虎红平板凝集试验(检测布病初筛试验)—人畜检测法一样

虎红平板凝集试验（RBPT）：实验原理：该试验又称为板式孟加拉红平板凝集实验。

由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性，检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。

器材与试剂：虎红平板凝集抗原、载玻片、移液器、枪头方法：在载玻片上加抗原30μl，加入30μl被检血清，混匀。

在5min内观察结果，轻摇载玻片，出现凝集颗粒为阳性，否则为阴性。

试管凝集试验（SAT）：实验原理：布鲁氏菌侵入机体后，会刺激机体产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布氏菌抗原发生特异性结合，在电介质作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。

器材与试剂：布病试管凝集抗原、生理盐水、试管、移液管、移液器、小烧杯、枪头、试管架方法：1.准备试管：取9支试管放在试管架中编号。

1号管为血清对照管，2—8号为试验管，9号为抗原对照管。

2.血清稀释：1号管加入2.3ml生理盐水，2号不加，3号—9号各加入0.5ml生理盐水。

1号管加入0.2ml被检血清，混匀后各吸0.5ml加入2、3号管。

从3号开始做倍比稀释，8号吸0.5ml弃去。

3.加入抗原：10倍稀释抗原（用烧杯，1ml抗原9ml生理盐水），从2号开始每支加0.5ml稀释后抗原，从2号开始，血清被稀释浓度为1：25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800、1:16004.凝集试验标准比浊管的配制（判定透明程度的依据）：取5支试管，编号，取稀释后的抗原再做2倍稀释。

盐水(ml) 清亮度标记管号抗原稀释液(ml)1 0.00 1.00 100% ++++2 0.25 0.75 75% +++3 0.50 0.50 50% ++4 0.75 0.25 25% +5 1.00 0.00 0% —充分混匀，将所有试管放入温箱中37℃培养20—22小时取出，在室温下放置1—2小时后观察结果。

布氏菌病虎红平板凝集试验抗原新兽药证书一、概述布氏菌病是一种由布氏菌引起的家畜和野生动物传染病，也可传染给人类。

布氏菌病的传播对动物养殖业和食品安全造成了严重威胁，因此对布氏菌进行有效的检测和防控至关重要。

其中，虎红平板凝集试验是一种常用的血清学检测方法，对布氏菌病的诊断具有重要意义。

二、布氏菌病虎红平板凝集试验抗原1. 抗原来源布氏菌病虎红平板凝集试验抗原主要来源于已知含有布氏菌的动物血清，如牛、羊、猪等。

这些血清样本需要通过严格的筛选和处理，以确保抗原的纯度和稳定性。

2. 制备方法虎红平板凝集试验抗原的制备需要严格按照相关技术规范进行操作。

首先需要从携带布氏菌的动物中提取血清样本，然后通过离心、超滤等手段去除杂质和细菌。

经过适当的稀释和加工处理，最终得到用于虎红平板凝集试验的抗原制剂。

3. 抗原质量控制为了确保抗原的稳定性和活性，需要对抗原制剂进行严格的质量控制。

包括对抗原的存储条件、保存期限、抗原效价等指标进行监测和管理，以确保虎红平板凝集试验的准确性和可靠性。

三、新兽药证书1. 申请流程布氏菌病虎红平板凝集试验抗原作为兽药的一种，需要获得新兽药证书才能在市场上合法销售和使用。

申请新兽药证书需要遵循相关政策和法规，提交包括临床试验报告、生产工艺流程、质量控制方案等材料，并经过相关部门的审批和认证。

2. 证书标注一旦获得新兽药证书，抗原制剂需要在包装、说明书等相关资料上标注证书编号、有效期限等信息。

这些信息对药品的合法性和可追溯性具有重要意义，也为用户提供了使用保障。

3. 证书更新新兽药证书的有效期通常较短，一旦过期就需要重新申请并通过审批，获得更新证书。

抗原生产企业需要及时关注证书的有效期限，提前做好证书更新工作，以保障产品的合法生产和销售。

四、结论布氏菌病虎红平板凝集试验抗原的制备和管理对于布氏菌病的检测和防控具有重要意义。

严格控制抗原的质量和规范生产流程、及时申请和更新新兽药证书，是保障抗原生产质量和市场合法的关键步骤。

37现代养生 2021年3月第21卷第6期预防医学与公共卫生布鲁氏菌病（简称为“布病”），是一种由布鲁氏菌引起的细菌性传染病，具有人兽共患的特点，病原体可以通过人体的皮肤黏膜、消化道等侵入体内，引起发热、多汗、乏力等症状[1]，严重者还会对生殖系统造成影响。

在基层的检测中，普遍使用虎红平板凝集试验（RBT）和试管凝集试验（SAT）[2]来检测布鲁氏菌病，为比较这两种方法在实际操作中的差异，减少实际工作中的失误，方便基层工作的开展，研究选择了宜兴市2020年布病监测点289份监测人员血清来进行比较分析。

