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白血病免疫分型5[1].11

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白血病免疫分型的诊断标准

白血病免疫分型的诊断标准

9．白血病免疫分型的诊断标准9．1 急性淋巴系白血病（ALL）9．1．1急性B淋巴系白血病（B-ALL）9．1．1．1MIC 标准:B 祖细胞ALL: CD19+,TdT+,CD10-,CIg-.sIg-Common ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg-,sIg-Pre-B- ALL: CD19+,TdT+,CD10+,cIg+,sIg-B-ALL : CD19+,TdT-,CD10-,cIg-,sIg+9．1．1．2 欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-B-ALL: (BⅠ型):CD19+,CD22+Common ALL:(BⅡ型):CD19+,CD22+,CD10+Pre-B-ALL: (BⅢ型):CD19+,CD22+,CyIgM+，成熟B-ALL:(BⅣ型)：CD19+，CD22+，Kappa/Lambda+9．1．2急性T淋巴系白血病（T-ALL）9．1．2．1MIC 标准:T祖细胞型: CD2-T成熟细胞型: CD2+9．1．2．2 Reinheiz 标准:早期胸腺细胞Ⅰ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71+普通胸腺细胞Ⅱ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD71-,CD4+,CD8+,CD1+ 胸腺髓质细胞Ⅲ期:CD2+,CD5+,CD7+,CD38+,CD3+,CD4+,CD8+,CD1- 9．1．2．3欧洲白血免疫学特征研究组标准:Pro-ALL:(TⅠ型):CD3+,CD7+Pre-T-ALL(TⅡ型):CD3+,CD2+,CD5+,CD8+皮质-T-ALL(TⅢ型):CD3+,CD1a+成熟-T-ALL(TⅣ型):CD3+,CD1a+,anti-TCRα/β+ 或γ/δ+9．3．急性髓性白血病(AML)能亚型常表达抗原M0 CD11b,CD13或CD33M1 CD13 CD15 CD33 CD34 HLA-DRM2 CD11b CD13 CD15 CD33 •CD34 •HLA-•DR •CD56 CD19M3 CD11b CD13 CD15 CD33 CD34M4 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M5 CD4 CD11b CD13 CD14 CD15 CD33 CD34M6 血型糖蛋白A CD13 CD33 CD34M7 CD41 CD61 CD13 CD33 CD34 因子Ⅷ相关抗原10．各型白血病及淋巴瘤免疫分型特点10．1 急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）10．1．1 M0：有低的(Side scatter ,SSC)和Forward scatter（FSC)。

急性白血病免疫学分型

急性白血病免疫学分型

（一）急性淋巴细胞白血病按免疫标志分为非T细胞型和T细胞型。

前者又可分为无标志性急淋（Null-ALL）普通型急淋（Common-ALL）、前B细胞型急淋（Pre-B-ALL）和B细胞型急淋（B－ALL）4个亚型；T细胞型又分为不成熟胸腺细胞型（immature T-ALL），普通的胸腺细胞型（eommon T-ALL）和成熟胸腺细胞型（mature T-ALL）。

见表5－3－1 和表5－3－2. 表5－3－1 急性T淋巴细胞白血病（T－ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征CD7CD5CD2CD1CyCD3SmCD3CD4CD8Ⅰ幼稚胸腺细胞型immature T-ALL+-/+-/+--/+---Ⅱ普通胸腺细胞型common T-ALL+++++-/+++Ⅲ成熟胸腺细胞型 mature T-ALL+++-+/-++/--/+表5－3－2 急性非T淋巴细胞白血病（non-T-ALL）细胞表型组别免疫亚型表型特征HLA-DRCD19CD10CD22CD20CyIgMSmIgⅠ无标志型急淋Null-ALL+-/+-----Ⅱ普通型急淋common-ALL+++-/+-/+--Ⅲ前B细胞型急淋pre-B-ALL++++++-ⅣB细胞型急淋B－ALL＋＋+/-++-+ （二）急性非淋巴细胞白血病应用免疫学标志进行分型尚正在探索中，髓细胞系的免疫膜标志；粒细胞系为过氧化物酶＋、CD34＋、CD13＋；单核细胞系为α－萘酚醋酸酯酶＋，可被氟化钠抑制，CD34＋、CD13＋、CD14＋；红细胞系为血型糖蛋白（Gl ycophorin）及红细胞膜收缩蛋白（Spectrin）＋；巨核细胞系为血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa+、Ⅰb/Ⅲa＋。

急非淋膜标志与FAB分型的关系见表5－3－3. 表5－3－3 急性非淋巴细胞白血病FAB 分型与膜标志抗体M1M2M3M4M5M6M7 HLA－DR++-+++/-+/-CD34++/--+/-+/--+/-CD33+++ +++/-+/-CD13+/-++ + +- CD14-+/--++- CD15-++/-+++/- 血型糖蛋白-----+-Ⅱb/Ⅲa/Ⅰb------+。

