细菌性食物中毒的快速检验

生物梅里埃微生物快速检验建议方案一、致病菌检验现状常见细菌性食物中毒的病原微生物有：1、致病性大肠杆菌（特别是出血性大肠杆菌O157：H7）；2、沙门氏菌属；3、致病性弧菌（包括：霍乱弧菌、副溶血性弧菌）；4、金黄色葡萄球菌及其肠毒素；5、近年来发现导致细菌性食物中毒的微生物越来越多，包括单核增生李司特菌、空肠弯曲菌等。

因此，包括上述致病菌在内的致病微生物的快速检验，对早日弄清食物中毒的病因，控制疫情，提高卫生防疫水平非常重要。

致病菌常规检验方法大致是：其中，增菌是不可缺少的步骤。

1、如果在增菌后能够利用自动化仪器对标本进行快速筛检，就可以尽快发现在那些标本中可能存在致病菌，可能存在那些致病菌，从而可大大缩小检验范围，集中人力检验可疑标本和可疑致病菌。

2、由于大多数细菌目前没有血清试剂，而传统生化鉴定试验周期长，操作繁琐，试剂质量无法保证，严重影响了致病菌确认工作。

3、选择性分离培养的培养基上挑选可疑菌落需要经验，存在漏检的可能。

4、葡萄球菌肠毒素热稳定性很高，加工后的食物虽然检不出，金黄色葡萄球菌，但仍有可能存在葡萄球菌肠毒素，而肠毒素的常规检验方法需要做动物实验，难度大，周期长。

鉴于上述原因，我们提出应用“全自动荧光免疫分析仪+API鉴定系统”的快速检验方案如下：二、致病菌快速检验系统建议方案（一）检验流程本系统能达到的效果1、葡萄球菌肠毒素：从标本处理到上机检测只需1小时。

2、大肠杆菌O157、沙门氏菌、李司特菌、空肠弯曲菌的检验：在增菌后1小时内即可完成筛检试验，从而缩小检验范围、明确检验对象、提高总体检验速度。

3、大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等最常见肠道致病菌的生化鉴定时间缩短到4小时。

4、包括：革兰氏阴性杆菌（108种）、非肠道革兰氏阴性杆菌（64种）、葡萄球菌（22种）、链球菌（47种）、酵母样真菌（43种）、厌氧菌（67种）、棒状杆菌（33种）、李司特菌（6种）、奈瑟氏及嗜血杆菌（10种）、弯曲菌（18种）、芽孢杆菌（24种）、乳酸菌（52种）、肠杆菌分型（111种）在内的五百多种细菌可以得到快速、准确的鉴定。

第一章细菌性食物中毒第一节概述一、食源性疾病WHO指出：凡是通过摄入食物而使病原体进入人体，以致人体患感染性或中毒性疾病，统称为食源性疾病。

食源性疾病包括食物中毒、肠道传染病、人畜共患传染病、肠源性病毒感染以及经肠道感染的寄生虫病等。

二、食物中毒摄入了含有生物性、化学性有毒有害物质的食品或把有毒有害物质当作食品摄入后所出现的非传染性(不同于传染病)急性、亚急性疾病。

(一)食物中毒的发病特点(1)发病潜伏期短，来势急剧，呈爆发性。

(2)发病与食物有关。

(3)中毒病人以恶心、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状为主。

(4)人与人之间无直接传染。

(二)食物中毒的分类（1）细菌性中毒食品指含有细菌或细菌毒素的食品。

（2）真菌性中毒食品指被真菌及其毒素污染的食品。

（3）动物性中毒食品将天然含有有毒成分的动物或动物的某一部分当作食品。

在一定条件下，产生了大量的有毒成分的可食的动物性食品。

(4）植物性中毒食品将天然含有有毒成分的植物或其加工制品当作食品（如大麻油等）。

在加工过程中未能破坏或除去有毒成分的植物当做食品（如木薯、苦杏仁等）。

在一定条件下，产生了大量的有毒成分的可食的植物性食品（如发芽马铃薯等）。

（5）化学性中毒食品被有毒有害的化学物质污染的食品。

指误为食品、食品添加剂、营养强化剂的有毒有害的化学物质。

添加非食品级的或伪造的或禁止使用的食品添加剂、营养强化剂的食品，以及超量使用食品添加剂的食品。

营养素发生化学变化的食品（如油脂酸败）。

2008年，卫生部收到的食物中毒事件中，细菌性食物中毒人数最多，占总中毒人数的45.8％我国细菌性食物中毒常见的致病菌和食物：沙门氏菌（禽、畜肉）、副溶血性弧菌（水产品）、蜡样芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌（剩饭）、肉毒梭菌（发酵制品、肉制品）、单核细胞增生李斯特菌（水产品、乳制品、冷藏食品）、大肠杆菌O157:H7（肉制品）等。