1 资料与方法1.1 研究资料宜兴市2020年布病监测点289份监测人员（主要从事兽医、牲畜饲养、交易、宰杀、皮毛加工、羊肉分割等）血清。

1.2 试剂布病虎红抗原、布病试管凝集抗原（购自青岛中创汇科生物科技有限公司）。

1.3 检测方法1.3.1 RBT ①将玻片标记好序号，用移液枪吸取30μL 待检血清滴加到玻片上；②将虎红平板凝集抗原平衡到室温（20～25℃），然后吸取30μL 滴加到玻片上的待检血清中；③轻轻摇晃玻片，使混虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病的效果评价陈秀青 邹国华 吴亦琴【摘要】 目的 以试管凝集试验（SAT）为金标准，对比分析虎红平板凝集试验（RBT）检测布鲁氏菌病的效果，探讨在基层检测中用RBT 检测布鲁氏菌病取代SAT 的可能性。

方法 选择了宜兴市2020年布鲁氏菌病监测点289份监测人员血清，用RBT 和SAT 两种方法同时进行检测。

以SAT 检测结果为金标准，评价RBT 检测效果。

结果 与金标准（SAT）检验结果比较，RBT 检测的灵敏度为100%，无假阴性；特异度为91.48%，假阳性率为8.52%。

Kappa=0.585，表明RBT 与金标准（SAT）检测结果具有中高度一致性，但二者相关性分析，差异有统计学意义（P <0.05），说明两种试验方法相关性较差，临床上RBT 不能取代SAT。

摘要：奶牛布病是重要的人畜共患病之一。

国家从实施稳控到提出净化，对此给予了高度重视。

在基层诊断和实施净化过程中,检测起着关键作用。

临床检测中，常存在免疫后的奶牛出现临床症状，存在布病免疫抗体还是感染抗体不易区分的现象，给基层诊断和净化工作带来了困难。

本文主要介绍了奶牛布病免疫抗体与自然感染抗体鉴别诊断现状，并结合临床实践筛选出虎红平板凝集试验、试管凝集试验、竞争ELISA试验、琼扩试验、荧光偏振试验等四种不同组合鉴别方法，仅供参考。

关键词：布病；试管凝集；诊断；检测试剂；奶牛1 布病检测及鉴别诊断现状布病的常规血清学诊断方法以光滑型脂多糖(S-LPS)抗原为基础，包括虎红平板凝集试验(RBT)、试管凝集试验(SAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、补体结合试验(CFT)等。

除S-LPS分子外，光滑型布鲁氏菌表面还有一种天然半抗原(native hapten，NH)。

有研究表明，接种疫苗的动物血清中检测不到NH抗体的存在，而野毒感染血清中能够检测到NH抗体的存在。

目前，市场上有布鲁氏菌抗体琼扩（AGID）检测试剂盒，它是利用光滑型布鲁氏菌表面的一种天然半抗原来鉴定布病疫苗免疫和野毒感染的方法。

另外，荧光偏振试验（FPA）作为新兴的布鲁氏a菌病检测方法，世界动物卫生组织（WOAH）在2016年批准了 FPA法用于牛布病的验证诊断以及羊和猪布病的检测。

在我国，荧光偏振试验（FPA）也在现行的《国家布鲁氏菌病防治计划（2016—2020年）》中被列为动物布病的初筛试验。

与前述的传统血清学诊断方法相比，荧光偏振试验（FPA）操作简便，能够快速给出结果，在实验室和仪器之间具有高度的可重复性。

此外，传统血清学检测方法的抗原大多是布鲁氏菌细胞膜上的光滑脂多糖（S-LPS），而FPA的抗原分子使用的是光滑脂多糖（S-LPS）中最具有免疫原性优势的O-多糖（OPS），这使得FPA 法能够区分免疫动物和自然感染动物，疫苗免疫后动物体内OPS抗体水平非常低，而自然感染动物体内抗体水平高。

虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测人布病抗体的对比分析作者：刘佳国来源：《现代养生·下半月》2018年第03期【摘要】目的：研究虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测人布病抗体的效果。

方法：本次研究选取的研究对象为2014年1月1日-2017年12月31日期间的饲养员、清洁工人等人群的血清标本1000份，分别进行虎红平板凝集试验、试管凝集试验，观察人布病抗体的检出情况。

结果：在1000份血清标本中，虎红平板凝集试验与试管凝集试验的人布病抗体阳性率分别为5.90%、3.30%，且前者的敏感度、特异度及准确性依次为100.00%、97.31%、97.40%（P【关键词】人布病抗体；虎红平板凝集试验；试管凝集试验布鲁菌病（brucellosis，布病）是一种人畜共患病，人类在感染此病后会出现发热、多汗等症状，若未得到及时有效的治疗会向慢性疾病转变，累及多个器官脏器，对患者的工作、生活产生较大的影响，因此尽早诊断并接受治疗十分重要。

为了比较两种试验方法在检测人布病抗体中的作用，进行了本次研究，正文详细内容如下：1资料和方法1.1资料研究对象：饲养员、清洁工人等人群的血清标本1000份，选取时间：2014年1月1日-2017年12月31日。

血清标本对应的研究对象情况——性别：600例男性，400例女性；年龄范围：以18岁为下限值，以70岁为上限值，年龄平均值（43.25±6.17）岁。

1.2方法采集方法：采集清晨研究对象空腹状态下的静脉血，通过离心处理取得上层血清。

虎红平板凝集试验：将待检血清30微升置于玻片上，再滴加虎红平板凝集抗原30微升，利用牙签将两者混合均匀，设置对照（阳性血清、阴性血清），在5min后对结果进行观察，判定标准：阳性（+）-肉眼可见颗粒或者是凝聚片出现，阴性（-）-液体均匀但较为浑浊。

