益气活血方对肝星状细胞LX-2增殖和凋亡的影响

中药对干细胞的作用研究进展吕梦婷;黄晓桃;吴云霞【期刊名称】《中西医结合研究》【年(卷),期】2018(010)005【总页数】4页(P261-264)【作者】吕梦婷;黄晓桃;吴云霞【作者单位】华中科技大学同济医学院药学院 ,中药/药理系,武汉 430030;华中科技大学同济医学院附属湖北省妇幼保健院 ,武汉 430070;华中科技大学同济医学院药学院 ,中药/药理系,武汉 430030【正文语种】中文干细胞是一类具有多向分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞，按其来源不同可分为胚胎干细胞和成体干细胞。

在特定条件下，干细胞可以分化成功能不同的细胞，形成多种组织和器官。

近年来，随着研究的逐渐深入，在越来越多的组织和器官中均发现了干细胞的存在[1]。

干细胞的多向分化潜能和自我复制功能，使其在组织结构和功能的维护更新及损伤修复中发挥重要作用，因此干细胞的应用将为临床某些疾病的治疗提供新方法和新思路[2]。

中医药具有几千年悠久历史，不仅是中华民族的宝贵财富，也是世界传统医学的重要组成部分。

中药材来源广泛、作用靶点多且毒副作用小，在各类疾病的治疗中发挥着重要作用。

随着对中医药的不断深入研究，许多学者发现，中药能够促进干细胞的增殖和分化，并能直接在干细胞治疗中产生协同效应，为疾病的治疗开辟新前景。

近年来有关中药干预干细胞的研究成为热门领域，现本文从基础和临床两个方面对中药复方、单味药及其有效成分对干细胞作用的研究作如下综述。

1 中药对干细胞的作用1.1 中药复方对干细胞的作用目前，中药大多以复方的形式治疗疾病。

复方体现了中药之间的协同效应，达到增效减毒的目的，因此对复方的研究与实际临床应用更贴近。

近年来，中药复方对胚胎干细胞、骨髓间充质干细胞、造血干细胞乃至毛囊干细胞的作用均有较多文献报道，其为中药联合干细胞移植治疗相关疾病奠定基础。

安红梅等[3]以食用左归丸的大鼠含药血清培养小鼠胚胎干细胞CRL-1825细胞株，以探讨补肾阳中药对小鼠胚胎干细胞的影响，结果发现补肾阳中药可以有效抑制CRL-1825细胞凋亡。

活血化淤法联合化疗在非小细胞肺癌中的应用分析【摘要】目的：分析非小细胞肺癌中采用活血化瘀法联合化疗的疗效。

方法：将80例非小细胞肺癌患者分成试验1组和试验2组，试验1组进行化疗，试验2组联合活血化瘀法，比较疗效。

结果：从病情控制方面来看，试验2组患者中医症状评分低于试验1组，且疾病控制率高于试验1组；从预后方面来看，试验2组患者免疫功能指标改善效果较高，且不良反应发生率较低，生活质量评分得到提高；所有数据组间比较均P<0.05。

结论：非小细胞肺癌患者在进行化疗的同时，配合活血化瘀法进行干预，可控制病情，提高预后。

【关键词】活血化瘀法；化疗；非小细胞癌；治疗效果肺癌是当前恶性肿瘤疾病中比较常见的一种，在肺癌众多类型中，非小细胞肺癌是高发类型，近几年伴随老龄化问题不断加重下，老年人数量持续增多，而老年人作为肺癌高发群体，导致肺癌发生率持续增高。

当前临床中针对非小细胞肺癌患者的治疗，手术是最佳治疗手段，但是如果患者确诊时间较晚，已经错过手术最佳治疗时机，这时则需要采取化疗方式治疗，以控制患者病情发展，延长生存期限。

但是化疗治疗因为药物的特殊性，在治疗期间，可能会产生较为显著的不良反应，同时还可能会影响疗效，预后效果较差。

这些年在临床研究持续探讨下发现，非小细胞肺癌从中医学方面入手进行治疗干预可以发挥出一定的优势，中医学认为非小细胞肺癌属于“肺积”“咳嗽”范畴，所以在治疗上采取活血化瘀法进行治疗，通过中药汤方内治，可以巩固临床疗效，减少不良反应程度。

对此，下文选取非小细胞肺癌患者，分析化疗联合活血化瘀法的疗效。

1 资料与方法1.1基础资料选取2021年1月至2023年1月医院收治80例非小细胞肺癌患者为对象，搜集资料分组见表1。

表1患者资料组别n（例）男女比例年龄（岁）病程（月）TNM分期III期IV期试验1组4022:1846.84±1.3315.84±1.5231（77.50）9（22.50）试验2组4023:1746.91±1.4215.96±1.4129（72.50）11（27.50）X2 /t0.05080.22760.36610.26670.2667P0.82160.82060.71530.60550.60551.2方法试验1组进行化疗治疗，主要选择紫杉醇和顺铂方案，通过静脉滴注的方式，紫杉醇剂量135mg/m2，接着给予顺铂60mg/m2静脉滴注，以21天作为一个治疗疗程，持续治疗两个疗程。

桃红四物汤的药理学研究进展李翊;彭代银【摘要】This article is a review of the latest progresses achieved in studying the pharmacological aspects of Taohong Siwu Decoction in rnthe context of the effects on cardiovascular system, hones, traumatic injury with blood stasis syndrome, hepatic, anti-tumor, gynecological rndisease,hoping to provide more scientific evidences for Taohong Siwu Decoction studies.%该文从对心血管系统的作用、对骨骼的作用、对损伤血瘀证的作用、对肝脏的作用、抗肿瘤作用、对妇科疾病作用等几个方面综述了桃红四物汤的药理学研究进展,为桃红四物汤研究提供科学依据.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)005【总页数】3页(P529-531)【关键词】桃红四物汤;药理学;研究进展【作者】李翊;彭代银【作者单位】安徽中医学院,安徽省高等学校省级现代中药重点实验室,安徽,合肥,230038;安徽中医学院,安徽省高等学校省级现代中药重点实验室,安徽,合肥,230038【正文语种】中文桃红四物汤源自于清·吴谦的《医宗金鉴》，为活血化瘀方中的经典方剂。

由桃仁、红花、当归、白芍、熟地黄、川芎等6味中药组成，具有养血活血，祛瘀生新之功，被古代医家推崇为调经要方，主治妇女月经不调及痛经，现代常用于血瘀引起的多种病症。

