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Hedgehog通路与TGF-β通路对肝纤维化的影响

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在胚胎组织和胚胎发育过程中Hedgehog（HH）通路具有非常显著的作用，如增殖、分化、和组织构建等，在成年人的组织和器官中，HH信号传导涉及组织修复和再生。作为对靶基因进行调控的核心因子，Gli能够对TGF-β通路进行调控。对于多种细胞过程，转化生长因子-β（ TGF-β）家族因子都能够进行调控，其中包括细胞外基质合成、细胞迁移、分化和增殖等，对于组织内环境稳定的维持和胚胎发育都能够实现积极的调控作用。 通过对下游Smad蛋白进行介导，依赖Gli2实现对Gli1的快速诱导，进而实现对HH通路的调控。 尽管它们的典型信号转导级联已被很好地表征，但越来越多的证据表明这些途径能够发挥重叠的活性，成为纤维化和癌症的治疗靶向。

1. HH信号通路的调控作用

下游靶基因、转录因子、跨膜蛋白和膜蛋白复合物以及分泌性糖蛋白配体是组成HH通路的主要基本内容。 Desert HH（ Dhh）、 Indian HH（ Ihh）和 Sonic

HH（ Shh）这三种分泌型 Hh配体是哺乳动物最基本的三种配体，并且这三种配体所在区域各不相同。 在毛发、皮肤、肢体、消化道和神经系统当中主要是SHH进行参与； 在胰腺、消化道的发育过程中主要是Ihh进行参与； 外神经周围、胰腺和性腺当中才会有Dhh分布。 其中阳性表达最高、分布最广的蛋白就是Shh。HH信号通路中存在两个跨膜蛋白受体： Smoothened （Smo）和Ptched（Ptch）是，Ptch1与Ptch2分别是Ptch的两个同源基因。 Hh配体与 Ptch的结合活性受到生长阻滞特异基因1（ growth arrestspecific gene1， Gas1）、

Hh相互作用蛋白（ Hip）、细胞黏附分子相关/被癌基因下调基因（ cell adhesion

molecule- related/ down- regulated by oncogenes， Cdon/ Cdo）及其家族成员 Boc等的调节。 Hip抑制Hh与Patch结合，负性调控HH信号通路。 Gas1是一种 GPI锚定细胞表面蛋白，既往认为 Gas1对 Hh与 Ptch结合产生抑制作用，目前则认为其通过结合 Hh信号结合肽以增强传导作用， Cdon/ Cdo及

Boc有利于 Hh与 Ptch结合促进信号传导。作为G蛋白耦联受体超家族的成员之一，Smo主要通过靶基因活性和细胞信号传导。胞质蛋白复合体的主要由 Fu抑制物［（ suppressor of fused， Su（ Fu）］、苏氨酸基和丝氨酸以及类运动蛋白（ Costal-2， Cos2）和锌指转录因子 Gli构成。 Gli1，Gli2，Gli3分别是Gli的三个亚型：分别编码相应蛋白，这些蛋白定位于胞核及细胞基质，其中具有抑制和激活双重功能的是 Gli2，能够发挥转录抑制功能的是 Gli3，而

Gli1的功能就是转录激活。同时参与HH通路转导的核内因子还有蛋白激酶A（PKA）类等。

通常情况下， Smo蛋白和 Ptch结合之后，能够有效的抑制下游通路，从而将 Hh信号控制在静息状态，从而将 HH下游的 Gli效应分子进行磷酸化，最终实现对基因表达的抑制作用。当和 Hh蛋白与 Ptch结合以后， Ptch不再对对 Smo有抑制作用， Smo会将信号传递给由驱动蛋白 Cos2和 Fu组成的蛋白复合体，从 Gli成员中的转录因子（ cubitusinterruptus， ci）向核内进行转移，促使下游基因进行表达。 综上Hh、Smo、Fu能够激动HH信号通路，而Ptch、Cosd2、Su（Fu）起抑制作用。HH信号通路的重要成员Gli蛋白是重要的转录基因，是激活HH通路的重要因子。Gli2作为Gli1的功能上游，同时是HH通路的核心递质，它能和Glil启动因子相结合从而促进Glil表达。 调节HH通路的下游信号通路如TGF-β，Notch，Wnt，EGF等通路，并与之发生交互作用，形成信号网络。