试管凝集试验：将每份血清再分成9小份置于小试管中，加入浓度为0.5%的石碳酸生理盐水2.3ml于第一支试管中，其余试管各加0.5ml石碳酸生理盐水，按照l：25、1：50、1：1001：200……1：1600的比例稀释血清，再将等量的稀释抗原（1：10）与稀释后的待检血清混合，将其充分混合均匀，置于37℃温箱中，时间为20h-22h，之后将其取出，置于室温下2h，再同对照管、比浊管进行比较，对结果进行判定。

虎红平板凝集试验原理虎红平板凝集试验是一种常见的血液凝集反应试验，用于检测人体血清中的抗凝血系统抗体。

试验原理：虎红平板凝集试验基于抗原-抗体反应中的凝集现象。

在试验过程中，首先将患者的血清样本与特定抗原反应，然后观察是否发生凝集的现象。

虎红平板凝集试验常用的抗原有：人红细胞凝集素（虎红）抗原、麦芽球蛋白原、系膜性肾炎合成物等。

试验步骤：1. 准备血清样本：从患者外周血中提取血清，并对血清进行稀释。

2. 准备虎红悬液：将虎红悬液与盐水溶解，制备成适当浓度的虎红悬液。

3. 加入抗原：将稀释后的患者血清和特定抗原（如虎红）混合，使其充分反应。

4. 等待反应：将混合液放置于试验管中，静置一段时间，观察是否出现凝集。

时间可根据需要确定。

5. 观察结果：通过肉眼观察凝集的形状和程度，判断血清中是否存在抗体。

凝集原理：虎红平板凝集试验中的凝集现象与抗原-抗体反应有关。

当抗原与相应抗体结合时，会形成抗原-抗体复合物。

这些复合物会在某一特定条件下发生凝聚或聚集，形成可见的凝集物。

凝集形成的机制有两种：1. 桥联凝集：当抗原的两个单元结合了两个相应抗体的结合部位时，抗体和抗原通过互相之间的连接桥联形成长链状结构，从而形成凝集。

这种凝集现象常见于多价抗原和多价抗体反应。

2. 网络凝集：当抗体与抗原的结合位点多于两个时，抗原-抗体复合物会在适当的条件下形成结网状结构，从而发生凝集。

这种凝集常见于多聚体抗原和多价抗体反应。

虎红平板凝集试验可用于以下情况的检测：1. 抗体检测：可以用于检测某些特定抗体的存在，如抗麻疹抗体、类风湿因子等。

2. 诊断：可用于一些疾病的辅助诊断，如自身免疫性疾病、风湿性疾病等。

3. 监测疗效：可用于评估治疗效果以及疾病进展情况。

4. 预防：有些疫苗接种后可以引起产生特定抗体，虎红平板凝集试验可以用于检测疫苗接种后人体是否产生了相应的抗体，从而判断免疫效果。

总结：虎红平板凝集试验是一种通过观察抗原-抗体反应的凝集现象来检测抗体的常用方法。

虎红平板凝集试验原理
虎红平板凝集试验是一种常用的微生物学检测方法，主要用于检测血清中的抗体和抗原。

该试验原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象，通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。

