GB坂崎肠杆菌检验

附件食品微生物之檢驗方法－阪崎腸桿菌之檢驗1 適用範圍〆本方法適用於一般食品及奶粉中阪崎腸桿菌之檢驗。

2 檢驗方法〆2.1 工作環境〆工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。

每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。

2.2 器具及材料〆2.2.1 乾熱滅菌器。

2.2.2 高壓滅菌釜。

2.2.3 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）〆適用於無菌操作者。

2.2.4 天平〆可稱量到2000 g者，靈敏度為0.1 g々可稱量到120 g者，靈敏度為1 mg。

2.2.5 冰箱〆能維持5 ±3℃者。

2.2.6 吸管或吸管尖〆已滅菌，1 mL吸管應有0.01 mL之刻度々5 mL及10 mL吸管應有0.1 mL之刻度。

2.2.7 吸管輔助器（Pipette aid）或微量分注器。

2.2.8 稀釋瓶〆160 mL，玻璃、聚乙烯（polyethylene）、鐵弗龍（Teflon）或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質，附螺旋蓋。

2.2.9 培養皿〆已滅菌，內徑約9 cm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮傷或其他缺點。

2.2.10 增菌用容器〆附螺旋蓋之125 mL、250 mL、2 L三角錐瓶或廣口瓶々玻璃、聚乙烯、鐵弗龍或其他能耐121℃濕熱滅菌20分鐘以上之塑膠材質。

2.2.11 pH測定儀。

2.2.12 培養箱〆能維持內部溫度在±1℃以內者。

2.2.13 溫度計〆量測溫度範圍1～55℃，最小刻度0.1℃。

2.2.14 水浴〆加蓋，具水流循環系統，能維持水溫溫差在±0.2℃以內者。

2.2.15 接種針及接種環（直徑約3 mm）〆鎳鉻合金、鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。

2.2.16 曲玻棒〆可滅菌者，直徑3～4 mm，塗抹區域45～55 mm。

2.2.17 試管〆10 ×100 mm，13 ×100 mm，13 ×120 mm，15 ×150 mm，16 ×150 mm試管，或其他適用者。

阪崎肠杆菌检测标准1. 引言阪崎肠杆菌〔Hafnia alvei〕是一种革兰氏阴性菌，属于肠杆菌科。

它在自然环境中广泛存在，也可以在人和动物的消化道内找到。

阪崎肠杆菌可以对人类和动物造成感染，引起各种疾病，如泌尿系统感染、呼吸道感染和胃肠道感染等。

为确保食品和饮用水的平安，阪崎肠杆菌的检测标准十分重要。

2. 检测方法2.1 阪崎肠杆菌的培养方法阪崎肠杆菌可以在一般细菌培养基上生长，常用的培养基包括MacConkey琼脂培养基和Eosin Methylene Blue〔EMB〕琼脂培养基。

培养时一般在37°C下孵育24-48小时。

2.2 阪崎肠杆菌的生化检测阪崎肠杆菌可以通过一系列的生化反响进行检测和鉴定。

常用的生化试验包括氧化/发酵葡萄糖试验〔O/F试验〕和酮糖酸盐〔Voges-Proskauer〕试验等。

2.3 阪崎肠杆菌的PCR检测PCR〔聚合酶链式反响〕是一种常用的分子生物学方法，可以快速、准确地检测阪崎肠杆菌。

通过特定的引物在PCR反响中扩增阪崎肠杆菌的DNA片段，然后通过凝胶电泳进行检测和鉴定。

3. 检测标准3.1 食品中阪崎肠杆菌的检测标准根据国家食品平安标准，食品中阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 生肉制品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过10 CFU； - 加工食品：阪崎肠杆菌在每克样品中不得超过100 CFU； - 饮用水：阪崎肠杆菌在每100毫升样品中不得检出。

3.2 环境中阪崎肠杆菌的检测标准根据环境保护标准，阪崎肠杆菌的检测标准如下： - 水质：阪崎肠杆菌在每升水样中不得超过100 CFU； - 空气：阪崎肠杆菌在每立方米空气中不得超过100 CFU； - 土壤：阪崎肠杆菌在每克土壤样品中不得超过1000 CFU。

4. 检测流程4.1 样品采集从食品、饮用水或环境样品中采集足够数量的样品。

使用无菌容器收集，并确保样品处于最正确的保存条件。

4.2 样品处理将采集的样品经过适当的处理，在无菌条件下进行前处理，如制备悬浮液或稀释样品。

阪崎肠杆菌检测标准阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是一种常见的致病菌，它可以存在于环境中的多种食品和饮用水中。

