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水产品中氯霉素残留检测方法氯霉素（Chloramphenicol，简称CAP）是一种广谱抗菌药物，在水产品中的残留对人体健康具有潜在风险。
因此，准确快速地检测水产品中的氯霉素残留是非常重要的。
目前，常用的氯霉素残留检测方法包括高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附测定法等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的氯霉素残留检测方法之一、它利用色谱柱进行分离，通过比色法或荧光法进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品进行提取，常用的提取剂包括乙腈、甲醇等。
然后，将提取液通过色谱柱进行分离，同时通过流动相的携带进行样品的洗脱。
最后，通过比色法或荧光法对洗脱液进行检测和定量。
HPLC方法具有准确、灵敏、高效的优点，但是需要较昂贵的设备和试剂，并且操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
液相色谱-质谱法（LC-MS）是一种结合了液相色谱和质谱的分析技术，可以实现对氯霉素残留的准确定量和结构鉴定。
与HPLC相比，LC-MS具有更高的灵敏度和特异性。
它可以通过质谱仪对分离出的化合物进行分析，从而实现对氯霉素残留的快速检测。
然而，LC-MS方法需要昂贵的设备和试剂，并且需要经验丰富的操作人员进行操作。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于免疫学原理的检测方法，可以实现对氯霉素残留的高效筛查。
ELISA方法的原理是将待检样品与特异性抗体结合，然后通过酶标记二抗进行检测。
具体步骤如下：首先，将待测样品和抗体溶液进行孵育，使得残留的氯霉素与抗体结合。
然后，通过酶标记的二抗与结合的复合物发生反应，产生可观测的信号。
最后，通过比色法或发光法对信号进行检测和定量。
ELISA方法具有灵敏度高、操作简便、成本低等优点，但是其结果可能受到其他因素的干扰，需要进一步的确认。
综上所述，水产品中氯霉素残留的检测方法有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法和酶联免疫吸附测定法。
这些方法各有优缺点，选择适合的检测方法需要根据实际情况进行评估和决策。
疾病种类较多，需要因症制宜地采取治疗措施。
比如，在脑膜炎、败血症方面有显著表现者，可以给予地塞米松；而对于淋巴结脓肿类症状者，则宜采用成熟后的治疗，也可以通过简单的手术进行切破处理，然后进行排脓汁、冲洗（以1%高锰酸甲、3%双氧水皆可）、伤口处理（如碘酊涂抹）等，完成后可以选用对应药物治疗。
3结语农村猪养殖方面的疾病预防控制只有通过基层政府的宣传，防疫站的帮助与指导，以及农户对猪养殖相关知识与技术的积极了解、学习，才能从多个方面共同促进猪养殖水平的提升。
建议利用回乡就业指导部门、现阶段成立的新型合作社等组织，尤其是借助我国农村各地的“党员之家”发挥组织效用，为农村的猪养殖提供更好的养殖服务，包括品种的引入、猪养殖相关手册的发放、视频的集中传播，尤其是需要加强上门指导；同时，需要防疫站实施由上到下的下基层防疫，提高对猪类疫情的防控水平，为提高养殖效益提供技术支持。
参考文献［1］皮祖超.浅谈呼吸道疫病在猪养殖中的发病原因和防制措施［J］.畜禽业，2015（3）：8-9.［2］李果夫.繁殖障碍性疫病在猪养殖中的诊断和防治［J］.养殖与饲料，2015（3）：30-31.水产品中氯霉素药物残留检测方法分析卓二妹（中山市古镇镇农业服务中心，广东中山528421）［摘要］氯霉素为一种广谱抗生素，可以有效抑制多种病原菌，但是其也具有很强的毒副作用，所以被明确规定不得在动物源食品中检出，已经被我国列为禁用兽药。
为保证食品安全，需要加强对水产品内氯霉素药物残留检测研究，应用有效检测技术，确定其含量是否在规定范围内，以避免对人体健康造成不良影响。
本文就水产品氯霉素药物残留检测方法进行简要分析。
［关键词］水产品；氯霉素；药物残留［中图分类号］S948［文献标识码］A［文章编号］1674-7909（2017）08-63-2随着生活水平的提高，人们对食品安全要求更为严格，尤其是各种药物在动物中的应用，因为药品残留已成为威胁人体健康的重要因素。
气相色谱法测定水产品中氯霉素类药物残留量作者：陈树鹏黎素菊陈晓衔洪捷娴李锦雯来源：《农家科技下旬刊》2017年第08期摘要：氯霉素被广泛应用于水产动物病害的预防和治疗，造成动物性食品中的残留，对人类产生了严重的副作用。
本文介绍了水产品中氯霉素类药物残留量的气相色谱法。
结果表明：该方法的线性系数在0.99以上，检出限可达到0.01mg/kg。
方法灵敏度高，回收率及精密度均达到分析要求。
关键词：气相色谱法；氯霉素；优化；精密度氯霉素是一种广谱、高效的抗生素类药物，由于其效高价廉，曾在水产养殖业中得到了较为广泛的应用，同时也不可避免地带来了残留问题。
残留在水产品中氯霉素会对人体的造血等功能产生不良影响，甚至引起粒状白细胞缺乏、不可逆的再生障碍性贫血、新生儿的灰婴综合症等疾病。
因此，氯霉素残留问题需要引起高度的重视，国内外对水产品中氯霉素残留监控特别严格，而且允许残留量都非常低，一般在1μg/kg以下。
目前一般常用的氯霉素残留量的检测标准有气相色谱法（GC-ECD）、液相色谱法（HPLC-UV）、酶联免疫吸附试验法（ELISA）及气-质联用法（GC/MS）等。
基于此，本文建立了分析水产品中氯霉素类药物残留的气相色谱法，方法准确可靠、灵敏度高。
一、材料与方法1.材料（1）试验原材料。
鱼肉组织，市场销售。
（2）主要试剂与材料。
乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈（色谱纯）；氯霉素标准、衍生化试剂BSTFA；C18固相萃取柱。
