当前位置：文档之家 › 2011血液检验复习指导：白血病免疫分型

2011血液检验复习指导：白血病免疫分型

  • 格式：doc
  • 大小：0.28 KB
  • 文档页数：1

下载文档原格式

  / 1

合集下载

急性白血病免疫学分型

急性白血病免疫学分型

（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。

前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。

见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。

急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。

急性白血病免疫分型

急性白血病免疫分型

天然T细胞 记忆T细胞
活化T细胞
表型 CD4 CD8 CD45RA CD45RO
CD25 CD54 CD58
天然T细胞 记忆T细胞 活化T细胞 + + -/+ + + +/++ + + +++
髓系抗原
根据髓系抗原表达大致分为7类： 1．粒细胞和单核细胞上都有较强表达的抗原： CD13、CDw17、CD32、CD87、 CD88、CD89、CDw92、CD93、 CD156、CD157、CD163。 2．以粒细胞为主，也存在于单核细胞上的抗原： CD15、CD65。 3. 以单核细胞为主，也表达在粒细胞上的抗原： CD14、CD33。
T细胞系抗原 ---CD4+T细胞亚群
1．根据产生淋巴因子的差异分为： TH1—产生 IL-2、IFN-γ 、TNF-β TH2—产生 IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 2．根据功能分为： TSI（suppressor inducer T-cell） —诱导TS功能，CD31+、CD45RA+ THI（helper inducer T-cell） —辅助B细胞产生抗体，CD31-、CD45RO+ 3．分为记忆T细胞、天然T细胞、活化T细胞
髓系抗原
3．基本只表达在单核细胞上的抗原： CD16、CD64、CD68、CD91、CDw136、CD155。 基本只表达在粒细胞上的抗原：CD16b、CD66。 4．造血干、祖细胞抗原：CD34、CD90。 5．其他髓系相关抗原：主要存在于其他系细胞上， 髓系细胞上也有表达：CD4、CD7、CD9、CD10、 CD11b、CD11c、CD31、CD36、CD38 6．血小板相关抗原：CD36、CD41、CD42、CD61、CD62。 7.. 红细胞抗原： CD36、GPA

白血病免疫分型测定

白血病免疫分型测定
5．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b.使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
操作-样本制备：
细胞膜表面抗原
1．首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
6．各管中加入透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
8．各管中加入4mlPBS，振荡混匀。
9．300g离心5分钟后，弃去上清液。
10．各管中加入PBS500ul，振荡混匀。11 Nhomakorabea上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，腰穿采骨髓。
采集部位腰穿采骨髓
抗凝剂肝素抗凝
要求1．样本量至少3ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本或已固定的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
4：鞘液液体20L室温
5：清洗液液体5L室温

白血病免疫分型测定

白血病免疫分型测定
粒系<20%淋系<30%
临床意义
用于血液病的诊断和分型诊断
方案（Protocol）
2．首先每管中加入标本(骨髓或外周血)100ul(根据细胞的多少决定)，5ulCD45-PC5抗体。室温避光20分钟。
3．每管中加入固定液100ul，剧烈振荡混匀，室温避光15分钟。
4．各管中加入PBS4ml。
5．300g离心5分钟后，弃去上清液，振荡混匀。透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
采集部位骨髓采血
抗凝剂EDTA或肝素抗凝
要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
白血病免疫分型测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与细胞膜上或膜内相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到百分数。
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
5．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。

白血病淋巴瘤免疫分型精品课件

白血病淋巴瘤免疫分型精品课件
DNA
Cytokinr
+
Cytokines
+
最新 PPT 欢迎下载
DNA
5
设门
最新 PPT 欢迎下载
6
08-03307
设门
全部 细胞
门内细胞
最新 PPT 欢迎下载
7
08-03307
最新 PPT 欢迎下载
8
血液肿瘤分类进程
最新 PPT 欢迎下载
9
白血病免疫分型的理论基础
最新 PPT 欢迎下载
3
CD45/SS示意图
最新 PPT 欢迎下载
4
抗原分布
• 表面,胞浆,核内
• 是共同检测还是分别检测?
表面
胞浆
核内
CD3, CD4, CD8, tetramer
cytokines
DNA
CD3,4,8, tetramer
+
Cytokines
CD3,4,8, tetramer
+
Promyeloid
CD15+/CD117+/-
CD34HLADR-
CD11b-, CD14-
Myelomonocytic & Monocytic
CD14+ CD4+/HLADR+ CD15+ CD11b+
红系和巨核系的鉴定需要另外增 加二线抗体。 如:CD71、GPA、CD41、CD61
最新 PPT 欢迎下载
CD2-/+ CD5-/+ sCD3-
CD4CD8-
Common Thymocyte
CD2+ CD5+ Dual CD4+/CD8+ sCD3-

