阪崎肠杆菌显色培养基原理
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婴幼儿健康的“敌人”-食品中阪崎肠杆菌的检测方法阪崎肠杆菌阪崎肠杆菌是广泛存在于环境中的一种微生物,可以感染婴幼儿并对他们的健康造成严重威胁,阪崎肠杆菌耐热、耐干燥、对渗透压有较强的忍耐力,可长时间生存在干燥的环境中。
阪崎肠杆菌最喜欢袭击1岁以下的婴儿,如果你在冲调、存放奶粉时操作不当,它就可以趁虚而入,婴儿的胃酸PH值比成人高,可以存活在他们的肠道中,并且婴儿血脑屏障未发育完全,阪崎肠杆菌可以轻易进入他们的脑部引发脑膜炎,由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎、菌血症等严重疾病,死亡率高达20-50%。
世界卫生组织建议,您应当使用不低于70℃的热水冲调婴儿配方奶粉,并在2小时内尽快喂哺,如果需要预先冲调,冲调后应快速冷却并且存放在不超过5℃的冰箱内,还要在冲调后24小时内饮用,喂哺前必须重新加热,那些早产、体重低或免疫力低的高风险婴儿,可以使用商业无菌的液态婴儿配方奶,你记住了吗?食品中阪崎肠杆菌的检测方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其它设备和材料如下:1.1 恒温培养箱:25℃±1℃,36℃±1℃,44℃±0.5℃1.2 冰箱:2℃-5℃1.3恒温水浴箱:44℃±0.5℃1.4天平:感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)1.7 无菌锥形瓶:容量100mL、250mL、2 000mL1.8 无菌培养皿:直径90mm1.9 pH计或精密pH试纸2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前,应消毒检样包装的开启处。
以无菌操作,称取检样100g(mL)加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中,缓缓振摇使样品充分溶解,36℃±1℃培养18h±2h。
尽量选择不同品牌的显色培养基更准确地对阪崎肠杆菌进行检测作者:王哲明郭彦希来源:《中国食品》2020年第22期婴儿奶粉和相关辅食中很可能出现的阪崎肠杆菌是一种较为危险的致病菌,倘若含量过高,很可能会使婴儿的身体健康受到影响,甚至诱发十分严重的疾病。
因此,对婴幼儿食物中的阪崎肠杆菌进行质量监测是十分重要的。
为了使检测结果更加精准,相关研究人员会使用不同品牌的显色培养基。
本文以每个品牌的显色培养基测量10个样本为基准,依照科学合理的方法进行实验,并进行相应的测试结果分析。
一、试验材料首先,研究人员要采用统一的实验用菌株来充当实验最主要材料。
其次,还需要用到生化培养箱、电热恒温培养箱、相应的样品均质器系统和生化鉴定系统,以及阴性细菌鉴定卡。
最后,挑选出市场上最为常见的5个不同品牌的显色培养基,以及通过了国家质量安全标准审核的奶粉和菌株。
二、试验方法取出100克奶粉和一支菌株,预热至大约44度的合适温度后,装入均质袋中进行均质,使得样品充分溶解。
溶解完成后放置在恒温36℃的环境中,静置18个小时进行培养。
将1毫升的增菌液注射入相关实验样本中,以44℃的温度培养24个小时。
将其至于分离平板上,进行菌落形态的观察,然后选择不同品牌的分离培养基对相关待测样品进行分离培养,最后进行生化鉴定。
三、结果分析通过实验发现,来自不同品牌的5个显色培养基,最终呈现的阪崎肠杆菌培养监测数量各有不同。
为了方便区分,相关技术研究人员对5个来自不同品牌的显色培养基进行了字母编号。
a类显色培养基的待测样本数为10份,疑似样本数为2份,挑选出的疑似菌落数是10个,被证实阳性的菌落数也是10份,假阳性的概率是0%。
b类显色培养基同样以10份样本來进行检测,疑似样本数高达9份,挑选出的疑似菌落数有45个,被证实阳性的菌落数仅有6个,假阳性的菌落数达到了39个。
因此,b类品牌的显色培养基准确率只有13.33%。