2. TGF-β通路的调控作用 在哺乳动物中的TGF-β配体的产物存在3种形式： TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3。

TGF-β信号通路有 TGF-βⅠ型受体（ Tβ RⅠ）、 TGF-βⅡ型受体（ Tβ RⅡ）与 TGF-βⅢ型受体（ Tβ RⅢ）三种的高亲和力受体， Tβ R- I和 Tβ R-Ⅱ都是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶受体，是细胞内激活 TGF-β信号的基本受体，。 虽然TβR-Ⅲ缺乏固有的酶活性，但是它是最丰富的受体，它作为一个辅助因子调节TGF-β的细胞反应。 作为Sma蛋白和Mad蛋白以及类似物的统称，Smad蛋白可以从其功能和结构上分成三种： 第一种是抑制型（Inhibitory Smad，I-Smad)：

主要为Smad6与Smad7，它们在 TGF-β信号中主要进行负调节作用； 第二种是受体特异型（Receptor-specific Smad，R-Smad)： 它由TβRⅠ所激活的，包括 Smad1、Smad 2、Smad 3、Smad 5与Smad 8 等 ，在 TGF-β家族信号中的发挥传递作用。 第三种就共同型（Common mediator Smad，Co-Smad)：在人体内为 Smad4， R- Smad磷酸化后就会与受体Ⅰ分离，和 Smad4构成杂聚体，入核后实现对靶基因转录的调节。

TGF-β蛋白和细胞膜上的 Tβ RⅠ、 Tβ RⅡ特异性结合形成异源四聚体，具有持续激活活性的 Tβ RⅡ磷酸化复合体中的 Tβ RⅠ，之后对细胞浆中的

Smad2和 Smad3进行磷酸化，然后和 Smad4结合，之后与其他转录因子共同结合，形成多聚体复合物转位至核内并在进行累积，调控靶基因转录。同时，核内具有活性的 Smad2、 Smad3可在磷酸酶 PPM1 A的作用下发生去磷酸化反应，随后被运出细胞核，进行下一个循环的激活反应。 这种途径被为是经典的 TGF-β 信号通路。 除了激活Smad依赖的下游信号，TGF-β还通过可以通过激活各种依赖于Smad2、Smad3的途径发挥作用。撕裂原激活的蛋白激酶( MAPK)家族具有丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶活性，受到促有丝分裂反应物刺激，能够调节细胞分化、增殖、活力和凋亡。 TGF-β能够激活已知的三条 MAPK

信号通路： 细胞外信号调控激酶(ERK)，p38-MAPK和JNK信号通路。它们即能调节 Smad蛋白的作用，也能启动 TGF-β不依赖Smad的信号反应。ERK的活化对Smad通路起到促进或抑制两种相反作用。与之相比，p38-MAPK和JNK信号通路通常增强TGF-β/Smad 效应。此外，p38-MAPK通路介导的TGF-β引起细胞周期暂停功能被认为与Smad蛋白无关。 除了Smad和MAPK，TGF-β通路还能激活Akt和 Rho信号通路，并和Wnt、Notch通路发生协同作用。 此种途径为不经典的TGF-β信号通路。两种TGF-β信号通路之间的不平衡与人类许多疾病发展相关联。

3 HH信号通路与TGF-β信号通路的交互作用

黄大伟等发现通过抗纤软肝颗粒能够抑制Shh、Ptc、Smo、Glil表达从而使TGF-β1表达下调。梁勇等使用特异性阻断剂环靶明( cyclopamine， Cyp)，发现 Smo的下调可降低 TGF-β1的表达，表明 Smo能够调控下游 TGF-β信号通路。 通过膜结合的受体复合物， TGF-β配体对细胞进行应答诱导，磷酸化并活化 Smad，随后其在细胞核中积累，促进靶基因反式激活。 近年来，在肿瘤细胞、胰腺癌细胞和角质细胞当中发现TGF-β信号通路当种的早期目的基因就是Gli2。 TGF-β启动区通过招募 Smad3、 Smad4蛋白形成复合物，和β-

catenin蛋白共同作用诱导 Gli2表达，显示 Gli2表达也可以通过 WNT/β-

catenin通路进行调节。TGF-β信号通路可通过多种机制促成Gli蛋白特异性应答： TGF-β诱导的Gli2蛋白可参与由HH配体激活的信号转导并增强HH诱导型转录应答。 TGF-b可能抑制PKA活性，从而限制蛋白酶体对Gli蛋白的加工; TGF-β诱导的Gli2也可以独立地作用于HH途径并直接激活其转录靶标。 这种机制当种并不会涉及到Ptch／Smo蛋白。

