能分离手性化合物的固定相_环糊精

能分离手性化合物的固定相—环糊精王东新(南京师范大学化学与环境科学学院,江苏南京210097)[摘要]　介绍了环糊精类化合物在色谱手性分离中的应用及其结构与特性.简单讲述了目前对环糊精能进行手性分离的原因的几种解释.分析了环糊精衍生物的种类及其在手性分离中的应用,特别是近年来,一些新的环糊精固定相和一些新方法的使用,使得环糊精的手性分离范围进一步拓宽.[关键词]　环糊精,手性分离,对映体[中图分类号]O658　[文献标识码]A [文章编号]100124616(2008)022*******Cyclodextr i n :The St a ti onary Pha se for Ch i ra l Separa ti onW ang Dongxin(School of Che m istry and Envir onmental Science,Nanjing Nor mal University,Nanjing 210097,China )Abstract:The constructi on and p r operties of cycl odextrins are revie wed .The possible mechanis m of chiral separati on of cycl odextrins is exp lained briefly .The derivatives of cycl odextrins and their app licati ons in chiral separati on are intr o 2duced .I n recent years ne w derivatives of cycl odextrins and app licati on of ne w methods expanded the area of chiral sepa 2rati on of cycl odextrins .Key words:cycl odextrins,chiral separati on,enanti omers　收稿日期:2007209207.基金项目:教育部“211工程”资助项目.通讯联系人:王东新,副教授,研究方向:气相色谱的制备新方法与色谱分离.E 2mail:dongxinw@s ohu .com 手性化合物是化学中的一种奇特的现象.一种手性化合物的两个互为对映体的分子中原子的种类与个数完全一样,原子连接的顺序也完全一样,但它们却是两种不能重合的分子.它们互为镜像,就像左、右手互为镜像一样.它们在药理学性质上有重大差异,有些手性分子药物的一个对映体有很好的药效,而另一对映体却没有药效甚至有毒性,因而分析药品中两种异构体的含量意义重大.但是两者物理化学性质极其相似,分离比较困难.色谱手性分离技术就是解决这一问题的有效手段.除了对药物对映体的测定分析,环境分析、地质分析、食品工业、化工生产中的不对称合成都和手性分离技术关系密切.手性分离可以是气相色谱、液相色谱,也可以是毛细管电泳等.气相色谱手性分离具有快速、灵敏、准确的优点,但是对热稳定性差、难以挥发的化合物不适用.在手性分离中选择合适的手性分离剂至关重要,而环糊精(cycl odextrin,CD )类的化合物就是其中的首选.1　环糊精的结构与特性环糊精是D 2吡喃葡萄糖单元通过1,42糖苷键联结成的环状低聚糖.可用作色谱固定相的分别含6、7、8个葡糖,称为α、β、γ2环糊精.环糊精的结构是一个中空的圆台,如图1所示.CD 分子空腔的内表面不含羟基,具有疏水性;而在外表面的大口端有22位和32位的仲羟基,小口端有62位的伯羟基.外表面有亲水性.母体环糊精熔点高(290℃),成膜性差,广泛使用的β2环糊精水溶性不好,因而CD 的母体通常不适宜作为气相色谱的固定相使用.为了作为固定相使用,可将羟基醚化或酯化,可以降低熔点,改善水溶性,提高其可涂渍性与成膜性,以使其适合作气相色谱的固定相.第31卷第2期2008年6月 南京师大学报(自然科学版)JOURNAL OF NANJ I N G NOR MAL UN I V ERSI TY (Natural Science Editi on ) Vol .31No .2Jun,20082　环糊精及其衍生物的分离机理环糊精(CD )能将对映体分开与其结构有关.构成环糊精的D 2吡喃葡萄糖单元有5个手性碳原子,这种结构使其有手性识别作用;端口C 22、C 23、C 26羟基的衍生化后随取代基的不同可以改变CD 空腔开口的大小和CD 的亲水性.这种结构与性质的变化使CD 的手性识别范围更为广泛.其手性分离的基本原理有以下几个方面:211　包结机理A r m str ong [1]提出,环糊精手性分离的原理是化合物与CD 中的手性点由于π-π电子作用、氢键作用等而形成了包结物.A r m str ong 认为它们之间一定要有相当紧密的复合,包结作用也可发生在环糊精的笼中或表面,前提是溶质分子与CD 间构象匹配且有相互作用.212　缔合作用机理A r m str ong 等认为缔合物是溶质分子与环糊精形成不完全的包结结构.形成缔合物的条件是两者之间要有较强的作用力,如氢键作用、偶极2偶极相互作用.气相色谱中,这种作用与溶液中的缔合作用相比,就显得较小.