猪肉和牛奶中氯霉素残留的高效液相色谱检测实验报告

ICS：65.020.30DB 备案号：四川省地方标准DB51/T 676—2007牛奶中氯霉素残留检测方法－高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法Determination of chloramphenicol residues in milkby high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry目次前言 (II)1 范围 (1)2 规范性引用文件 (1)3 制样 (1)3.1 样品的制备 (1)3.2 样品的保存 (1)4 测定方法 (1)4.1 方法提要或原理 (1)4.2 试剂和材料 (1)4.3 仪器和设备 (2)4.4 测定步骤 (2)4.5 结果计算和表述 (3)5 检测方法灵敏度、准确度、精密度 (4)5.1 灵敏度 (4)5.2 准确度 (4)5.3 精密度 (4)附录 A （资料性附录）氯霉素特征离子质量色谱图、特征离子质谱图 (5)I前言本标准按GB/T1.1—2000 《标准的结构和编写规则》进行编制本标准附录是资料性附录本标准由四川省畜牧食品局提出并归口本标准由四川省质量技术监督局批准本标准起草单位：四川省兽药残留监控中心、四川省兽药监察所本标准主要起草人：彭莉、岳秀英、高岚、熊浩山、官艳丽、王海波、吴晓岚II牛奶中氯霉素残留检测方法－高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）法1 范围本标准规定了牛奶中氯霉素残留量检测的制样和高效液相色谱-串联质谱（LC-MS-MS）测定方法。

本标准适用于牛奶中氯霉素的残留量测定。

检出限为0.05µg/L。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定
氯霉素是一种广谱抗菌药，常用于治疗动物疾病。

过量使用氯霉素类药物可能导致残留物在动物源性食品中积累，对人体健康产生潜在风险。

准确测定动物源性食品中氯霉素类药物残留量成为保障公众健康的重要问题。

动物源性食品中氯霉素类药物残留量的测定方法有多种，包括色谱法、质谱法和免疫学法等。

高效液相色谱法（HPLC）被广泛应用于测定氯霉素类药物的残留量。

第一步：样品处理
将待测样品（如肉类、奶类等）称取适量，加入磷酸盐缓冲液中，进行均匀混合。

然后，使用离心机进行离心，将澄清的上层液体转移至新的离心管中。

第二步：萃取
将第一步得到的上层液体与乙酸乙酯混合，进行振荡和离心分离。

离心后，将乙酸乙酯层取出，并使用氮气吹干。

第三步：溶解
将第二步得到的干燥残留物用甲醇溶解，得到测试溶液。

第四步：色谱分析
将测试溶液通过HPLC进行分析。

选择适当的色谱柱和移动相，设置合适的流速和检测波长。

根据氯霉素类药物的特征峰进行定量分析。

根据已知浓度的标准品制备多个浓度的标准曲线，从而计算待测样品中氯霉素类药物的浓度。

第五步：结果判断
根据分析结果，判断待测样品中氯霉素类药物的残留量是否符合国家标准要求。

如果超过标准限量，则建议不使用该样品，以防止对人体健康造成潜在风险。

HPLC是一种常用于测定动物源性食品中氯霉素类药物残留量的方法。

通过样品处理、萃取、溶解和色谱分析等步骤，可以准确测定残留物的含量，并对公众健康提供保障。

肉类中氯霉素(CAP)的高效液相色谱测定法________________________________________分类：一般性问题|食品工业|轻工业、手工业|工业技术作者：于国胜关键词：肉类氯霉素高效液相色谱期刊名称：分析测试通报.1991,10(4).-75-76全文长度：2579个字机构：分类号：TS202全文：肉类中氯霉素(CAP)的高效液相色谱测定法肉类氯霉素高效液相色谱分析测试通报于国胜不详1991 第ｌ卷第４（９１）０期１９分析测试通报肉类中氯霉素（Ａ）高效液相色谱测定法ＣＰ的于国胜（青岛市卫生防疫站）擅要本文叙述用高教液相色谱法对注入猪体中的氯霉素进行测定的方法。