药理学研究证明，其不仅具有改善心功能、抗心肌缺血、抑制血小板聚集、改善血液流变学及微循环作用，而且具有抗缺氧、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、降血脂、增强免疫功能等多种功效。

益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺miR-375表达水平和胰岛功能的影响袁洁;张军;戴金颖;王顺意;徐雪梅;赵静;刘颖【摘要】目的探讨益气养阴活血方对2型糖尿病大鼠胰腺组织中miR-375表达水平的影响,并分析其与胰岛β细胞功能的相关性.方法采用小剂量链脲佐菌素(STZ)加高脂饮食诱导2型糖尿病大鼠模型.设空白组、模型组、益气养阴活血方(自拟)高、中、低剂量治疗组,于治疗8周后处死大鼠.分别测定大鼠体质量、空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hBG)、胰岛素敏感指数(ISI)并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),胰岛素分泌指数(HOMA-β)光镜下观察胰岛形态学变化,通过实时荧光定量PCR技术检测胰腺组织中miR-375的表达水平.结果经益气养阴活血方治疗后,大鼠的体质量、FBG、2hBG均不同程度降低(P＜ 0.05);HOMA-IR均有所降低,ISI HOMA-β均有所升高(P＜0.05);胰岛细胞形态有不同程度改善;胰腺组织中的miR-375表达量显著降低,模型组(2.29±0.91),益气养阴活血方低剂量组(0.33±0.21),中剂量组(0.43±0.32),高剂量组(0.48 ±0.19),治疗前后比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论益气养阴活血方可改善胰岛β细胞功能.其改善的原因可能与胰腺中miR-375表达下调有关.%Objective To study the effect of Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction on miR-375 in pancreatic tissue and on the function of β cells in diabetic rat models.Methods Diabetic rat models were established using high-energy diet and intravenous injection of streptozocin(STZ).The rats were divided into blank group,model group,and high-,medium-and low-dose Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction groups.After 8 weeks of administration,body weight (BW) was measured and blood was collectedfor detection of fasting blood glucose (FBG),fasting bloodinsulin(FINS),insulin sensitive index(ISI) and for calculation of the indexes of insulin resistance(HOMA-IR).Before the rats were sacrificed,2-hour plasma glucose(2hPG) was determined.The histopathological features in the islet tissue were examined with HE staining.The level of miR-375 in the islet tissue was detected with qPCR.Single factor analysis of variance was used to sort out the data.Results After the treatment with Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction,the levels of WB,FBG,2hPG,FINS and HOMA-IR decreased significantly (P ＜ 0.05) compared with the model group while the ISI was increased significantly (P ＜ 0.05).The islet apoptosis was reduced by the administration of this pared with model group (2.29 ± 0.91),the levels of miR-375 in the high dose Yi Qi Yang Yin Huo Xue de coction group(0.48 ±0.19),medium dose group(0.43 ±0.32) and low dose group (0.33 ± 0.21) were decreased significantly (P ＜0.05).Conclusions Yi Qi Yang Yin Huo Xue decoction can improve islet beta cell function,and the mechanism may be associated with the down-regulation of the level of miR-375 in islet tissues.【期刊名称】《武警医学》【年(卷),期】2017(028)004【总页数】5页(P347-351)【关键词】益气养阴活血方;2型糖尿病大鼠;miR-375;胰岛β细胞功能【作者】袁洁;张军;戴金颖;王顺意;徐雪梅;赵静;刘颖【作者单位】063000唐山,华北理工大学;063000,唐山市中医医院内分泌一科;063000唐山,华北理工大学;063000唐山,华北理工大学;063000唐山,华北理工大学;063000唐山,华北理工大学;063000,唐山市中医医院内分泌一科【正文语种】中文【中图分类】R285.5糖尿病多属于中医“消渴病”的范畴，由于其起病隐匿且病程漫长，在糖耐量受损阶段及糖尿病早期，因无明显的“三多一少”的临床症状，往往被人们忽略，来医院就诊时往往发病已久。

水飞蓟宾对肝星状细胞增殖的抑制和促凋亡作用黄家明【期刊名称】《临床合理用药杂志》【年(卷),期】2017(10)33【摘要】目的探讨水飞蓟宾对肝星状细胞(HSC)增殖的抑制和促凋亡作用。

方法取对数生长期的HSC-T6细胞,用完全培养基将细胞悬液的浓度调至1×104个/ml,接种于96孔板,以MTT法分别检测OD值,以流式细胞术检测各组细胞凋亡率。

结果随着药物剂量的增加,细胞的增殖受抑,呈明显剂量依赖性。

对照组、25umol/L,50 umol/L,100 umol/L,200 umol/L,400 umol/L的凋亡比分别为(5.30±0.97)%、(14.60±1.70)%、(35.40±8.93)%、(47.60±11.34)%、(55.80±15.94)%、(69.60±22.93)%,可见水飞蓟宾剂量依赖性可诱导HSC-T6凋亡。

结论水飞蓟宾对HSC增殖和迁移具有明显的抑制作用,其机制可能与其诱导肿瘤细胞的早期凋亡有关,细胞凋亡与细胞周期活动密不可分。

【总页数】2页(P83-84)【作者】黄家明【作者单位】江西省赣州市人民医院消化内科【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.水飞蓟宾抑制乳腺癌细胞增殖和促进其凋亡的作用及机制2.水飞蓟宾抑制人乳头状甲状腺癌TPC-1细胞增殖及诱导凋亡作用的实验研究3.水飞蓟宾对人膀胱癌细胞系T24和5637的增殖抑制及凋亡诱导作用4.水飞蓟宾对大鼠肝HSC—T6储脂细胞增殖和胶原合成的抑制作用5.水飞蓟宾通过Fas/FasL信号通路促进肝星状细胞凋亡因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

养阴益气活血方药对VEC血管调节物质的影响
张旭;戴晓明
【期刊名称】《青海医药杂志》
【年(卷),期】2006(36)12
【摘要】目的:观察养阴益气活血方药物血清对血管内皮细胞(VEC)病理模型血管调节物质的影响及其对血瘀证的治疗机理。

方法:经LPS及养阴益气活血方药物血清作用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)12h后,取上清培养液测定NO与ET水平。