试验步骤：
1. 准备试剂和样品：将需要检测的抗原或抗体样品与相应的抗原或抗体试剂混合。

2. 在平板上滴加混合液：将混合液滴在准备好的平板上，通常是在平板上画出一条直线，然后在直线上滴加混合液。

3. 观察凝集程度：在一定时间内观察滴加的混合液是否出现凝集现象，凝集程度越明显，说明抗原与抗体结合的程度越高。

4. 结果判断：根据凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。

该试验的原理是基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。

抗原是一种能够引起免疫反应的物质，通常是一种蛋白质或多糖体。

抗体是一种能够识别并结合抗原的蛋白质，通常由免疫细胞产生。

在试验中，当抗原与抗体结合时，它们会形成一个复合物，这个复
合物会在液体中形成凝集物。

凝集程度越明显，说明抗原与抗体结合的程度越高。

通过观察凝集程度来判断样品中是否存在特定的抗体或抗原。

虎红平板凝集试验是一种简单、快速、经济的检测方法，广泛应用于临床诊断、疫苗研究和生物制品质量控制等领域。

但是，该试验也存在一些局限性，例如对于某些抗原或抗体的检测不敏感，需要结合其他检测方法进行综合分析。

虎红平板凝集试验是一种重要的微生物学检测方法，其原理基于抗原与抗体结合后形成凝集物的现象。

该试验具有简单、快速、经济等优点，但也存在一些局限性，需要结合其他检测方法进行综合分析。

布氏杆菌病虎红平板凝集实验操作流程材料与试剂以布氏杆菌病平板凝集反应为例。

1．玻璃板、刻度吸管等。

2．布氏杆菌平板凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清。

操作方法1．取洁净玻板一块，用玻璃铅笔划成方格，并注明待检血清号码。

2．取０.２ml吸管分别吸取0.08ml、0.04ml、0.02ml和0.01ml各放入一方格内。

大规模检验时，可只做２个血清量，大动物用0.04ml和0.02ml，中小动物用0.08ml和0.04ml。

每检一个样品需换一只吸管。

3．每格内加布氏杆菌平板凝集抗原0.03ml，滴在血清附近，而不要与血清接触。

用牙签（或火柴杆）自血清量最小的一格起，将血清与抗原混匀，每份血清用一根牙签。

4．混合完毕，将玻板置凝集反应箱上均匀加温或采用别的办法适当加温，使温度达到３０℃左右。

3min～5min内记录结果。

结果判定＋＋＋＋：出现大的凝集块，液体完全清亮透明，即100％凝集。

＋＋＋：有明显的凝集片，液体几乎完全透明，即75％凝集。

＋＋：有可见的凝集片，液体不甚透明，即50％凝集。

＋：液体混浊，有小的颗粒状物，即25％的凝集。

－：液体均匀混浊，即不凝集。

以出现＋＋凝集的血清最高稀释倍数作为该份血清的凝集价。

大动物（牛、马、骆驼等）以0.02ml出现凝集价判为布氏杆菌病血清阳性，0.04ml出现凝集价判为可疑。

中小动物（猪、山羊、绵羊等）以0.04ml出现凝集价判为该份血清为布氏杆菌病阳性血清，0.08ml出现凝集价判为可疑。

注意事项1．每次试验必须以标准阳性血清和标准阴性血清进行对照。

2．加抗原前必须摇匀。

3．反应温度最好保证在30℃左右，3min～5min内判定。

如反应温度偏低，可适当延长判读时间。

4．如用两个血清量作试验，任何一个血清量出现凝集反应时，则需要用四个血清量重检。

5．平板凝集反应最好是用于初筛，如出现阳性或可疑反应，再用试管凝集反应进行复检，以定性。

6．平板凝集反应与试管凝集反应的关系。

布病试管凝集试验（人畜检测方法相同）一、实验前准备1、试管的准备①把试管浸泡于带有洗涤剂的温水中30分钟，浸泡后用试管刷将其刷干净。

先用自来水冲洗10遍，再用去离子水冲洗1遍②试管冲洗干净后倒置于篮子中，等水沥干后置干燥箱中，160℃干燥3个小时（整个干燥过程需要5——6个小时）。

③实验前要配置0.5%的石炭酸生理盐水实验前要配置的石炭酸生理盐水配置方法：称取0.5克石炭酸加入100ml的生理盐水中121℃高压30分钟。

2、试剂的准备①标准抗原：按照说明书使用。

使用时充分摇匀，用稀释液作1:20(工作浓度)稀释。

②标准阳性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

③标准阴性血清冻干品，使用前用蒸馏水溶解至规定容积。

3、被检血清①按常规方法采血分离血清血清必须新鲜，无明显蛋白絮凝物、无溶血和无腐败气味。

②运送和保存血清样品防止血清冻结和受热，以免影响凝集价。

若3d内不能送到实验室，可用冷藏方法运送血清。

二、试验操作过程1、确定被检血清的稀释度牛、马、骆驼稀释用1:50、1:100、1:200、1:400（4个稀释度）；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50、1:100、1:200（4个稀释度)。

大规模检疫时也可用2个稀释度，牛、马、骆驼用1:50、1:100；猪、山羊、绵羊和狗用1:25、1:50，为测定强阳性血清效价，稀释度可以增加。

2、稀释被检血清：猪、山羊、绵羊和狗血清的稀释①每份被检血清用4支试管，标记检验编号后第I管加 1.15 mL 稀释液，第2-4管各加人0.5 m L稀释液。

②取被检血清0.1 mL，加人第1管，充分混匀后吸弃0.25 mL。

③从第1管中吸取0.5mL加人到第2管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第4管，从第4管弃去0.5mL，稀释完毕。

④从第1 至第4 管的血清稀释度分别为 1：12.5,1：25,1：50,1：100。

3、加抗原将0. 5 m L 抗原抗原(1:20)加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，猪、羊或狗的血清稀释则依次变为 1 : 25,1 : 50,1 : 100,1：200；牛、马和骆驼的血清稀释度则依次变为 1：50,1：100,1：200,1:400。

782018.03基础研究虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测人布病抗体的对比分析刘佳国甘肃省张掖市民乐县疾病预防控制中心 甘肃省民乐县 734500【摘　要】目的：研究虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测人布病抗体的效果。

方法：本次研究选取的研究对象为2014年1月1日-2017年12月31日期间的饲养员、清洁工人等人群的血清标本1000份,分别进行虎红平板凝集试验、试管凝集试验，观察人布病抗体的检出情况。

结果：在1000份血清标本中，虎红平板凝集试验与试管凝集试验的人布病抗体阳性率分别为5.90%、3.30%，且前者的敏感度、特异度及准确性依次为100.00%、97.31%、97.40%（P<0.05）。

结论：虎红平板凝集试验应用在人布病抗体的检测中具有较高的敏感性和准确性，效果优于试管凝集试验，但为了提高临床诊断准确率，可结合应用两种凝聚试验方法。

【关键词】人布病抗体；虎红平板凝集试验；试管凝集试验布鲁菌病(brucellosis ，布病)是一种人畜共患病，人类在感染此病后会出现发热、多汗等症状[1,2]，若未得到及时有效的治疗会向慢性疾病转变，累及多个器官脏器，对患者的工作、生活产生较大的影响，因此尽早诊断并接受治疗十分重要。