WHO关于白血病分型

WHO关于白血病分型
按临床和瘤细胞浸润程度 急性型：最常见，WBC高，高钙血症，生存期短 慢性型：WBC增高不明显，异常淋巴细胞较少，骨
髓常正常，生存期长 隐袭型：无特征性症状，WBC正常且异常T细胞少，
用适当的HTLV-I探针方法可证实T细胞克隆性增生
精品课件
ATLL早期无Hb和血小板降低或稍低，随疾病发展 WBC升高，淋巴细胞增多，出现大小不一（大者＞14μm） 多少不等（10%-80%）多形性多核叶细胞
WHO关于白血病的分类
精品课件
精品课件
血液病的诊断标准
FAB诊断？？
MICM诊断（WHO标准）
M：Morphology （histochemistry ） I：Immunology C：Cytogenetics M：Molecular biology
（敏感性，特异性？）
精品课件
精品课件
精品课件
除典型CGL外，aCML、Ch-CML、CNL和CMML均为Ph-/bcr-， 故也称这4型为P h染色体或bcr基因阴性疾病。
WHO 将CGL和CNL归属MPD，将CMML、aCML、Ch-CML归属 骨髓增生异常/MID。最近WHO认为：将CMML外周血WBC＞ 13×109/L者列为MPD（CGL）。
②前T细胞ALL。 ③Burkitt细胞白血病/淋巴瘤：有t（8；14）（q244； q32）异常和变异，c-myc。此外99%可检出Ki-67片断。
精品课件
成人T细胞白血病/淋巴瘤（ATLL）
一般以淋巴结肿大伴外周血淋巴细胞异常、高 钙血症、骨质破坏、皮肤损害和骨髓受累为特征。 HTLV-I抗体阳性是诊断的必要条件。
幼单 HLA-DR CD11b、13 14、33、64 115
CFU-E

WHO关于白血病分型

WHO关于白血病分型

AML各亚型免疫标志
亚型 常表达抗原 不常表达抗原
其它粒系或淋巴系抗原
M0 CD11b、13、33
M1 CD13、15、33、HLA-DR
CD11、14
M2 CD11b、13、15、33、34、56、19、HLA-DR
M3 CD11b、13、15、33、34
M4 CD4、11b、13、14、15、33、34 M5 CD4、11b、13、14、15、33、34 M6 血型糖蛋白A、CD13、33、34 M7 CD41、61、因子VII相关抗原
表面分 化抗原
前T细胞
胸腺皮质T细胞
髓质T细胞
末梢T细胞
表面分 化抗原
FAB 分类
单核细胞 前单核细胞 CFU-C 骨髓母细胞 幼稚细胞 M3 M4 M0 M1
M5b M5a M2
粒细胞
CD14
CD13 CD33 CD34
CD11b
HLA-DR
CD38 CD71
Cancer Cytogenetics
CFU-E
CD36、117 EpoR
红细胞
CD33、34 117、EpoR
CD35、 44 59
血小板 CD9、14、 36、41、 42、49 61、126
CFU-MEG CD33、34 116、126 W123、IL-11R
巨核细胞 CD9、14、36 41、42、61 W116、W123 126
我国将CML分为5型： ①典型慢粒（CGL或CGL-CP）； ②不典型慢粒（aCML或a-CML）； ③幼儿型慢粒（Ch-CML）；
④慢性中性粒细胞白血病（CNL）；
⑤慢性粒单核细胞白血病 （CMML）。 除典型CGL外，aCML、Ch-CML、CNL和CMML均为 Ph-/bcr-，故也称这4型为P h染色体或bcr基因阴性疾病。 WHO 将CGL和CNL归属MPD，将CMML、aCML、Ch-

白血病免疫分型测定

白血病免疫分型测定
5．溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b.使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进行溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进行下一个样品测定。
（*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体）
操作-样本制备：
细胞膜表面抗原
1．首先准备所需的管，并在管上标记上欲加入的抗体。
2．首先每管中加入5ulCD45-PC5抗体。
3．然后，按管上的标记，加入相应抗体各10ul(注意：必须是FITC和PE标记的抗体搭配)
4．各管中加入标本(骨髓或外周血)30～100u1(根据细胞的多少决定)，振荡混匀，室温避光20～30分钟。
6．各管中加入透膜剂100ul，轻轻混匀，室温避光5分钟。
7．加抗体，阴性对照管中加入10ul，其余各管加入相应抗体各10ul，室温避光15分钟。
8．各管中加入4mlPBS，振荡混匀。
9．300g离心5分钟后，弃去上清液。
10．各管中加入PBS500ul，振荡混匀。11 Nhomakorabea上机测样
报告结果
报告百分数
操作性能
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态，腰穿采骨髓。
采集部位腰穿采骨髓
抗凝剂肝素抗凝
要求1．样本量至少3ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本或已固定的标本不能用。
3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
4：鞘液液体20L室温
5：清洗液液体5L室温