结果:养阴益气活血方药物血清可降低LPS所致NO与ET的升高。

结论:养阴益气活血方可以维持VEC血管调节物质的动态平衡,维持其正常生理功能,从而能有效预防和治疗血瘀证。

【总页数】3页(P1-3)
【关键词】养阴益气活血方;药物血清;人脐静脉血管内皮细胞;NO;ET
【作者】张旭;戴晓明
【作者单位】南京中医药大学基础医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R289.5;R331.36
【相关文献】
1.养阴益气活血方药对血管内皮细胞的影响 [J], 仲浩;吴德芹;周晶;张旭
2.养阴益气活血方药对大鼠血液流变学和血小板聚集的影响 [J], 杨洁红;郭莹;别晓东;刘华;万海同
3.养阴益气活血方药不同配伍对VSMC的影响 [J], 戴晓明;张旭;蒋明;杨进
4.养阴与益气活血方药对培养人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶等功能影响的对比研究[J], 万海同;白海波;杨洁红;余道军;杜月光;别晓东;严伟民;杨进;郑筱祥
5.益气活血养阴方药对实验性心衰大鼠血流动力学的影响 [J], 韩曼;赵小明;张灯成;于远望
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活血化瘀中药重塑肿瘤微环境
何伟
【期刊名称】《中医学报》
【年(卷),期】2024(39)6
【摘要】“血瘀”既是对机体整体血液高凝状态的病理归纳,也是对局部肿瘤微环境血脉病变的高度概括,是肿瘤中医病机认识的核心要素。

活血化瘀类中药具有抑制肿瘤细胞生长、增殖、侵袭及转移等功效,能够通过诱导肿瘤细胞凋亡及自噬、抑制肿瘤相关成纤维细胞活化、抑制肿瘤新生血管增殖、改善血液高凝状态、阻止细胞外基质降解、改善缺氧微环境、纠正酸性微环境、抑制炎性微环境、调控免疫微环境等重塑肿瘤微环境。

针对活血化瘀中药重塑肿瘤微环境的研究现状,今后需遵循中医辨治原则,注重肿瘤微环境时空异质性,阐释肿瘤微环境各成分间“正邪联动”效应机制,开展活血化瘀中药复方药效机制及临床疗效的真实世界研究,研发靶向肿瘤微环境纳米递药系统,以期为肿瘤病证的精准辨治提供指导。

【总页数】7页(P1188-1194)
【作者】何伟
【作者单位】陕西中医药大学基础医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R285
【相关文献】
1.活血化瘀法辅助治疗对肿瘤血管生成及肿瘤缺氧微环境影响的Meta分析
2.活血化瘀中药调节肿瘤微环境研究进展
3.活血化瘀中药改善肿瘤缺氧微环境研究进展
4.聚焦肿瘤微环境重塑:中药及其有效成分干预肿瘤复发转移的优势与思考
5.血小板介导的肿瘤微环境调控:活血化瘀中药的新靶点
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黄芪-当归药理作用及临床应用的研究进展摘要：本文基于黄芪-当归的相关文献报道，对其药理作用、临床应用进行如下综述。

关键词：黄芪-当归；药理作用；临床应用；研究进展黄芪与当归是我国临床常用的两种传统中药，两者组成的药对也是临床中较为多见的配伍方式。

现代药理学发现[1]，黄芪-当归配伍方案多用于气血两虚证，具有发挥益气活血的功效。

笔者对相关研究文献进行收集整理，对黄芪-当归的药理作用以及临床应用做如下综述。

1黄芪-当归药理作用1.1抗氧化应激氧化应激主要体现为细胞内部ROS与其他自由基持续上升，造成机体抗氧化与氧化平衡异常改变，最终导致组织或者细胞因氧化而受损。

徐天娇等[2]对当归补血汤有效组分配伍进行研究，发现当归中含有的阿魏酸、黄芪含有的黄芪甲苷协同作用能够实现对对大鼠脂质过氧化物(LPO)含量、抗氧化酶及Ⅱ相解毒酶的有效调节，并以此实现对大鼠机体氧化应激反应的改善。

李鑫琦等[3]则通过组方数据挖掘同样证实了以黄芪-当归为核心的组方具有免疫应答、氧化应激、信号传导等调控功效。

1.2调节物质能量代谢对细胞代谢来说，线粒体是其运作的关键场所。

有报道发现[4]，黄芪-当归配伍应用能够实现对线粒体生物能的有效调节，同时还能够实现对线粒体表达基因的上调与电位的增加。

袁嘉婧等[5]表示以黄芪-当归配伍为核心的当归补血汤，在作用于再障小鼠的骨髓单个核细胞时，能够促使细胞线粒体膜电位与自噬相关蛋白表达得到显著调节，并基于此促使造血细胞的快速凋亡。

1.3免疫力调节功能气虚血瘀症患者普遍合并有免疫功能持续下降和失衡情况，而黄芪-当归配伍应用能够实现对细胞因子基因表达和T细胞表达等免疫功能的调节，在发挥益气功效的同时，能够促进机体恢复正常生理功能。

骆紫燕等[6]发现当归、黄芪提取物的配伍可促使巨噬细胞激活作用得到有效调控，同时报道中指出，将当归、黄芪提取物制作成复方片剂为小鼠提供治疗，再次发现小鼠的RAW264.7细胞吞噬活性、NO、iNOS、TNF-α、IL-6水平均得到了有效调控。

