DNA的粗提取与鉴定PCR蛋白质的提取与分离ppt课件

B:(1)向试管中加入0.015mol／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)4 mL 二苯胺试剂
目的 ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ⑦ ⑧
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①加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固 ②加速血细胞破裂 ③溶解DNA ④使2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA 最大限度地释出 ⑤使含DNA的黏稠物被留在纱布上 ⑥使含DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中 ⑦除去含DNA的滤液中的杂质 ⑧提取DNA ⑨ A出现蓝色 B无变化
3.DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质则可以溶 于酒精。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少 的DNA。 4.DNA遇二苯胺（沸水浴）会变成蓝色，因此，二苯胺 可以作为鉴定DNA的试剂。
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二、方法与过程
1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）
0.1g/mL柠檬酸钠100mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，
在20mL烧杯中轻缓搅拌 3min，使尽可能多的 DNA溶解在NaCl溶液。
⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液：
用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，
滤液中含有DNA。
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⑺.提取含有杂质较少的DNA： 步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精
50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出） 出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸 吸取上面的水分。
因为DNA在低浓度（ 0.14mol/L ）的氯化钠溶液中 溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大。所以在向含 DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化 钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。5
4.DNA的再溶解。 用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。
5.DNA的沉淀和浓缩。
6.将 DNA 的黏稠物再溶解 2 mol／L 的 NaCl 溶液 20 mL
7.过滤含DNA 的 NaCl 溶液
8.提取含有杂质较少的DNA 9.DNA 的鉴定
冷却的 95％的酒精50 mL
A:(1)向试管中加入0.015 mol ／L 的 NaCl 溶液 5mL (2)加入 DNA (3)4 mL二苯胺试剂
对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进 一步沉淀和浓缩，常用酒精沉淀法。即往含有Na＋的 DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可 以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物， 悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰 箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒 （玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。
活鸡鲜血180mL
离心、分离或静置沉淀。
2.提取DNA。
⑴.提取血细胞核物质：
①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向
快速搅拌。
②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。
③原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速
搅拌，机械加速血细胞破裂。
⑵.溶解核内的DNA：
滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向
3.DNA的鉴定：
加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解， 沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。
三、实验小结
1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精”
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四、实验原理拓展介绍。
1.DNA的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会
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(一) PCR原理
• 体内DNA复制: • 模板DNA • 原料: dNTP • 酶: 解旋酶、DNA pol.
… • 起始引物、合成方向 • 合成环境 •…
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(一) PCR原理
• 解链→模板变性 • 引物-起始→引物-模板复性
轻缓搅拌。
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⑶.析出含DNA的粘稠物：
在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻 轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加 水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。
⑷.滤取含DNA的粘稠物：
用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。
⑸. DNA粘稠物的再溶解： 20mL2mol/L的NaCl溶液 步骤⑷含DNA的粘稠物
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1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯 中加入蒸馏水的作用是( )。
A.稀释血液、冲洗样品 B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出 C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量 D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
答：B
2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和 0.14 mol／L对DNA有何影响?
释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可 以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅 拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但 释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释 放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。
在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶 解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。
DNA的粗提取与鉴定
一、实验原理 1.血细胞在蒸馏水中会渗透吸水过度而导致细胞膜和细 胞核膜的破裂。利用此特性可得到含有DNA的溶液。
2.DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氯化钠的浓度 的变化而改变的。DNA在物质的量浓度为0.14 mol／L 的氯化钠溶液中的溶解度最低，利用这一原理，可以使 溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。
6.DNA的鉴定。 DNA＋二苯胺 100℃ 蓝色物
鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。
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方法步骤
加入物质
1.制备鸡0 m1 蒸馏水
3.溶解细胞核内的DNA
2 m1／L 的 NaCI 溶液 40mL
4.析出含DNA 的黏稠物
蒸馏水
5.滤取含DNA 的黏稠物
答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出
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3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ) A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色
答：D
4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液 中的上清液?
答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于 上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以 要除去上清液(含有蛋白质)。