4 HH与TGF-β信号通路对肝纤维的影响

肝纤维化是一中由各种致病因子所致的病理生理过程，表现为组织结缔组织异常增生。 在肝脏修复愈合的过程中，任何肝脏损伤都有肝纤维化的过程，肝纤维长期持续就会破坏组织的正常组织结构， 发展成为肝硬化甚至肝癌。慢性病毒感染、慢性酒精中毒、化学毒物或药物中毒、自身免疫性损伤等多种致病因子可诱发肝纤维化。当组织结构发生改变，肝脏内血管受到压迫后发生扭曲或者闭锁现象，动脉与静脉之间也可能发生“短路”吻合，使门静脉系统的血管阻力显著升高，形成门静脉高压，使脾脏肿大、生成腹水、曲张胃底食管静脉，可能存在上消化道静脉曲张，从而破裂出血的危险。细胞外基质的沉积也会阻碍细胞之间的血液微循环通道，因而造成循环障碍，影响肝细胞的血液供应，受到炎症而损伤的肝细胞不能较好的修复甚至会导致损伤加重，功能正常的肝细胞越来越少，进一步加速肝纤维化的进展。 通过内部环境的改变与外部的治疗，肝纤维化的早期可以被逆转，但是如果肝纤维化持续进展将会导致肝硬化、肝衰竭等，后果将极为严重。

过量细胞外基质的沉积是肝脏纤维化的一个重要特点，肝星状细胞（ HSC）的活化能够调控作用胶原纤维的沉积， 是纤维化过程的关键环节。 同时枯否氏细胞( Kupffer)通过 TGF-β与活性氧物质的作用， 促进基质的合成、细胞的增殖以及 HSC中脂滴的流失； 窦状小管内皮细胞同样也会活化TGF-β，促进纤连蛋白的产生，使HSC的活化；通过血小板衍生生长因子(PDGF)、 TGF-β、表皮生长因子(EGF)，血小板也提供旁分泌刺激。TGF-β可通过下调基质金属蛋白酶（MMPs)同时上调基质金属蛋白酶组织抑制因子（TIMPs），使ECM合成增加而分解减少。在细胞外基质降解的级联蛋白水解过程中，MMPs起着至关重要的作用。内肽酶MMPs拥有高度同源性，能够进行有效分解各种细胞外基质。

TIMPs作为天然的MMPs抑制剂，能够特异性下调MMPs的表达。TGF-β通过诱导HSC从而实现 TIMPs合成的作用，最终对MMPs的表达进行有效抑制，最终实现降解ECM的作用。在胶原分泌与HSC激活中，Hh通路具有重要的调节作用，并且深刻影响着肝纤维化进展。 HH信号通路曾被认为是调节胚胎形成与发育过程中的经典通路，但最新的研究发现，在组织损伤中，它还能调控细胞分化、迁移、增殖及修复。持续或过度的 Hedgehog信号通路活化可诱导 HSC异常激活，实现对α-平滑肌蛋白表达的增加和Ⅰ型胶原蛋白表达的增加，肝组织受到损伤后过度增生，加速肝纤维化发展。 近年来学者发现 HH通路能够激活HSC。当 HH通路被激活时， Gli通过向细胞核转移的方式实现对下游靶基因的转录，对 HSC、窦状内皮细胞以及胆管上皮细胞转换为肌成纤维细胞过程中起着重要作用。在慢性肝损伤的修复过程中，HH信号通路直接调控HSC的上皮-间质转化（Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）、促进肝脏上皮再生修复。同时HH通路与TGF-β等多种信号通路交互作用共同参与肝纤维化的过程。

