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目的基因的4种获取方法
1、从基因文库中获取目的基因；
2、cDNA文库；
3、反转录法；
4、人工合成法。
目的基因，也称靶标基因，是指在实验中研究或操纵的特定基因。
在基因克隆过程中目的基因就是要分离、纯化、克隆并转化到生物体的那个可以带来预期表型性状如抗虫或耐除草剂的基因。
目的基因获得方法是取得含有所需生物学功能或编码所需产物结构基因的DNA片段的方法。
1969年贝克威思等从大肠杆菌中分离出了乳糖操纵子DNA，以后有不少科学家用生物学方法、物理化学方法分离出许多纯化的基因。
但总的来看为数不多。
1970年首次完成了77对碱基的酵母丙氨酸tRNA基因的全合成；1973年又合成了126对碱基的酪氨酸tRNA的结构基因。
但上述两次合成的基因都不能得到表达。
1976年8月成功地合成了能表达功能的人工基因——193对碱基的大肠杆菌酪氨酸tRNA基因。
自此以后人工合成基因的报道不断出现。
胰岛素目的基因的获取方法一、基因文库法基因文库法是一种通过构建基因文库来获取目的基因的方法。
基因文库是指将基因组或特定基因的DNA片段克隆到表达载体上，形成的基因重组分子集合。
通过筛选文库，可以获得特定的目的基因。
基因文库法包括基因组文库和cDNA文库，其中cDNA文库构建较为简单，应用更为广泛。
二、化学合成法化学合成法是一种通过化学手段合成目的基因的方法。
在已知目的基因序列的基础上，利用DNA合成仪，按照碱基互补配对原则，合成目的基因的DNA片段。
化学合成法的优点是快速、准确、特异性高，适用于小片段DNA 的合成。
但是，对于大片段DNA的合成，化学合成法存在难度和限制。
三、RT-PCR法RT-PCR法（逆转录-聚合酶链式反应）是一种通过逆转录和PCR技术获取目的基因的方法。
该方法首先将RNA逆转录为cDNA，然后利用PCR技术扩增目的基因片段。
RT-PCR法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于基因克隆、基因表达和基因突变研究等领域。
四、基因定点诱变技术基因定点诱变技术是一种通过诱变手段获取目的基因的方法。
该方法利用定点诱变技术，如寡核苷酸定向诱变技术（ODT）和锌指核酸酶技术（ZFNs），对特定基因位点进行突变，从而获取具有特定变异特征的目的基因。
基因定点诱变技术广泛应用于基因功能研究和遗传性疾病治疗等领域。
五、基因重组技术基因重组技术是一种通过构建重组载体获取目的基因的方法。
该方法将目的基因插入到载体中，形成重组分子，然后将重组分子导入到宿主细胞中，通过筛选和分离，获得含有目的基因的表达产物。
基因重组技术广泛应用于基因克隆、基因表达和蛋白质工程等领域。
六、基因合成技术基因合成技术是一种通过合成手段获取目的基因的方法。
该方法利用化学合成或酶促合成技术，按照目的基因的序列，合成完整的基因片段。
基因合成技术具有快速、准确、特异性高等优点，适用于小片段DNA的合成，广泛应用于基因克隆、基因表达和蛋白质工程等领域。
基因⽂库构建的过程、原理及⽅法基因⽂库构建的过程、原理及⽅法1 cDNA ⽂库的构建1.1 cDNA ⽂库构建的基本原理与⽅法cDNA ⽂库是指某⽣物某发育时期所转录的全部 mRNA 经反转录形成的 cDNA ⽚段与某种载体连接⽽形成的克隆的集合。
经典 cDNA ⽂库构建的基本原理是⽤ Oligo(dT) 作逆转录引物，或者⽤随机引物，给所合成的 cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得⽂库。
其基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法，盐酸胍—有机溶剂法，热酚法等等，提取⽅法的选择主要根据不同的样品⽽定)，要构建⼀个⾼质量的 cDNA ⽂库，获得⾼质量的 mRNA 是⾄关重要的，所以处理 mRNA 样品时必须仔细⼩⼼。
由于RNA 酶存在所有的⽣物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建⽴⼀个⽆ RNA 酶的环境对于制备优质 RNA 很重要。
在获得⾼质量的 mRNA 后，⽤反转录酶 Oligo(dT) 引导下合成 cDNA 第1链， cDNA 第2链的合成(⽤ RNA 酶 H 和⼤肠杆菌 DNA 聚合酶 I，同时包括使⽤ T4 噬菌体多核苷酸酶和⼤肠杆菌 DNA 连接酶进⾏的修复反应)，合成接头的加⼊、将双链DNA 克隆到载体中去、分析 cDNA 插⼊⽚断，扩增 cDNA ⽂库、对建⽴的 cDNA ⽂库进⾏鉴定。
这⾥强调的是对载体的选择，常规⽤的是λ噬菌体，这是因为λ DNA 两端具有由12个核苷酸的粘性末端，可⽤来构建柯斯质粒，这种质粒能容纳⼤⽚段的外源 DNA。
1.2 cDNA 全长⽂库经典 cDNA ⽂库的构建虽然⾼效、简便，但⽂库克隆的⽚段⼀般较⼩，单个克隆上的 DNA⽚段太短，所能提供的基因信息很少，⼤多需要⼏个克隆才能覆盖⼀个完整的全基因的 cDNA。
为了克隆到真正的 cDNA 全长，建⽴富含全长的 cDNA⽂库具有重要意义。
为此，必须克服仅⽤ mRNA 的 PolyA 尾合成以及由普通逆转录酶作⽤特点所导致的局限性。