c类显色培养基同样以10份样本来进行检测,疑似样本数为3份,挑选出的疑似菌落数有15个,被证实阳性的菌落数是10个,假阳性的菌落数是5个。
北京索莱宝科技有限公司
阪崎杆菌显色培养基
成分:蛋白胨,牛肉粉,氯化钠,琼脂,显色试剂。
操作:
1、称取瓶内干粉5g,溶于10ml去离子水中,可以根据需要按照50g/L的比例缩小或扩大。
2、将上述干粉缓慢倒入去离子水中,用玻璃棒充分搅拌。
3、按常规搅拌加热至100℃,直至琼脂完全溶解,用纸密封瓶口,微火保持溶液微沸2分钟。
4、表面接种法:将培养基冷却至50℃时,立即倾注于无菌平皿中,使其完全凝固、干燥后,划线接种,
36℃培养18-22h。
贮存:
1、干粉需密闭保存于15-30℃干燥、避光环境中、
2、制备好的培养基在室温可保存一天,2-8℃冰箱中避光可贮存一星期。
染色结果:
初筛微生物菌落颜色及外观
阪崎肠杆菌(蓝)绿色菌落
大肠埃希氏菌无色菌落
金黄色葡萄球菌抑制
注意事项:
1、搅拌加热溶解时,避免溶液溢出灼伤人员。
2、表面接种法中制备的培养基因表面干燥,未见明显湿润。
3、最后的鉴定必须做补充实验。
4、使用过的培养基需要在121℃灭菌30分钟,才可按照有关规定弃去。
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显色培养基显色培养基(Chromogenic/Fluorogenic Culture Media)是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。
这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶作用下,游离出产色基因显示一定颜色,直接观察菌落颜色即可对菌种作出鉴定。
它是一种新型分离培养基,利用显色培养基进行微生物的筛选分离,其反应的灵敏度和特异性大大优于传统培养基。
大肠杆菌显色培养基E.Coli Chromogenic Medium用途:用于快速、准确检测大肠杆菌大肠杆菌培养24小时,大肠杆菌显蓝绿色大肠杆菌显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基,用于食品、水、牛奶、冰激凌和肉制品中大肠杆菌的快速检测。
大肠杆菌显蓝绿色,大肠菌群显无色,其它菌显黄色或无色,革兰氏阳性菌被抑制。
成份(g/L)此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意此培养基仅供实验室使用。
用法称取本品50.1g 加入1000ml 蒸馏水,加热溶解并不停搅拌,煮沸不要超过1 分钟。
分装三角瓶,121 ℃高压灭菌15 分钟。
取1ml 制备好的样品液加入直径为9cm 无菌平皿中心,倾入冷却至45 -50 ℃培养基约15ml ,混匀,凝固后,36 ± 1 ℃倒置培养18 ~24h 。
或冷却至45-50 ℃时,倾入无菌平皿,琼脂完全凝固后,在37 ℃的培养箱中倒置放置1-2 小时,加入适当稀释度的样品液1ml ,涂布于培养基上,36 ± 1 ℃培养18 ~24h 。
贮存制备好的平板应立即使用,应避免光线直接照射。
干燥培养基应放置于阴暗干燥处,保存温度2-8 ℃,注意避光保存。
失效干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤1 、按国家标准、SN 标准、FDA 标准或其它方法制备样品液2 、取样品液1ml 加入冷却至45-50 ℃显色培养基中混匀或涂布于平板上3 、36 ± 1 ℃培养18 ~24h ,选用有30 ~200 个菌落的平板,计数平板上出现的典型大肠杆菌菌落。
阪崎肠杆菌科菌种鉴定细菌成分一、引言阪崎肠杆菌科(Sakazakii Enterobacteriaceae)是一种常见的细菌科,包含多种致病性菌种。
其中的阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)是一种已知的人类致病菌,能引起新生儿脑膜炎、败血症、肺炎等严重感染。