白血病免疫分型

白血病免疫分型

正常人血液白细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：单核细胞 R3：中性粒细胞 R4：嗜酸性粒细胞 R5：原始细胞
正常人骨髓有核细胞CD45-SSC设门散点图
R1：淋巴细胞 R2：粒系细胞 R3：单核细胞 R4：原始细胞 R5：幼红细胞
白血病细胞的特性
白血病细胞的异常表现在： 抗原系列异常和时间异常
CD15
CD1a
CD64
2008年WHO细胞系别确定标准
髓系：MPO（流式细胞术、免疫组化或者细胞化 学） 或单核系分化（非特异性酯酶弥漫性阳性， 或者CD11c、CD14、CD36、CD64、溶酶体， 两个及以上阳性） T系：胞浆CD3（流式使用抗CD3ε链的抗体；免 疫组化使用的多克隆抗体会检测到非T细胞特异性 的CD3ζ链） 或胞膜CD3（MPAL中比较罕见） B系：CD19强表达加下述标志中至少一个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10 或CD19弱表达加下述标志中至少两个强表达： CD79a、胞浆CD22、CD10
髓片
POX染色
AML-M0
AML-M1
AML-M2
AML-M3
AML-M3v
AML-M4EO
AML-M4b
AML-M5b
AML-M6
AML-M7
AML免疫分型总结
192例AML病例中免疫分型结果示髓系抗原CD13、CD33、 MPO最常见，其次CD117也是髓系比较敏感的指标，在 原始细胞百分比高的AML亚型中有较高的阳性率。
白血病免疫分型---CD45-SSC设门
CD45是白细胞的共同抗原成分,所有人类白细胞均表达CD45，包括 淋巴细胞、单核细胞、多形核细胞、嗜酸、嗜碱性细胞、胸腺细胞、 脾细胞、扁桃腺细胞以及骨髓前体细胞。 造血系统细胞CD45表达量与细胞分化程度的高低紧密相关，即分化 程 度 高 的 细 胞 CD45 表 达 量 高 ， 分 化 程 度 低 的 细 胞 CD45 表 达 量 低 （淋 巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞，在红细胞中不表 达。 SSC是侧向角参数，反应细胞的颗粒度（成熟粒细胞>单核细胞>原 幼 细 胞 > 淋 巴 细 胞 ） 。 目 前 ， 国 际 上 采 用 CD45—SSC 设 门 （Gating），可将白血病细胞与正常细胞分开，增加白血病免疫分 型的准确性。

急性白血病免疫分型

B-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点

白血病免疫分型


CD2 CD3 CD5 CD7 CD4 CD8 CD25 CD56 CD57
T-CLL/PLL + + + + +/- -/+ -
T-LGL
+ + +/- +/- -
+
-
-/+
+
NK-LGL + - -
- +/- -
+
-
ATL
+++ - +
+
肝脾γ δ T细胞淋巴瘤：CD2+ CD3+ CD7+ TCRγ δ + CD16+/- CD56+/- CD8-/+ CD4- TCRα β -
‫‫‬
表达率
‫ ‫‬CD13
70%
‫ ‫‬CD33
70%
‫ ‫‬CD117
70%
‫ ‫‬cMPO
70%
特异性 非特异 非特异 特异 特异
错译表达（Ly+AML ，My+ALL ）：
白血病细胞表达非本系细胞抗原标志 物，具有预后意义。
ALL
CD13， CD33
AML
CD2+， DR- M3
CD2+， DR+ M4Eo
B系 cCD79a CD22 cIgM CD19 CD10 CD20 TdT CD24
T系 cCD3 TCRαβ TCRγδ CD2 CD5 CD8 TdT CD7
髓系 cMPO
CD117 CD13 CD33 CD14 CD15 CD64
部分慢性B淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型
CD5 CD10 CD19 CD22 CD23 HLA-DR FMC7 SIg CD11c