此法检出下限为００２．０ｍｇｋ｝对于含量为００ｉｇｋ／ｇ．ｌ／ｇ量级的回收率为７。

ｎ５美■词；氯霉索，肉类，高效液相色谱。

’为防止猪牛、羊肉发生霉变、腐烂，在其屠宰前常注射氯霉素（ＡＰ）抗菌素。

测定Ｃ等食用肉中ＣＰＡ方法。

含量，日益受到国内外的重视。

目前，我国尚无测定肉类ＣＰＡ含量的标准实一验部分、试剂：如无特殊要求，必须是分析纯以上。

水应为微孔过滤水。

１规格为２ｍｌ．０的样品预处理柱（商品货号为Ｍｅｋａｔ１３ｒｒ１７７）｝２二氯甲烷｝．．３甲苄｝４乙腈（紫外光谱纯）。

．二、醋酸缓冲溶液“溶解０８ｇ台醋酸钠到７０水中，以５醋酸溶液调节ｐ。

：．２水０ｍｌＯＨ为４３．。

转移该溶液到１容量瓶中，稀至刻度，摇匀。

然后通过０４１滤膜过滤。

此即为Ｌ．５ｍｔ００Ｍｐ＝４３醋酸缓冲液。

．１Ｈ．的三，ＩＰＣ洗脱液：）７０－ＬＩ）５ｍｌ醋酸缓冲液到２０乙腈中，混匀，脱气。

１］５ｍｌ四、ＣＡＰ标准液配制：称取１．ｍｇＡＰ以甲醇溶解并稀至１０。

取出５，以水稀００Ｃ，０ｍｌｍｌ至１０。

然后从水溶液中取出１，２，５ｍｌ分别以水稀至１０ｎ。

此标准溶液的浓度分别０ｍｌ，０ｒｌ为００。

０１，Ｏ２ｇ／。

．５．０．５ｇｍｌ五仪器：１肉类粉碎机；２液体混合器Ｊ．心机Ｊ．有氮气吹干装置和旋转式蒸．．３离４带发器的恒温水培及电热块（ｔｂｃＪ．Ｈｏｌｋ）５振荡器ｊ６ｐ７ＷａｒＭ－００高效液相ｏ．ｍｉ．ｔｓＢ０型ｅ色谱。

河南畜牧兽医２００７年（第２８卷）第２期综合版专论综述专论综述高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素残留的研究综述李红１，张莹蕾２，李永军１，马伟华１（１．河南省乳品工程技术研究中心，河南郑州４５０００８；２．河南三鹿花花牛乳业有限公司）中图分类号：Ｓ８５９．８４文献标识码：Ｂ文章编号：１００４－５０９０（２００７）０３－００１１－０１氯霉素抗菌谱较广，能抑制革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，由于其价格低廉、抗菌性能好，是预防和治疗牛乳房炎等疾病的主要药物，但其残留对人体健康的危害不容忽视，它能够导致严重的再生障碍性贫血，并且其发生与使用剂量和频率无关。

因此，近年来美国和欧盟对动物食品中的氯霉素残留量都制定了严格的限制指标，残留量不得超过０．１μｇ／ｋｇ。

我国农业部已禁止使用该药，无论内销还是出口的畜产品，氯霉素残留都是必检项目。

到现在为止，氯霉素残留的检测已相继建立了气相色谱、液相色谱、薄层色谱、放射性分析、微生物法及免疫学检测等方法。

高效液相色谱法是一种快速有效的分离分析技术，它引入了气相色谱理论，在技术上采用高压泵、高效固定和高灵敏度检测器，实现了分离速度快、效率高和操作自动化。

高效液相色谱法测定牛奶中的氯霉素残留都要经过提取、层析柱净化、浓缩以及残留药物分离和检测。

该文就从这四个方面对高效液相色谱法测定牛奶中氯霉素的残留进行概述。

１样品的提取与净化１．１样品的提取牛奶中含有大量蛋白质、脂肪、糖类、维生素、无机盐、水分等，这些样品基质的存在不但干扰待测物的检测，而且污染仪器和降低设备使用寿命，因此需要选择合理有效的提取方法。

为了从牛奶样品中提取氯霉素，首先要使蛋白质变性，破坏其胶体状态。

从牛奶中提取氯霉素使用最多的是乙酸乙酯和乙腈，乙酸乙酯既能有效提取氯霉素，又能减少牛奶中蛋白质等水溶性杂质被萃取到溶剂中。

乙腈能够有效除去牛奶中的蛋白质，但萃取效率没有乙酸乙酯高。

使用高氯酸溶液能有效地净化残留物，减少对氯霉素的干扰。

一、实验目的本实验旨在通过胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行快速、准确的检测，为食品安全监管提供技术支持。