㊃基础研究㊃基金项目:国家自然科学基金面上项目(82274323);四川省科技厅项目(2020YFS0379)作者单位:610072　成都中医药大学附属医院中心实验室[陶雨静(博士研究生)㊁李晖㊁陈婧㊁郭佳玲(硕士研究生)㊁张天洪㊁袁强华];成都中医药大学临床医学院[陶雨静(博士研究生)㊁郭佳玲(硕士研究生)]作者简介:陶雨静(1994-),2021级在读博士研究生㊂研究方向:肝纤维化基础与临床研究㊂E⁃mail:915114379@通信作者:李晖(1970-),博士,教授,中国防痨协会结核病与肝病专科分会常务委员㊂研究方向:肝纤维化基础与临床研究㊂E⁃mail:1400124746@益气逐瘀解毒颗粒对肝纤维化模型大鼠GIV 及下游信号通路PKA /CREB 表达的影响陶雨静　李晖　陈婧　郭佳玲　张天洪　袁强华【摘要】　目的　观察益气逐瘀解毒颗粒对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl 4)诱导的肝纤维化模型大鼠的抗纤维化作用及其对与Gα相互作用的囊泡相关蛋白(Gα⁃interacting vesicle⁃associatedprotein,GIV)㊁下游信号通路蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)表达水平的影响并探讨其作用机制㊂方法　SD 雄性大鼠予以CCl 4橄榄油混合物腹部皮下注射7周诱导肝纤维化模型,造模成功后随机分为益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组,扶正化瘀组及模型对照组,另设阴性对照组,共6组,每组大鼠8只㊂益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组分别予益气逐瘀解毒颗粒10.8g /(kg㊃d)㊁5.4g /(kg㊃d)㊁2.7g /(kg㊃d)灌胃给药,扶正化瘀组予扶正化瘀胶囊0.405g /(kg㊃d)灌胃给药,其余组等量蒸馏水灌胃,持续5周后处死大鼠收集标本㊂检测外周血丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)㊁天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);肝组织苏木精 伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)㊁MASSON 染色检测肝纤维化程度;免疫组化法检测肝组织α⁃平滑肌激动蛋白(alpha smooth muscle actin,α⁃SMA)含量,并采用实时荧光定量PCR 法(real time quantitative PCR,RT⁃qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原α1链(collagen type I alpha 1chain,Col1A1)㊁Ⅰ型胶原α2链(collagen type I alpha 2chain,Col1A2)㊁GIV㊁PKA㊁CREB mRNA 和蛋白表达水平㊂结果　益气逐瘀解毒颗粒可减少肝纤维化模型大鼠胶原纤维增生及肝细胞损伤,且与模型对照组相比,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组α⁃SMA 含量显著下降(P <0.05),Col1A1㊁Col1A2㊁GIV 表达显著下调(P <0.05),益气逐瘀解毒颗粒高㊁中剂量组PKA 表达上调(P <0.05),中剂量组CREB 表达显著上调(P <0.05);与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中剂量组α⁃SMA 含量显著下降(P <0.05),高剂量组GIV 表达下调(P <0.05),中剂量组PKA 表达上调(P <0.05)㊂结论　益气逐瘀解毒颗粒对CCl 4诱导的肝纤维化模型大鼠具有抗肝纤维化作用,可能与调节GIV 表达及其下游信号通路PKA /CREB 的表达有关㊂【关键词】　益气逐瘀解毒颗粒;　肝纤维化;　与Gα相互作用的囊泡相关蛋白;　蛋白激酶A /环磷酸腺苷反应元件结合蛋白信号通路【中图分类号】　R285.5　【文献标识码】　A　doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2024.01.002Study on the effect of Yiqi Zhuyu Jiedu granule by regulating GIV and PKA /CREB signal pathway on hepatic fibrosis in a carbon tetrachloride⁃induced rat modelTAO Yujing ,LI Hui ,CHEN Jing ,GUO Jialing ,ZHANG Tianhong ,YUAN QianghuaCentral Lab ,Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine ,Chengdu 610072,China Corresponding author :LI Hui ,E⁃mail :1400124746@【Abstract】　Objective　Study the effect and mechanism of Yiqi Zhuyu Jiedu granule by regulating GIV and PKA/CREB signal pathway on hepatic fibrosis in the carbon tetrachloride(CCl4)⁃induced rat model.Methods　Hepatic fibrosis was induced in male Sprague⁃Dawley rats by subcutaneous injection of mixture of CCl4and Olive oil twice a week for7weeks.The animals were randomly divided into six groups (each group,n=8)as follows:high,middle and low dose group each was treated with different dose of Yiqi Zhuyu Jiedu granule by gavage,the Fuzheng Huayu capsule group was treated with Fuzheng Huayu capsule,the model group and the control group was treated with distilled water.After5weeks,Alanine aminotransferase(ALT),aspartate aminotransferase(AST)were analyzed by ELISA and automatic biochemical instrument.The effect of Yiqi Zhuyu Jiedu granule on hepatic fibrosis was evaluated by histo⁃morphologically using hematoxylin and eosin(HE)staining and MASSON staining,and the collagen pro⁃portionate area was quantified.The content of alpha smooth muscle actin(α⁃SMA)in liver tissue was detected by immunohistochemistry.In addition,fibrosis⁃related factors,such as Collage typeⅠalpha1 chain(Col1A1),Collage