞;李润平;李泉;刘文武;练庆林;刘昀;孙学军;蒋春雷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人骨髓来源内皮祖细胞的分离培养及生物学特性的鉴定唐欲博;陈孝;黄保丁;冯鑫;彭龙云;彭新生;邹学农【摘要】目的建立人骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)分离、培养、诱导分化与鉴定的方法,并探讨其生物学特性.方法收集腰椎间盘退变性疾病患者的髂骨骨髓24例,密度梯度离心法分离的单个核细胞接种于纤维连接蛋白包被的培养瓶,贴壁培养,EGM-2培养基诱导扩增EPCs.Dil-ac-LDL、FITC-UEA-I荧光双标、流式细胞术鉴定EPCs,计算纯度.透射电镜和管腔形成实验鉴定EPCs向血管内皮细胞(ECs)分化的能力.结果培养72 h换液时可见贴壁细胞形成明显细胞克隆集落,第5天集落数增加,1周后细胞融合达80%,至第14天细胞呈铺路石样排列.培养至第7天细胞Dil-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色阳性率为(95.1±4.0)%,CD133、CD34、KDR、VE-Cadlaerin标记阳性率分别为(18.5±4.4)%、(45.4±7.8)%、(66.7±7.2)%、(20.5±5.3)%.培养第10天细胞透射电镜显示成熟血管ECs特有的Weibel-Palade小体.管腔形成实验表明,体外ECMatrix上培养7至12d的EPCs 具有较强的管腔形成能力.结论采用密度梯度离心与贴壁培养法分离、培养的人髂骨骨髓来源的单个核细胞在特定诱导条件下可分化为EPCs,纯度较高,稳定性和重复性好.EPCs培养7至12d,具有良好的管腔形成能力.【期刊名称】《中国骨科临床与基础研究杂志》【年(卷),期】2009(001)001【总页数】6页(P56-61)【关键词】内皮细胞;骨髓细胞;细胞;培养的;细胞分离【作者】唐欲博;陈孝;黄保丁;冯鑫;彭龙云;彭新生;邹学农【作者单位】510080,广州,中山大学附属第一医院药学部;510080,广州,中山大学附属第一医院药学部;510080,广州,中山大学附属第一医院脊柱外科;中山大学药学院;510080,广州,中山大学附属第一医院心血管内科;510080,广州,中山大学附属第一医院脊柱外科;510080,广州,中山大学附属第一医院脊柱外科【正文语种】中文【中图分类】R329.2内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）是血管内皮细胞（endothelial cells，ECs）的前体细胞，是一群介于血液-血管细胞与成熟内皮细胞之间的具有较强增殖分化能力、可向血管新生部位趋化并促进血管新生的幼稚细胞[1，2]。
大鼠骨髓基质干细胞体外分离、纯化、培养的实验研究何玉祥;孙岩;刘振川;刘洋;周华;王茂华;袁海;金星;吴学君【摘要】Objective To explore the methods of separation, depuration and cultivation in vitro for bone marrow stromal cells ( BMSCs) of rats. Methods Five-week-old Wistar rats were anesthetized through abdominal cavities using 1% sodium pentobarbital (0. 006 ml/g), and then BMSCs were extracted from the rats'femurs and tibias. The adherent culture method was used to separate, purify and culture the BMSCs. The changes in cell morphology were observed, and characteristics of cell growth, passage and amplification were studied by drawing curve of growth. The cells were identi-fied with flow cytometry. Results The BMSCs obtained with adherent culture method had rapid proliferation and good growth curve, which proved BMSCs by the detection of cell surface marker, and the cells had good homogeneity (96. 