白血病免疫分型初筛方案

白血病免疫分型初筛方案

白血病免疫分型初筛方案白血病免疫分型初筛方案白血病是一种由于造血干细胞异常增殖引起的恶性血液病，其临床表现及预后差异较大。

对于白血病患者的治疗和预后判断，准确的分型至关重要。

近年来，随着免疫学研究的进展，白血病的免疫分型成为了一个重要且具有指导意义的方面。

本文将介绍白血病免疫分型的初筛方案，以及其对临床的意义和应用。

一、什么是白血病免疫分型？白血病免疫分型是通过检测白血病患者的免疫表型，即细胞上表达的抗原和细胞表面标记物，来确定白血病的类型和亚型。

目前，常见的白血病免疫分型方法主要包括流式细胞术、免疫组化、免疫电镜等。

二、为什么需要白血病免疫分型？白血病患者的治疗和预后与其分型紧密相关。

不同类型的白血病具有不同的临床表现、生物学特点和预后，准确的分型对于指导个体化治疗非常重要。

免疫分型不仅可以帮助医生确定病情严重程度、制定个体化治疗方案，还可以对患者的预后做出评估。

对于一些疑难病例，免疫分型还有助于确定病理诊断和鉴别诊断，减少误诊和漏诊的发生。

三、白血病免疫分型的初筛方案目前，国际上广泛应用的白血病免疫分型初筛方案主要是基于流式细胞术。

这一方法具有快速、准确、多参数检测的特点，使得它成为了白血病免疫分型的首选工具。

白血病免疫分型的初筛方案通常包括以下几个方面的内容：1. 纵向免疫分型纵向免疫分型主要是通过检测白血病细胞表面的免疫表型，确定白血病的类型和亚型。

对于怀疑白血病的患者，医生通常会进行一系列免疫标记物的检测，如CD45、CD34、CD13、CD33、CD14、CD15等。

这些标记物可以帮助医生确定白血病患者的分型，指导后续的治疗和预后评估。

2. 横向免疫分型横向免疫分型则是通过比较不同类型的白血病细胞表面的免疫表型，辅助鉴别白血病的类型和亚型。

在横向免疫分型中，医生通常会检测同一类别不同亚型的白血病患者的共同抗原和独特抗原，以确定其具体的亚型。

3. 免疫细胞化学分析免疫细胞化学分析是一种通过检测白血病细胞内特定抗原的染色反应，来确定白血病的类型和亚型的方法。

白血病分型及诊断标准

白血病分型及诊断标准

白血病分型及诊断标准白血病是一种由于骨髓中某些白细胞异常增生而导致的恶性血液疾病。

它是一种高度复杂的疾病，分为多种不同的类型和亚型。

对于正确诊断和治疗白血病，准确分型是非常重要的。

本文将深入探讨白血病的分型及其诊断标准，并提供相关观点和理解。

为了更好地了解白血病的分型和诊断标准，我们首先需要了解白血病的基本概念。

白血病是一种造血系统的恶性疾病，主要表现为骨髓中异常增生的白细胞，这些白细胞数量过多，发育不成熟或功能异常。

根据白细胞的分化程度和特征，白血病可以分为急性白血病和慢性白血病两大类。

急性白血病是一类进展迅速的白血病，骨髓中存在大量未成熟的白细胞，这些白细胞无法正常发挥其功能，并且会抑制正常造血细胞的产生。

急性白血病通常分为急性淋巴细胞白血病（ALL）和急性髓系白血病（AML）两大类。

急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种由淋巴细胞前体异常增生导致的白血病。

它可发生在儿童和成人身上，儿童ALL占所有儿童肿瘤的25％，成人ALL则较为罕见。

ALL的诊断标准主要基于骨髓和外周血液中异常淋巴细胞比例的检测及免疫分型。

根据世界卫生组织（WHO）的分类标准，ALL通常被分为B细胞型和T细胞型。

B细胞型ALL占所有ALL患者的大部分，而T细胞型ALL较为罕见。

急性髓系白血病（AML）是一种由骨髓中异常增生的髓系细胞引起的白血病。

与ALL不同的是，AML主要发生在成年人身上，尤其是中老年人。

AML的诊断主要依据骨髓中异常细胞的形态学特征和免疫分型。

根据WHO的分类标准，AML根据细胞学分类、分子遗传学和临床表现可分为多个亚型。

慢性白血病是一类进展缓慢的白血病，相对于急性白血病而言，慢性白血病的白细胞增生相对成熟，功能也相对正常。

慢性白血病一般分为慢性淋巴细胞白血病（CLL）和慢性髓细胞白血病（CML）两大类。

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是一种由成熟淋巴细胞异常增生导致的白血病。

CLL通常发生在中老年人身上，很少影响年轻人和儿童。

急性白血病免疫分型

急性白血病免疫分型
B-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL旳免疫表型特点：
T-ALL分类
免疫表记
TdT+ 、CyCD3+ 、CD7+
Pro/Pre-T-ALL
CD2-、sCD3- 、CD1a-
T-ALL
CD2+、 sCD3+ 、 CD5+/- 、CD8+/- 、CD4+/- 、 CD1a+/-
-
+
+
-
T-ALL
+
-
-
+
-
-
+
AML
-
+/-
+
-
-
-/+
-/+
R1 门为成熟淋巴细胞 R2 门为正常单核细胞位置 R3 门正常粒细胞位置 R4 门为幼稚淋巴细胞出现位置 R5 门为有核红细胞或细胞碎片位置 R6 门为幼稚髓细胞出现位置 白血病细胞一般会在R4 R6 两门位置处出现
正常骨髓经CD45/SSC射门旳散点图
CD45/SSC 图中可见 CD45 强阳性SSC 低信号旳细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体 中档强度旳CD45 体现SSC 信号最强旳细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体 CD45 体现与SSC 信号介于淋巴细胞与粒细胞之间旳是单核细胞群体绿色细胞群体 CD45 阴性SSC 信号最低旳有核红细胞和细胞碎片
ANLL旳免疫分型特点
FAB-M1/M2旳免疫表型特点：CDl3+、CD15+、CD33+、 HLA-DR+、CD34+，其中CD34在M1中旳体现强于M2，而CD15在M2旳体现较强。
ANLL旳免疫分型特点