许多热力学数据的测定都以缔合作用为前提的.213　构象诱导作用机理这个作用机理是Vene ma [2]提出的.此理论认为溶质分子在接近环糊精的时候,溶质对环糊精的某些特定区域有诱导作用,使得环糊精的构象变得适合溶质分子的构象,因此增加了互相之间的作用.如果CD 衍生物的取代基团较小,它们就可以增加CD 分子的柔性,从而增强诱导作用,也就增加了CD 的拆分效果;但如果取代基团较大,一方面由于较大的空间位阻,另一方面由于大基团之间较强的互相作用,使得构象诱导难以进行,拆分效果反而会下降.214　主客互相作用机理Vene ma,Konig [3]等人认为溶质分子(guest,客)与环糊精(master,主)之间互相发生的作用使溶质的对映体得以分离.这种互相作用涉及氢键作用、偶极2偶极相互作用、范德华力等.总之,环糊精手性分离的原理还没有一个统一的理论.目前积累的数据表明,分离的机理因环糊精衍生物和手性化合物的结构各异而不相同.然而其中两者构象的匹配与相互作用的强弱起着关键的作用.3　环糊精衍生物的种类及其在手性分离上的应用环糊精的母体,特别是大量使用的β2环糊精,通常并不直接用作固定相来分离手性化合物,手性固定相是β2环糊精的衍生物.根据衍生机团和取代位置的不同,其衍生物可分为下面几类:(1)将环糊精羟基接枝到聚硅氧烷的固定相,称为Chirasil 2Dex .这种接枝聚硅氧烷环糊精固定相热稳定性好,容易涂渍成膜.国内外很多化学工作者已经合成了多种此类手性固定相.早在1990年Schu 2rig [4]和Fischer P [5]合成了此固定相;国内的阮宗琴[6]等人制备的聚硅氧烷侧链甲基化β2环糊精键合交联手性毛细管气相色谱柱热稳定性好,柱寿命长.此固定相的电色谱分离也有不错的效果;Yi [7]合成了环糊南京师大学报(自然科学版) 第31卷第2期(2008年)王东新:能分离手性化合物的固定相—环糊精精与聚硅氧烷的共聚物并用于毛细管电泳和超临界流体色谱;此外还有Schmalzing D[8]等人将全甲基化的β2CD与聚硅氧烷接枝后的Chirasil2Dex为气相色谱柱的固定相,在上面分离了106种化合物的对映体,包括从非极性的烷烃到极性很强的二元醇和游离酸.分离结果与以全甲基β2CD及OV21701混合物为固定相的气相色谱柱上的分离结果进行了比较.结果表明Chirasil2Dex柱在分离度和选择性方面都有较大优势;Jung M[9]将七(2,62二2氧2甲基232氧2三氟乙基)2β2环糊精通过一个含8个碳原子的链连接到聚二甲基硅氧烷上,并以此为固定相进行了25手性种化合物对映体的气相色谱分离.经比较,这种分离要优于七(2,62二2氧2甲基232氧2三氟乙基)2β2环糊精或七(2,62二2氧2甲基232氧2乙基)2β2环糊精与OV21701混合物的固定相上的分离.(2)CD的22位、32位、62位被完全相同的基团取代.如陈帆[10]合成了全丁基2β2环糊精并与硝酸银混合,将混合物溶于聚乙二醇400,以此为毛细管气谱固定相,7组对映异构体、4组芳香族位置异构体化合物得到满意分离;Dai[11]合成了全甲基β2CD,或是全乙基β2CD、全戊基β2CD,发现此类固定相,特别是全甲基β2CD,选择性较高,分离较好.(3)CD的22位与32位被相同的取代基团取代,62位是不同的取代基;或者22位与62位是相同取代基, 32位的取代基不同.例如,Ra mos[12]研究γ2丁内酯的衍生物在液相色谱中的拆分使用的手性识别剂是2,32二2O2甲基262O2特丁基二甲基硅烷基2β2环糊精.发现它的手性识别能力更加取决于化合物几何构型,丁内酯取代烷基的极性几乎不起什么作用.因而在这里环糊精的包结作用比环糊精空腔外的极性互相作用更加重要;史雪岩[13]合成的用于气相色谱的2,62二2O2戊基232O2苄基2β2CD对于甲酚、二甲苯等难分离的二取代苯的位置异构体有良好分离能力;唐课文[14]合成的气谱固定相2,62二2O2庚基232O2三甲基硅烷基2β2 CD对醇、酮、烯烃类的对映体分离良好,且柱性能稳定,柱寿命长;龙远德[15]合成了2,62二2O2丁基232O2乙酰基2β2CD并制成气相色谱柱,柱效高,分离范围广.(4)32、62位取代基相同或22、32、62位取代基全不同的环糊精几乎不用来作固定相,此类报道很少.环糊精的羟基被不同的基团衍生化会使CD的开口的大小、空腔的深度、形成氢键的能力都发生变化,因而使环糊精对多种化合物的对映体都有手性分离能力.4　环糊精手性分离的新进展随着研究的不断深入,研究色谱的化学工作者在环糊精柱的研制中继续取得进展,这表现在三方面:新的环糊精固定相不断被合成出来;一些新的制柱方法也不断出现;分析方法的创新与改进.随着这些新型固定相和新方法的出现,环糊精柱的分离效果愈来愈好,色谱柱的性能愈来愈稳定,气相色谱中允许使用的温度也愈来愈高.秦金平[16]采用全甲基β2CD及2,32二2O2苄基262O2叔丁基二甲基硅烷基2β2环糊精为固定相,研制了4根气相色谱毛细管柱,研究了稀释比例和柱温对酚类异构体分离的影响.结果表明全甲基环糊精柱对酚类及二甲酚类能完全分离;但含有苄基的柱子分离效果较差,不能完全分离间甲酚与对甲酚.侯经国[17]等人用羟乙基2β2CD为手性选择剂,用毛细管电泳对心得安、氧氟沙星、戊脉安、克它命进行分离.在对各种条件优化以后,3种化合物达到基线分离.