36%). Conclusion Adherent culture can well separate, purify and culture the BMSCs, and the obtained cells have better proliferative capacity, and the 3th -6th generations are more suitable for experimental research.%目的：探讨Wistar大鼠骨髓基质干细胞( BMSCs)体外分离、纯化、培养的方法。
大鼠脾源性内皮祖细胞培养及鉴定朱晋坤;毛华;董文;文美;刘庭筑;鲁玉明;熊宗华;杜锋【摘要】目的培养、鉴定大鼠脾源性内皮祖细胞.方法机械损伤大鼠脾脏,用密度梯度离心法收集单个核细胞层,富含胎牛血清EMDM培养液培养,观察细胞形态,将培养第7天内皮祖细胞与DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白37℃孵育4h,以检测内皮祖细胞对Dil-乙酰化低密度脂蛋白的摄取,再用20 g/I,多聚甲醛固定细胞10 min,固定后用PBS浸洗,将FITC标记的凝集素I加入上述标本,37℃孵育1 h,PBS 浸洗,通过激光共聚焦显微镜鉴定FITC-凝集素1和DiI-乙酰化低密度脂蛋白.结果贴壁细胞呈现类圆形、纺锤形或多边形,7～14 d可见部分贴壁细胞生长呈"铺路石"样外观.胞浆摄取DiI-乙酰化低密度脂蛋白显示红色,胞膜结合FITC-凝集素I显示绿色,双染色阳性细胞为黄色,为正在分化的内皮祖细胞.结论大鼠脾源性内皮祖细胞分离、培养简单、可行.【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2011(035)009【总页数】4页(P776-779)【关键词】内皮祖细胞;脾源性;细胞培养;细胞鉴定;大鼠【作者】朱晋坤;毛华;董文;文美;刘庭筑;鲁玉明;熊宗华;杜锋【作者单位】贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002;贵阳市第一人民医院,550002【正文语种】中文【中图分类】R.332经皮冠脉介入术后靶血管再狭窄、血栓形成及血管舒缩功能丧失是其临床应用面临的重大难题。
加速靶血管段的内皮覆盖是防治PCI术后靶血管再狭窄、血栓形成、血管痉挛及重建靶血管生物学功能的关键。
近年研究认为,内皮祖细胞具有较强的增殖能力,有向缺血部位归巢的特性,能够分化为成熟内皮细胞,可以用来治疗缺血性心血管疾病[1,2]。
大鼠骨髓源性内皮祖细胞的体外分离、培养及鉴定叶露薇,王志刚,张 萍(重庆医科大学附属第二医院超声影像学研究所,重庆,400010)提要:目的:体外分离、扩增培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞,并进行生物学特性鉴定,为后续实验研究提供材料准备。
方法:采用密度梯度离心法和差速贴壁法分离获得单个核细胞,置于特殊培养基EGM -2MV 进行扩增培养,对细胞行免疫荧光法检测CD34、CD133、VEGFR2的表达情况,摄取DiI -ac -LDL 、结合FITC -UEA -1双染色鉴定及细胞迁移实验。
结果:刚分离的单个核细胞小而圆,诱导培养4d 左右细胞开始变大,部分呈梭形或多角形,2周左右呈条索状排列;细胞免疫荧光法鉴定CD34、CD133、VEGFR2为阳性,细胞既能吞噬DiI -ac -LDL 又能与FITC -UEA -1结合;细胞迁移实验可见每个视野迁移细胞数为(16.6±1.05)个。
结论:通过密度梯度离心法和差速贴壁法能成功获取单个核细胞,在特定培养基EGM -2MV 中培养后可分化成为内皮祖细胞,为后续实验提供了细胞来源。