（3）主要仪器。
气质联用仪；均质机；固相萃取装置；分析天平；氮吹仪；旋转蒸发仪。
2.标准溶液配制氯霉素标准溶液：配制100mg/L的标准储备液，保存于1～4℃冰箱中冷藏，使用时用甲醇稀释至相应浓度做标准工作曲线。
3.样品前处理（1）分离提取。
准确称取鱼肉（鱼糜状）（5±0.01）g于具塞离心管中，加入20mL乙酸乙酯，在组织匀浆机均质1min后，用15mL乙酸乙酯清洗刀头倒入离心管中，高速离心机10000r/min离心3min，将上清液倒入浓缩品中，浓缩近干，用甲醇-水（V：V=1：1）溶液5mL定容，待净化。
FOOD INDUSTRY ·127水产品中氯霉素残留检测方法 李梓建 广东省汕头市食品检验检测中心 广东省汕头市质量计量监督检测所氯霉素是一种广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
近年来，在水产品养殖和运输过程中违规使用氯霉素的现象屡见不鲜，问题日益突出，严重威胁到了人民群众的健康。
本文简述了水产品中氯霉素残留的多种检测方法，包括色谱分析法、微生物法、免疫分析法以及生物传感器、生物芯片等新型检测技术，并对其优缺点进行了比较分析，以期为水产品中氯霉素残留检测提供参考。
最后本文还对氯霉素残留检测方法的发展趋势进行了展望。
氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｈｌｏｒｏｍｙｃｅｔｉｎ）是白色或无色的针状或片状结晶，由委内瑞拉链丝菌产生的抗生素。
大卫·戈特利布于１９４７年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌成功分离，并于１９４９年合成并引入临床试验。
它属于抑菌性广谱抗生素，也是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素，对很多不同种类的微生物均起显著作用。
但是，由于它对造血系统有严重不良反应，需要慎重使用。
检测方法分析的必要性水产品营养丰富，品种繁多且风味各异，深受老百姓的喜爱，需求量也是与日俱增，这在很大程度上促进了我国水产品养殖业规模的发展。
然而，伴随着发展而来的是越来越多的抗生素类药物被应用其中，由于部分养殖户和商家不遵守国家有关规定及未合理使用药物，造成抗生素在水产品中残留居高不下。
其中，氯霉素药物的违规使用更是屡见不鲜，甚至让水产品成为食品安全的重灾区之一。
由于氯霉素药物存在严重的毒副作用，能够抑制骨髓造血功能、引发再生障碍贫血、粒状白细缺乏症和新生儿、早产儿灰色综合症等，美国、欧盟、日本等很多国家都禁止其在动物源性食品中检出。
依据中华人民共和国农业部公告第２３５号中《动物性食品中兽药最高残留限量》（发布日期：２００２年１２月２４日）的规定，氯霉素为禁止使用的药物，在动物性食品中不得检出。
一、实验目的本实验旨在通过胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行快速、准确的检测，为食品安全监管提供技术支持。
二、实验原理氯霉素残留检验实验采用胶体金免疫层析法，该方法基于抗原抗体特异性结合的原理。
当氯霉素样品与标记有抗氯霉素单克隆抗体的胶体金颗粒混合时，如果样品中含有氯霉素，则氯霉素会与抗氯霉素单克隆抗体结合，形成抗原抗体复合物。
复合物在层析膜上通过毛细作用向前移动，与固定在层析膜上的抗氯霉素抗体结合，形成金标记的抗原抗体复合物，最终在层析膜上形成两条色带：控制线（C）和测试线（T）。
如果样品中氯霉素浓度超过检测限，则在测试线上形成明显的色带；如果样品中氯霉素浓度低于检测限，则测试线上无色带。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）氯霉素标准品（2）阴性对照样品（3）阳性对照样品（4）氯霉素残留样品（5）胶体金免疫层析试纸条（6）试剂：缓冲液、洗涤液、封闭液等2. 实验仪器：（1）电子天平（2）恒温培养箱（3）移液器（4）微量加样器（5）一次性无菌手套四、实验方法1. 样品处理（1）准确称取氯霉素残留样品0.1g，加入1ml缓冲液，涡旋混匀，室温下放置10min。
（2）取1ml样品溶液，加入1ml洗涤液，涡旋混匀，室温下放置5min。
（3）重复步骤（2）两次。
2. 检测（1）取一条胶体金免疫层析试纸条，将样品加样孔浸入样品溶液中，室温下放置5min。
（2）取出试纸条，观察结果。
五、实验结果与分析1. 阳性对照实验阳性对照样品在测试线上形成明显的色带，说明试纸条的性能良好。
2. 阴性对照实验阴性对照样品在测试线上无色带，说明试纸条对阴性样品具有良好的检测效果。
3. 样品检测根据实验结果，氯霉素残留样品在测试线上形成明显的色带，说明样品中氯霉素残留量超过检测限。
六、实验结论本实验采用胶体金免疫层析法对食品中的氯霉素残留进行检测，结果表明该方法具有快速、简便、准确的特点，适用于食品中氯霉素残留的现场快速检测。
水产品肌肉组织中氯霉素残留量检测方法的对比分析引言：氯霉素是一种广谱抗生素，常用于水产养殖中的疾病治疗和预防。
然而，由于氯霉素在人体中可以引起苯甘氮类药物引起的无异位脂肪移植症，因此世界各国都对水产品中的氯霉素残留量有严格的限制。
针对水产品肌肉组织中氯霉素残留量的测试，现有许多不同的方法和技术。
本文将对其中一些常用的方法进行对比分析，并评估它们的优缺点。
方法一：高效液相色谱法（HPLC）检测氯霉素残留量HPLC是一种常用的分离和定量分析方法，可以快速准确地检测氯霉素残留量。
该方法通过将水产品肌肉组织样品提取液经过色谱分离，利用紫外或荧光探测器测量不同物质的峰值面积，从而定量检测氯霉素的含量。
该方法的优点是操作简便、准确性高，可以同时检测多种氯霉素类药物。
然而，HPLC方法的缺点是设备昂贵、操作复杂，对操作人员的技术要求较高。
方法二：酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测氯霉素残留量ELISA是一种常用的生物学分析方法，可以通过酶标记的抗体与目标物质结合来检测氯霉素残留量。