由于其对婴儿和免疫系统较弱者具有较高的致病性，因此对阪崎肠杆菌的检测标准显得尤为重要。

本文将介绍阪崎肠杆菌检测的相关标准，以便从事食品生产和检验的相关人员了解和遵循。

首先，阪崎肠杆菌的检测应该遵循国家相关的标准和规定，如《食品安全国家标准食品中阪崎肠杆菌的检验》（GB 4789.41-2016）。

该标准规定了食品中阪崎肠杆菌的检测方法和技术要求，包括样品的采集、处理、培养和鉴定等步骤。

在进行检测时，应当严格按照标准的要求进行操作，以确保检测结果的准确性和可靠性。

其次，阪崎肠杆菌的检测需要使用合适的检测方法和设备。

常见的检测方法包括PCR法、免疫学方法、生化方法等。

在选择检测方法时，应根据实际情况和样品的特点进行合理的选择，以确保检测的准确性和灵敏度。

同时，应使用经过认证的检测设备和试剂，确保其质量和性能符合要求。

另外，阪崎肠杆菌的检测还需要严格控制检测过程中可能存在的污染和干扰因素。

在样品采集、处理和检测过程中，应避免外部环境的污染，确保样品的纯净性和可靠性。

同时，应严格控制实验室环境和操作流程，避免可能对检测结果产生干扰的因素存在。

最后，阪崎肠杆菌的检测结果应当进行合理的解读和评估。

在获得检测结果后，应根据标准的要求进行结果的解读和评估，判断样品中阪崎肠杆菌的存在情况和数量水平。

同时，应根据检测结果进行合理的风险评估和控制措施制定，以保障食品安全和公共健康。

总之，阪崎肠杆菌的检测标准对于食品安全和公共健康具有重要意义。

相关从业人员应当严格遵循国家标准和规定，选择合适的检测方法和设备，严格控制检测过程中的污染和干扰因素，合理解读和评估检测结果，以确保食品的安全和可靠性。

希望本文能够为相关人员提供一定的参考和帮助，促进阪崎肠杆菌检测工作的规范和标准化。

牛奶中阪崎肠杆菌的检测方法引言：阪崎肠杆菌（又称阪崎氏肠杆菌）是一种周身无鞭毛，能运动，无芽孢的兼性厌氧菌，革兰氏阴性杆菌。

1980年由黄色阴沟肠杆菌更名为阪崎肠杆菌。

阪崎肠杆菌能引起严峻的新生儿脑膜炎、小肠结肠炎和菌血症，致死率可达40％～80%，自1961年首次由阪崎肠杆菌引起的新生儿脑膜炎之后，全球范围间续消失感染大事，丹麦、希腊、英国、荷兰、冰岛等国均有报道。

其严峻性已引起世界多国相关部门的重视，阪崎肠杆菌已被世界卫生组织和很多国家确定为引起婴儿死亡的重要条件致病菌。

我国也于2021年5月20日通过了《奶粉中阪崎肠杆菌检测方法》行业标准，并于同年10月实施，我国《婴儿配方食品》和《幼儿配方食品》相关标准规定婴幼儿配方奶粉、食品中禁止检出阪崎肠杆菌等致病菌。

一、阪崎杆菌的生物学特性1 形态染色阪崎肠杆菌属肠杆菌科肠杆菌属, 因此本菌具备肠杆菌基本形态特征: 革兰阴性粗短杆菌，有周身菌毛, 无芽胞, 有动力[1] 。

2 培育特性能在一般养分琼脂、血平板、麦康凯(MAC) 琼脂、伊红美兰(EMB) 琼脂、脱氧胆酸琼脂等多种培育基上生长繁殖。

培育最佳温度25 ～36 ℃ , 在6～45 ℃下都能生长, 某些菌株可在47 ℃下生长[8] 。

在胰蛋白胨琼脂(TSA) 、脑心浸液琼脂(BH I) 及血平板上经25 ～36 ℃培育24 h 后, 形成1. 5 ～2. 5mm, 黄色菌落。

在结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBG) 能产生紫红色菌落[2]。

二、阪崎杆菌的传统检测方法阪崎肠杆菌检验程序见图1。

1 基本步骤如下：取检样100g（mL）加入已预热至44℃装有900mL缓冲蛋白胨水的锥形瓶中，用手缓缓地摇动至充分溶解，36℃1℃培育18 h2h。

移取1mL 转种于10mL mLST-Vm肉汤，44℃0.5 ℃培育24 h2h。

轻轻混匀mLST-Vm 肉汤培育物，各取增菌培育物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培育基平板，36℃1℃培育18 h2 h。