因此,对于阪崎肠杆菌科菌种鉴定的准确性和全面性要求极高。
二、样品采集与处理1. 采集样品:从食品、环境等来源中采集样品,如奶粉、水源等。
2. 处理样品:将样品进行预处理,如加入缓冲液等,以保证后续操作的可靠性和准确性。
三、培养基选择与制备1. 培养基选择:常用的培养基有Luria-Bertani(LB)、营养琼脂(NA)、大肠杆菌选择性培养基MacConkey(MAC)等。
2. 培养基制备:按照标准配方制备培养基,并进行灭菌处理。
四、细胞分离与纯化1. 细胞分离:将样品接种到培养基中,进行静置或摇床培养,使菌落生长。
2. 细胞纯化:通过不同的方法,如差速离心、磁珠分离等,将目标细菌分离纯化。
五、生化鉴定1. 氧化酶试验:检测细菌是否具有氧化酶活性。
2. 婴儿食品模拟液培养:将细菌接种到婴儿食品模拟液中进行培养,观察是否能够生长。
3. 阳性和阴性反应检测:通过添加不同的试剂观察细菌是否产生阳性或阴性反应。
六、分子生物学鉴定1. PCR扩增:使用特异性引物对目标基因进行PCR扩增。
2. 16S rRNA序列分析:对PCR扩增得到的16S rRNA序列进行测序和比对,并与数据库中的已知序列进行比较。
七、质谱鉴定1. MALDI-TOF MS技术:利用MALDI-TOF MS技术对目标菌株进行质谱分析,并与数据库中的已知质谱图谱进行比对。
八、总结阪崎肠杆菌科菌种鉴定需要综合应用多种方法,包括样品采集与处理、培养基选择与制备、细胞分离与纯化、生化鉴定、分子生物学鉴定和质谱鉴定等。
在实际操作中,需要根据具体情况选择合适的方法,并注意操作规范和安全性。
肠杆菌实验原理
肠杆菌实验原理是通过检测肠杆菌在样品中的存在和数量来评估食品、饮水和环境的卫生状况。
该实验通常基于培养方法,首先将样品制备成悬浮液或适当稀释后,然后在含有有利于肠杆菌生长的培养基上进行孵育。
经过一段时间后,通过观察培养基上的菌落形态、颜色和数量来判断肠杆菌的存在和增殖情况。
为了进一步确认,可以采用生化试验,并使用特定培养基例如大肠杆菌MacConkey培养基来鉴定革兰阴性菌真正为肠杆菌。
生化试验可以通过检测革兰阴性菌的特定酶活性或代谢产物来确认肠杆菌的存在。
此外,还可以使用分子生物学方法例如PCR来检测肠杆菌的
特定基因或DNA序列,以更高的灵敏度和特异性确定肠杆菌
的存在。
肠杆菌实验的结果可以帮助评估样品的卫生质量,并为采取相应的控制措施提供依据,以保障公共健康和卫生安全。
牛奶中阪崎肠杆菌的检测方法引言:阪崎肠杆菌(又称阪崎氏肠杆菌)是一种周身无鞭毛,能运动,无芽孢的兼性厌氧菌,革兰氏阴性杆菌。
1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。
阪崎肠杆菌能引起严峻的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症,致死率可达40%~80%,自1961年首次由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎之后,全球范围间续消失感染大事,丹麦、希腊、英国、荷兰、冰岛等国均有报道。
其严峻性已引起世界多国相关部门的重视,阪崎肠杆菌已被世界卫生组织和很多国家确定为引起婴儿死亡的重要条件致病菌。
我国也于2021年5月20日通过了《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准,并于同年10月实施,我国《婴儿配方食品》和《幼儿配方食品》相关标准规定婴幼儿配方奶粉、食品中禁止检出阪崎肠杆菌等致病菌。
一、阪崎杆菌的生物学特性1 形态染色阪崎肠杆菌属肠杆菌科肠杆菌属, 因此本菌具备肠杆菌基本形态特征: 革兰阴性粗短杆菌,有周身菌毛, 无芽胞, 有动力[1] 。
2 培育特性能在一般养分琼脂、血平板、麦康凯(MAC) 琼脂、伊红美兰(EMB) 琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培育基上生长繁殖。