尹明明[18]等人合成了3种2,62O2烯丙基232O2酰基2β2CD,其中的酰基分别为戊酰基、庚酰基和辛酰基,并制成气相色谱柱,对15种环丙烷的衍生物的对映体进行了分离.这些物质都与除虫菊酯、某些抗生素与止咳药的光学合成有关.结果表明分离与固定相、溶质的结构与性质有关.齐素华[19]等人用全甲基β2CD、全戊基β2CD及两者的混合物为固定相,并将它们与OV21701混合制成3根气相色谱柱.3根色谱柱对氨基酸等多种化合物有良好的手性分离能力,并发现混合固定相对手性化合物及难分离的化合物有协同作用.廖燕芝[20]等人合成了苯丙氨酸环糊精(β2CD262L2phe)并将其乙酰化,然后以此为固定相制备了毛细管气相色谱柱.结果表明,此色谱柱对位置异构和对映异构有较强的立体选择性和较好的手性分离效果.罗爱芹[21]等人合成了2,62二2O2苄基2β2环糊精键合硅胶固定相.此固定相有较好的立体选择性,在液相色谱中位置异构体得到很好的分离.这是因为苄基取代后,改变了环糊精的亲水性,因而改变了环糊精键合固定相的保留性和立体选择性.M ikus P [22]等人以3种N 2甲基胺基β2环糊精为手性选择剂用毛细管区间电泳分离了2,42二硝基苯基氨基酸的对映体.在单取代和三取代的胺基β2环糊精上对单独的一对对映体分离效果最好;氨基酸混合物的对映体最好的分离是在单取代的胺基β2环糊精上取得的;而位置异构的最好分离是在单取代和二取代的胺基β2环糊精上得到的.此结果表明手性选择剂中胺基的甲基化程度的重要性.Berkecz R [23]等人使用3,52二甲基苯基胺基甲酰基β2环糊精为固定相,用HP LC 分离了12(α2氨基苯基)222萘酚及22(α2氨基苯基)212萘酚的对映体.用醇对流动相的极性进行调节可以使分离得到优化.他发现12萘酚和22萘酚上α2氨基苯基的位置与本性影响着色谱分离中的保留值和选择性.本文作者在上世纪90年代首先成功地用溶胶凝胶法制备了毛细管气相色谱柱[24],经过不停的研究、探索和试验,溶胶2凝胶法也被成功地应用于环糊精气相色谱毛细管柱的制备.这类色谱柱的固定相既包括环糊精与低级的聚硅氧烷生成的共聚物[25],也包括环糊精与高级聚硅氧烷生成的接枝侧链化合物[26].这些色谱柱成功地分离了某些化合物对映体.下面的图2与图3就是它们对手性内酯对映体的分离.此外,还有很多化学工作者近年来对溶胶2凝胶法制备色谱柱这一方法进行了深入的研究.葛晓霞[27]等人使用溶胶2凝胶法制备了以全乙基、全丙基、全辛基环糊精及2,62二2O 2苄基2β2环糊精为固定相的4种气相色谱柱.理论塔板数达到了3000/M ,对苯的衍生物的位置异构有很好的分离效果,其中对二甲苯、甲酚等化合物在全烷基的柱上的分离比在2,62苄基化的柱上的分离更胜一筹.而且此类色谱柱性能稳定,柱寿命长.南京师大学报(自然科学版) 第31卷第2期(2008年)溶胶2凝胶柱由于使用动态法涂渍固定相,制柱时间大为缩短.由于固定相结构的特点,能在比较高的温度下正常使用.固定相流失很低,柱性能稳定,因而柱使用寿命也得以延长.在溶胶凝胶柱的制作中,使用了甲基三甲氧基硅烷或其它硅烷单体.单体在酸,如三氟乙酸(含微量的水),的催化作用下水解为多羟基化合物.这些多羟基化合物互相之间脱水缩聚为三维网状结构.随着聚合度的增加,凝胶逐渐生成.在此过程中,具有羟基结构的固定相也会参加缩聚反应.石英毛细管内壁上的硅羟基同样也会和上述三维网状结构间发生缩合.实际的结果是固定相和石英毛细管新的内表层面之间形成了化学键.化学键的形成就是用溶胶2凝胶法制取的色谱柱允许使用温度高而固定相流失低的原因.此种制柱法由于将毛细管去活、固定相涂渍及固载化同步完成,制柱时间大为缩短,而且克服了传统制柱法中去活不均匀等缺点[24].5　结论环糊精以其特殊的结构,在用作分析中的手性选择剂时,应用范围广泛,有较强的手性分离能力,在医药、环境保护、化工合成等各方面都有很重要的应用.目前环糊精新的衍生物、新的制柱方法与新的分析方法不断出现.它的发展在某些方面还不成熟,人们对其手性分离机理也不十分了解,因而,环糊精作为手性选择剂还具有很大的发展空间.[参考文献][1]　Berthod A,L iW,A r m str ong D W.Multi p le enanti oselective retenti on mechanis m s on derivatized cycl odextrin gas chr omat o2graphic chiral stati onary phases[J].Anal Che m,1992,64(8):8732879.[2]　Vene ma A,Henderiks H,Geest R V.The enanti oselectivity of modified cycl odextrins:Studies on interacti on mechanis m s[J].Journal of H igh Res oluti on Chr omat ography,1991,14(10):6762680.[3]　KonigW A,Lcheln D,Runge T,et al.Cycl odextrins as 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影响手性药物分离的因素全解析：1.温度：而温度对分离的影响比较大，温度升高系统的手性选择性降低。