三、细菌性食物中毒的特点1、病程短、恢复快、预后好、病死率低但李斯特菌、肉毒梭状芽孢杆菌等食物中毒病程长、病情重、恢复慢。

卫生检验综合技术-微生物检验部分课堂讨论模块二：细菌性食物中毒案例讨论一、一起食物中毒案例的分析目的要求：1.掌握细菌性食物中毒实验室检测流程及检测技术2.熟悉引起食物中毒的原因，食物中毒类型、临床表现、诊断及治疗处理原则3.熟悉食物中毒的调查与处理的方法4.了解食物中毒案例的分析方法学时：11学时课程内容：一、事件概述B市C镇初级中学为政府公办初级中学，共有学生1132名，22个班级，83名老师，7名食堂工作人员。

其中寄宿生630名，走读生502名，周一至周五上课，周六至周日放假。

根据学校报告，6月5日下午17：20开始，有学生出现腹痛、腹泻、呕吐、恶心和头痛、头昏等症状，到6月6日晨检发现有80余名左右出现同类症状，因这些学生在学校有共同就餐史，且发病时间非常集中，怀疑为食物中毒。

6月6日上午7：30学校向C镇卫生院报告并组织患病学生就诊。

【问题1】C镇卫生院接到报告后，首先应当开展什么工作？当卫生院同天接到数例相同症状体征的病人时，应如何考虑？作何处理？【参考答案】C镇卫生院接到报告后应第一时间奔赴现场核实情况，并及时开展救治。

当同一天接到数例相同症状体征的病人时，则考虑食物中毒的可能。

因此，对病人采取紧急处理的同时及时报告当地CDC或卫生执法监督机构。

镇卫生院接报告后立即赶赴现场进行核实，核实后于6月6日上午8：30向B市疾病预防控制中心报告……【问题2】B市疾病预防控制中心接到报告后，如果怀疑是食物中毒，应做何处理？【参考答案】及时将事件报告给市卫生局和省疾控中心。

除了及时报告之外，还应：○1对病人采取紧急处理，包括停止食用中毒食品；采取病人标本，以备送检；对病人的急救治疗；○2对中毒食品的控制：保护现场，封存中毒食品或疑似中毒食品；追回已售出的中毒食品或疑似中毒食品；○3对中毒场所采取消毒处理B市疾控中心立即将情况报告市卫生局，相关负责人于6月6日上午9：20分到达现场。

同时B市疾控中心向省疾控中心报告，并立即调集流行病学、食品卫生学、微生物检验、理化检验等学科专业人员前往现场调查，上述专家于6月6日下午13：00到达现场。

食物中毒调查处理程序第一条为做好食物中毒调查处理工作,根据《中华人民国食品卫生法》、《食物中毒事故处理办法》、《食品卫生监督程序》等法律、法规及规性文件制定本程序。

第二条食物中毒的管辖（一）由直接提供可疑中毒食品的食品生产经营者所在地的卫生监督机构负责管辖，不能确定食品生产经营者的食物中毒由进食地点所在地的卫生监督机构负责管辖。

（二）接到报告的卫生监督机构应立即向有管辖权的卫生监督机构通报情况,并开展初步调查,将调查资料的原件及时移交有管辖权的卫生监督机构，有管辖权的卫生监督机构需要跨区域调查时,应将情况及时通报市卫生监督机构及相关卫生监督机构，并做好相关资料的转接工作，相关卫生监督机构必须积极协助调查处理。

（三）食物中毒调查处理管辖有争议时,由市卫生行政部门指定管辖。

（四）市卫生监督机构负责或参加以下食物中毒的调查处理（详见《食物中毒、生活饮用水污染事故应急处理总则》（三）现场调查处理：3、发生以下食物中毒、生活饮用水污染事故时，市卫生监督机构应到达现场指导、参与现场调查处理的规定。

（五）有管辖权的卫生监督机构负责食物中毒的全面调查,并写出调查报告。

（六）有管辖权的卫生监督机构负责对造成食物中毒的单位（或个人）进行行政处罚。

第三条接报与上报按《食物中毒、生活饮用水污染事故应急处理总则》规定的标准、时限、程序执行。

第四条食物中毒调查处理的前期准备（一）各级卫生监督机构应成立专（兼）职食物中毒事故处理队伍，接到事故报告后，迅速赶往现场，进行调查处理，每次事故应由一名领导或监督员全面负责。

事故处理队伍的成员和人数，视本单位实际情况而定，以能同时到达发病现场和可疑事故现场开展工作为标准。

（二）调查处理必备物品1、食品：包括固体、液体无菌容器（灭菌塑料袋、广口瓶等）、刀、剪、勺、镊子、吸管等。

2、涂抹：灭菌生理盐水试管(5ml) 20个以上,有条件的单位应配备选择性培养基，消毒棉拭子若干包。

3、大便：采便管、运送培养基各20支以上。

86·FOOD INDUSTRY分析 检测　陈文财 惠州市食品药品检验所食品中沙门氏菌的快速检验方法泛用于遗传病诊断和微生物检验中。

（我个人认为沙门不会用）荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检验法基于沙门氏菌ｆｉｍＹ基因序列，进行引物和探针的设计，利用基因重组技术对检测的定量标准品进行构建，可借助荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ法对沙门氏菌进行检测。