typeⅠalpha2chain(Col1A2),Gα⁃interacting vesicle⁃associated protein (GIV),protein kinase(PKA)and cAMP response element binding protein(CREB)expression level, were evaluated using the method of real⁃time polymerase chain reaction and Western blot.Results　Yiqi Zhuyu Jiedu granules could decrease collagen fiber hyperplasia and hepatocyte injury in liver fibrosis model pared with the model group,the content ofα⁃SMA in each group of Yiqi Zhuyu Jiedu granules group was significantly decreased(P<0.05),and the expression of Col1A1,Col1A2and GIV was significantly down⁃regulated(P<0.05).The expression of PKA in the high and medium dose groups was up⁃regulated(P<0.05),and the expression of CREB in the medium dose group was significantly up⁃regulated(P<0.05).Compared with the Fuzheng Huayu group,the content ofα⁃SMA in the the high and middle dose groups of Chinese medicine compound was decreased significantly(P<0.05),the expression of GIV in the high dose group was down⁃regulated(P<0.05),and the expression of PKA in the middle dose group was up⁃regulated(P<0.05).Conclusion　Yiqi Zhuyu Jiedu granule has anti⁃hepatic fibrosis effect on CCl4⁃induced liver fibrosis model rats,which may be related to the regulation of GIV expression and its downstream signaling pathway PKA/CREB expression.【Key words】　Yiqi Zhuyu Jiedu granule;　hepatic fibrosis;　GIV;　PKA/CREB 肝纤维化是由多种致病因素引起的慢性㊁持续性肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应,细胞外基质(extracellular matrix,ECM)合成大于降解,导致过度沉积,形成肝纤维化[1]㊂其中,肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSCs)的激活是其发生的中心环节[2]㊂肝纤维化甚至早期肝硬化可以通过治疗发生逆转[3],及时进行有效的抗肝纤维化治疗是防止慢性肝病向终末期肝病转化的必要措施㊂益气逐瘀解毒颗粒由膈下逐瘀汤合小柴胡汤加减化裁而形成,作为临方制剂应用多年,治疗肝纤维化有确切疗效,可促进肝纤维化的消退㊂前期动物实验证实,益气逐瘀解毒颗粒可促进四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导肝纤维化大鼠模型的肝组织结构恢复,调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的平衡[4],降低促纤维化因子的表达[5],抑制HSCs的活化[6],从而确切改善肝纤维化程度[7]㊂但益气逐瘀解毒颗粒抑制HSCs活化的具体分子机制仍需要进一步明确㊂与Gα相互作用的囊泡相关蛋白(Gα⁃interacting vesicle⁃associated protein,GIV),又称微丝附着梁蛋白[8],是多结构域信号转导子,可以通过鸟嘌呤核苷酸交换因子基序激活Gαi蛋白调控下游多个受体相关信号通路[9⁃11]㊂研究发现,GIV是肝纤维化信号网络的关键枢纽,在损伤后的肝脏中表达,是HSC活化所必需的[12];且一旦表达,GIV抑制抗纤维化通路 环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)-蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)-磷酸化cAMP反应元件结合蛋白(p⁃cAMP response element binding protein,pCREB),使信号网络偏向纤维化[13]㊂GIV位于多个肝纤维化受体信号系统的中心,在肝纤维化信号网络中起整合作用,有望成为肝纤维化治疗的重要靶点㊂本研究在构建CCl4诱导肝纤维化大鼠模型基础上,研究益气逐瘀解毒颗粒对该大鼠肝纤维化模型的治疗作用,并进一步探讨其对GIV表达及下游PKA/CREB信号通路的影响,明确其作用靶点㊂1　材料与方法1.1　实验动物健康SPF级雄性SD大鼠58只,7周龄,体质量(220±20)g,由成都达硕实验有限公司提供,实验动物许可证号:SCXK(川)2015⁃030㊂普通饮食,适应性喂养1周后开始实验㊂1.2　实验药物益气逐瘀解毒颗粒由成都中医药大学附属医院药剂科制备,由党参10份㊁黄芪15份㊁莪术10份㊁当归10份㊁川芎5份㊁赤芍10份㊁丹皮10份㊁丹参15份㊁柴胡5份㊁黄芩7.5份㊁甘草2.5份等组成㊂制备方法:全方药物加入8倍量水,浸泡40分钟,煎煮3次,每次50分钟,合并3次滤液,浓缩至相对密度1.3,加入糊精,混合,在75℃下鼓风干燥6小时,粉碎过筛,加入80%乙醇,制粒,65℃下鼓风干燥4小时,整粒,分包装至10g/袋(含生药21.25g);扶正化瘀胶囊购自上海黄海制药有限公司(批号:190912,规格:0.5g/粒)㊂1.3　实验试剂及主要仪器测定Ⅰ型胶原α1链(collagen type I alpha1 chain,Col1A1)多克隆抗体(84336)购自美国CST公司,大鼠GIV多克隆抗体(ab113890)㊁PKA单克隆抗体(ab75991)㊁CREB单克隆抗体(ab32515)㊁Ⅰ型胶原α2链(collagen type I alpha2chain,Col1A2)多克隆抗体(ab96723)及α⁃平滑肌激动蛋白(alpha smooth muscle actin,α⁃SMA)单克隆抗体(ab32575)购自英国abcam公司;上述蛋白的PCR引物序列见表1;7500荧光定量PCR仪为ABI公司产品㊂1.4　动物造模㊁分组与给药1.4.1　肝纤维化大鼠模型制备　对大鼠腹部皮下注射CCl4㊁橄榄油混合液(按2∶3配制而成),每周注射2次,前4周每次给予剂量4mL/kg,后3周每次给予剂量3mL/kg,共7周㊂第7周末随机处死造模组及阴性对照组大鼠各5只,收集外周血,4℃离心20分钟,血清检测生化指标,另取肝右叶组织标本,通过苏木精 伊红(hematoxylin⁃eosin,HE)染色和MASSON染色以确定肝纤维化模型制备成功与否,具体参见文献[14]㊂CCl4皮下注射7周后,进行外周血生化指标的检测,结果提示,模型大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)㊁天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)均出现明显的增高,提示CCl4皮下注射后,模型组大鼠出现明显的肝功能损害,与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)㊂见表2㊂表2　