急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型

急性白血病系别判断的流式细胞免疫分型
用于ALAL，也适用于单系AL的诊断； • （2）针对标志在系别诊断中的贡献（特异性和覆盖率）综合给予分值； • （3）将诊断标准量化，简单易行，降低室间差异。
三、急性白血病系别诊断标准
• EGIL诊断标准缺点： • （1）关于阳性定义，因为影响因素众多，有时存在歧义； • （2）对于某些覆盖率低、特异性高的标志，给予分值低或者未纳入，如CD64、CD14； • （3）对某些常见伴系表达标志予以极低分值，如CD7，未考虑荧光强度的差异； • （4）对于相对特异、在某系别易于伴发的标志，未考虑差异对待，如cCD79a、CD10
三、急性白血病系别诊断标准
• 鉴于几乎没有任何标志是绝对敏感和特异的，做全标志有助于降低误诊风险，因此 在系别筛查时如果出现系别标志表达过多或者过少，或者伴系表达标志的强度超过 标本中残留的正常细胞时，首先应该做全两个诊断标准涉及的相关系别标志，必要 时甚至需要增加CD371等新的髓系标志。
• 在此过程中可以选择一步法或者两步法。选择一步法的实验室，以目前常用3激光8 色机型为例，可供参考的5管法见表3；选择两步法的实验室，第一步进行系别筛查， 包括髓系MPO（或者CD33）和CD117，T系CD7和cCD3、B系CD19和CD22，根据 采用仪器型号不同可能有差异，4色方案可以参考2015年4色流式细胞术中国专家共 识，3激光8色推荐方案见表3。
三、急性白血病系别诊断标准
三、急性白血病系别诊断标准
• 注意几个标志的FCM检测： • （1）MPO：使用克隆号8E6、MPO-7的抗体需要小心，因为均有在B-ALL表达的
报道；阳性阈值虽然大多数沿用10%，但是建议结合荧光强度，并且不典型病例应 该做全其他髓系标志，并结合细胞化学和免疫组化MPO检测结果；FCM破膜处理 可能会使粒细胞的侧向角光散射（side scatter，SSC）降低，从而影响CD45/SSC设 原始细胞门的精确度，导致假阳性结果，正确的方法应结合原始细胞标志修订设门。

白血病形态分型

白血病形态分型

T淋巴细胞系 B淋巴细胞系
MPO+
抗血型糖
CD13+、CD33+ 蛋白H、C
CD15+(M2、M4)
(M6)
CD14+(M4、M5)
CD34+(M0、M1)
CD41a+、CD41b+ CD7+、CD5+
CD61+
CD2+、CD3+
CD42b+、CD42c+ CD4+、CD8+
(M7)
CD1a+
(ALL)
随着血液病在发病机理、 诊断方法以及治疗手段等方面 的进展，急性白血病的诊断技 术也有很大发展，急性白血病 的分型基本上分三个阶段。
FAB分型 1976（M）
MIC分型 1986（MIC）
WHO分型 2001（MICM）
表1 急性白血病分型的三个发展阶段
（一）急性白血病 FAB分型
FAB分型法依据白血病
白血病临床特征
发热 贫血 出血 浸润
由于白血病细胞起源、分化 和生物学行为不同，构成了白 血病的异质性，因此急性白血 病的全面、正确分型是准确、 及时治疗的前提。
传统的白血病诊断和分型 主要依据骨髓涂片中血细胞形 态和分类及化学染色检查来确 定的。根据白血病自然病程长 短将白血病分为急性和慢性两 大类；按细胞起源不同又可分 为髓细胞系、淋巴细胞系以及 特殊类型等不同类型白血病。
❖ M7 巨核细胞白血病 未分化型（M7a）：外周血有原 巨核（小巨核）细胞；骨髓中原巨核细胞>0.30非红系， 须有组化电镜或单克隆抗体证实。骨髓细胞少，往往干 抽。活检有原始和巨核细胞增多，网状纤维增多。分化 型（M7b）：骨髓及外周血中以单圆核和多圆核病态巨 核细胞为主。

免疫分型

免疫分型

2.判断预后 有利于确认与表型有关的特定细胞遗传学异 常来预测肿瘤的生物学行为，有利于发现表型异 常来检测微小残留病。如白血病原始细胞表达多 药耐药基因MDR-1（一种跨膜转运泵，使化学药 物不能进入白血病细胞内），老年AML细胞 MDR-1阳性患者伴预后不良细胞遗传学表现的发 生率比阴性者高，而MDR-1阴性者治疗完全缓解 率高。
白血病免疫分型及应用
昆明市第一人民医院检验科 沈骅
白血病免疫分型理论基础
造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、 细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的
分化发育阶段密切相关，表现出与细胞系列及其
分化程度相关的特性。
正常血细胞中的抗原表达特点
‫‫‬
1. 系列保守性
2. 时序性 3. 抗原表达量的模式化
淋巴瘤临床诊疗现状
在全世界，85%以上的非霍奇金淋巴瘤是成熟B细胞 肿瘤，两种最常见的类型是大B细胞淋巴瘤和滤泡性淋巴 瘤，占所有非霍奇金淋巴瘤的50%。成熟B细胞肿瘤相似 于正常成熟B细胞各个分化阶段的细胞，并有不同的典型 形态和免疫表型。 在过去20年里白血病和淋巴瘤最有意义的治疗进步 主要在前驱B和T-ALL/LBL，前驱B-ALL中有些类型的治 愈率达80%，而另一些类型的肿瘤缓解率仍很低，肿瘤 的细胞遗传谱、基因型和免疫表型有助于预后的分类，这 些不同的预后分类促使人们创建了更有效的治疗方案，并 提高了不良预后组的肿瘤缓解率。
‫‫‬
‫‫‬
白血病细胞中的抗原表达特点
‫‫‬
表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具 有以下特点： 1. 跨系表达
2. 时相混乱 3. 抗原表达量的改变 白血病髓系细胞抗原标志物表达情况
‫‫‬
‫‫‬
‫‫‬
(TDT CD7)