5 展望

肝纤维化和很多信号通路都有关联， TGF-β通路会参与在肝脏疾病发展的整个过程， HSC活化因子当中最强的就是 TGF-β1，因为下游靶基因和 HH信号通道在细胞内的转移、发育和增殖以及凋亡过程中都具有十分重要的意义。

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肉苁蓉苷A通过TGFβ1VEGF通路对放射性肺炎小鼠肺部氧化应激和炎症指标影响的研究

肉苁蓉苷A通过TGFβ1VEGF通路对放射性肺炎小鼠肺部氧化应激和炎症指标影响的研究

doi:10.3969/j.issn.1000鄄484X.2019.04.009

肉苁蓉苷A通过TGF鄄茁1/VEGF通路对放射性肺炎小鼠肺部氧化应激和炎症指标影响的研究淤

许东风摇杨东明摇冯云枝摇杨明生摇(南阳医专第一附属医院,南阳473000)

摇摇中图分类号摇R563郾1摇摇文献标志码摇A摇摇文章编号摇1000鄄484X(2019)04鄄0429鄄06

淤本文为河南省卫生厅规划基金资助项目(HW鄄2012B鄄018)。作者简介:许东风,男,硕士,副主任医师,主要从事呼吸与危重症医学科方面研究,E鄄mial:xudongfengxx@163郾com。[摘摇要]摇目的:探究肉苁蓉苷A对放射性肺炎小鼠肺部氧化应激及炎症反应的作用及机制。方法:X射线照射复制小鼠放射性肺损伤模型并同时给予肉苁蓉苷A,30d后处死小鼠,用Tunel法检测细胞凋亡情况,试剂盒检测肺匀浆抗氧化酶、氧化产物和炎症因子的含量,免疫组化检测TGF鄄1茁的表达,Westernblot检测TGF鄄1茁/VEGF通路相关蛋白表达。结果:肉苁蓉苷A能显著抑制放射诱导的凋亡小体的形成,能明显升高肺匀浆抗氧化酶GSH鄄PX、T鄄Aoc及SOD的浓度,降低氧化产物MDA浓度;同时,肉苁蓉苷A还能显著降低肺匀浆炎症因子IL鄄6和IL鄄1茁浓度,促进IL鄄10分泌。此外,肉苁蓉苷A能显著减少模型小鼠肺组织TGF鄄茁1的阳性表达,降低TGF鄄茁1、VEGF和VEGFR2的蛋白表达水平。结论:肉苁蓉苷A能抑制放射性肺损伤小鼠肺部的氧化应激和炎症反应,其机制与TGF鄄1茁/VEGF通路有关。[关键词]摇肉苁蓉苷A;氧化应激;炎症反应EffectsofCistanosideAonoxidativestressandinflammatorycytokinesinradiation鄄inducedpulmonaryinjurymiceviaTGF鄄茁1/VEGFpathway

小干扰RNA抑制TIEG基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β信号通路的影响

小干扰RNA抑制TIEG基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β信号通路的影响

中国药物与临床２０１２年７月第ｌ２卷第７期Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｊｕｌｙ　２０１２，Ｖｏ１．１２，Ｎ０．７　