造模后大鼠生化指标结果比较(x±s,U/L)组别鼠只ALT AST模型组5364.20±58.12a515.00±83.51a阴性对照组547.20±12.07105.20±37.69注:与阴性对照组比较,a P<0.05㊂ALT正常范围:23.5~71.9U/L; AST正常范围:76.2~149.5U/L㊂肉眼观察肝脏标本表面明显颗粒样凸起,HE 染色见肝索排列紊乱,肝小叶结构损坏,肝纤维化弥漫整个视野;MASSON染色可见肝纤维化已从中央静脉和汇管区周围向周围延伸,有形成假小叶的趋势,参照Knodell肝纤维化分期标准,肝纤维化分级达3级,提示肝纤维化模型制备成功㊂1.4.2　动物分组及给药　造模结束后,肝纤维化模型大鼠随机分成益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组,扶正化瘀组及模型对照组,每组各8只,另设阴性对照组8只㊂大鼠用药剂量根据等效体表面积公式计算,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组服用生药分别为10.8g/(kg㊃d)㊁5.4g/(kg㊃d)㊁2.7g/ (kg㊃d),将颗粒用温水溶解后等体积灌胃;扶正化瘀组使用扶正化瘀胶囊,药量为0.405g/(kg㊃d),等体积灌胃浓度;阴性对照组㊁模型对照组也均以等体积的蒸馏水灌胃,每日灌胃1次,连续5周㊂表1　PCR引物序列基因名称引物序列(5'-3')上游下游GIV GCCTTCCGATCCAAGCAATT TGCTAGTGGATGTTCTGCCA Col1A1TCAAGATGGTGGCCGTTACT CATCTTGAGGTC ACGGCATG Col1A2CAAGGTTTCCAAGGACCTGC ATCCATCCAGACCGTTGTGT PKA TTCCCATCCCACTTCAGCTC AAGTTACTCGTGTCCCCAGG CREB GCTGGCTAACAATGGTACCG AGGACGCCATAACAACTCCA β⁃actin GGAGATTACTGCCCTGGCTCCTA GACTCATCGTACTCCTGCTTGCTG1.5　标本采集灌胃5周后,大鼠禁食12小时,用10%苯巴比妥腹腔注射麻醉,开腹充分暴露腹主动脉,采血,4℃离心20分钟,血清存于-80℃保存备用;然后取出肝脏,剪下大小约0.6cm×0.6cm×0.6cm的肝右叶组织,放入10%的中性甲醛中固定,常规石蜡包埋,切片备用㊂另取大小约0.1cm×0.1cm×0.1cm新鲜肝组织-80℃保存,以备实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT⁃qPCR)检测使用㊂1.6　检测指标1.6.1　外周血生化指标检测　ALT㊁AST检测采用速率法,全自动生化检测仪进行检测㊂1.6.2　HE染色㊁MASSON染色进行病理组织学观察　标本取自肝右叶,10%的中性甲醛固定,常规石蜡包埋,切片,分别进行肝组织的HE染色和MASSON染色㊂参照Knodell肝纤维化分期标准,对大鼠肝纤维化程度进行评估,并参照肝纤维化SSS 计分标准,给予每个样本半定量评分㊂1.6.3　免疫组化法检测大鼠肝组织中α⁃SMA的表达　样本切片进行抗原修复,用3%的过氧化氢阻断其内源性过氧化物酶活性,清洗后,按照说明书分别加入一抗㊁二抗,DAB试剂盒显色,脱水㊁透明㊁风干后用中性树胶封片,再加盖玻片,显微镜下观察㊂1.6.4　RT⁃qPCR法检测大鼠肝组织中目标蛋白mRNA的表达　Trizol®Reagent提取转染肝组织总RNA,取纯化后的总RNA进行逆转录,37℃水浴1.5小时以合成cDNA模板进行qPCR检测,经过95℃10分钟预变性,95℃变性15秒,60℃退火㊁延伸15秒,共40个循环㊂以β⁃actin为内参,Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB基因的相对表达情况㊂1.6.5　Western blot检测大鼠肝组织中目标蛋白的表达　RIPA裂解液及超声破碎,提取大鼠肝组织总蛋白,BCA检测蛋白浓度,SDS⁃PAGE电泳㊁转移至PVGF膜,5%脱脂奶粉封闭,分别加一抗㊁二抗孵育,经ECL发光,X线胶片曝光,显影及定影,并以计算机图像扫描进行图像分析,测定灰度值,代表蛋白的表达量㊂1.7　统计学分析实验所得数据为计量资料,使用SPSS21.0统计软件进行处理㊂以均数±标准差(x±s)来描述计量资料的结果㊂组间结果比较统计分析前,经检验数据符合正态分布且方差齐,采用t检验进行结果分析,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2　结果2.1　生化指标比较灌胃治疗肝纤维化模型大鼠5周后,进行外周血生化指标的检测,结果提示,血清中ALT㊁AST 均在正常范围内,各组之间比较无显著差异(P>0.05)㊂见表3㊂表3　各组肝纤维化模型大鼠生化指标结果比较(x±s,n=8)组别ALT(U/L)AST(U/L)益气逐瘀解毒颗粒高剂量组31.83±4.1685.00±9.07益气逐瘀解毒颗粒中剂量组30.66±5.2786.60±16.05益气逐瘀解毒颗粒低剂量组36.00±3.0392.80±10.91扶正化瘀组41.16±1.8393.60±9.94模型对照组43.80±3.03101.00±17.89阴性对照组31.20±12.0775.50±6.34 2.2　肝组织病理学情况益气逐瘀解毒颗粒各剂量组肝小叶结构大多清晰,中㊁高剂量组胶原纤维主要分布在汇管区㊁中央静脉及其周围,高剂量组仅少数小叶周边可见有纤维组织增生,肝纤维化分级在1级左右;低剂量组中可见少数胶原纤维形成细条索状结构延伸至周围,延伸距离较短,未形成环状结构分割肝小叶㊂模型对照组肝索排列不整齐,纤维组织明显增生,形成较粗的纤维间隔向周围延伸分割肝小叶,同时肝细胞出现明显的空泡样变及点状坏死,汇管区可见扩大,肝纤维化分级多数在3级或以上㊂扶正化瘀组中,部分肝小叶结构被纤维间隔分割㊂见图1㊂与阴性对照组比较,模型对照组SSS评分显著升高(P<0.05);与模型对照组和扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组SSS评分显著降低(P<0.05);同时益气逐瘀解毒颗粒各剂量组SSS 评分比较,无显著差异(P>0.05)㊂见表4㊂2.3　肝组织中α⁃SMA含量比较与阴性对照组比较,模型对照组α⁃SMA含量显著升高(P<0.05);与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中㊁低剂量组α⁃SMA含量显著下降(P<0.05);与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高㊁中剂量组α⁃SMA含量显著下降(P<0.05),低剂量组无显著差异(P>0.05)㊂结果见表5㊁图2㊂注:A:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组;B:益气逐瘀解毒颗粒中剂量组;C:益气逐瘀解毒颗粒低剂量组;D:扶正化瘀组;E:模型对照组;F:阴性对照组㊂图1　各组肝纤维化模型大鼠肝组织病理情况(×100)注:A:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组;B:益气逐瘀解毒颗粒中剂量组;C:益气逐瘀解毒颗粒低剂量组;D:扶正化瘀组;E:模型对照组;F:阴性对照组㊂图2　各组肝纤维化模型大鼠肝组织α⁃SMA表达情况(免疫组化,×100)表4　各组肝纤维化模型大鼠MASSON染色SSS评分结果比较(x±s)组别鼠只SSS评分(分)益气逐瘀解毒颗粒高剂量组8 2.00±0.63bc益气逐瘀解毒颗粒中剂量组8 4.16±1.33bc益气逐瘀解毒颗粒低剂量组8 