急性白血病免疫分型

急性白血病免疫分型

免疫学分型 与FAB AML分型的相关性
M1：CD34+、MPO+、DR+、TdT+、CD33+、CD13+、CD15-、CD11b-、 无 淋、红、巨核系抗原 M2：CD34+、CD33+、CD13+、DR+、CD15+ M3：CD33+、CD13+、DR-、CD34M4：CD34+ 、CD33+、CD13+、CD14+、CD15+ M5：CD34+ CD33+、CD13+、CD14+、CD15+ M6：血型糖蛋白+、CD34-，DR-、CD33-、CD13-、CD15M7：CD34+、CD33+、DR+、CD41+、CD42+、CD61+ M0：FAB：形态学为L2型，MPO、SBB组化阴性，淋系抗原阴性， CD33、CD11、CD15 及antiMPO单抗阳性。
与AML预后有的抗原
6。Ly+AML： CR率低 占AML43%， CR46%，合并CD34+38%， PgP+15%， （其中CD2+AML7.7%， CD7+AML22%，CD19+13%）， Ly-AML： CR73%
7。CD7+AML： CR率低， 占AML22%， 合并CD34+75%，PgP+55%， （ M1：42%，M2：18%，M4：28%，M5： 9%，M3：0%）CR35%
讲座
急性白血病
免 疫 学 分 型
急性白血病的免疫分型
MICM分型:
细胞形态学(包括细胞组化)为基础， 细胞免疫学(免疫表型)为主体， 细胞遗传学为辅助， 分子生物学为补充的原则。 免疫学分型对ALL更重要。 免疫学与FAB分型可不一致。