该方法操作简便，具有高通量性和准确性。
ELISA方法的优点是对样品处理较少，检测时间短，适用于大批量样品分析。
然而，ELISA方法的缺点是可能存在交叉反应和假阳性结果，对操作人员技术要求较高。
此外，ELISA方法只能定性或半定量检测氯霉素残留量，不能提供准确的定量结果。
方法三：气相色谱质谱联用法（GC-MS）检测氯霉素残留量GC-MS是一种常用的分析方法，可以通过将水产品肌肉组织样品提取液经过气相色谱分离，然后利用质谱检测器对不同物质进行鉴定和定量。
GC-MS方法准确性高，可以进行定量检测，具有良好的选择性和灵敏性。
然而，GC-MS方法的缺点是操作复杂，需要较长的分析时间，设备昂贵，对操作人员的技术要求较高。
综合对比分析：从操作简便性、准确性、成本和设备要求等方面考虑，HPLC方法适合进行氯霉素残留量的定量检测。
而ELISA方法适合进行大批量样品的快速筛查，但不能提供准确的定量结果。
气相色谱法测定水产品中氯霉素残留
赵文亚;沈美芳;徐幸莲;吴光红
【期刊名称】《水产学报》
【年(卷),期】2003(027)003
【摘要】介绍了水产品中氯霉素残留量测定的气相色谱法.样品中的氯霉素用乙酸乙酯提取,正己烷去脂肪,过Sep-C18柱进行净化,用BSTFA-TMCS衍生后进带有微电子俘获器的气相色谱仪检测.该方法的线性范围为O.5～500μg@L-1,相关系数r=0.999,最低检测限为0.1μg@kg-1,相对标准偏差为4.3%～11.0%,向样品中分别添加1μg@kg-1、10μg@kg-1和20μg@kg-1 3个浓度水平的氯霉素,回收率分别为62.0%、88.2%和96.4%.方法灵敏度高,准确可靠,适合水产品中氯霉素残留量的检测.
【总页数】5页(P278-282)
【作者】赵文亚;沈美芳;徐幸莲;吴光红
【作者单位】南京农业大学食品科技学院,江苏,南京,210095;江苏省水产质量检测中心,江苏,南京,210017;南京农业大学食品科技学院,江苏,南京,210095;江苏省水产质量检测中心,江苏,南京,210017
【正文语种】中文
【中图分类】X592
【相关文献】
1.水产品中氯霉素残留量气相色谱检测方法的探讨 [J], 宫向红;徐英江;张秀珍;刘丽娟
2.气相色谱法检测水产品中氯霉素残留量不稳定原因及其消除方法 [J], 徐英江;张世娟;耿金培;张秀珍;曹鹏;尹大路
3.气相色谱法测定水产品中氯霉素残留前处理方法的比较 [J], 沈美芳;吴光红;费志良;高钰一
4.气相色谱法测定水产品中氯霉素残留前处理方法的比较 [J],
5.气相色谱/质谱测定水产品中氯霉素残留量 [J], 康继韬;俞雪钧;谢东华;李佐卿因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水产品中氯霉素的检测标准水产品中氯霉素的检测标准氯霉素是一种广泛应用于畜禽养殖中的抗生素，也被用于水产养殖中。
然而，氯霉素对人体健康有一定的危害，因此被世界卫生组织列为二类致癌物质。
为了保障消费者的健康，各国都制定了严格的水产品中氯霉素的检测标准。
我国水产品中氯霉素的检测标准主要包括以下几个方面：1. 检测方法目前，我国常用的氯霉素检测方法主要有高效液相色谱法、气相色谱法、荧光免疫分析法等。
这些方法不仅能够快速、准确地检测出氯霉素的含量，而且能够同时检测出多种抗生素残留物质，具有较高的检测灵敏度和准确性。
2. 检测对象我国水产品中氯霉素的检测对象主要包括鱼类、虾类、贝类等水产动物及其制品。
其中，对于进口水产品，我国要求检测对象范围更广，包括所有水产品及其制品。
3. 检测标准我国对于水产品中氯霉素的检测标准分为限量和禁止两种。
其中，限量标准是指在一定重量范围内允许残留的最高含量，而禁止标准则是指在任何情况下都不允许出现氯霉素残留。
目前，我国对于水产品中氯霉素的限量标准如下：鱼类及其制品：0.3mg/kg虾类及其制品：0.5mg/kg贝类及其制品：0.3mg/kg对于进口水产品，我国要求检测出氯霉素残留物质即视为不合格。
4. 监督管理为了保障水产品中氯霉素的检测质量，我国建立了完善的监督管理体系。
各级食品药品监管部门对于生产、经营、使用水产品的企业进行定期监督检查，并对不合格企业进行处罚。
同时，我国还建立了食品安全快速预警机制，一旦发现问题及时采取措施，确保消费者的健康安全。
总之，水产品中氯霉素的检测标准是保障消费者健康安全的重要措施。
我们应该加强监督管理，严格执行检测标准，切实保障人民群众的饮食安全。
水产品中氯霉素的残留量的检测：气相色谱法氯霉素属广谱抑菌抗生素，是治疗伤寒，副伤寒的首选药，治疗厌氧菌感染的特效药物之一，其次用于敏感微生物所致的各种感染性疾病的治疗。
氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染，后因对造血系统有严重不良反应，故对其临床应用现已做出严格控制。
因其抗菌效果好、成本低，上世纪八、九十年代长期应用于水产养殖业。
尽管农业部出台公告禁止使用，但仍有一些不法的水产品养殖户，特别是散户依然在偷偷使用。
水产养殖户会在饲料、养殖（包括环境、器械等的消毒）、加工、保鲜、包装和运输等生产环节使用氯霉素，用于延长水产品的寿命、方便运输。
我国在养殖过程中滥用抗生素已经成为一个严重的水产品安全问题，而且由于氯霉素在水产品中的残留超标，我国水产品出口已经受到严重冲击，并且开始波及到其他动物制品的出口。
现在我国政府也明文禁止在渔牧养殖中使用含有氯霉素的兽药和渔药，并加强了对食物性产品中氯霉素的监督力度。
仅凭肉眼无法分辨水产品是否含有氯霉素，只有经过专业部门才能检测出来。
仪器准备GC5890N气相色谱仪（南京科捷分析仪器有限公司）全兼容Agilent 6890N气相色谱仪，可直接接驳Agilent 6890N检测器及相关检测器控制板，可连接安捷伦色谱工作站和自动进样器，仪器技术指标、性能、检测器灵敏度可与Agilent 6890N相媲美。
独特的进样口设计解决进样歧视，双柱补偿功能不仅能解决升温带来的程序漂移，可以得到更低的最小检测限；可选填充柱、毛细管分流/不分流（具有隔膜清扫功能）两种进样系统。