5.33±1.21bc扶正化瘀组812.78±8.99b模型对照组826.00±3.28a阴性对照组80.75±0.46注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂表5　各组肝纤维化模型大鼠α⁃SMA表达情况比较(x±s)组别鼠只α⁃SMA 益气逐瘀解毒颗粒高剂量组80.86±0.14bc益气逐瘀解毒颗粒中剂量组8 1.33±0.21bc益气逐瘀解毒颗粒低剂量组8 2.00±0.19b扶正化瘀组8 2.28±0.18b模型对照组8 3.69±0.21a阴性对照组8 1.00±0.00注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂2.4　肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB 的mRNA表达比较与阴性对照组比较,模型对照组Col1A1㊁Col1A2及GIV的mRNA表达量显著升高(P<0.05),PKA的mRNA表达量显著下降(P<0.05),CREB的mRNA 表达量无显著差异(P>0.05)㊂与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组Col1A1㊁Col1A2㊁GIV的mRNA表达量显著下降(P<0.05),高剂量组PKA的mRNA表达量显著升高(P<0.05)㊁CREB的mRNA表达量无显著差异(P>0.05),中剂量组PKA㊁CREB的mRNA表达量均显著升高(P<0.05),低剂量组PKA㊁CREB的mRNA表达量无显著性差异(P>0.05)㊂与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组Col1A1㊁Col1A2的mRNA表达量显著下降(P<0.05),高剂量组GIV的mRNA 表达量显著下降(P<0.05),中剂量组PKA的mRNA表达量明显升高(P<0.05),高剂量组PKA 的mRNA表达量无显著性差异(P>0.05),低剂量组PKA的mRNA表达量显著下降(P<0.05),中㊁低剂量组CREB的mRNA表达量显著降低(P<0.05),高剂量组CREB的mRNA表达量无显著性差异(P>0.05)㊂见表6㊂2.5　肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB 的表达比较与阴性对照组比较,模型对照组Col1A1㊁Col1A2㊁GIV表达量显著升高(P<0.05)㊂与模型对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组Col1A1㊁Col1A2㊁GIV表达量显著下降(P<0.05),高㊁中剂量组PKA的表达量显著升高(P<0.05),中剂量组CREB的表达量显著升高(P<0.05)㊂与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组GIV表达显著降低,PKA表达显著升高(P<0.05),中剂量组PKA㊁CREB的表达水平显著升高(P<0.05),低剂量组CREB的表达水平显著升高(P<0.05)㊂益气逐瘀解毒颗粒各剂量组之间Col1A1㊁Col1A2表达无显著差异(P>0.05)㊂见表7㊁图3㊂3　讨论3.1　益气逐瘀解毒颗粒具有抗纤维化作用肝纤维化的病理实质是各种致病原因导致ECM的过度沉积,其中ECM的主要来源是HSCs 的激活[15]㊂因此抑制HSCs的激活,有助于ECM 的减少,改善肝纤维化㊂HSC的活化受多种细胞因子的调控,表型活化改变后α⁃SMA表达是HSCs活化的一个重要标志[16]㊂α⁃SMA参与合成Ⅰ型胶原㊁Ⅲ型胶原㊁纤维连接蛋白等多种细胞外基质成分,促进肝纤维化的发生㊂同时,肝脏ECM成分以Ⅰ㊁Ⅲ和Ⅳ型胶原为主,其中Ⅰ型胶原是纤维间隔非常重要的来源,由Col1A1和Col1A2编码的两条链形成三螺旋结构㊂本实验为验证对ECM的影响,通过免疫注:A:益气逐瘀解毒颗粒高剂量组;B:益气逐瘀解毒颗粒中剂量组;C:益气逐瘀解毒颗粒低剂量组;D:扶正化瘀组;E:模型对照组; F:阴性对照组㊂图3　各组肝纤维化模型大鼠肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB表达情况表6　各组肝纤维化模型大鼠肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB的mRNA表达情况比较(x±s,n=8)组别Col1A1Col1A2GIV PKA CREB 益气逐瘀解毒颗粒高剂量组0.516±0.062bc0.012±0.004bc0.053±0.010bc67.678±17.436b 2.461±1.308益气逐瘀解毒颗粒中剂量组0.614±0.133bc0.017±0.005bc0.125±0.008b79.290±27.011bc 2.176±0.534bc 益气逐瘀解毒颗粒低剂量组0.591±0.079b0.020±0.005bc0.133±0.024b31.096±7.519ac 1.331±0.589c 扶正化瘀组 1.008±0.1650.066±0.004b0.116±0.017b48.316±16.461a 3.529±0.602ab 模型对照组 1.080±0.187a0.134±0.036a0.323±0.078a25.540±7.894a 1.560±0.470c 阴性对照组0.469±0.1730.041±0.0080.154±0.03887.159±45.490 2.250±1.123注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂表7　各组肝纤维化模型大鼠肝组织中Col1A1㊁Col1A2㊁GIV㊁PKA㊁CREB表达情况比较(x±s,n=8)组别Col1A1Col1A2GIV PKA CREB 益气逐瘀解毒颗粒高剂量组0.405±0.019b0.059±0.004b0.028±0.003bc 2.232±0.459bc 1.448±0.292益气逐瘀解毒颗粒中剂量组0.377±0.065bc0.235±0.012bc0.226±0.022b 3.282±0.668bc 4.036±0.873bc 益气逐瘀解毒颗粒低剂量组0.426±0.015b0.147±0.004bc0.202±0.136b 1.662±0.243 2.315±1.086ac 扶正化瘀组0.638±0.0120.346±0.018ab0.086±0.017b 1.645±0.477 1.014±0.263b 模型对照组0.814±0.007a0.969±0.014a0.322±0.039a 1.528±0.459 1.946±0.319c 阴性对照组0.374±0.0140.193±0.0190.024±0.009 1.240±0.223 1.191±0.197注:与阴性对照组比较,a P<0.05;与模型对照组比较,b P<0.05;与扶正化瘀组比较,c P<0.05㊂组化法检测大鼠肝组织中α⁃SMA含量,RT⁃qPCR 法和Western blot法检测Col1A1㊁Col1A2表达水平,发现益气逐瘀解毒颗粒各剂量组α⁃SMA含量显著下降,且可显著降低Col1A1㊁Col1A2的表达水平,病理组织学肝纤维化程度显著改善,优于扶正化瘀组和模型对照组㊂3.2　GIV/PKA/CREB在CCl4诱导的肝纤维化发病中的作用肝纤维化发生的中心环节是HSCs的激活, GIV的表达与HSCs的活化之间具有双向调节性㊂GIV通过影响HSCs的迁移㊁增殖及细胞骨架重构活化HSCs,同时活化的HSCs又使GIV的表达量增加,共同促进肝纤维化㊂当GIV表达下调时,可加速HSCs的凋亡,缓解肝纤维化[9]㊂作为G蛋白信号级联的第二信使,cAMP与GIV之间有着重要的关系㊂GIV表达量不足时,cAMP在HSCs中积聚,一方面使HSCs的趋化㊁增殖及胶原合成作用受到抑制,另一方面又可增强基质金属蛋白酶降解胶原的作用[17]㊂此外,GIV的下调还能够有效的调控PKA⁃CREB依赖途径,达到抑制转化生长因子⁃β(transforming growth factor⁃β,TGF⁃β)⁃SMAD蛋白信号的作用[18⁃19],通过负向调控使肝纤维化趋向消退㊂本实验采用RT⁃qPCR法和Western