为了比较两种试验方法在检测人布病抗体中的作用，进行了本次研究，正文详细内容如下：1 资料和方法1.1 资料研究对象：饲养员、清洁工人等人群的血清标本1000份，选取时间：2014年1月1日-2017年12月31日。

血清标本对应的研究对象情况——性别：600例男性，400例女性；年龄范围：以18岁为下限值，以70岁为上限值，年龄平均值（43.25±6.17）岁。

1.2 方法采集方法：采集清晨研究对象空腹状态下的静脉血，通过离心处理取得上层血清。

虎红平板凝集试验：将待检血清30微升置于玻片上，再滴加虎红平板凝集抗原30微升，利用牙签将两者混合均匀，设置对照（阳性血清、阴性血清），在5min 后对结果进行观察，判定标准：阳性（+）--肉眼可见颗粒或者是凝聚片出现，阴性（-）--液体均匀但较为浑浊。

随着全国各地牛养殖业规模的不断扩大，养牛数量越来越多，各种传染性疾病发病率也呈现逐年上升的趋势。

布鲁氏杆菌病是牛养殖业中较为常见的疫病之一，也是一种人畜共患病，具有较强的传染性与危害性，已被我国列为二类动物性传染病。

该病一旦暴发流行，则会长期潜伏在养殖场内难以净化，当前尚无特效药可以治疗，很容易给养殖户造成不可挽回的经济损失。

因此，如何对牛布鲁氏杆菌病进行有效净化并做好预防控制工作显得尤为重要。

一、牛布鲁氏杆菌病原及流行特点1、病原学特征布鲁氏杆菌病由布鲁氏杆菌感染所致，其菌属众多，当前已知的就有19个生物型、6个种类，该病菌主要寄生在细胞内，侵袭力与传播力均较强，主要侵害宿主淋巴系统及生殖系统。

布鲁氏杆菌外观呈球杆、球型或短杆状，其中牛属菌多呈短杆状，长度为0.5～1.3μm，宽度约为0.4μm，未长有鞭毛、荚膜和芽孢等结构，为革兰式染色阴性菌，涂片镜检多呈单个排布。

该病菌在外界环境中适应能力极强，阳光直射条件下可存活4h，但难耐湿热环境，在60℃温度条件下30min即被灭活，70℃温度条件下5min即被灭活，100℃热水中会被立即灭活，普通的消毒剂均可将其杀灭。

2、流行病学人类与多种动物均易感染布鲁氏杆菌病，其中，以牛、羊、猪等易感性最强，母畜比公畜更易感，成年动物比幼龄动物更易感，发病率也更高。

布鲁氏杆菌病在一年四季均可发生，尤以春、夏季高发。

牛养殖场内患病牛与带菌牛是该病主要的传染源，公牛感染后期的精液、尿液、粪便中会携带大量病菌，患病的妊娠母牛生产或流产后，其乳汁、胎衣、胎盘羊水、恶露等分泌物中携带有大量致病菌，对产房周边环境造成污染，健康牛接触后染病。

通常情况下，患有该病的妊娠母羊在流产后的3年内，其阴道分泌物中仍带有布鲁氏杆菌。

呼吸道、生殖道、消化道等是该病主要的感染途径，也可通过破损的皮肤或黏膜等传染该病。

二、临床症状及病理变化1、临床症状布鲁氏杆菌病多呈地方性流行，牛只染病后通常会有15～180d的潜伏期，大部分为隐性感染。

虎红平板凝集试验（RBPT）检测布鲁氏菌病的原理和方法由于培养的营养条件苛刻而且时间长，所以病的诊断以血清学诊断为主。

其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应，用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。

虎红平板（RBPT）灵敏度高，价格便宜，操作方便，检测快速，适于群体布鲁氏菌病的普查。

在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。

检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体用虎红染料染色后，悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。

试验原理：虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。

由于所用的抗原是酸性（）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反应的特异性。

虎红平板凝集试验具体方法如下：一、材料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2、被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

3、洁净的玻片或玻璃板，其上划分成4cm2的方格。

4、吸管或移液器，适于滴加液体。

5、牙签、混合棒或火柴杆，供搅拌用。

二、操作方法1、实验前，应将血清和抗原在室温放置30-60min。

2、将玻璃板上各格标记被检血清号，然后加相应被检血清。

3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原。

4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在5分钟内观察结果。

5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。

三、结果判定1、在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。

四、方法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病，方法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检疫；2、该方法敏感性较好，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。

动物布鲁氏菌病诊断技术1、琥红平板凝集试验(Agg)1.1 材料准备：1.1.1 抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

1.1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

1.1.3 洁净的玻璃板，其上划分成4cm的方格。

1.1.4 吸管或微量移液器，适于滴加0.03ml。

1.1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2.2 操作方法：2.2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03ml。