二、实验原理氯霉素残留检验实验采用胶体金免疫层析法，该方法基于抗原抗体特异性结合的原理。

当氯霉素样品与标记有抗氯霉素单克隆抗体的胶体金颗粒混合时，如果样品中含有氯霉素，则氯霉素会与抗氯霉素单克隆抗体结合，形成抗原抗体复合物。

复合物在层析膜上通过毛细作用向前移动，与固定在层析膜上的抗氯霉素抗体结合，形成金标记的抗原抗体复合物，最终在层析膜上形成两条色带：控制线（C）和测试线（T）。

如果样品中氯霉素浓度超过检测限，则在测试线上形成明显的色带；如果样品中氯霉素浓度低于检测限，则测试线上无色带。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）氯霉素标准品（2）阴性对照样品（3）阳性对照样品（4）氯霉素残留样品（5）胶体金免疫层析试纸条（6）试剂：缓冲液、洗涤液、封闭液等2. 实验仪器：（1）电子天平（2）恒温培养箱（3）移液器（4）微量加样器（5）一次性无菌手套四、实验方法1. 样品处理（1）准确称取氯霉素残留样品0.1g，加入1ml缓冲液，涡旋混匀，室温下放置10min。

（2）取1ml样品溶液，加入1ml洗涤液，涡旋混匀，室温下放置5min。

（3）重复步骤（2）两次。

2. 检测（1）取一条胶体金免疫层析试纸条，将样品加样孔浸入样品溶液中，室温下放置5min。

（2）取出试纸条，观察结果。

五、实验结果与分析1. 阳性对照实验阳性对照样品在测试线上形成明显的色带，说明试纸条的性能良好。

2. 阴性对照实验阴性对照样品在测试线上无色带，说明试纸条对阴性样品具有良好的检测效果。

3. 样品检测根据实验结果，氯霉素残留样品在测试线上形成明显的色带，说明样品中氯霉素残留量超过检测限。

六、实验结论本实验采用胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行检测，结果表明该方法具有快速、简便、准确的特点，适用于食品中氯霉素残留的现场快速检测。

食品工业防褐变、保脆和消毒等多种功能于一体,只需一个单元操作———护色保脆,即可同时达到上述目的。

该护色保脆剂的配方为:亚硫酸钠0120%或焦亚硫酸钠0110%、柠檬酸012%、氯化钙011%、氯化钠014%。

防腐保鲜剂:该剂有两种配方,具有防腐保鲜和防褐变等功能。

一种供带汤汁产品使用,即汤汁配料,其配方为:柠檬酸012%、氯化钠014%、双乙酸钠016%或双乙酸钠012%+山梨酸钾012%、另一种供不带汤汁产品使用,其配方为:柠檬酸012%、氯化钠014%、双乙酸钠115%或山梨酸钾015%+双乙酸钠110%。

虽然在单因子试验中,抗坏血酸钠具有很好的防褐变效果,EDT A对褐变也有一定的抑制作用,但在复合试剂试验中却发现,加有抗坏血酸钠的样品较未加抗坏血酸钠的样品易于褐变,加有EDT A的样品细菌总数远高于未加EDT A的样品,使用焦磷酸钠和不使用焦磷酸钠的试样无明显差别。

故在复合试剂中不使用这三种试剂。

4结论4.1产品感官品质色泽洁白自然,基本保持了原藕的天然色泽,无漂白色;藕片厚薄均匀一致,为2～5mm;汤汁澄清透明,无肉眼可见外来杂质。

具有良好的清脆度;具有原藕的自然风味,无酸涩味及其他异味。

在0～5℃贮藏6个月后,产品仍色白无褐变、带汤汁产品汤汁澄清透明。

4.2卫生品质产品在0～5℃贮藏6个月后:细菌总数:带汤汁产品155个/g,不带汤汁产品167个/g;SO2残留(微量滴定法):带汤汁产品:22～26m g/ k g,不带汤汁产品:28～30m g/k g。

