阪崎肠杆菌检验培训课件

附件食品微生物之檢驗方法－阪崎腸桿菌之檢驗1 適用範圍〆本方法適用於一般食品及奶粉中阪崎腸桿菌之檢驗。

2 檢驗方法〆2.1 工作環境〆工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。

每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。

2.2 器具及材料〆2.2.1 乾熱滅菌器。

2.2.2 高壓滅菌釜。

2.2.3 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）〆適用於無菌操作者。

2.2.4 天平〆可稱量到2000 g者，靈敏度為0.1 g々可稱量到120 g者，靈敏度為1 mg。

2.2.5 冰箱〆能維持5 ±3℃者。

2.2.6 吸管或吸管尖〆已滅菌，1 mL吸管應有0.01 mL之刻度々5 mL及10 mL吸管應有0.1 mL之刻度。

2.2.7 吸管輔助器（Pipette aid）或微量分注器。

2.2.8 稀釋瓶〆160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、鐵弗龍（Teflon）或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質，附螺旋蓋。

2.2.9 培養皿〆已滅菌，內徑約9 cm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮傷或其他缺點。

2.2.10 增菌用容器〆附螺旋蓋之125 mL、250 mL、2 L三角錐瓶或廣口瓶々玻璃、聚乙烯、鐵弗龍或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質。

2.2.11 pH測定儀。

2.2.12 培養箱〆能維持內部溫度在±1℃以內者。

2.2.13 溫度計〆量測溫度範圍1～55℃，最小刻度0.1℃。

2.2.14 水浴〆加蓋，具水流循環系統，能維持水溫溫差在±0.2℃以內者。

2.2.15 接種針及接種環（直徑約3 mm）〆鎳鉻合金、鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。

2.2.16 曲玻棒〆可滅菌者，直徑3～4 mm，塗抹區域45～55 mm。

2.2.17 試管〆10 ×100 mm，13 ×100 mm，13 ×120 mm，15 ×150 mm，16 ×150 mm試管，或其他適用者。

阪崎肠杆菌科菌种鉴定细菌成分一、引言阪崎肠杆菌科（Sakazakii Enterobacteriaceae）是一种常见的细菌科，包含多种致病性菌种。

其中的阪崎肠杆菌（Cronobacter sakazakii）是一种已知的人类致病菌，能引起新生儿脑膜炎、败血症、肺炎等严重感染。

因此，对于阪崎肠杆菌科菌种鉴定的准确性和全面性要求极高。

二、样品采集与处理1. 采集样品：从食品、环境等来源中采集样品，如奶粉、水源等。

2. 处理样品：将样品进行预处理，如加入缓冲液等，以保证后续操作的可靠性和准确性。

三、培养基选择与制备1. 培养基选择：常用的培养基有Luria-Bertani（LB）、营养琼脂（NA）、大肠杆菌选择性培养基MacConkey（MAC）等。

2. 培养基制备：按照标准配方制备培养基，并进行灭菌处理。

四、细胞分离与纯化1. 细胞分离：将样品接种到培养基中，进行静置或摇床培养，使菌落生长。

2. 细胞纯化：通过不同的方法，如差速离心、磁珠分离等，将目标细菌分离纯化。

五、生化鉴定1. 氧化酶试验：检测细菌是否具有氧化酶活性。

2. 婴儿食品模拟液培养：将细菌接种到婴儿食品模拟液中进行培养，观察是否能够生长。

3. 阳性和阴性反应检测：通过添加不同的试剂观察细菌是否产生阳性或阴性反应。

六、分子生物学鉴定1. PCR扩增：使用特异性引物对目标基因进行PCR扩增。

2. 16S rRNA序列分析：对PCR扩增得到的16S rRNA序列进行测序和比对，并与数据库中的已知序列进行比较。

七、质谱鉴定1. MALDI-TOF MS技术：利用MALDI-TOF MS技术对目标菌株进行质谱分析，并与数据库中的已知质谱图谱进行比对。

八、总结阪崎肠杆菌科菌种鉴定需要综合应用多种方法，包括样品采集与处理、培养基选择与制备、细胞分离与纯化、生化鉴定、分子生物学鉴定和质谱鉴定等。

在实际操作中，需要根据具体情况选择合适的方法，并注意操作规范和安全性。

食品微生物之检验方法－阪崎肠杆菌之检验1 适用范围：本方法适用于一般食品及奶粉中阪崎肠杆菌之检验。

2 检验方法：2.1 工作环境：工作平台须宽敞、洁净、光线良好，操作平台光度为100呎烛光以上，密闭室内换气良好，尽可能没有灰尘及流动空气。

每15分钟落菌数不得超过15 CFU／培养皿。

2.2 器具及材料：2.2.1 干热灭菌器。

2.2.2 高压灭菌釜。

2.2.3 搅拌均质器（Blender）或铁胃（Stomacher）：适用于无菌操作者。

2.2.4 天平：可称量到2000 g者，灵敏度为0.1 g；可称量到120 g者，灵敏度为1 mg。

2.2.5 冰箱：能维持5 ± 3℃者。

2.2.6 吸管或吸管尖：已灭菌，1 mL吸管应有0.01 mL之刻度；5 mL及10 mL吸管应有0.1 mL 之刻度。

2.2.7 吸管辅助器（Pipette aid）或微量分注器。

2.2.8 稀释瓶：160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、铁弗龙（Teflon）或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质，附螺旋盖。

2.2.9 培养皿：已灭菌，内径约9 cm，深度约15 mm，底皿之内外面应平坦，无气泡、刮伤或其它缺点。

2.2.10 增菌用容器：附螺旋盖之125 mL、250 mL、2 L三角锥瓶或广口瓶；玻璃、聚乙烯、铁弗龙或其它能耐121℃湿热灭菌20分钟以上之塑料材质。

2.2.11 pH测定仪。

2.2.12 培养箱：能维持内部温度在± 1℃以内者。

2.2.13 温度计：量测温度范围1～55℃，最小刻度0.1℃。

2.2.14 水浴：加盖，具水流循环系统，能维持水温温差在± 0.2℃以内者。

2.2.15 接种针及接种环（直径约3 mm）：镍铬合金、铂铱或铬线材质，或可抛弃式者。

2.2.16 曲玻棒：可灭菌者，直径3～4 mm，涂抹区域45～55 mm。

2.2.17 试管：10 × 100 mm，13 × 100 mm，13 × 120 mm，15 × 150 mm，16 × 150 mm试管，或其它适用者。

食品中阪崎肠杆菌检验方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃。

1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。

1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL。

1.8 无菌培养皿：直径90mm。

1.9 pH计或精密pH试纸。

2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水。

2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(mLST-Vm)2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。

以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。

移取增菌液1mL转种于10mL mLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h。

3.2 分离3.2.1 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36℃±1℃培养24h±2h。

阪崎肠杆菌为圆形、直径1mm-2mm的蓝绿色菌落。

3.2.2 挑取1~5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。

25℃±1℃培养48h±4h。

3.3 鉴定自TSA平板上挑取黄色菌落，采用API 20E生化鉴定试剂盒进行生化鉴定。

4 结果与报告综合菌落形态和生化特性，报告每100g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。