白血病的免疫学分型

白血病的免疫学分型

白血病的免疫学分型利用白血病细胞的免疫标志可明确区分ALL和AML，并可进一步鉴定亚型。

（1）T细胞：绵羊红细胞受体（Es）及细胞表面分化抗原CD7、CD2、CD3、CD4、CD8、CD5为T细胞标记。

CD7为出现早、且贯穿表达整个T细胞分化发育过程中的抗原。

目前认为CD7、CyCD3同属于检测T-急性淋巴细胞白血病（T-ALL）的最敏感指标。

但CD7与髓系（急性髓细胞性白血病）有5%～10%的交叉反应，只表达CD7+的不能诊断T-ALL。

CD5与部分B淋巴细胞有交叉反应，CD25为激活的T、B细胞的标记。

（2）B细胞：成熟B细胞特征性的标记是细胞膜表面免疫球蛋白（Smlg）及小鼠红细胞受体（Em），Em为早期成熟B细胞标志。

B细胞表面的非特异性表记有HLA-DR、补体C3受体和Fc受体等。

B细胞分化抗原CD10、CD19、CD20、CD21和CD22。

CD19的反应谱系广，从早前B细胞至前浆细胞，是鉴别全B系的敏感而又特异的标记。

CD10为诊断Common-ALL的医|学教育网搜集整理必需标记，但在少数T细胞和髓系有交叉表达。

胞浆CD22（CyCD22）先于膜表达，且出现很早，髓系均不表达，证明CyCD22用于检测早期B细胞来源的急性白血病是相当特异而敏感的。

浆细胞由成熟B细胞分化而成，失去了Smlg，但胞质有Ig形成，胞质表达：CyIg+、浆细胞抗原PC-1+和PCA-1+。

（3）粒-单核细胞：粒-单核细胞有些共有的标记如CD11b、CD31～CD36、CD64、CD68等，这些标记在淋系无交叉表达（个别除外）。

CD33、CD13反应谱系较广，亦可表达在细胞质中，且十分稳定。

CDl4为单核细胞特异的。

胞质中CD13（CyCD13）、CD14（CyCD14）、CD15（CyCD15）表达早于膜表面表达，且特异性更强。

髓过氧化物酶（MPO）为髓系所特有。

（4）巨核细胞：巨核细胞系分化发育过程中，其特异性标记主要有CD41a（GPⅡb/Ⅲa）、CD41b（Ⅱb）和CD61（Ⅲa）以及血小板过氧化物酶（PPO）等。

流式细胞术系列之-白血病免疫分型

流式细胞术系列之-白血病免疫分型
?cd45强阳性ssc低信号的细胞群为淋巴细胞褐色细胞群体?中等强度的cd45表达ssc信信号最强的细胞群体为粒细胞蓝色及红色细胞群体?cd45表达与ssc信号介于淋巴细胞与粒细胞之间的是单核细胞群体绿色细胞群体?cd45阴性ssc信号最低的有核红细胞和细胞碎片?根据骨髓细胞cd45ssc图中分布情况设门圈定各类细胞?r1门为成熟淋巴细胞?r2门为正常单核细胞位置?r3门正常粒细胞位置?r4门为幼稚淋巴细胞出现位置?r5门为有核红细胞或细胞碎片位置?r6门为幼稚髓细胞出现位置?白血病细胞通常会在r4r6两两门位置处出现tall在cd45ssc点图中幼稚细胞群体低ssc信号与成熟淋巴细胞比较cd45弱表达白血病流式免疫分型举例100101102103104cd45percpcy55tangcaixia001r1r2r3r4r5cd5cd7ccd3cd34阳性ball在cd45ss点图中幼稚细胞群体低ssc信号与成熟淋巴细胞比较cd45弱表达100101102103104cd45percpcy55dupeng001r1r2r3r5r4cd19cd20cd10ccd72cd34hladr阳性amlm0?幼稚细胞群体的fsc和ssc信号低在cd45ssc点图中特征性地与幼稚淋巴细胞区域相连blasts90
门位置处出现
白血病流式免疫分型举例
T-ALL
在CD45/SSC点图中，幼稚细胞群体低SSC信号，与成熟 淋巴细胞比较CD45弱表达
Ta ng ca i xi a.00 1
R3
R4
R5 100
R1 R2
101
102
103
CD4 5 PerCP-Cy5.5
104
CD5、CD7、 cCD3、 CD34阳性
• 幼稚细胞群体的FSC和SSC信号与M0相似，Blasts >90%。

免疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移

免疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移

七、注意事项
1.标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常 放置24小时后检测,但标本采集后应在3-4天 内测定完毕。若标本采集后不能及时测定， 勿预先固定和冰箱内保存。
2.滴加单克隆一抗时，格外小心避免混淆。 3.滴加二抗、显色剂时无需分开。 4.整个检测过程中自固定后标本均应保持湿
润，不能干燥，直至复染后方能使其干燥。
韩茂芬，女，57岁 住院号：165004 感染科—27床 2004年10月6日骨髓片
CD7
攀胜甫，男，42岁 住院号：166298 消化科—4床 2004年11月27日骨髓片
杨雨甜，女，1岁3个月 住院号：167108 小儿科—13床 2004年11月29日骨髓片
前言
白血病和肿瘤细胞骨髓转移的诊断主要靠骨髓 细胞病理学诊断。骨髓细胞病理学诊断的方法 主要有细胞形态学、细胞化学染色、免疫细胞 化学染色、 细胞遗传学以及分子生物学。根据 文献报道，根据细胞形态对白血病进行分型的 准确性是64%～77%。细胞形态学和细胞化学 结合可使准确性达86% [2] ，但对于AML-M0 、 M7 、M5a 、MAL 鉴定有一定的困难。而免疫 细胞化学染色在一定程度上可以解决此类问题。
二、免疫细胞化学染色理论基础
（一）白血病免疫分型 各种血细胞来源于多能干细胞，经过分化
发育而成为成熟的血细胞。这些血细胞在分化 发育过程中，在其表面出现不同阶段的特异性 分化抗原，利用各种特异性单克隆抗体和酶联 免疫方法测定这些抗原，从而精确测定细胞类 型及不同的分化阶段。白血病细胞具有与其对 应的分化抗原,因此利用分化抗原可对白血病进 行免疫学分型。
3.PBS冲洗，5分钟×3。
4.滴加非免疫动物血清50μl，室温孵育10 分钟。
5.根据形态学初检选择需要标记的第一抗 体滴在圆圈内并做好记号，然后将玻片 置于湿盒内室温下1.5小时或4℃ 过夜。

白血病免疫分型

白血病免疫分型

白血病免疫分型
白血病免疫分型：
1、胸腺移植
胸腺移植是一种利用病人的免疫系统抗白血病的新方式。

病人将在手术当中收集胸腺，将其根据个人情况调节，再移植回病人体内，可以促进病人免疫力对抗白血病，从而获得疗效。

2、肿瘤抑制剂治疗
肿瘤抑制剂治疗是通过治疗肿瘤细胞阻断细胞的生长，从而达到抗白血病的目的，一般与化疗联合使用，可以获得较好的疗效。

3、血液干细胞移植
血液干细胞移植是指把病人本身或从其他捐助者那里获取的血液干细胞，通过放射线、化疗等手段，灭活病人体内的血细胞，然后再将血液干细胞移植回体内，由其自动重建新的血系给病人，使其免疫力能抗白血病，从而获得疗效。

4、免疫疗法
免疫疗法是指对病人的免疫体系开展抗白血病的改造，例如，将病人的有效抗体、转基因细胞等植入体内，用以增强病人的抗白血病免疫力，以实现抗病毒和抗炎，达到治疗目的。

5、免疫抑制剂
免疫抑制剂是指利用特定药物来抑制人体免疫系统，也就是进行免疫抑制，从而实现抗病毒的目的。

免疫抑制剂对抗白血病的疗效可以通过阻断病毒的复制，抑制炎症状态，减少体内抗病毒抗体的数量来达到。

白血病细胞的免疫分型

白血病细胞的免疫分型

白血病细胞的免疫分型正常血细胞从多能干细胞分化、发育、成熟为功能细胞的过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的出现、表达增多与减少甚至消失与血细胞的分化发育阶段密切相关，而且表现出与细胞系列及其分化程度相关的特异性。

因此，这些抗原的表达与否可作为鉴别和分类血细胞的基础。

白血病是造血系统的恶性肿瘤，在形态上变化虽相当大，但仍能表达正常血细胞所具有的抗原，因而仍可依据其抗原的表达谱对白血病进行免疫分型。

由于白血病细胞具有肿瘤细胞的特征，其抗原表达又不完全同于正常血细胞，常可出现某些抗原缺乏、过度表达、系列交叉表达某一系列或阶段不应有的抗原，这又增加了白血病免疫分型的复杂性。

