酶联免疫吸附试验检间接法测igg抗体步骤

组织中igg的检测方法是
IGG检测方法是一种常用的免疫学方法，用于检测特定抗体IgG的存在和浓度。

以下是一种常见的IGG检测方法：
1. 血清收集：从被测对象采集血液样本，通常采用静脉血。

2. 血清分离：将采集的血液样本放置在试管中，通过离心等操作分离血清。

3. 定量测定：利用酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法，将被测血清样本与特定的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

4. 洗涤：通过多次洗涤步骤，去除未结合的成分，以降低非特异性背景信号。

5. 探针结合：添加与IgG结合的二抗或探针，使其与已结合的抗体形成二抗-抗体复合物。

6. 信号检测：通过添加底物，如酶底物，使其与上述二抗-抗体复合物反应产生可定量测量的信号。

7. 分析结果：根据所测定的信号强度，可以判断被测血清中特定抗体IgG的存在与浓度。

通过这种IGG检测方法，可以快速、准确地确定组织中特定抗体IgG的水平，帮助诊断和预防多种疾病。

人免疫球蛋白G(IgG) ELISA检测方法及步骤人(Human) 免疫球蛋白G (IgG) ELISA检测试剂盒本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆试验原理：IgG试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知IgG浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

先将IgG和生物素标记的抗体同时温育。

洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。

再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。

产生颜色。

颜色的深浅和样品中IgG的浓度呈比例关系。

试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制96/48人份酶标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80g/L1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释缓冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的抗IgG抗体1瓶(6ml)1瓶(3.0ml)即用型亲和链酶素-HRP1瓶(10ml)1瓶(5.0ml)即用型洗涤缓冲液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按说明书进行稀释底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型标本稀释液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型自备材料1．蒸馏水。

2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3．振荡器及磁力搅拌器等。

安全性1．避免直接接触终止液和底物A、B。

一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

操作注意事项1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。

稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3．不用的其它试剂应包装好或盖好。

酶联免疫吸附试验操作步骤
1. 溶解标记抗体。

以适量的磷酸缓冲液()稀释已标记的酶标记抗体,让其浓度为每盘20-30μ。

2. 溶解待检标样。

以液体或稀释液将待检的血清或其他体液样品进行适量稀释,一般为1:100-1:1000。

3. 加样。

分别将稀释后的标记抗体和稀释后的待检标样溶液加入相应位置的试验板孔中,孔内最好包含20-30μ的液体。

4. 导入保护液。

加入或体液作为阻断剂,防止非特异结合,每孔加入100μ。

5. 导入抗原。

加入不同浓度的抗原作为定量标准曲线,以及未加抗原的对照孔。

6. 导入待检血清或体液。

将稀释后的待检标样加入对应位置的试验板孔内。

7.孵育。

将试验板封口后,室温孵育30分钟-2小时。

8.清洗。

用液体洗盘,每孔加入300μ,强力清洗5-10次。

9.加显色底物。

加入显色底物,避光孵育10-30分钟。

10.终止反应。

加入终止液,如2/浓硫酸停止显色反应。

11.读取光密度值。

以未加样对照孔为零点,在450波长下读取各孔吸光值。

12.计算结果。

根据标准曲线计算样本或比对阳性比负性 - 值判断结果。

精选全文完整版酶联免疫吸附试验（ELISA）的程序第一节间接ELISA试验一用可溶性抗原的ELISA：1、纯化抗原：用包被液稀释至1—20ug/ml；2、以50—100ul/孔量加入酶标板孔中；3、置4（度）过夜或37（度）吸附3h；4、PBST洗三次；5、每孔200ulPBS/NCS 4（度）过夜封闭或37（度）封闭3h；6、PBST洗5次，每次1min（包被板可—20（度）或许（度）保存备用）7、每孔加50—100ul第一抗体，同时设阳性、阴性对照。

若杂交瘤筛选，每孔加杂交瘤培养上清；8、37（度）孵育2h9、PBST洗5次，每次5min10、每孔加50—100ul酶标第二抗体；若杂交瘤筛选，每孔加HRP 标记的抗小鼠（IgG+IgM）抗体；11、37（度）孵育2h12、PBST洗5次，每次数5分钟；13、每孔加OPD 或TMBS底物100ul14、37（度）避光作用；（OPD为10—20）分钟，TMBS为40分钟）；15以50ul2MH2SO4终止反应，在酶联免疫阅读仪上读取OD值（OPD底物选用490nm滤光片，TMBS底物选用450nm滤:光片）；16结果判定：（1）P/N≥2.1 为阳性(2) P≥N+3SD 为阳性成功范例:NDV单抗检测，粘附素单抗检测，H单抗检测亚类鉴定和鸡白痢检疫等。