适用于食品卫生、医疗器械、电子高纯气体行业、精细化工、石油开采及炼制、石油化工、环境监测、生物工程以及职卫检测、质量监督检验所等分析检测机构。
检测过程样品处理：提取准确称取5.00g样品，置于50mL玻璃离心管中，加入乙酸乙酯20mL，均质机均质1min，分散均匀，4000r/min离心3min，将乙酸乙酯层转移到100mL细口鸡心瓶中。
用酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量沈美芳1,赵文亚2,费志良1,吴光红1,耿雪冰1(1.江苏省水产质量检测中心,210017,南京) (2.南京农业大学食品科技学院,210095,南京)[摘要] 运用酶联免疫法测定水产品中的氯霉素残留.氯霉素浓度在0105~4105L g/kg 范围内呈线性,线性方程为Y =0131211-0134014X ,r =01994.向样品中分别添加0145、1135、4105L g/kg 3个浓度水平的氯霉素,平均回收率分别为8415%、8814%和7919%,最低检测限为90ng/kg,批内变异系数为610%~815%,批间变异系数为518%~1413%.结果表明该方法灵敏度高,重复性好,适合水产品中氯霉素残留筛选检测.[关键词] 水产品,氯霉素,酶联免疫法[中图分类号]R978.1+3;TQ460.7+2, [文献标识码]B, [文章编号]1672-1292-(2003)02-0001-04收稿日期:2003-03-13.资助项目:江苏省/十五0科技攻关项目(BE2001385)和江苏省科技厅社会公益项目(BM2001704)资助.作者简介:沈美芳,女,1968-,江苏省水产质量检测中心副研究员,主要从事水产动物营养需要与检测技术的研究.氯霉素(chlora mphenicol,C AP)是一种广谱抗生素,对多种病原菌有较强的抑制作用,曾是我国水产养殖中常用的抗菌药之一.氯霉素存在着严重的毒副作用,能引起人的再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症以及新生儿、早产儿灰色综合症等[1],对人类健康构成巨大的潜在威胁.因此,氯霉素残留问题已引起国际组织和许多国家及地区有关部门的高度重视.美国严禁氯霉素用于食用动物[2,3].欧共体各国也严格控制氯霉素用于食用动物.因此,探讨快速、便捷的氯霉素残留的检测方法也引起了世界各国的广泛关注.目前,氯霉素残留分析主要采用高效液相色谱法[4~8]和气相色谱法[9~11].高效液相色谱法虽操作简单,但检出限较高,无法满足当前对氯霉素低残留限量的要求.气相色谱法灵敏度较高,但也存在一些不足,如样品前处理过程复杂、分析速度慢、仪器化程度高且价格昂贵,不适合在基层推广使用.基于抗原抗体特异性反应建立起来的免疫学测定方法,具有简单、快速、处理样品量大、灵敏度较高、特异性强等诸多优点,现已有试剂盒供应市场,可以直接用于生产实践.本文采用酶联免疫法检测水产品中的氯霉素残留,该方法简单、快速、灵敏度高、重复性较好,适用于大规模氯霉素的残留筛选检测.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 样品及其制备实验所采用的样品为南美白对虾.虾经洗净、去头、去皮后,取肌肉,用高速万能试样粉碎机匀浆,备前处理用.11112 仪器与设备JA -5002电子天平,上海精天电子仪器厂;KS 调速多用振荡器,常州国华电器有限公司;Allegra TM 21R 台式高速冷冻离心机,美国Beckman 公司;BI O -RAD550酶标仪,BI O -RAD1575洗板机,美国BIO -RAD 公司.11113 试剂乙酸乙酯、异辛烷、三氯甲烷,分析纯,上海化学试剂有限公司;RIDASC REE N Chloramphenicol 试剂第3卷第2期2003年南京师范大学学报(工程技术版)JOURNALOF NANJI NG NORMAL UNI VERSI TY(E NGI NEERI NG AND TEC HNOLOGY)Vol.3No.22003盒,德国R -Biopharm 公司,其中包括0、015、115、415、1315、4015L g/L 6种浓度的氯霉素标准浓缩液、酶标记物、抗体、基质、发色剂、反应停止液和缓冲液.112 方法11211 标准溶液的配制分别取0、015、115、415、1315、4015L g/L 的氯霉素标准浓缩液各50L L,分别用450L L 缓冲液(试剂盒提供)稀释并混合均匀,制成0、0105、0115、0145、1135和4105L g/L 的标准溶液.11212 样品前处理称取111.1制备的样品3g,加入6mL 乙酸乙酯,用振荡器强烈混合10min,4000r/min 室温离心10min,取2mL 上清液在氮气流下干燥,用1mL 异辛烷/氯仿(2B 3)溶解干燥后的残留物,加入1mL 缓冲液强烈振荡1min,5000r/min 室温离心10min.取50L L 上层水相进行测定.11213 酶联免疫分析程序将足够的标准品和样品所用的孔条插入微孔架,每个标准品和样品做2个平行,记录标准品和样品的位置.加入50L L 标准品或处理好的样品到各自的微孔中,再加入50L L 稀释了的酶标记物(10份缓冲液+1份酶标记物浓缩液)于微孔底部.加入50L L 稀释了的抗体溶液(10份缓冲液+1份抗体浓缩液)于每一个微孔底部充分混合,覆盖上薄膜,在室温孵育2h.倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打3次以保证完全除去孔中的液体,用洗板机洗板3次或用250L L 蒸馏水充入孔中,再次倒掉微孔中的液体,重复操作3次.洗板后加入50L L 基质和50L L 发色剂到每个微孔中,充分混合并在室温暗处孵育30min.加入100L L 反应停止液到微孔中,混合后,以空气为空白,用酶标仪在450nm 处测量吸光度值.