近年来白血病的免疫分型已成为诊断血液恶性肿瘤不可缺少的重要标准之一。

国际上公认的通用的方法是流式细胞术（FCM），此外还有免疫组化法，电镜和荧光显微镜也可以帮助诊断。

其中流式细胞术（F CM）和免疫组化法较为常用。

流式细胞术中，白血病免疫分型是利用荧光素标记的单克隆抗体（McAb）作分子探针，多参数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。

因为FCM能快速，多参数，客观的定性又定量测定细胞膜，浆，核的抗原表达。

另一个重要理由是至今尚未发现白血病的特异抗原。

所以能用正常血细胞的单抗来进行免疫分型是基于白血病形成的分化阻断学说即白血病细胞基因异常，分化受阻于某阶段形成不同亚型的白血病。

这群细胞充盈于骨髓。

抗原表达与其相应系列/阶段的血细胞无明显差异。

与形态学检查相似仅能根据数量的差异来判断病变细胞的属性。

单参数免疫标志测定易将正常细胞包括在内。

因此，近年来主张用设门（gating）方法。

即用CD45与侧向角（side scatter,SSC），对数取样后可将骨髓细胞清晰地分出淋巴细胞，单核细胞，成熟粒细胞，幼稚细胞和红细胞群，其理论依据是CD45是所有白细胞的抗原。

其表达量在淋巴细胞最高，单核细胞，成熟粒细胞，早期造血细胞（blasts）依次减弱。

白血病免疫分型

白血病免疫分型

白血病免疫分型白血病的免疫分型主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。

一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测，我们可以判断出白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。

此种白血病的分型即为免疫分型。

白血病免疫分型是诊断白血病的重要标准，对于白血病选择化疗药物以及估计预后是非常重要的。

白血病的免疫分型最早由欧洲提出来，它主要是根据造血干细胞再分化发育过程中，不同的阶段，细胞表面的分子标记也不同这一规律，反推出细胞是处于哪个阶段以及细胞属于哪个系别来源。

一般使用流式细胞仪去检测细胞上面表达的抗原，通过检测从而判断出，白血病细胞属于哪个系列来源以及处于分化的哪个阶段，最终来确诊白血病的类型。

此种白血病的分型即为免疫分型。

白血病免疫分型一般是对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测。

1、白血病的诊断需要骨髓穿刺、骨髓液免疫分型、染色体和基因检查以进一步诊断，骨髓细胞学诊断白血病的准确性仅为70%左右。

如果同时增加白血病的免疫分型，白血病的明确诊断准确率可以接近100%。

2、白血病免疫分型是指对白血病细胞表面表达的分子进行相关检测，可以进一步区分急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病和慢性髓系白血病等类型。