二、用全菌抗原的ELISA法（一）GA法1、新鲜培养的细菌用蒸馏水悬浮，光密度法或比浊法调整细菌浓度至1X10（6）个/ml。

注意：沙门氏菌等人畜共患病原体，使用前必须灭活或采用市售的灭活诊断菌液；2、酶标板中加200ul/孔，5%戊二醛（GA）溶液（0.1M NaHCO4 95ml+25%DNY戊二醛溶液5ml）;37(度);2小时3、蒸馏水洗5次;4、加细菌悬浮液,50ul/孔;5、37(度)温箱内过液,干燥吸附(20—24h)6、加PBS/NCS 220ul/孔37（度）封闭3小时或4（度）过夜封闭；7、PBST洗5次（—20（度）或4（度））存放备用；8、以下步骤同一。

间接elisa实验流程
间接ELISA实验流程
ELISA（酶联免疫吸附实验）是一种常用的免疫学实验方法，用于检测抗体或抗原的存在。

其中，间接ELISA是一种常用的抗体检测方法，其流程如下：
1.涂层：将待检测的抗原溶液加入96孔板中，使其在孔底形成一层涂层。

通常使用1%的牛血清白蛋白（BSA）或羊血清白蛋白（GSA）作为涂层缓冲液，以防止非特异性结合。

2.阻断：将孔中的涂层缓冲液倒掉，加入5%的牛血清或羊血清，使其在孔底形成一层阻断液。

阻断液可以防止非特异性结合，提高检测的灵敏度。

3.加入一抗：将待检测的样品加入孔中，与涂层中的抗原结合。

一般情况下，使用稀释后的血清或纯化的抗体作为一抗。

孵育时间一般为1-2小时。

4.加入二抗：加入与一抗特异性结合的辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，孵育时间一般为1小时。

二抗可以与一抗结合形成复合物，
从而增强信号。

5.加入底物：加入HRP底物，如TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺），孵育时间一般为10-30分钟。

HRP底物在酶的作用下会发生颜色变化，从而形成信号。

6.停止反应：加入停止液，如2M的硫酸，停止底物的反应。

停止液可以防止底物的继续反应，从而保证结果的准确性。

7.测量：使用酶标仪测量吸光度值，计算样品中抗体或抗原的浓度。

总结：间接ELISA是一种常用的抗体检测方法，其流程包括涂层、阻断、加入一抗、加入二抗、加入底物、停止反应和测量。

通过这种方法可以检测样品中抗体或抗原的存在，具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。

酶联免疫吸附实验的原理及分类酶联免疫吸附实验的原理及分类如下原理：将抗原包被在固相载体上，加入待测样本形成固相抗原-受检抗体复合物；经温育洗涤后，加入酶标二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待测抗体-酶标抗抗体复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体含量。

多用于检测IgG类型抗体。

分类如下1.间接法：最常用的方法，属非竞争性结合试验。

原理：将抗原包被在固相载体上，加入待测样本形成固相抗原-受检抗体复合物；经温育洗涤后，加入酶标二抗，常用羊抗人IgG，在固相上即形成固相抗原-待测抗体-酶标抗抗体复合物，加入底物后根据显色的深浅确定待测抗体含量。

多用于检测IgG类型抗体。

2.双抗原夹心法此法可检测各类抗体，因此双抗原夹心法的灵敏度和特异性要高于间接法。

其原理及操作步骤类似双抗体夹心法，也可采用一步法。

由于机体产生抗体IgG的效价有限，一般不会出现钩状效应。

临床上乙型肝炎表面抗体的测定常用此法。

3.竞争法一般抗体检测是较少采用，当相应抗原材料中含有与抗人IgG 反应的物质，而且不易得到足够的纯化抗原或抗原的结合特异性不稳定时，可采用这种方法测定抗体，目前临床运用较多的是乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）的检测。

竞争抗体与待测抗体的特异性及亲和力越接近，则测定的可靠性越强。

4.捕获法又称反向间接法主要用于血清中某种抗体亚型成分（如IgM）的测定，最常用的是病原体急性感染诊断中的IgM型抗体。

原理：先将针对IgM的二抗包被于固相载体，加入待测标本，其中IgM类抗体可被固相抗体捕获，再加入特异性抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标记特异性抗原的抗体，形成固相二抗-IgM-抗原-酶标记抗体复合物，加底物显色后，即可对待测标本中IgM是否存在及含量进行测定。

酶联免疫吸附试验检间接法测IgG抗体步骤酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的实验技术，用于定量或定性检测特定抗原或抗体。