关键词:皮祖细胞;体外分离;密度离心法中图分类号:TN248.1 文献标识码:A 文章编号:0253-2743(2013)05-0099-02Isolation ,culture and identification of endothelial progenitor cells from SD rat bone marrowYE Lu -wei ,WANG Zhi -gang ,Z HA NG Ping(Institute of Ultras ound Imaging ,Depart ment of Ultrasound ,the Second Affiliated Hospital ,Chongqing M edical U niversit y )Abs tract :Objective :Is olation ,culture and identification of endothelial progenitor cells from SD rat bone marrow in order to s upply the subsequent experi -ment .M ethods :M ononuclear cells were collected by density gradient centri fugation and induced culture in EGM -2MV ,then us e immunofluorescence to identif y cell makers suc h as CD34、CD133、VEGFR2,then observe cell stained DiI -ac -LDL and FITC -UEA -1,and tested the ability of migration .Results :Adherent cells were express ed CD34、CD133、VEGFR2related anti gen and labeled both with DiI -ac -LDL and FITC -UEA -1,the migranted cells were (16.6±1.05).Coclusions :The mononuclear cells coll ected fro m SD rat bone marrow by densit y gradient centrifugation can be di fferentiated into endothelial progenitor cells ,and this method applied cell s ource for subsequent experiment .K ey words :endothelial progenitor cells ;cell culture ;bone marrow收稿日期:2013-08-21基金项目:重庆市教委科学技术研究项目(KJ110320)。
作者简介:叶露薇(1986-),女,硕士,研究方向:超声分子成像。
通讯作者:张萍,副教授。
内皮祖细胞(EPCs )是一种能够直接分化成为血管内皮细胞的前体细胞,在损伤、缺血及药物等因素的刺激下均可以动员骨髓中的EPCs 进入体循环并在各种趋化因子作用下逐步募集到缺血或者损伤处分化成成熟的内皮细胞,促进缺血组织器官的内皮细胞修复及恢复血供〔1-4〕。
所以,EPCs 已经越来越多的应用于各种组织器官损伤的修复和再生治疗,但是其发挥作用的前提是干细胞的归巢。
如何提高EPCs 的归巢数量,是EPCs 移植治疗各种疾病的关键所在。
而目前干细胞移植都存在移植率低的问题。
近年来,超声微泡药物载送系统因为它可保持各种治疗性物质的活性和稳定性,避免它们在血循环中被破坏和降解,同时超声造影剂对超声波敏感,在靶区给予超声辐照,可达到靶向给药的目的,增加局部的治疗效果并减少用药剂量和实时的超声造影图像能够帮助监控释药、治疗过程,验证药物的活性〔5-6〕。
成为超声造影领域研究的热点。
因此,我们设想利用超声造影剂为载体传递干细胞促进细胞归巢。
因此,本实验采用密度梯度离心法〔7-8〕。
在体外获得大鼠骨髓源性单个核细胞,进行诱导培养扩增并进行鉴定。
1 材料和方法1.1 主要试剂及仪器10只3至4周龄SD 大鼠,雌雄不限,由重庆医科大学实验动物中心提供。