(注意:必须在加入停止液后60min 内读取吸光度值).11214 标准曲线的制作及样品浓度的计算将所获得的标准品和样品的吸光度值按下式折算成百分比吸光度值(%吸光度值):%吸光度值=标准品或样品的吸光度值@100/空白标准品的吸光度值.以标准样品浓度的对数值为横坐标,标准样品的%吸光度值为纵坐标,绘制对应氯霉素浓度的半对数校正曲线,样品浓度根据测得的吸光度值从校正曲线上读出,或利用试剂盒公司提供的RIDASC REE N 数据分析软件直接读出浓度.图1 RI DASCREE N 数据分析软件建立的氯霉素标准曲线 图2 ORNGI N 数据处理软件建立的氯霉素标准曲线2 结果211 标准曲线按照11212步骤,分别测定浓度为0、0105、0115、0145、1135和4105L g/L 氯霉素标准液的吸光度值,采用RIDASCREEN 数据分析软件建立标准曲线如图1,采用ORI GIN 软件绘制氯霉素曲线如图2.由图2曲线可知氯霉素浓度在50~4050ng/kg 范围内呈线性,线性方程为Y =0131211-0134014X ,相关系数南京师范大学学报(工程技术版) 第3卷第2期(2003年)r =01994.212 精密度表1 精密度测定结果(n =3)测试样品批内变异系数(n =3)批间变异系数(n =3) X ?SD CV(%) X ?SD CV(%)10139?010*********?010*******0167?010578150167?010*******1120?010726101134?01078518采用变异系数表示法,在同一次测定中对3个浓度水平的样品分别重复测定3次,计算批内变异系数.分别测定3个浓度水平的样品在3个不同批次测定之间的变异系数,即为批间变异系数.结果如表1所示.213 回收率表2 回收率测定结果(n =3)添加浓度/(L g/kg)实测浓度/(L g/kg)回收率/%平均回收率/%CV/%0.4089.20.450.3884.48415?41705160.3679.81.1383.51.35 1.2189.78814?41364191.2491.93.1577.84.05 3.3081.57919?11912143.2780.7向样品中分别添加3个浓度水平的氯霉素标样:0145、1135、4105L g/kg,每个浓度做3个平行,同时做3个空白样.按11212处理后测定氯霉素含量,计算回收率,结果如表2所示.214 灵敏度按照11213步骤同时测定10个/00标准溶液的吸光度值,求出其平均值( X ),再减去两倍标准差(SD ),从标准曲线上查出对应于吸光度值为 X -2SD 的浓度,即为灵敏度.本实验中 X =01847,SD =01073,该方法的平均灵敏度为90ng/kg.3 讨论目前文献报道的氯霉素的酶联免疫法大都是针对动物性食品和畜禽组织的[12,13],专门针对水产品的检测尚未见报道.本文采用酶联免疫法对水产品中氯霉素残留进行检测,该方法的最低检测限为90ng/kg,批内变异系数为610%~815%,批间变异系数为518%~1413%,当向样品中分别添加0145、1135、4105L g/kg 3个浓度水平的氯霉素时,平均回收率分别为8415%、8814%和7919%.结果表明该方法灵敏度高,重复性较好,适用于水产品中氯霉素残留的筛选.运用酶联免疫法对水产品中氯霉素残留进行筛选,能在几小时内检测几十到上百个样品,且不需要复杂的仪器设备,样品预处理简单,检测成本低,是药物残留检测发展的趋势.但目前筛选法的检测标准极少,检测限(即阳性浓度标准)不统一,给检测结果判定带来一定困难,对筛选可疑结果需用确证方法进行确证.酶联免疫法作为一种快速筛选手段,在现场监控和基层检测中有着广阔的推广应用前景.[参考文献][1]Allen E H.Review of chromatograp hic methods for chloramphenicol residues in milk,egg,and tissues from food -producing ani mal[J].J Assoc Off Anal Chem,1985,68:990~999.[2]Munns R K,Holland D C,Roybal J E,et al .Gas chromatographic determination of chloramphenicol residues in shri mp:interlabo -ratory study[J].J AOAC Int,1994,77(3):596~601.[3]Ginkel L A,Rossu m H J,Zoontjes P W,et a l .Development and validation of a gas chromatographic -mass spectrometric procedurefor the identification and quati fication of residues of chloramphenicol[J].Analytica Chimica Acta,1990,237:61~69.[4]于国胜.肉类中氯霉素(C AP)的高效液相色谱测定法[J].分析测试通报,1991,10(4):75~76.[5]陈家华.高效液相色谱快速测定家禽组织中氯霉素残留研究[J].中国抗生素杂志,1992,17(5):351~355.[6]李兰生,王勇强.对虾体内氯霉素含量测定方法的研究[J].青岛海洋大学学报,1995,25(3):400~405.[7]Austi n R,Long L C,Hsieh A C,et al .Method for the isolation and liquid chromatographic determination of chloramphenicol in沈美芳,等:用酶联免疫法测定水产品中氯霉素的残留量南京师范大学学报(工程技术版)第3卷第2期(2003年)milk[J].J Agric Chem,1990,38:427~429.