山梨酸残留(高效液相色谱):带汤汁产品:88～102m g/k g,不带汤汁产品:306～309m g/k g。

主要参考文献[1]潘思轶等.莲藕爽汁饮料护色方法及品味调配试验研究.食品科学,1995,(5):30～36.[2]张有林等.莲藕贮期褐变机理与防褐变技术研究.食品工业技术,2003,(1):87～89.[3]胡晓丹等.莲藕酶促褐变的研究.江苏食品与发酵, 1999,(2):1～4.[4]郁志芳等.鲜切莲藕酶促褐变底物的分析确定.食品科学,2002,(4):41～44.[5]陈移平等.水煮莲藕漂白护色工艺研究.食品工业科技,2003,(11):48～49.[6]严守雷等.水煮莲藕片研制工艺学探讨.保鲜与加工,2002,(3):12～14.食品检测摘要建立了对牛奶中氯霉素残留量进行检测的高效液相色谱-荧光测定方法的研究。

Food Science And Technology And Economy粮食科技与经济2023 年10月第48卷 第5期Oct. 2023V ol.48, No.5畜牧业中兽药残留常有报道，常见超标兽药有驱虫药、抗原虫药[1]、生长促进或者抑制剂、抗菌类或者抗生素类物质[2]等，其中氯霉素是一种常见兽药残留物。

氯霉素为一种广谱抗生素，具备显著抗菌效果，临床上对家禽副伤寒、幼畜副伤寒等多液相质谱联用测定猪肉中氯霉素残留量黄仁贵1，王 洁2，马 龙1，蒋 丽1，陈 丹3，陈彦霖3，周海旭4（1. 重庆仕益产品质量检测有限责任公司，重庆 401120；2. 重庆能院食品检测有限公司，重庆 402200；3. 赛旺检验检测认证有限公司，重庆 400000；4. 河南科技学院，河南 新乡 453003）摘要：为提高猪肉中氯霉素残留分析效率，在重庆市永川区4个农贸市场各购选5组新鲜猪肉，各自混合均匀制备成4组分析样品，经乙酸乙酯提取后使用氮吹仪浓缩至近干，残渣用水溶解，然后以正己烷脱脂，采用甲醇—水进行洗脱，经色谱柱分离后，采用多反应监测ESI -模式进行定性及同位素内标法定量分析。

结果显示，氯霉素在0.1～0.8 ng/mL 范围内线性良好，相关系数R 2＞0.999，相对标准偏差为4.2%～8.2%，回收率为82.7%～117.5%。

所选样品检测结果均为阴性，表明永川区所选区域抽检猪肉品质良好。

该法虽不能针对每一组样品进行独立检测分析并出具检测报告，但可在大批量样品中初步筛选残留氯霉素的样品，缩小筛查范围，提高猪肉中氯霉素残留物监控效率。

关键词：液相质谱；测定；氯霉素；猪肉；残留量中图分类号：TS251.7 文献标志码：A DOI：10.16465/431252ts.20230524Determination of chloramphenicol residues inpork by liquid chromatography-mass spectrometryHuang Rengui 1, Wang Jie 2, Ma Long 1, Jiang Li 1, Chen Dan 3, Chen Yanlin 3, Zhou Haixu 4( 1. Chongqing SIIE Product Quality Inspection Co., Ltd., Chongqing 401120; 2. Chongqing Energy Institute Food Testing Co., Ltd., Chongqing 402200; 3. Saiwang Inspection and Certification Co., Ltd., Chongqing 400000;4. Henan University of Science and Technology, Xinxiang, Henan 453003 )Abstract: In order to improve the efficiency of analysis of the chloramphenicol residues in pork, five groups of fresh pork were purchased from each of the four agricultural markets in Yongchuan District, Chongqin Province and then mixed uniformly to prepare four analytical samples. After extracted with alkaline ethyl acetate, the residue was concentrated to nearly dry with a nitrogen blowing instrument. The residue was dissolved in water, then degreased with n-hexane, eluted with methanol-water, and separated by a chromatographic column, the multi-reaction monitoring ESI mode was used for qualitative analysis and the isotope internal standard method for quantitative analysis. The results showed that the linearity of chloramphenicol was good in the range of 0.1～ 0.8 ng/mL, the correlation coefficient was greater than 0.999(R 2＞0.999), the relative standard deviation was 4.2%～8.2%, the recovery rate was 82.7%～117.5%, and the test results of the selected samples were negative, indicating that the quality of the pork in the selected areas of Yongchuan District was good. This method couldn't conduct independent detection and issued a detection report, but it could initially screen residual chlorampheni-col sample in a large number of samples, which narrowed the scope of screening, and improved the monitoring efficiency of chloramphenicol residues in pork.Key words: liquid chromatography-mass spectrometry, detection, chloramphenicol, pork, residual收稿日期：2023-05-07作者简介：黄仁贵，男，硕士，工程师，研究方向为食品化工产品检测分析。