白血病淋巴瘤免疫分型精品课件讲座


谢谢大家
•
9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定 。22.2.2722.2.27Sunday, February 27, 2022
•
10、低头要有勇气，抬头要有低气。* **2/27/2022 12:55:45 AM
•
11、人总是珍惜为得到。22.2.27**Feb-2227- Feb-22
•
12、人乱于心，不宽余请。***Sunday, February 27, 2022
•
16、业余生活要有意义，不要越轨。* *2/27/2022
•
17、一个人即使已登上顶峰，也仍要 自强不 息。*** 22.2.27
谢谢大家
•
9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定 。2022/2/272022/2/27Sunday, February 27, 2022
•
10、低头要有勇气，抬头要有低气。2022/2/272022/2/272022/2/272/27/2022 12:55:45 AM
MM
流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势
1、纤维化、硬化的骨髓可能没有足够的细胞分析。 2、细胞太多聚集或成团也可能没有足够的分析细
胞。 3、硬化的组织也很难得到足够的分析细胞。 4、组织结构关系、形态关系丢失。 5、比例太低的单克隆B细胞很难检测到。
流式免疫表型诊断血液肿瘤的劣势
6、没有异常免疫表型的T细胞淋巴瘤也可能很难检测。 7、异常的T细胞免疫表型不一定提示T细胞肿瘤，也可能
•
15、一个人炫耀什么，说明他内心缺 少什么 。。2022年2月 2022/2/272022/2/272022/2/272/27/2022
•
16、业余生活要有意义，不要越轨。2022/2/272022/2/27Februar y 27, 2022

2011血液检验复习指导：急性髓性白血病分型

2.急性粒细胞白血病部分分化型（M2）：骨髓ＮＥＣ中，原始细胞（Ⅰ型＋Ⅱ型）30－89％，早幼粒及以下阶段粒细胞大于10％，单核细胞小于20％。

3.急性早幼粒细胞白血病（M3）：含大量的异常早幼粒细胞。

异常早幼粒细胞的特征是核常为肾形或双叶，胞浆完全被密集甚至融合的粗大颗粒占据，常掩盖胞核，用Romanowsky 染色，这些颗粒为亮粉红色、红色或紫色。

有些异常早幼粒细胞的胞浆充满灰尘详细小颗粒。

典型的细胞含束状的ａｕｅｒ小体，散乱分布在胞浆。

变异型急性早幼粒细胞白血病（M3ｖ）：其特点是周围血几乎每一早幼粒细胞核均为双叶、多叶或肾形，大多数细胞无或仅含少许嗜天青颗粒，但至少部分细胞具典型M3的胞浆特征。

骨髓细胞形态更接近典型M3的特征。

与典型M3不同，M3V的白细胞计数常明显升高（可达200 X 109／L），而典型M3的白细胞计数常略高于正常或低于正常。

与典型M3一样，M3V易出现DIC并发症，染色体多有t（15：17）异常。

4.急性粒单核细胞白血病（M4）：符合下列条件之一：①骨髓NEC中，原始细胞大于／等于30％，骨髓原粒及原粒以下阶段的粒细胞大于／等于30％至小于80％；不同分化程度的单核细胞大于20％；周围血单核细胞大于／等于5 X 109／L。

②骨髓检查同上，血斗核细胞系小于SX10’／L，但血或尿溶菌酶高于正常值3倍以L，或单核细胞酯酶染色证实单核细胞系大于20％。

③骨髓细胞形态检查符合MZ，但有下列条件之一：a。

血单核细胞大于／等于sxlo’／L。

b。

血或尿溶菌酶大于正常值3倍。

b。

单核细胞酯酶染色证实骨髓NEC中，单核细胞大于20％。

伴嗜酸性粒细胞增多的粒单核细胞白血病（M4EO）：符合上述M4的条件，但骨髓异常嗜酸性粒细胞增多，常大于／等于5％（NEC）。

异常嗜酸性粒细胞的特点是：除含大的特异性嗜酸性颗粒外，尚含大的嗜碱性颗粒，可为单个未分叶核；与正常嗜酸性粒细胞不一样，异常嗜酸性粒细胞的氯醋酸酯酶染色及糖原染色强阳性。

  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。