2.2.2 在受检血清旁滴加抗原0.03ml。

2.2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.2.4 每次试验应设阴、阳性血清对照。

2.3 判定2.3.1 在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

2.3.2 受检血清在4分钟内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（—）。

2、试管凝集试验2.1 材料准备2.1.1 血清稀释液0.5%石炭酸生理盐水。

检验羊血清时用含0.5%石炭酸的10%盐溶液，如果稀释用含0.5%石炭酸的10%盐溶液，抗原的稀释亦用含0.5%石炭酸的10%盐溶液。

2.1.1.1牛血清稀释液的配制:石炭酸 5克氯化钠 8.5克加蒸馏水或去离子水至1000毫升，10磅20分钟消毒备用。

2.1.1.2羊血清稀释液的配制:石炭酸 0.5克氯化钠 10克加蒸馏水或去离子水至100毫升（10%浓盐水），10磅20分钟消毒备用。

2.1.2 抗原、阳性血清和阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。

2.1.3 凝集试验管（三分管）、试管架、吸管（移液器）和温箱。

2.2 操作方法2.2.1 按常规方法采血分离血清。

被检血清必须新鲜，无明显蛋白凝固，无溶血现象和无腐败气味。

采血应在早晨喂饲前或停食6小时后采血，以免血清浑浊。

冬季采血，防止冻结，以免溶血。

2.2.2 运送和保存血清样品时防止冻结和受热，以免影响凝集价。

若3天内不能送到实验室，按每9毫升血清加1毫升0.5%石炭酸生理盐水（徐徐加入）防腐，也可用冷藏方法运送血清。

奶牛布鲁氏菌病血清学诊断方法的比较研析讨论作者：鲁毛才让来源：《农民致富之友》 2021年第17期鲁毛才让奶牛布鲁氏菌病是一种动物源性传染病，属于人畜共患病，动物患病，母牛容易发生流产，公牛容易患睾丸炎和附睾炎等疾病，对动物的生长发育产生非常大的影响。

我国针对布鲁氏病采用血清诊断方法进行诊断，主要采用虎红平板凝集试验、快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验等。

通过比较三种方法的优缺点，虎红平板凝集试验法与快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验法相比较，虎红平板凝集试验方法的操作更加简便，成本低，且对阳性病牛的检出率比较高，比较差异显著（P＜0.05），而快速诊断试纸卡检测、间接酶联免疫吸附试验法比较，在阳性检出率方面无显著差异（P＞0.05）。

因此，在奶牛布鲁氏菌病血清学诊断过程中，需要结合奶牛发病的具体地区，选择相对合适的方法进行检测，提高奶牛布鲁氏菌病血清诊断效果。

近些年，我国养殖业的发展速度越来越快，养殖规模也不断扩大，其中牛养殖满足了市场对牛肉的需求，在牛养殖期间布鲁氏菌病的发病率比较高，对奶牛的养殖产生负面影响。

布鲁氏菌病又称为波状热，属于动物源性传染病，属于人畜共患的慢性传染病，因该疾病的发病与地域、职业有密切的关系，牛患病后容易影响牛养殖的质量，人患病后疾病难以根除，对人体健康不利。

为了有效控制布鲁氏菌病的发病率，提高治疗效果，我国临床主要采用血清学诊断检测，降低了奶牛布鲁氏菌病的发病率。

下面针对常见的疾病诊断检测方法进行对比分析，为我国奶牛布鲁氏菌病的诊断检测提供有价值的参考。

一、资料与方法1、资料①选取的样品在2017年2月-2019年6月期间，分批在规模化养殖场中选取患有布鲁氏菌病症状的奶牛2000头。

②采样试剂分别采用布鲁氏菌虎红平板凝集抗原、布鲁氏抗体快速诊断试纸卡、间接酶联免疫吸附试验试剂盒对样品进行检测。

③使用仪器酶标仪、自动洗板机、高速冷冻离心机、Eppendorf 移液枪。

布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比王　刚1，范伟兴2，刘　坤2，田丽华3，温建新1（1. 青岛农业大学动物医学院，山东青岛　266109；2. 中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛　266032；3. 青岛西海岸新区动物疫病预防与控制中心，山东青岛　266400）摘　要：布鲁氏菌病（简称布病）严重危害畜牧养殖业安全和人类健康，而有效的检测方法能够为布病的预防、检测和净化提供技术支持。

目前针对布病的血清学检测方法主要包括：布病虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、全乳环状实验（MRT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光偏振测定法（FPA）、补体结合试验（CFT）以及琼脂扩散试验（NH-GD）等。

不同的血清学检测方法各有优缺点：RBT操作简便，敏感性较高，但环境会对检测结果产生一定影响；ELISA敏感性较高，可一次性检测多个样本，但对仪器要求较高；FPA短时间内能够检测大量样品，操作简单，特异性和敏感性与ELISA相似，但需要专业的荧光偏振仪器；SAT特异性较强，但敏感性不高，操作步骤繁琐；CFT的特异性和敏感性都高于SAT，但试验较为繁琐，耗时长；MRT一般只用于牛奶样本检测，无需采血，特异性强，但对牛奶的质量有一定要求；NH-GD对疫苗免疫样本和野毒感染样本具有鉴别诊断能力，但抗原纯度要求高。