同时还需要检查融合基因的染色体，以便对白血病诊断后的预后进行分层，并制定个性化的化疗方案。

建议平时多进行体育锻炼，增强自身免疫力。

急性白血病是造血干细胞的克隆性恶性疾病，发病时骨髓中异常的原始细胞大量增殖并浸润各种器官组织，正常造血受到抑制。

急性白血病分为急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病，这两类还可分成多种亚型。

白血病的分型采用MIC分型，即形态学、免疫学和细胞遗传学结合的分型。

根据白血病细胞免疫学标志，不仅可将急性淋巴细胞白血病和急性非淋巴细胞白血病进行区别，而且还可将T细胞和B细胞急性淋巴细胞白血病加以区别。

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四.正常血细胞分化发育过程中免疫标志变化特点及 白血病细胞免疫标志特点 (一）. 正常B细胞标志：
CD19 TdT CD34 CD10 CD20 FMC7 CD22 CD23 I期 ： + + + II期： + + -/+ III期： + + + + Ⅳ期： + + + + + 泛B标志：CD19，HLA-DR，cCD79a/cCD22 幼稚B标志：CD34，TdT， CD10， 成熟B标志：CD22，CD23，FMC7
+ + -
+ +/-
+ +/-
泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8
T-ALL的分型
分型 急性早期T前体细胞白血病 early T precursor ALL CD7 + CD2 TdT CD3c/m + +
急性T细胞白血病 T-ALL
B-ALL的分型
亚型 CD19 CD34 TdT CD10 CyIg SmIg
急性早期B前体细胞白血病 + early B-precursor ALL 普通型B 细胞白血病 + Common B-ALL 急性前B细胞白血病 + Pre B-ALL 急性B细胞白血病 + B-ALL
+
+/-
+
+
+
-
-
CD19 CD19
CD11b CD11b
CD7
Side scatter Side scatter
CD117 CD5 CD5
CD45 CD45
CD13 CD13
CD34 CD34
CD64 CD64
CD64
CD19
CD11b CD11b
CD117 CD117
Side scatter
Side scatter
CD13
CD117
cCD13
CD34
HLA-DR
CD11b CD11b
CD117 CD117
Side scatter scatter
HlA-DR HLA-DR
CD5 CD5
CD45 CD45
CD64
CD34
CD64
CD19 CD19
CD11b
CD117 CD117
Side scatter
CD11b
三.免疫分型的作用：
1.区分ALL、AML：形态、组化难以诊断的病例（不典型、 治疗后） 2.将ALL分为B、T细胞及根据细胞发育阶段分为几种亚型 3.对M0、M6 、M7具有诊断意义： M0：形态似ALL、组化（-), MPO(+), 髓标志+, T,BM6：GlyA+，CD71+ M7：CD41+，CD61+（Iib/IIIa）
AML M0 M1 M2 M3 M4 M5 M5a M5b M6 M7
二.急性白血病的MIC分型：1985-1986提出
MIC：Morphology Immunology Cytogenitics 80年代免疫学研究的进展，单克隆抗体的大量涌现， 利用特异的单抗可以明确区分ALL、AML及进一步 鉴定亚型，对研究白血病的生物学特性，指导临床 治疗及判断预后起着重要的作用
-/+
-
+
-
+
-
+
-/+
+
意义：Common B-ALL 预后相对较好，CD34+B-ALL比CD34预后好，但CD34+患者伴Ph1+预后差。B-ALL预后相对 差，但随化疗方案改进，预后有所改善。
(二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期
CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8 I期 ： II期： III期： Ⅳ期： + + + + + + + + + + + + + -/+ -/+ +/+ +/+
CD117 CD11 7
CD45
CD64 CD64
CD34 CD34
CD64 CD64
CD34 CD34
CD79a
cMPO
CD11b CD11b
CD117 CD117
Side scatter Side scatter
HlA-DR HLA-DR
CD5 CD5
CD45 CD45
CD64
CD34
CD64
正常BM各系细胞比率： 淋巴：20-30%：T：70%，B：20%，NK：10%； 单核：2-6%±；粒细胞：40-60%；有核红：<50%
FCM的主要测定指标：FSC，SSC，FL1，FL2，FL3（FL4） FSC：反应细胞的大小。SSC：反应细胞内颗粒的多少。 FCM设门法： FSC/SSC： 缺点： 不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC：CD45是WBC抗原，RBC、Plt为阴性。 CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱， 在淋巴、单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开。特异分析 白血病细胞免疫表型 FCM标记方法： 单标：一种单抗/tube: FL1,FSC,SSC(三参数） 双标：(两种单抗/tube/)：FL1,FL1,FSC.SSC（四参数） 三/四标：(三种单抗/tube)(四种单抗/tube)：FL1-FL3/4,FSC,SSC
+
+
-
+
T-ALL特点： 1. 幼稚T细胞数量增多：CD34+，TdT+ 2. 泛T标志丢失 3. CD4/8双+或CD4/CD8单阳
意义：儿童：ALL发病率占肿瘤的25%， B-ALL 预后比T-ALL相对好 成人：ALL 发病率20% T-ALL 预后比B-ALL 好。
(三).正常粒细胞标志
白血病免疫分型
北京大学血液病研究所
一.急性白血病FAB分型：1976年提出,以形态为基础。
ALL L1 以小细胞为主，大小一致 L2 以大细胞为主，大小不一 L3 以大细胞为主，大小一致 微小分化型急性髓细胞白血病, 原始细胞>30% 急性髓细胞白血病未分化型, 原始细胞》90% 急性髓细胞白血病部分分化型，原始细胞30-89% 急性早幼粒细胞白血病，异常早幼粒细胞>30% 急性粒单核细胞白血病，原始细胞>30%，单核20-80% 急性单核细胞白血病，原单+幼单>30% 未分化型，原单细胞》80% 部分分化型，原单细胞<80% 急性红白血病，原始细胞>30%，有核红细胞>50% 急性巨核细胞白血病，原巨核细胞>30%
cMPO CD13 CD34 CD117 HLA-DR CD33 CD11b CD15 CD64 CD10
幼稚粒 成熟粒
+ +
+ +
+ -
+ -
+ -
+ -
+
+
+
+
全粒细胞标志：CD13， cMPO 幼稚粒细胞：CD34，CD117，HLA-DR，CD33 成熟粒细胞：CD15，CD11b，CD10，CD64
CD11b CD11b
CD5 CD5
CD45 CD45
CD64
CD34
CD64 CD64
CD19 CD19
GlyA GlyA
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
CD64
CD34
GlyA
CD64
CD19
CD41
干祖细胞标志：T祖细胞 CD34 + TdT + CD117 -/+ HLA-DR +/CD38 +
CD11b
CD117
CD45
CD11b
CD5
Side scatter
CD64
CD34
CD64
CD19
CD11b
CD7
Side scatter
HLA-DR
CD5
CD45
CD117
CD34
CD117
CD19
CD11b
CD7
CD45
CD11b CD10-,CD34CD117
CD7
Side scatter
B祖细胞 + + + +/-
髓祖细胞 + + + +
诊断白血病主要标志： B-ALL：CD34，HLA-DR，CD19，CD10+/-，cCD79 T-ALL： CD34，CD38, CD7,CD2+/-,CD5+/-,cCD3 AML： CD34，CD117，CD33，CD13，cMPO M3：CD34 -，HLA-DRM2：CD19+：t（8，21） M4/M5：CD14+ M6：GlyA+,CD71+ M7：IIb/IIIa(CD41,CD61)+
(四).正常单核细胞标志：
HLA-DR CD33 CD13 CD34 CD117 CD14 CD64
幼稚单 成熟单
+ +
+ +
+ +
+ -
+ -
+
+
全单核细胞标志：CD33，CD13，HLA-DR 幼稚单核细胞标志：CD34，CD117， 成熟单核细胞标志：CD14，CD64 (五).成熟粒、单核细胞主要区别： 成熟粒细胞：CD33- HLA-DR- CD14- CD64+dim 成熟单核细胞：CD33+ HLA-DR+ CD14+ CD64+st