培育最佳温度25 ~36 ℃ , 在6~45 ℃下都能生长, 某些菌株可在47 ℃下生长[8] 。
在胰蛋白胨琼脂(TSA) 、脑心浸液琼脂(BH I) 及血平板上经25 ~36 ℃培育24 h 后, 形成1. 5 ~2. 5mm, 黄色菌落。
在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBG) 能产生紫红色菌落[2]。
二、阪崎杆菌的传统检测方法阪崎肠杆菌检验程序见图1。
1 基本步骤如下:取检样100g(mL)加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中,用手缓缓地摇动至充分溶解,36℃1℃培育18 h2h。
移取1mL 转种于10mL mLST-Vm肉汤,44℃0.5 ℃培育24 h2h。
轻轻混匀mLST-Vm 肉汤培育物,各取增菌培育物1环,分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培育基平板,36℃1℃培育18 h2 h。
阪崎肠杆菌显色培养基使用说明书
组分
琼脂15.0g/L 蛋白胨7.0g/L 酵母膏 3.0g/L 氯化钠 5.0g/L
x-α-葡萄糖苷0.15g/L 脱氧胆酸钠0.6g/L 结晶紫0.002g/L
pH值7.0±0.2
操作
1、取瓶内干粉30.7g溶于1000ml去离子水的洁净三角瓶中,充分搅拌混
匀。
也可根据需要按照30.7 g/L的比例扩大或缩小制备培养基的量。
2、将溶解完全的培养基高压灭菌(121℃,15min)。
3、将冷却至44℃~47℃的培养基,轻轻地摇动均匀,倾注平皿,使其凝固,
晾干备用。
保存该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内贮存2个月(2℃~8℃,避光)。
接种
划线或涂布接种(冰箱内保存的平板使用前应恢复至室温),在44±1℃恒温条件下有氧培养24±2h。
结果
性能及局限
一些阪崎肠杆菌在44℃环境下可能生长不好,最终鉴定需做补充试验。
贮存条件
干粉需保存于15-30℃干燥环境中,在有效期前使用。
污染处理
使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。
附:供体外诊断使用,产品须专业人员操作。
阪崎肠杆菌显色培养基原理
阪崎肠杆菌显色培养基是一种针对阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)的检测工具,通过显色原理,可快速、准确地检测食品中的阪崎肠杆菌。
其原理主要包括以下几个方面:
1.选择性生长:阪崎肠杆菌显色培养基中的成分专门针对阪崎肠杆菌的生长需求,为其提供适宜的营养环境。
同时,培养基中还含有抑制其他微生物生长的成分,从而确保只有阪崎肠杆菌能够在培养基上生长。
2.酶反应显色:阪崎肠杆菌在生长过程中,能产生特定酶,这些酶与培养基中的显色底物发生反应,使菌落呈现出特定的颜色。
阪崎肠杆菌显色培养基中的显色底物是由产色因子和微生物部分可代谢物质组成,在特异性酶作用下,游离出产色因子使菌落显示一定颜色。
3.菌落显色区分:在适宜的培养条件下,阪崎肠杆菌生长出的菌落呈现蓝-绿色,而其他微生物生长的菌落则为无色或黄色。
通过观察菌落颜色,可以快速区分目标菌和非目标菌。
4.生化试验验证:对于显色培养基上呈现典型蓝-绿色菌落的样品,还需进行生化试验以进一步确认阪崎肠杆菌的identity。
常见的生化试验包括氧化酶试验、气泡产生试验等。
5.质量控制:为了确保阪崎肠杆菌显色培养基的可靠性和准确性,需进行质量控制。
主要包括观察培养基的外观、菌落颜色以及生长情况等,确保培养基符合相关标准和要求。
总之,阪崎肠杆菌显色培养基通过选择性生长、酶反应显色、菌落显色区分、生化试验验证和质量控制等原理,实现了对食品中阪崎肠杆菌的快速、准确检测。
在实际应用中,实验室人员可以根据需求选择合适的显色培养基,并按照操作步骤进行检测,以保障食品的安全性。