该方法操作简单、检验快速、适用范围广，在临床诊断、商品检验、食品卫生监管等领域均有运用。

多重ＰＣＲ快速检验法多重ＰＣＲ快速检验法基于质粒毒力基因ｓｐｖＣ、１６Ｓ　ｒＲＮＡ、ｆｉｍＡ、致病基因ｉｎｖＢ序列设计引物，多重ＰＣＲ检测沙门氏菌株基因组ＤＮＡ，以此实现对沙门氏菌的快速检验。

多重ＰＣＲ快速检验法可对沙门氏菌的多种毒力因子进行鉴定，是沙门氏菌株检验和鉴定的新方法。

变性高效液相色谱检测法　变性高效液相色谱结合多重ＰＣＲ反应技术可对食品中的沙门氏菌进行快速检测。

该方法以ｆｉｍＹ基因为靶基因，选择引物可实现对多重ＰＣＲ体系的优化，由此可对沙门氏菌进行快速鉴别。

该方法的特异性、灵敏性较高，其扩增产物为２８４ｂｐ，可对沙门氏菌进行快速检验，并能进一步验证多重ＰＣＲ的特异性。

沙门氏菌是食物常见的病原菌，具有传播媒介多、途径繁复等特点，容易污染食品而危害人体健康。

另外，沙门氏菌是多种有紧密联系细菌的泛指，包括导致伤寒、胃肠及引起食物中毒的众多细菌。

文中提到的几种快速检验法与传统检验法相比，具有操作简单、特异性强、灵敏度高等特点。

但这些方法也存在各自缺陷，试纸快速检验法检验纯菌时，若目菌＞１０３ｃｆｕ／ｍｌ时，纸片菌斑密集，可导致假阴性反应的发生。

ＰＣＲ检验的特异型取决于所选扩增的靶序列，若为保守的特异片段，所选引物就会显示出特异型。

ＬＡＭＰ技术的产物复杂多样，引物设计要求较高，目标单链ＤＮＡ的分离困难，无法对扩增产物的序列进行分析；其在同一温度条件下采用多条引物扩增非特异性条带，可能会出现假阳性结果。

细菌性食物中毒采样对检验结果影响因素的分析及对策摘要每年5～10月是细菌性食物中毒的高发季节。

根据以往在处理食物中毒工作中遇到的情况,对中毒报告不及时、专业知识不足、样品的采集与实验室检测等影响食物中毒原因查明的影响因素进行分析探讨,并提出应加强食物中毒行政管理措施、保证样品采集质量、加强实验室的质控管理以提高食物中毒病因检出率等相应的对策和措施。

关键词细菌性食物中毒检验影响因素影响因素采集样品缺乏及时性:由于一些消费者对《食品卫生法》观念淡薄,缺乏自我保护意识,发生食物中毒后,不能首先及时向卫生监督部门报告疫情,而是自己与经营者私自交涉,在不能如愿的情况下才向卫生监督部门举报,因此造成一些经营者在知道发生食物中毒的情况下,首先处理掉一切可能的剩余食品,对加工经营现场、工具、容器进行了消毒和处理,延误了有效的报告时间,从而影响了对可疑食物的采集[1]。

采集样品缺乏代表性:由于食物中毒是突发公共卫生事件,细菌性食物中毒都有特定的潜伏期,毒素性中毒一般有1～3小时,细菌性中毒一般6～10小时。

当卫生监督部门接到疫情报告赶赴现场时,往往时间周期较长,可疑食物已被清理,即使采到几份剩余食品,也可能不是食物中毒当天餐桌上的剩余食物,因此常出现食品中检出的细菌与病人排泄物中检出的细菌不相符,影响了中毒结果的分析。

另外,食品加工、制作现场能提供线索的环节已被经营者清扫、消毒,食具和用具已被清洗干净,同样也影响了食品加工工具、容器、场所的采样和检验。

采集样品缺乏典型性:中毒病人发病后,患者一般自行服用抗菌类药物,严重时才到医院就医。

由于一些医务人员对食物中毒报告制度不够了解,导致了只管用药治疗,忽视了对病人呕吐物、排泄物的留取,导致了大量的抗生素抑制了致病菌的繁殖,从而影响了致病菌的检出率。

采集样品缺乏完整性:一般中毒病人发病期的血样容易采到,而采集病人恢复期的血样,由于病人的不配合或提前出院往往采集不到,也影响了检验结果的全面分析。