液相色谱串联质谱内标法测定猪肉中氯霉素的不确定度评定作者：鞠中杰,王倩倩来源：《现代食品》 2019年第6期摘要:对采用高效液相色谱串联质谱内标法检测定猪肉中的氯霉素含量的不确定度进行分析评定,分析了不确定度的来源。

结果表明:量化合成各不确定度分量得出不确定度评定结果为(0.098±0.006) ru,g.kg。

1,k=2:同时得出影响检测结果不确定度的主要因素是标准溶液的配制标,样品的前处理和标准曲线的拟合。

关键词:不确定度:液相色谱串联质谱法:氯霉素氯霉素是一种廉价广谱抗生素,曾被广泛用于家畜和水产品养殖业。

研究证明,氯霉素对人体有具明显的毒副作用,如抑制骨髓造血功能,造成再牛障碍性贫血以及胃肠和神经系统病变等。

由于食物链的传导作用食物中的氯霉素残留将对人体健康造成很大危害[2-3]。

农业部235号公告,规定在动物源性食品中不得检出氯霉素。

本文采用高效液相色谱串联质谱法测定猪肉中氯霉素含量,参照JJF1059.1-2012《测量不确定的评定与表示》对方法的不确定度进行分析评定,从而提高检测结果的准确性。

1 材料与方法1.1 主要仪器与试剂1.1.1仪器与设备液相色谱质谱联用仪(美国ABSCIEX公司,5500)配电喷雾离子源、电子天平(德国赛多利斯公司,SQP)、色谱柱(ZPRBAXEclipsePlusC18( 2.1 mm×100 mm,3.5 11m)。

1.1.2试剂氯霉素标准品(农业部环境保护科研监测所)、氯霉素-D5(北京坛墨质检有限公司)、甲醇(色谱纯)、乙酸乙酯(色谱纯),其他试剂采用优级纯。

1.2样品的前处理准确称取样品5g(精确至O.OOOlg)于50 mL的离心管巾,加入200 V,L 10 ng.mL-1的氯霉素-D;内标液,加入20 mL乙酸乙酯提取液、5g无水硫酸钠,经高速分散器匀质提取,离心,收集上清液于鸡心瓶中。

用乙酸乙酯清洗分散器刀头,合并清洗液。

第29卷2001年7月 分析化学(FE NXI H UAX UE )　研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry 第7期779～781柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中5种青霉素残留量王　超3　王　星(中国进出口商品检验技术研究所,北京100025)摘　要　样品采用乙腈直接提取,离心分离及用液2液分配和固相萃取(C 18柱)净化方式,经衍生后,用液相色谱紫外检测器测定猪肉中5种青霉素残留量。

使用的分离柱是N ova Pak C 18柱,流动相为乙腈和磷酸盐混合液。

方法检出限0.02mg/kg ,回收率为70.9%～96.5%,相对标准偏差为3.10%～6.71%。

关键词　青霉素,残留,高效液相色谱,猪肉,柱前衍生化　2000208210收稿;2001201219接受1　引 言青霉素作为治疗家畜疾病的抗菌剂已获得广泛应用。

当食用肉食品时,可能会受到青霉素残留的危害。

为了保证人类食品的安全,欧盟对肉中青霉素最高残留限量规定为苄青霉素0.05mg/kg ,苯唑青霉素、邻氯青霉素和双氯青霉素分别为0.3mg/kg 。

测定猪肉中青霉素的方法已有许多报道,但对多种青霉素残留的测定方法,都是使用离子对反相色谱进行分离测定〔1～3〕。

由于离子对试剂对色谱的分离影响较大,作者报道了用反相液相色谱分离测定牛奶中多种青霉素残留量的方法〔4〕,在此基础上,本文通过增加样品脱脂净化处理,采用柱前衍生高效液相色谱法测定猪肉中多种青霉素残留量。

并用于实际样品分析,结果满意。

2　实验部分2.1　仪器与试剂日本岛津LC 210AD 高效液相色谱仪,RF 210A 紫外检测器,CR 27AD 数据处理机。

净化柱为Supel 2clean T M LC 218SPE Tubes (3m L )。

磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫代硫酸钠、氯化汞、氯化钠、氢氧化钠和正己烷为分析纯。

乙腈为色谱纯。

水为蒸馏水或相应的去离子水。