小干扰ＲＮＡ抑制ＴＩＥＧ基因对瘢痕疙瘩　成纤维细胞ＴＧＦ—Ｉ３信号通路的影响　

弓军胜余睿芳兰丽珍　・　８６１　・　

【摘要】　目的用小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）封闭瘢痕疙瘩成纤维细胞中转化生长因子（ＴＧＦ）．Ｂ诱导早期基　因（ＴＩＥＧ）的表达，观察对成纤维细胞ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路基因表达的影响。方法采用小分子ＲＮＡ干扰　（ＲＮＡｉ）技术，用脂质体将ｐＳＵＰＥＲ．ｇｆｐ／ＴＩＥＧ２转染原代培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，应用反转录聚合酶链反应　（ＲＴ—ＰＣＲ）方法检测阻碍内源性ＴＧＦ。１３／Ｓｍａｄｓ信号转导的条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞ＴＩＥＧ、Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ７以及　一平滑肌肌动蛋白（ＳＭＡ）、胶原Ｉ　ｍＲＮＡ表达水平。结果ｐＳＵＰＥＲ．ｇｆｐ／ＴＩＥＧ２可有效干扰瘢痕疙瘩成纤维细胞　中ＴＩＥＧ的表达，并使Ｓｍａｄ２　ｍＲＮＡ表达减弱，Ｓｍａｄ７　ｍＲＮＡ表达增强；同时　．ＳＭＡ和胶原Ｉ　ｍＲＮＡ表达减弱。　结论针对Ｔ１ＥＧ基因的ｓｉＲＮＡ干扰质粒转染瘢痕疙瘩成纤维细胞后能明显抑制ＴＩＥＧ　ｍＲＮＡ表达，并使其调　控ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄｓ信号通路，一定程度上抑制了瘢痕疙瘩中成纤维母细胞转分化及细胞外基质的合成。　【关键词】ＲＮＡ，小分子干扰；转化生长因子Ｂ；瘢痕疙瘩；成纤维细胞；信号传导；ＴＩＥＧ　

Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＴＩＥＧ　ｇｅｎｅ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｎ　ＴＧＦ—Ｂ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｏｆ　ｋｅｌｏｉｄ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｖｉａ　ｓｍａｌｌ　ＲＮＡ　ｉｎｔｅｒｆｅｒ・　ｅｎｃｅ　ＧＯＮＧ　Ｊｕｎ—ｓｈｅｎｇ５　ＹＵ　Ｒｕｉ－ｆａｎｇ，ＬＡＮ　Ｌｉ－ｚｈｅｎ．＊Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＰｌａｓｔｉｃ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｈｏｓｐｉｔｄ　ｏｆ　Ｓｈａｎｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｙｕａｎ　０３０００１，Ｃｈｉｎａ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｔｈｅ　ｉｍｐａｃｔｓ　ｏｆ　ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄｓ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙｓ　ｏｆ　ｋｅｌｏｉｄ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　ｖｉａ　ｂｌｏｃｋａｄｅ　ｏｆ　ＴＩＥＧ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｕｓｉｎｇ　ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ　ＲＮＡ　ｆｓｉＲＮＡ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｈｕｍａｎ　ｋｅｌｏｉｄ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ　（ＫＦＢ）ｗｅｒｅ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐＳＵＰＥＲ．ｇｆｐ／ＴＩＥＧ２　ｆｏｒ　ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｓｉＲＮＡｓ．　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＩＥＧ，　Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ７，ｏ【一ＳＭＡ　ａｎｄ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　Ｉ　ｉｎ　ＫＦＢ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ　ｃｈａｉｎ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　（ＲＴ—ＰＣＲ）ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄｓ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐＳＵＰＥＲ．ｇｆｐ／　ＴＩＥＧ２　ｐｌａｓｍｉｄ　ｗａｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｂｌｏｃｋａｄｅ　ｏｆ　ＴＩＥＧ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ＫＦＢｓ．　ｒ｝ｌｉｓ　ｗａｓ　ａｃｃｏｍｐａｎｉｅｄ　ｂｙ　ｓｕｐ—　ｐｒｅｓｓｅｄ　Ｓｍａｄ２．　—ＳＭＡ　ａｎｄ　ｃｏｌｌａｇｅｎ　Ｉ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｕｐ．ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　Ｓｍａｄ７　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉ０ｎ　ＴＩＥＧ—ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｐｌａｓｍｉｄｓ　ｌｏａｄｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｉＲＮＡｓ　ａｒｅ　ｃａｐａｂｌｅ　ｏｆ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ＴＩＥＧ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｆｔｅｒ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ＫＦＢｓ．Ｔｈｉｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　ｍｅｄｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＴＧＦ一￣／Ｓｍａｄｓ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ａｎｄ　ｍａｙ，ｔｏ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｅｘｔｅｎｔ，ｓｕｐｐｒｅｓｓ　ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ　ｄｉｆ－　ｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｍａｔｒｉｘ　ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ．　【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】ＲＮＡ，ｓｍａｌｌ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎｇ；Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃｔｏｒ　ｂｅｔａ；Ｋｅｌｏｉｄ；Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ；Ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓ—　ｄｕｃｔｉｏｎ；ＴＩＥＧ　瘢痕是皮肤损伤达到一定程度后组织修复的必　然结果，转化生长因子（ＴＧＦ）．Ｂ是瘢痕形成中的关　键性效应因子。参与愈合的所有过程，其过量表达和　持续的高浓度可能成为瘢痕形成的重要原因［　。　ＴＧＦ．Ｂ诱导早期基因（ＴＩＥＧ）属于ＴＧＦ．ｐ诱导的早　期转录基因。可以调节ＴＧＦ．１３／Ｓｍａｄｓ信号通路而增　强其活性［２－４］。因此，本研究用小分子ＲＮＡ干扰　（ＲＮＡｉ）方法阻抑ＴＩＥＧ的生物学效应，并观察其对　ＴＧＦ一１３／Ｓｍａｄｓ信号通路的影响，以明确ＴＩＥＧ在刨伤　愈合和瘢痕形成中的重要价值。　基金项目：山西省青年科技研究基金（２００６０２１０４７）　作者单位：０３０００１太原，山西医科大学第一医院整形外科（弓军　胜、余睿芳），内分泌科（兰丽珍）　通信作者：兰丽珍　１材料与方法　１．１质粒、菌种　ｐＳＵＰＥＲ．ｓｆｐ荧光质粒以及Ｅ．ｃｏｌｉ　ＤＨ５ｃｔ菌株均　由孙辽博士后惠赠。ｐＳＵＰＥＲ．ｇｆｐ／ＴＩＥＧ２为前期设计　完成并证实有效的ＴＩＥＧ　ｓｉＲＮＡ　Ｅ引。　１．２方法　１．２．１成纤维细胞的分离、培养：选用瘢痕疙瘩患者　术中切除的瘢痕疙瘩组织．术前均取得患者或家属　同意。瘢痕疙瘩诊断标准参见文献［６］。将所得标本　用０．９％氯化钠注射液漂洗数次，去除上皮部分，切　成２　ｍｉｎｘ２　ｍｍ大小的组织块，送入无菌培养瓶中　培养，每３　４　ｄ换液１次。待培养的成纤维细胞长满　瓶底后，磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）漂洗１次，用０．２５％胰　