其中，酶联免疫吸附试验检间接法是一种用于检测IgG抗体的常用方法。

本文将详细介绍酶联免疫吸附试验检间接法测量IgG抗体的步骤。

步骤一：制备诊断试样首先，我们需要获得待测的诊断试样。

这可能是一种血液样品，如血清或血浆。

需注意的是，样本应严格遵循安全操作规程进行采集和储存。

步骤二：涂覆固相抗原在这一步骤中，我们将使用具有高亲和力的抗原（可能是蛋白质或多肽）来涂覆固定在试验板上的固相。

常见的抗原固相材料有微孔板或磁珠。

涂覆过程包括以下几个步骤：1.准备1x涂层缓冲液，pH值通常在8.0-9.0之间。

加入适量的缓冲液到微孔板的孔中，使每个孔完全涂覆。

2.在每个涂层孔中加入一定浓度的抗原。

一般来说，我们可以通过实验确定最佳的抗原浓度。

孔中的抗原应覆盖整个孔底，并允许在温和的条件下孵育一段时间，以实现抗原的吸附和固定。

3.抗原吸附完成后，将板孔转至4℃的冰箱中，在适当的条件下储存板孔，以防止抗原降解。

步骤三：阻断非特异性结合位点在进行酶联免疫吸附试验时，我们希望检测到的信号仅来自于特定的抗体与抗原结合。

然而，试样中存在的非特异性成分可能与固相抗原结合，导致干扰或错误结果。

因此，在进行特异性结合之前，我们需要阻断非特异性结合位点。

这一步骤的目的是减少背景信号。

1.将非特异性结合位点涂覆孔中的样品排除。

2.溶液的组成可以包括蛋白质、牛血清白蛋白（BSA）或牛血清。

3.将阻断溶液加入涂覆孔中，孵育一段时间以实现充分的结合。

4.之后，将孔排空，可用洗涤缓冲液冲洗孔。

在这一步骤中，我们将待测的样品（如血清或血浆）加入至阻断后的涂覆孔中。

通过与固相抗原结合，特定的IgG抗体会与固相抗原结合形成免疫复合物。

这一步骤的操作包括：1.加入待测样品到阻断后的涂覆孔中。

酶联免疫吸附试验流程
酶联免疫吸附试验（ELISA）流程如下：
1. 准备试样和反应物：将需要检测的样品（如血清、尿液等）和对应的抗原或抗体加入到试剂盒提供的孔板中。

2. 孔板洗涤：将孔板中的试液抽空，加入洗涤缓冲液，在振荡器上洗涤孔板，去除未结合的物质。

3. 添加检测试剂：将特异性的酶标记抗体加入到孔板中，与已经结合的抗原或抗体结合并形成复合物。

4. 孔板洗涤：再次将孔板中的试液抽空，加入洗涤缓冲液，在振荡器上洗涤孔板，去除未结合的物质。

5. 添加底物：将酶底物加入到孔板中，与酶标记抗体结合并产生发色反应。

6. 反应停止：将反应停止液加入到孔板中，停止酶反应，防止进一步颜色的产生。

7. 测量吸光度：使用ELISA读板器测量每个孔板的吸光度，根据标准曲线计算样品中的抗原或抗体浓度。

8. 结果判定：根据孔板的吸光度值，结合参照值及实验目的进行结果判定，得出具有统计学差别的阴性、弱阳性和阳性结果。

总之，ELISA是一种高灵敏度、高特异性、快速、简便的检测方法，不仅可以应用于医学领域，还可以应用于生物技术、环境监测、农业等领域。

酶联免疫吸附实验免疫酶技术是本世纪60年代末期发展起来的一种免疫检测方法，是目前最广泛应用的标记免疫技术。

1966年Nakene和Pierce共同发表了《酶标抗体：制备和抗原定位中的应用》，首先提出了免疫酶技术的基本原理。

1971年Engvall和Perlmann发表《酶联免疫吸附试验测定IgG含量》一文，使免疫酶技术成为一种实用的检测液体标本中微量物质的方法。

目前免疫酶技术已广泛用于免疫学、微生物学、寄生虫学等。

由于其具有灵敏度高、试剂稳定、设备简单、操作安全等优点，近几年也将其应用到食品领域中来检测某些食品中的生理活性物质。

一、基本概念1、免疫：笼统地概括起来，免疫就是人和动物机体防御、排除外来物质(异物)进人体内，同时识别和清除体内死亡、变性物质和平定体内叛乱分子突变细胞，以保护和稳定自身的防护机制。

2、抗原：抗原是指那些能够诱导机体的免疫系统发生免疫应答，产生抗体和致敏效应淋巴细胞，并在体内外与之特异性结合，发生免疫反应的物质。

3、抗体：是能与相应的抗原专一性结合的蛋白质分子，和机体其他生物大分子一样是细胞的产物，分泌到体液中或表现在细胞表面上。

4、抗原、抗体反应：抗原和抗体在体外的反应亦称血清学反应。

这类反应可借助免疫学方法进行检测。

二、抗体定量检测方法及其原理定量分析抗体的常用方法有扩散法、酶联免疫吸附法和火箭免疫电泳法等。

1、免疫扩散法1.1、单向免疫扩散法原理：将待检抗原滴加于含相应抗体的琼脂板小孔中，经一定时间扩散后。

形成乳白色的沉淀坏，在一定浓度范围内，抗原的含量与沉淀坏直径成正比。

可以先用己知不同浓度的标准抗原制成标准曲线，再根据测试样品沉淀环直径的大小，从标准曲线上查出样品中抗原的相应含量。

1.2双向免疫扩散法原理：可溶性抗原与已知可溶性抗体分别加入相邻的琼脂糖凝胶板上的小孔内，在电解质存在下让它们相互向对方扩散。

当两者在最适当比例处相遇时，即形成一条清晰的沉淀线。

根据最大稀释度与已知标准品最大稀释度之比，可计算出抗体含量。