[8]Pascal Sanders,Philippe Guillot,M ichele Dagorn,et al.Liqiud chromatographic determination of chloramphenicol in calf tissues:studies of stability in muscles,kidney,and liver[J].J Assoc Off Anal Chem,1991,74(3):483~486.[9]王建华,陈世山.同时测定鱼肉中氯霉素和甲砜霉素残留量的毛细管气相色谱法[J].分析测试学报,2001,20(3):89~91.[10]Weber L.Trace analysis of chloramphenicol residues in egg powders by capillary gas chromatography-electron capture detection[J].Chromatographic Science,1990,28:501~504.[11]Robert L E.In ternational validation study for the determination of chloramphenicol in bovine muscle[J].J AOAC 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aquatic products. Key words:aq uatic products,chloramphenicol,ELISA[责任编辑:严海琳]。
液质联用法测定水产品中氯霉素残留的技术研究作者：暂无来源：《渔业致富指南》 2017年第11期氯霉素（Chloroamphenicol，CAP）是一种有效的广谱抗生素，常用于动物各种传染性疾病的治疗，对多种病原菌有较强的抑制作用，人们经常使用氯霉素进行水体消毒和防治渔业病虫害，但由于氯霉素对人体产生严重的毒副作用，是多个国家禁止使用的兽用药物。
目前水产品中氯霉素的残留主要用GB/T20756-2006国家标准进行检测，本文在此标准的基础上进一步优化了前处理方法，提高了检测效率，并且能够达到规定的重现性和准确性。
具体通过液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/ MS），多反应监测扫描模式（MRM）和同位素内标法定量，直接对草鱼、鳜鱼、对虾等水产品中的氯霉素进行了检测。
一、实验材料1. 仪器AB QTRAP4500液相色谱-三重四级杆串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）、匀浆机、离心机、超声波清洗仪、垂直振荡器、氮吹仪等。
2. 材料草鱼、鳜鱼、对虾等水产品，均采自于养殖场和农贸市场，去皮去骨去内脏取可食部分切碎、混匀、冷冻，作为样品备用。
3. 试剂和药品甲醇（色谱纯）德国Merck（默克）公司；乙酸乙酯（分析纯）、正己烷（分析纯）、氢氧化铵（25%-28%）（分析纯）国药集团。
4. 标准品氯霉素（CAP）标准品德国Dr公司、氘代氯霉素（CAP-D5）BESTOWN北京振翔科技有限公司。
二、实验仪器方法1. 色谱条件色谱柱：Thermo C18柱（1.9μm×2.1mm ×50mm）；柱温40℃；进样量10.0μL；流动相乙腈和水，流速0.4mL/min，运行时间 6min。
2. 质谱条件采用电喷雾离子源（ESI），负离子扫描，多反应监测扫描模式（MRM）；雾化器、碰撞器为氮气。
质谱参数见表2。
三、实验步骤1. 标准溶液的配置氯霉素标准储备液（100.0μg/mL）用甲醇配置，氯霉素标准中间工作液（40.0ng/mL）用水稀释；氘代氯霉素标准使用液（20.0ng/mL）用水稀释。
气相色谱／质谱测定水产品中氯霉素残留量第24卷第7期2005年7月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryV o1.24.No.72o05—7气相色谱/质谱测定水产品中氯霉素残留量康继韬,俞雪钧,谢东华,李佐卿(宁波出入境检验检疫局,宁波315012)摘要:样品经均质后,用乙酸乙酯提取,正己烷脱脂,C.小柱净化,衍生后用GC—ECD,NCI—GC—MS,NCI—GC—MSMS多种方法定性及定量测定,外标法定量.在0.1ttg/kg水平,回收率为72%～110%,平行测定9次后相对标准偏差为16.5%.质量浓度在0～10ttg/L范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9997.关键词:氯霉素;残留;气相色谱/质谱;测定中图分类号:0657.6文献标识码:A文章编号:1000—0720(2005)0—0038—03氯霉素作为一种广谱抗菌药物,曾经广泛应用于人体,也曾作为药物用于家畜疾病治疗和预防.世界卫生组织关于食品添加剂的系列评价报告中,证明氯霉素可以造成骨髓抑制,再生障碍性贫血和灰色婴儿综合症.所以,许多国家包括我国,已经禁止在动物饲养和加工过程中使用氯霉素.近来关于氯霉素的分析方法已有大量文献报道,但由于国外对其残留限量有苛刻的要求(达到0.3ttg/kg),较为适用的方法有ELISA,放射免疫(Rn),气相色谱法,气质联用以及液质联用等.ELISA和RIA方法仅能够对特定样品进行筛选,半定量,且有部分假阳性结果.色谱法可以定量测定,但需要与质谱联用准确定性.本文摸索了一套水产品中氯霉素残留量的快速提取,净化方法,通过多种方法测定,检出限达到0.1ttg/kg.特别使用了GC—MSMS,与GC—ECD, NCI—GC—MS比较,可以降低基线,大大减低样品杂质的干扰,提高相对灵敏度.1实验方法1.1仪器和试剂衍生试剂:双一(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺(BSTFA)与体积分数1%三甲基氯硅烷(TMCS);氯霉素标准溶液;固相萃取柱(c小柱):500mg,3mL;GC—MSMS带NCI电离源.