TGF-β超家族成员介导的信号转导通路和对肿瘤发生的影响

TGF-β超家族成员介导的信号转导通路和对肿瘤发生的影响

２０１１年８月第２２期　Ｓｃｉｅｎｃｅ＆ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｖｉｅｗ　科技视界　科教前哨　

子ｅＥＦ１Ａ１Ｓｅｒ一３００磷酸化．而这一位置的磷酸化会导致氨酰　ｔＲＮＡ的补充受阻，从而影响蛋白合成ｉ６／。　

其一是经典的Ｓｍａｄ依赖性信号转导。另外一条则是通　过同Ｇ蛋白、有丝分裂原蛋白相关联的非Ｓｍａｄ依赖性的信　

号转导途径。同时，ＴＧＦ一１３Ｒ　Ｉ还能够直接同ｅＥＦ１Ａ１发生作　用，对蛋白合成进行调控。　

２　ＴＧＦ—Ｄ信号转导通路对肿瘤发生的影响　

ＴＧＦ—ｐ超家族在哺乳动物中有超过３０种的细胞因子，　在胚胎细胞生长发育的早期就已经开始参与细胞的分化调　控。除此之外，ＴＧＦ一１３超家族还通过信号转导广泛参与各种　

细胞和组织的调控，如参与软骨细胞的生长、分化、增殖．成　

熟和凋亡，抑制淋巴细胞、免疫活性细胞的分化、增殖等。近　年来发现，ＴＧＦ一１３超家族成员介导的信号转导对卵泡细胞　

和卵母细胞的生长发育及成熟也起重要的调控作用［８１。同时　

研究还发现ＴＧＦ—Ｂ超家族成员介导的信号转导对肿瘤的发　生有重要影响，在信号转导途径中，任何一个转导成员表达　

异常或突变、失活都将使机体细胞丧失ＴＧＦ—Ｂ的对细胞增　殖调控的生物学效应而导致肿瘤的发生［９１。　

２．１　ＴＧＦ－１３对细胞周期的调控　真核生物的细胞周期主要包括Ｇ１期、ＤＮＡ合成期（ｓ　

期）、Ｇ２期和有丝分裂期（Ｍ期），而细胞不同时期之间的转　

换要依赖一系列的细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激　

酶（Ｃｄｋ）。ＴＧＦ一１３对细胞命运的调控主要是通过对Ｃｄｋ、分　化因子和肿瘤抑制因子的表达等来调控细胞增殖和分化。　

ＴＧＦ—Ｂ对细胞周期的调控主要发生在Ｇ１期，ＴＧＦ一１３能够诱　导Ｃｄｋ４合成水平降低，进而抑制Ｃｄｋ２的活化而抑制细胞增　

殖。ＴＧＦ—Ｂ在行使这一功能时，主要是通过诱导或激活肿瘤　抑制因子如ｐ１５和ｐ２７等，进而协同抑制细胞周期蛋白依赖　

性蛋白激酶的功能。尽管ＴＧＦ—ｐ受体引导的下游信号通路　

加味当归补血汤对肾小管上皮细胞TGF-β1／SMADs信号转导通路的影响

加味当归补血汤对肾小管上皮细胞TGF-β1／SMADs信号转导通路的影响

匝医结合肾病杂志２００７年９月第８卷第９期ｃＪＩ１ｗＮ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ　２００７，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．９　

・实验论著・　・５０３・　

加味当归补血汤对肾小管上皮细胞ＴＧＦ—ｌ３１／　

ＳＭＡＤｓ信号转导通路的影响　＊　

张敏鸥①　卜爽剡②　王永钧①　朱晓玲①　杨汝春①　王豫巍③　

［摘要］　目的：观察加味当归补血汤对转化生长因子Ｂｌ（ＴＧＦ一禹）刺激的小鼠肾小管上皮细胞Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４、Ｓｍａｄ７　

信号通路的影响，探讨该方防治肾间质纤维化的细胞分子生物学机制。方法：原代培养ＢａｌＢ／Ｃ小鼠肾小管上皮细胞．用　

ＴＧＦ一岛（１　ｎｇ／ｍ１）刺激２４　ｈ，加味当归补血汤及洛汀新含药血清干预。共分６组：正常组、模型组、加味当归补血汤低中高剂　

量组（含药血清浓度分别为２．５％、５％、１０％）、洛汀新组，观察各组细胞形态学变化，检测细胞Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４、Ｓｍａｄ７的ｍＲ—　

ＮＡ和蛋白质表达情况（Ｆｒｒ—ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ—Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）。结果：（１）ＴＧＦ一　刺激后，肾小管上皮细胞部分形态发生变大，伸　

长，呈梭形，经中药加味当归补血汤和洛汀新干预后，细胞形态又恢复正常；（２）ＴＧＦ一　刺激肾小管上皮细胞后，Ｓｍａｄ３、　

Ｓｍａｄ４　ｍＲＮＡ和蛋白质表达显著增加，Ｓｍａｄ７　ｍＲＮＡ和蛋白质则显著减少（Ｐ＜０、０５～０、０１）；（３）各浓度加味当归补血汤能　显著下调异常增高的Ｓｍａｄ３，上调Ｓｍａｄ７的基因和蛋白质表达水平（Ｐ＜０．０５－－０．０１），能显著下调Ｓｍａｄ４基因表达。结论：　加味当归补血汤防治肾问质纤维化可能与调控肾小管上皮细胞ＴＧＦ一　／Ｓｍａｄｓ信号转导途径相关。　

［关键词］　加味当归补血汤　肾小管上皮细胞转化生长因子　Ｓｍａｄｓ　

Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｊｉａ　Ｗｅｉ　Ｄａｎｇ　Ｇｕｉ　Ｂｕ　Ｘｕｅ　Ｔａｎｇ　ｏｎ　ＴＧＦ—ｐ１／ＳＭＡＤｓ　

Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　Ｒｅｎａｌ　Ｔｕｂｕｌａｒ　Ｅｐｉｔｈｅｌｉａ　Ｃｅｌｌｓ