因此，RBT、MRT、ELISA、FAP和NH-GD更适合用于布病初筛，而SAT和CFT更加适用于布病复核。

未来应探索更多的血清学检测方法，如荧光微球法、半抗原鉴别诊断方法等，以便为布病检测提供更优选择。

关键词：布鲁氏菌病；血清学；检测方法；优缺点对比中图分类号：S851.3 文献标识码：A 文章编号：1005-944X（2021）05-0072-04DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2021.05.016Comparison on the Serological Detection Methods for BrucellosisWang Gang1，Fan Weixing2，Liu Kun2，Tian Lihua3，Wen Jianxin1（1. School of Veterinary Medicine，Qingdao Agricultural University，Qingdao，Shandong　266109，China；2. China Animal Health and Epidemiology Center，Qingdao，Shandong　266032，China；3. Qingdao West-Coast Economic New Area Center for Animal Disease Prevention and Control，Qingdao，Shandong　266400，China）Abstract：The animal husbandry safety and human health have been seriously endangered by brucellosis，against which，the prevention，detection and purification could be technically supported by an effective detection method. Current serological detection methods mainly include rose-bengal plate agglutination test（RBT），standard-tube agglutination test（SAT），whole milk ring test（MRT），enzyme-linked immunosorbent test（ELISA），fluorescence polarization Assay（FPA），complement fixation test（CFT）and native hapten-gel diffusion test（NH-GD），which are with different advantages and disadvantages as follows：RBT is user-friendly with high sensitivity，but is subject to environment to some extent；ELISA can detect several samples at one time with high sensitivity，but advanced device will be required；FPA can detect a large number of samples in a short time with similar specificity and sensitivity as ELISA，but a specific fluorescence polarization instrument will be required；SAT is with good specificity but lower sensitivity and complicated operation steps；CFT is with higher specificity and sensitivity compared to SAT，but is收稿日期：2021-02-07　修回日期：2021-02-26基金项目：山东省现代农业产业技术体系特种经济动物创新团队项目（SDAIT-21）通信作者：温建新。

虎红平板凝集试验与试管凝集试验检测人布病抗体的比较分析[摘要]目的：观察分析在人布病抗体中进行虎红平板凝集试验以及试管凝集试验检测效果比较。

方法：选择我疾控中心于2021年7～12月收到的60例人布病患者血清样品为研究对象,将所有样品按照检测方法的不同,分为对照组（30例,进行试管凝集试验检测）和观察组（30例,进行虎红平板凝集试验检测）。

对两组的阳性率、阴性率以及布鲁菌检出率进行收集和分析。

结果：对照组进行试管凝集试验检测后阳性27（90.00%）例,阴性3（10.00%）例,观察组进行虎红平板凝集试验检测后阳性30（100.00%）例,阴性0例,观察组进行虎红平板凝集试验检测后检测效果明显优于对照组进行试管凝集试验检测后检测效果（P＜0.05）。

在布鲁菌结果方面上,观察组布鲁菌检出率为93.33%；对照组布鲁菌检出率为76.67%；观察组数据相比较对照组较（P＜0.05）。

结论：在人布病抗体中采用虎红平板凝集试验检测能够提高敏感性和准确性,具有明显检测效果,在实际工作中为保证精确度,往往采用虎红平板凝集和试管凝集试验相结合检测。

[关键词]虎红平板凝集试验；试管凝集试验；人布病抗体；布鲁菌人布病是由于人类通过接触感染动物的排泄物或者摄入感染或者患病动物制成的食品而患病。

患病后患者主要表现为大汗、乏力、关节痛以及肝脾、淋巴结肿大等症状。

如果患者未及时进行控制治疗，则会使细菌在细胞内不断繁殖，形成局部病灶，病菌在细胞内破裂分布到各个脏器器官内，形成多发病灶，严重影响患者生活质量，威胁生命安全，给家庭、社会、医疗带来负担。

因此如果发现存在以上异常现象，应该及时就医采取科学、合理检验方法，结合临床症状及接触史，判断临床病情，做到早发现早治疗。

为此，选择我疾控中心于2021年7～12月收到的60例人布病患者血清样品为研究对象，本文分析对于人布病抗体采用试管凝集试检测和虎红平板凝集试验检测实际效果，先报告如下。

虎红平板凝集试验(检测布病初筛试验)—人畜检测法相同虎红平板凝集试验介绍：虎红平板凝集试验是用来诊断布氏杆菌病。

布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患的急、慢性传染病。

因接触病畜或食用受染牛奶或奶制品而感染。

潜伏期1～3周，临床特点是缓慢起病，长期发热、多汗、虚弱、全身痛和关节痛，急性期症状多在3～6月内消退。

虎红平板凝集试验正常值：阴性虎红平板凝集试验临床意义：异常结果：阳性(50%)凝集：诊断布氏杆菌病符合率为95.92%。

需检测人群：感染,常发热,多汗,虚弱,全身痛者虎红平板凝集试验注意事项：不适合人群：没有检查前：使用前应充分摇匀样本，出现污染或有摇不散的凝块时不得使用检查时：抗原和血清应在室温中放置30～60分钟后，再进行试验虎红平板凝集试验检查过程：1 材料准备1.1 试剂:抗原、标准阳性血清、阴性血清。

1.2 受检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

1.3 洁净的玻璃板，其上划上4cm 2 的方格。

1.4 吸管或分装器，适于滴加0.03ml。

1.5 牙签或火柴杆，供搅拌用。

2 操作方法2.1 将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应的血清0.03ml。

2.2 再受检血清旁滴加抗原0.03ml。

2.3 用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合。

2.4 每次试验应设阴、阳性对照。

3 结果判定在阴阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。

受检血清在4 分钟内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性（+），无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性（-）。