收稿日期:2004—08—06;修订日期:2004—11-03作者简介:康继韬(1965一),男,高级工程师,硕士一38—1.2提取,净化,衍生称取已匀浆的样品10g,加入乙酸乙酯,旋涡混匀并超声振荡提取,过滤,滤液浓缩近干,用N,吹干.上述残渣中加入甲醇和40g/LNaC1溶液溶解,加入少量正己烷,再涡旋混匀,离心,用尖嘴吸管将上层正己烷吸去.下层溶液用c.小柱净化.净化后的洗脱液收集后,用氮气流吹干,加入100LV(BSTFA):V(TMCS)=99:1衍生试剂.衍生物用氮气吹干.用丙酮溶解,供测定.标准样品系列分别加入100ttL衍生试剂在同样条件下进行衍生.1.3色谱条件色谱柱,VF一5MS,30mx0.25inln,膜厚0.25ttm;程序升温,150℃保持1min,以20℃/min程序升温至270oC,保持4min;进样口温度,260℃;自动进样器,无分流进样1ttL,载气,氦气;接口温度: 250℃;离子源:160℃,NCI;反应气为甲烷,离子源真空度为1463Pa;灯丝电流,100ttA;电子能量, 150eV;检测方式:多离子监测模式,以nde466作为母离子,监测m/e322,304,232,151子离子,CID:氩气0.133Pa,碰撞电压18v.在以上色谱条件下,标准工作液和样液等体积穿插进样,GC—ECD 测定氯霉素的保留时间为15.78nfin.GC—MS,GC—MSMS测定氯霉素的保留时间为8.5min.第24卷第7期2005年7月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryV o1.24.NO.72oo5—72结果与讨论2.1提取溶剂,分配条件的选择氯霉素的提取溶剂有乙腈…,乙酸乙酯及混合溶剂等,经过实验,发现乙腈在挥干时容易冒泡, 挥干时间长,影响回收率且毒性大,而乙酸乙酯无此缺点,效果较好.在液.液分配净化时,用甲醇.40g/LNaC1溶液.正己烷体系有利于残渣中氯霉素的溶解,也有利于下一步柱净化的进行,但甲醇量的控制是关键,过多将影响回收率及去脂的效果.2.2固相萃取条件的优化本法用C,.小柱净化.比硅胶柱净化方便,首先液.液分配后下层溶液可直接进C.小柱净化, 最佳洗脱剂是纯甲醇,它有利于快速洗脱,洗脱后容易挥干,不留水分,有利于下一步衍生反应的进行, 因为硅烷化试剂易水解,稍有水分影响衍生效果.2.3质谱检测条件的选择二级质谱选择多离子监测模式,以m/e466作为母离子,监测m/e322,304,232,151离子.碰撞气体采用氩气,试验了15—20v的碰撞电压,在碰撞电压较低时(15v),m/e466未被完全碰撞;在碰撞电压较高时(20v),仅得到明显的m/e151碎片, 选择18V的碰撞电压可以给出较为丰富的离子碎片.2.4GC.ECD,GC.MS,GC.MSMS的比较采用同样的化学源条件,比较了单级质谱和多级质谱的检测结果.在检测烤鳗样品过程中,由于样品基体较复杂,GC.ECD干扰严重,在限量要求下无法定性定量.使用单级质谱SIM检测模式时, 基线噪音较高且有漂移,同时可能出现干扰,如图1所示,标准品,样品+标准品谱图的基线和保留时间均有差异.采用多级质谱检测,如图2所示,标准品,样品+标准品谱图的基线,保留时间及峰形基本重合,且无杂质峰,它可以降低基线,样品杂质的干扰,提高相对灵敏度.图3为GC.MS.SIM和GC.MS.MS检测烤鳗中CAP的谱图的比较.8.258.508.75t/min图1GC—MS-SIM测定烤鳗中氯霉素Fig.1GC—MS-SIMdeterminationofCAPintoastedeel(1ng)1一样品标准(1ng);2一标准(1ng);3一样品t/min图2GC.MS.MS测定烤鳗中氯霉素Fig.2GC—MS-MSdeterminationofCAPintoastedeel(1ng)1一样品标准(1ng);2一标准(1ng);3一样品一39—第24卷第7期2005年7月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryV o1.24.No.720o5—7t/min图3比较Gc—MS-SIM和Gc—MS-MS测定烤鳗中氯霉素,样品+标准(1ng} Fig.3ComparisonbetweenGC—MS-SIMandGC—MS-MSdeterminationofCAPintoastedeel(1ng)2.5方法的回收率,相对标准偏差,线性本方法对样品添加0.1kg质量分数进行测定,回收率在72%～110%,平行测定9次后相对标准偏差为16.5%,质量浓度在0—10ttg/L范围内呈良好线性关系(r=0.9997).2.6测量不确定度的报告与表示本文对制定的气相色谱一串联质谱测定氯霉素残留量方法进行测定不确定度的评定,评定中共进行38次测定,可以初步得出如下结论:在评估残留量测定方法的不确定度过程中,应主要考虑检测方法及检测分散性引起的不确定度;而各计算分量引起的不确定度,则远小于前者,在残留分析中可以忽略不计.用本法测定氯霉素残留量结果的报告:0.0898(0.0461)ttg/kg,P=95%,y=35.参考文献[1]李俊锁,邱月明,王超.兽药残留分析.上海:上海科学技术出版社,2002,394[2]施冰,陈伟玲,吴怀秆等.国外分析仪器一技术与应用,2002,(3):31[3]ArnoldD,SomogyiA.JAOACint1985,68(5):984[4]黄世乐,陈祖义,成冰.南京农业大学,1991,14(3):109[5JPfenningAP,MadsonMR,RoybalJEeta1.JAOACInt,1998.81(4):714-——40.-——【6]V anderHeeftE,deJongAP,vanGinkelLAeta1.Biol MassSpectrom,1991,20(12):763【7JBarbaraK.Neuhaus,JeffreyA.HudbutandWalterHam—mack.U.S.FoodandDrugAdministrationLaboratoryInfor. ma~onBulletin,2002,118(9):4290【8]KeukensHJ,BeekWM,AertsMM.JChromatogr. 