blot法检测大鼠肝组织中GIV表达情况,模型对照组GIV表达水平较其他组明显上调,说明GIV表达上调在肝纤维化发病中具有重要意义㊂经过益气逐瘀解毒颗粒及扶正化瘀胶囊的灌胃干预,发现益气逐瘀解毒颗粒高剂量组GIV表达水平显著降低,并优于扶正化瘀组;而中㊁低剂量组降低GIV表达水平不及高剂量组和扶正化瘀组㊂同时,益气逐瘀解毒颗粒中剂量组中PKA㊁CREB的蛋白表达水平显著上调,优于高㊁低剂量组和扶正化瘀组㊂上述结果说明益气逐瘀解毒颗粒在调控GIV㊁PKA㊁CREB表达方面具有剂量依赖性㊂此外值得注意的是,益气逐瘀解毒颗粒高剂量组显著抑制GIV的表达,但PKA/CREB的表达并没有相应的升高,不及中剂量组PKA/CREB的表达显著,这说明除GIV外,还有其他影响PKA/CREB升高的因素,需要进一步深入研究㊂3.3　益气逐瘀解毒颗粒抗纤维化作用机理分析课题组通过多年的临床及基础研究,结合四川盆地独特的湿热型地域特点,以及肝纤维化病机的复杂性,提出 气虚血瘀,湿热未清”的病机学说,以健脾祛瘀㊁疏肝清热为基本治则,创立益气逐瘀解毒方㊂方中莪术破血逐瘀,黄芪益气扶正,共为君药;党参助黄芪益气,补脾气升清阳,当归㊁川芎补血㊁活血,行气,与逐瘀药同用,使瘀血祛而又不伤阴血;丹参助莪术活血祛瘀,赤芍㊁丹皮清热凉血,活血化瘀,以解未尽之热毒,共为臣药;柴胡㊁黄芩和解少阳,黄芩清泄少阳半里湿热,柴胡疏肝解郁,升达清阳,共为佐药;甘草为使,调和诸药㊂全方配伍得当,标本兼治,化瘀解毒不伤正,益气扶正不碍邪,在健脾祛瘀的同时,通畅气机,清解湿热余毒,可促进肝纤维化的消退㊂纵观本研究实验结果,得出初步结论,益气逐瘀解毒颗粒可显著改善CCl4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度,而GIV可能是其关键作用靶点之一,通过降低GIV表达水平,解除对下游抗肝纤维化PKA/CREB信号通路的抑制,使PKA㊁CREB表达水平上升,达到改善CCl4诱导肝纤维化大鼠的肝纤维化程度的目的㊂此外,益气逐瘀解毒颗粒尚可通过调控基质金属蛋白酶及其抑制剂的平衡㊁抑制HSCs的活化㊁降低TGF⁃β1的表达水平等方面达到抗肝纤维化的目的[7,14],表现为多靶点调控的特点,但对关键靶点确认,尚需进一步完善其作用机制㊂参考文献[1]　Ralf W,Sabine W,Frank T.Recent advances in understandingliver fibrosis:bridging basic science and individualizedtreatmentconcepts[J].F1000Res,2018,7:F1000Faculty Rev⁃921.[2]　Rosenbloom J,Macarak E,Piera⁃Velazquez S,et al.Humanfibrotic diseases:Current challengesin fibrosis research[J].Methods Mol Biol,2017,1627:1⁃23.[3]　Ebrahimi H,Naderian M,Sohrabpour A A.New concepts onreversibility and targeting of liver fibrosis:A review article[J].Middle East J Dig Dis,2018,10(3):133⁃148.[4]　谭勤锐.益气逐瘀解毒方抗肝纤维化作用及机制研究[D].成都:成都中医药大学,2017.[5]　杨琪.益气逐瘀解毒颗粒调节Th17/Treg细胞平衡的抗肝纤维化作用机制研究[D].成都:成都中医药大学,2018. [6]　韩朋丽.益气逐瘀解毒颗粒调节Girdin表达治疗大鼠肝纤维化的作用机制研究[D].成都:成都中医药大学,2018. [7]　李晖,谭勤锐,韩朋丽,等.益气逐瘀解毒方抗四氯化碳诱导大鼠肝纤维化的作用研究[J].中华中医药学刊,2019,37(4):956⁃959,1045⁃1047.[8]　Eonomoto A,PING J,Tiakahashi M.Girdin,a novel actin⁃binding protein,and its family of proteins possess versatilefunctions in the Akt and Wnt signaling pathways[J].Ann N YAcad Sci,2006,1086:169⁃184.[9]　Garcia⁃Marcos M,Ghosh P,Farquhar M G.GIV is anonreceptor GEF for G alpha i with a unique motif that regulatesAkt signaling[J].Proc Natl Acad Sci U S A,2009,106(9):3178⁃3183.[10]　Garcia⁃Marcos M,Ghosh P,Farquhar M G.GIV/Girdintransmits signals from multiple receptors by triggering trimeric Gprotein activation[J].J Biol Chem,2015,290(11):6697⁃6704.[11]　Ghosh P,Garcia⁃Marcos M,Farquhar M G.GIV/Girdin is arheostat that fine⁃tunes growth factor signals during tumorprogression[J].Cell Adh Migr,2011,5(3):237⁃248. [12]　韩朋丽,李晖,杨琪.Girdin与肝纤维化相关性研究进展[J].广东医学,2017,38(17):2725⁃2727,2731.[13]　Lopez⁃Sanchez I,Dunkel Y,Roh Y S,et al.GIV/Girdin is acentral hub for profibrogenic signalling networks during liverfibrosis[J].Nat Commun,2014,5:4451. [14]　李晖,杨琪,韩朋丽,等.益气逐瘀解毒颗粒调控MMPs/TIMPs平衡抗大鼠肝纤维化的作用研究[J].新中医,2019,51(5):17⁃22.[15]　Tsuchida T,Friedman S L.Mechanisms of hepatic stellate cellactivation[J].Nat Rev Gastroenterol Hepatol,2017,14:397⁃411.[16]　武希润,吕敏和,王琦,等.α⁃平滑肌肌动蛋白表达及血浆转化生长因子β1变化在肝纤维化发生发展中的作用[J].中华肝脏病杂志,2004,12(7):21⁃23.[17]　Acquaviva A,Vecchio D,Arezzini B,et al.Signaling pathway⁃sinvolved in isoprostane⁃mediated fibrogenic effects in rat hepaticstellate cells[J].Free Radic Biol Med,2013,65:201⁃207.[18]　LIU X,SUN S Q,Hassid A,et al.cAMP inhibits transforminggrowth factor⁃beta⁃stimulated collagen synthesis via inhibitionofextracellular signal⁃regulated kinase1/2and Smad signaling incardiac fibroblasts[J].Mol Pharmacol,2006,70(6):1992⁃2003.[19]　谭勤锐,李晖,杨超.转化生长因子⁃β1调控与肝纤维化治疗的研究进展[J].广东医学,2015,36(13):2109⁃2111.(收稿日期:2022⁃12⁃02)(本文编辑:张楠)。