注：对出现阳性反应的动物须进一步作补体结合试验，或其他辅助诊断试验（试管凝集试验）。

布鲁氏菌病虎红平板凝集试验抗原系用抗原性良好的布鲁氏菌菌株，接种于适宜培养基培养，收获菌体，经加热灭活，离心后用虎红染液染色，悬浮于乳酸缓冲液中制成。

反应强度的判定标准“-”无凝集，呈均匀粉红色。

“+”稍能查到凝集，稍有卷边形成，凝集物间液体呈红色。

“++”形成明显卷边，凝集块间液体稍清亮。

常规试管凝集试验与虎红平板凝集试验检测布病抗体结果对比分析本文的主要研究目的，是通过虎红平板凝集试验以及常规试管凝集试验对布鲁菌病进行检测，并且分析对比两者的检测结果。

在实际检测的过程中，主要运用试管凝集试验以及虎红平板凝集试验这两种方法。

通过对试验结果分析发现，在四百份的高温血清当中，其中有十八份试管凝集试验阳性，完全来自于三十六份的虎红平板凝集试验的阳性当中。

因此我们能够得出，在对布鲁菌病的实际检测过程中，应用通过虎红平板凝集试验进行有效的筛选，所得到的阳性样品可以通过试管凝集试验来进行复核。

所谓布鲁菌病，通常也被人称作布病或者波状热病。

这种疾病主要是布鲁菌所引发的，并且在世界范围内分布广泛，人类与牲畜都会感染这种慢性的细菌性传染疾病。

布鲁菌病在我国隶属于二类牲畜疫病。

在我国大多数布鲁菌病发病率高的区域，国家颁布了2015年必须对该疾病进行有效的控制，到了2020年必须彻底的清除该疾病。

因此，?τ诓悸尘?病阳性高效的检测手段，对该疾病的预防与医治都有着至关重要的意义。

疾病控制机构通过运用试管凝集试验方法以及虎红平板凝集试验方法对四百例高危群体的样品血清进行检测对比分析。

其详细的分析检测报告结果如下。

1 材料与方法1.1 材料在实际检测的过程中，所使用的材料包括：试管凝集抗原试剂，虎红平板凝集抗原试剂，并且都在有效期之间进行使用。

所检测的血清样品来自于四百例布鲁菌疾病的高危群体。

1.2 方法1.2.1 虎红平板凝集试验（RBPT）在实际检测的过程中，将需要进行检测的血清样品，取出0.03mL，放置于玻片上，并且将0.03mL的虎红平板抗原加入到其中，并且均匀混合，其判定结果将会在5min之内产生。

如果玻片上的混合物当中产生颗粒状的物质或者产生凝集片，其检测结果都为阳性（+）。

如果混合液体呈现出十分浑浊的状态，其检测结果都为阴性（-）。

1.2.2 试管凝集试验（SAT）在运用该种方法进行实际检测的过程中，需要稀释被检测的血清样品。

布病虎红平板凝集试验与试管凝集试验对比研究摘要：本文以虎红平板凝集试验和试管凝集试验这两种方法对布鲁菌病进行检测，并对其检测结果进行对比分析。

试验选择200例牲畜血清作为研究对象，对所有牲畜同时进行虎红平板凝集试验和试管凝集试验，并从两种试验的准确率入手进行分析。

关键词：布病；虎红平板凝集试验；试管凝集试验；对比研究前言：布病又叫做布鲁菌病，此病广泛分布在全世界，为人畜共患病。

在我国属于二类牲畜疫病，主要在狗、山羊、绵羊、猪等家畜中出现，野生动物也会受到感染。

此病最为有效的检测方式为试管凝集试验和虎红平板凝集试验，为提升试验结果准确率，下文对这两种试验结果进行对比分析。

1试验对象及方法1.1试验对象本次试验将200例牲畜血清作为试验对象，待测血清样本采集为某市养殖场，采集后均处于-20℃保存。

1.2材料本次试验使用材料为试管凝集抗原试剂和虎红抗原试剂，两种试剂均在有效期，待检测的血清样本来自上述200例牲畜。

1.3方法1.3.1SAT使用试管凝集试验此种检测方法需要先对患者的血清样本进行稀释。

稀释需要使用五支试管稀释一例血清样本。

在第一支试管中加入2.3毫升的0.9%氯化钠溶液，在第三、四、五支试管中加入0.5毫升的0.9%氯化钠溶液，第二支试管中则不需要加入。

再利用1毫升的吸管将待检测的血清样本取0.2毫升混入至第一支试管中，并确保血清和0.9%氯化钠溶液充分混合。

确定试管中样本已经充分混合后再利用吸管将第一支试管中的溶液分别吸取0.5毫升加入至第二支和第三支试管中，当第三支试管中样本充分混合后，再次利用吸管将0.5毫升样本转移至第四支试管中，最后将第四支试管中的0.5ml溶液转移至第五支试管后进行均匀混合。

此时从第二支试管至第五支试管的稀释度为，8%、4%、2%、1%。

完成血清样本的稀释后再将0.5毫升的抗原试剂加入其中。

此时对试管内样本进行观察，其稀释度分为别4%、2%、1%、0.5%。

并同时准备对照观察所需要的比浊管，将所有待使用的比浊管、试验管进行震荡后将所有血清样本和制备后的设备放入37℃的温箱内，放置时间控制在22小时，取出后将其在常温环境中放置两个小时，最后将比浊管当前的状态为依据进行判断。