1986,352:445 Determinationofchloramphenicolresiduesin seafoodsbygaschromatography/tandemlnassspec—trumKANGJtao.YUXue-jun,xIEDong-huaandLiZuo-qing(NingboAdministrationforEntry—ExitIn—spectionandQuarantine,Ningbo315012),FenxiShiy—anshi,2005,24(7):38～40Abstract:Amethodforthedeterminationofchloram—phenicol(CAP)residuesinseafoodsforexportWaSin—vestigated.Muhi—methodsofGC/ECD,NCI.GC/MS, NCI.-GC.-MSMSwereusedtoidentifythetargetsubstance andtoquantifytheCAPresidues.Inthelevelof0.1ttg/kg,therecoveryisintherangeof72%～110%. andtherelativestandarddeviation(n=9)iS16.5%. Intherangeof0～10/.tg/L,theconcelationcoefficientis0.9997.Keywords:Chloramphenicolresidues;Gaschromatogra—phy;Tandemmassspectrum;Determination。
不同前处理方法对鱼肉中氯霉素残留检测研究氯霉素是一种广谱抗生素，在兽医学和医药学领域被广泛使用。
然而，氯霉素的滥用和残留可能对人类健康造成潜在威胁，因此对鱼肉中氯霉素残留的检测显得尤为重要。
为了提高检测的可靠性和准确性，研究人员采用了不同的前处理方法。
第一种前处理方法是酸性水提取。
这种方法通过将鱼肉样品与酸性水溶液混合，并在一定温度下搅拌一段时间，实现了氯霉素的分离和提取。
然后，使用离心机将混合溶液分离成液体和固体。
液体中可能存在的氯霉素残留可以通过进一步的浓缩和过滤步骤得到提纯，以便后续的分析和测定。
第二种前处理方法是溶剂萃取。
这种方法使用有机溶剂来提取鱼肉样品中的氯霉素。
首先，将鱼肉样品与有机溶剂混合，并在一定温度下搅拌一段时间。
然后，使用离心机将鱼肉样品和有机溶剂分离。
有机溶剂中可能存在的氯霉素残留可以通过进一步的浓缩和洗涤步骤得到提纯，以便后续的分析和测定。
第三种前处理方法是固相萃取。
这种方法利用固相萃取柱或固相萃取薄片将鱼肉样品中的氯霉素残留分离和富集。
首先，将鱼肉样品与固相萃取柱或固相萃取薄片接触，并在一定压力和温度下进行一段时间。
然后，通过移除萃取柱或薄片上的杂质和洗涤步骤，将氯霉素残留提纯。
最后，使用适当的溶剂将固相萃取柱或薄片中的氯霉素溶解，以便后续的分析和测定。
这三种前处理方法各有优缺点。
酸性水提取方法简单易行，适用于大批鱼肉样品的处理，但提取效果相对较差。
溶剂萃取方法提取效果较好，但需要使用有机溶剂，可能对环境造成污染。
固相萃取方法需要使用专门的仪器设备和较长的操作时间，但提取效果较好，并且可以实现自动化操作。
综上所述，不同的前处理方法可以对鱼肉中氯霉素残留进行有效的提取和检测。
研究人员可以根据实际需求和资源条件选择合适的前处理方法，以提高检测的可靠性和准确性，并最大程度地保护消费者的安全和健康。
水产品中氯霉素残留检测方法（二）
4.4.3 测定 4.4.3.1 用压杆将竞争性结合试剂压入一洁净的硅硼酸
盐玻璃试管内，加入300 uL水，用涡旋振荡器振荡10 s，使试剂振碎彻低。
4.4.3.2 加5.0 mL样品提取液(4.4.2.3)，或阴性对比液
(4.4.1.1)或阳性对比液(4.4.1.2)到试管中，混匀15 s，使样品上下
混匀15次，置于恒温孵育器中于50℃±1℃孵化3 min，取出混匀15 s，再置于恒温孵育器中50℃±1℃孵化3 min。
4.4.3.3 用压杆将[3H]标志的压入试管中，用旋涡混合器振荡15 s，使样品上下混合15次，置于恒温孵育器中50℃±1℃孵化3 min。
4.4.3.4 取出试管，于
3300r/min离心10 min，立刻取出试管，倒掉上清液，用棉签将试管边缘的污渍擦去。
4.4.3.5 加300uL水到试管内，振荡并混合混匀，再加入3.0 mL闪耀液(4.2.2.7)至试管中，涡旋混匀至试管内没有不均的云状物。
4.4.3.6 将试管放入液体闪耀计数仪内，在[3H]频道举行60 s LSC计数，读cpm值。
4.5 控制点确实定控制点是推断样品阴性与初筛阳性的一个界定值，可按照筛选水平自行设定。
对于同一批号的试剂，正常状况下只需测定1次控制点。
控制点设定步骤如下：称取20.0g均质好的空白组织样品，加入0.6 mL 10 ug/L抗生素标准溶液，按4.4.2试样提取和4.4.3发射免疫测定；测定六个加标样品的cpm 值，求出cpm平均值乘上系数1.2，即为筛选水平0.3ug/kg的控制点。
注：空白样品应是不含抗生素残留的样品，即假如测得某个样品cpm 值在阴性对比液的cpm值±20％左右波动，可认为其不含氯霉素抗生素。
5 结果判定 5.1 将测得结果与控制点对比，当样品cpm值大于控制点50以上时，判定样品为“阴性”，即样品中氯霉素含量低于筛选水平。
5.2 将测得结果与控制点对比，当样品cpm值等于或小于控制点，视为“初筛疑惑阳性”，此时应重新测定样品、阴性对比液和阳性对比液的cpm值。
阴性对比液和阳性对比液的cpm值需在正常范围波动(见试剂盒性能监测)，当重新测定样品的cpm值大于控制点，判定为“阴性”；小于或等于控制点，则判定为“初筛阳性”。
5.3 将
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