受控编号：
阪崎肠杆菌检测原始记录表
检测项目：☑阪崎肠杆菌检测依据：☑GB 4789.40-2016
样品状态：□液态☑固态□完好□已开封□其他：检测日期： 2023.12.4-12.6 环境条件： 25 ℃ 47 ％ RH
存放条件：□室温□冷藏☑冷冻检测仪器：☑生化培养箱WTHF1010A1-002 □电热恒温培养箱 WTHK1001A-1001
样品处理：1.阪崎肠杆菌检验平板法：操作称取100g（ml）样品，加入900mL已预热至44℃的缓冲蛋白胨水中，缓缓摇动充分混匀，置36℃恒温培养18h，移取上述增菌液1mL接种至10mL ST-Vm肉汤中，置44℃恒温培养24h。

2.阪崎肠杆菌检验MPN法:称取样品100g、10g、1g各三份,分别加入900mL、90mL、9mL已预热至44℃的BPW,轻轻振摇使充分溶解,制成1∶10样品匀液,选取合适的梯度试验，置36℃±1℃培养18h±2h。

分别移取1mL转种于10mLmLST-Vm 肉汤,44℃±0.5℃培养24h±2h。

委托单编号：
备注：1.“+”表示选择性平板上有可疑或典型菌落生长或生化试验呈阳性，“-”表示选择性平板上无可疑或典型菌落生长或生化试验呈阴性。

2.“ND”表示未检出。

检验员：复核人：审核人：。

备案号：ICS SN中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布前 言SN/T XXXX－XXXX《食品中多种致病菌快速检测－PCR方法》分为十一个部分：─ 第 1 部分：食品中沙门氏菌检测方法；─ 第 2 部分：食品中志贺氏菌检测方法；─ 第 3 部分：食品中金黄色葡萄球菌检测方法；─ 第 4 部分：食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌检测方法；─ 第 5 部分：食品中单核细胞增生李斯特氏菌检测方法；─ 第 6 部分：食品中空肠弯曲菌检测方法；─ 第 7 部分：食品中肠出血性大肠埃希氏菌 O157:H7检测方法；─ 第 8 部分：食品中副溶血性弧菌检测方法；─ 第 9 部分：食品中霍乱弧菌检测方法；─ 第 10 部分：食品中创伤弧菌检测方法；─ 第 11 部分：食品中阪崎肠杆菌BAX®全自动PCR检测方法。

本标准修改采用Government of Canada Laboratory Procedure MFLP-27 THE DUPONT QUALICON BAX®1） SYSTEM METHOD FOR THE DETECTION OF ENTEROBACTER SAKAZAKII IN SELECTED FOODS （2003.9）本标准的附录A是资料性附录。

本标准由国家认可监督管理委员会提出并归口。

本标准起草单位：中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。

本标准起草人：卢行安等。

本标准系首次发布的检验检疫行业标准。

1） 为美国杜邦公司（DuPont Qualicon）产品。

食品中多种致病菌快速检测－PCR方法第11部分：食品中阪崎肠杆菌BAX®全自动PCR检测方法1 范围本部分规定了用BAX®全自动PCR技术快速检测阪崎肠杆菌的方法。

本部分适用于食品中阪崎肠杆菌的检验。

2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

食品中阪崎肠杆菌检验方法1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：1.1 恒温培养箱：25℃±1℃，36℃±1℃，44℃±0.5℃1.2 冰箱：2℃-5℃。

1.3恒温水浴箱：44℃±0.5℃1.4天平：感量0.1g1.5 均质器1.6 无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）。

1.7 无菌锥形瓶：容量100mL、250mL、2 000mL。

1.8 无菌培养皿：直径90mm。

1.9 pH计或精密pH试纸。

2 培养基和试剂2.1 缓冲蛋白胨水。

2.2 改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(mLST-Vm)2.3 阪崎肠杆菌显色培养基2.4 胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）2.5 API 20E生化鉴定试剂盒2.6 氧化酶试剂3 操作步骤3.1 前增菌和增菌取样前，应消毒检样包装的开启处。

以无菌操作，称取检样100g（mL）加至预热到44℃装有900mL灭菌缓冲蛋白胨水的2 000mL锥形瓶中，缓缓振摇使样品充分溶解，36℃±1℃培养18h±2h。

移取增菌液1mL转种于10mL mLST-Vm肉汤，44℃±0.5℃培养24h±2h。

3.2 分离3.2.1 轻轻混匀mLST-Vm肉汤培养物，各取增菌培养物1环，分别划线接种于两个阪崎肠杆菌显色培养基平板，36℃±1℃培养24h±2h。

阪崎肠杆菌为圆形、直径1mm-2mm的蓝绿色菌落。

3.2.2 挑取1~5个可疑菌落，划线接种于TSA平板。

25℃±1℃培养48h±4h。

3.3 鉴定自TSA平板上挑取黄色菌落，采用API 20E生化鉴定试剂盒进行生化鉴定。

4 结果与报告综合菌落形态和生化特性，报告每100g（mL）样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。