E GM -2MV 培养基(美国Lonza 公司);大鼠淋巴细胞分离液(天津灏洋公司);细胞培养用青霉素-链霉素液、磷酸盐缓冲液、MTT 试剂盒、HE 试剂盒(碧云天生物技术研究所);兔抗大鼠CD34抗体(加拿大L &P Labtory );兔抗大VE GFR2抗体(美国Cell Signaling );兔抗大鼠CD133抗体(北京博奥森);FITC 标记的山羊抗兔IgG (北京康为世纪);DiI 标记的乙酰低密度脂蛋白(Yiyuan biotech );FITC -UEA -1(北京博奥森);大鼠纤维粘连蛋白(美国Sigma 公司);Tran -swell 板(美国康宁公司);激光共聚焦培养皿(Nest );激光共聚焦显微镜(德国Zeiss 公司);倒置显微镜(日本Olympus 公司);离心机5804R (德国EPPENDORF 公司);酶标仪(美国BIO -TEK 公司)。
1.2 实验方法1.2.1 大鼠骨髓源性EPCs 的体外分离培养3至4w SD 大鼠颈椎脱臼处死,75%酒精侵泡15min ,无菌条件下分离出胫骨和股骨,剪断两端,用培养基反复冲洗骨髓腔至骨干发白,将收集的液体转入10mL 离心管1000rpm 离心10min ,弃上清液加入培养基重悬后,缓慢移至装有等量淋巴细胞分离液的离心管中,常温1500rpm 离心15min 。
轻轻吸取离心管中间乳白色云雾状的单个核细胞层至新的离心管中,加入等量PBS 后吹打离心后,弃上清液加入EGM -2MV 培养基重悬细胞,反复轻轻吹打成单细胞悬液后接种在预先用大鼠纤维黏连蛋白铺被的培养瓶或共聚焦培养皿中,37℃、5%CO2的培养箱中培养,4d 后首次换液,去除为贴壁的细胞,以后每3d 换液,等细胞融合到80%左右进行传代。
1.2.2 大鼠骨髓源性EPCs 生长曲线的绘制当细胞生长融合到80%左右后,用胰蛋白酶消化后,以EGM -2MV 重悬细胞,按每孔1000个细胞,接种到96孔板里,用MTT 法测定4至10d 的吸光度值(OD 值),每组设5个复孔,计算每组平均OD 值,根据培养时间及OD 值绘制EPCs 生长曲线。
1.2.3 细胞免疫荧光鉴定将一定量的新分离的单个核细胞接种到共聚焦培养皿诱导培养,分别于第3、4及10d 左右对细胞进行CD34、CD133、VEGFR2的鉴定;按照SP 通用性试剂盒说明操作,PBS 洗涤细胞3次,加入4%多聚甲醛固定5min ,PB S 洗涤3次后加入血清封闭液,37℃,孵育1h ,分别在不同的共聚焦培养皿中依次加入CD34一抗、CD133一抗(浓度:一抗:PBS =1:100)、VEGFR2一抗(浓度:一抗:PB S =1:1600),4℃过夜后37℃,孵育1h ,PBS 洗涤后加入FITC 标记的二抗,37℃孵育2h ,PB S 洗涤后激光共聚焦显微镜观察。
1.2.3 DiI -ac -LDL 和FITC -UE A -1的双荧光鉴定培养7d 的细胞,用无血清的培养基洗涤后,加入Dil -ac -LDL (10mg /L )37℃避光孵育5h ,无血清1640培养基洗涤3次,4%多聚甲醛固定5min 后,加入FITC -UEA -1(10mg /L )37℃避光孵育1h ,PBS 洗后,激光共聚焦显微镜观察。
1.2.4 细胞迁移实验当细胞融合至80%左右时,用胰蛋白酶消化后,向细胞小室的上室中接种EPCs ,每孔密度约为5×105个/ml ,同时向下室里加入已添加VEGF 趋化因子的培养基,37℃、5%CO 2培养12h ,取出细胞小室用棉签擦去小室上层细胞后,4%多聚甲醛对小室下层细胞进行固定后行HE 染色,倒置显微镜下随机选取5个视野(×200),技术迁移细胞数,结果用均数99 叶露薇等:大鼠骨髓源性内皮祖细胞的体外分离、培养及鉴定 《激光杂志》2013年第34卷第5期 LASER J OURNAL (Vol .34.No .5.2013)±标准差(x ±s )表示。
2 结果2.1 大鼠骨髓源性E PCs 的形态学变化刚分离的单个核细胞呈大小不均的小圆形(图1-A )。
48h 后部分细胞开始贴壁,细胞逐渐变大变圆,部分可见伸出伪足样突起呈梭形(图1-B )。
随着培养时间增加,梭形细胞开始变多(图1-C ),第七天左右细胞数显著增多,梭形细胞呈首尾相连,条索样排列(图1-D )。
图1 EPCs 的形态学变化(100×)a :刚分离出来的单个核细胞b :诱导培养2d 的细胞c :诱导培养4d 的细胞d :诱导培养7d 的细胞2.2 大鼠骨髓源性E PCs 生长曲线传代后的EPCs 在前几天未明显见生长,第5-9天增殖较快,10天后进入生长平台期,生长曲线外观呈典型S 形外观(图2)。
2.3 细胞免疫荧光法鉴定培养第3、4天及第10天左右的EPCs 固定后进行免疫荧光染色后,CD34、CD133、VEGFR2均为阳性表达,即可见胞浆发出明亮的绿色荧光(图3)。