溶剂传质速度增加，溶质在固定相上解吸附加快，保留时间减少，对手性识别过程不利。

当温度升高至某一点时，对映体同时洗脱下来，若继续升高温度，对映体又分离，但洗脱顺序颠倒。

温度降低，迁移速度变慢，出峰时间变长，分离度增加。

温度对组分容量因子的影响较为复杂，不存在GC中的线性关系。

2.固定相的类型：将手性试剂化学键合到固定相上，与对映体形成非对映体复合物。

Pirkle型手性固定相接上苯基甘氨酸或亮氨酸等基团，采用此类固定相时，氢键作用、偶极-偶极相互作用和π-π相互作用在手性分离中起了重要作用。

环糊精手性固定相，手性选择性随孔径的增大而增大。

氨基酸和酰胺类手性固定相中，π-酸、π-碱类固定相具有给电子或接受电子的基团，通过这些基团产生手性试剂所需要的各个相互作用点，并且这些基团在手性识别中起着重要作用。

氨基酸类固定相的手性识别主要通过形成氢键，它们的分离效能随着流动相中改性剂的分子增大或极性减小而降低，而选择性则相反。

3.手性选择剂类型和浓度：由于手性异构体的立体结构不同，应首先考虑主客体分子之间的匹配性，只有药物的结构与手性选择剂的空腔大小相适应才能容纳手性分子，形成稳定的包络物。

因此，手性选择剂种类的选择是实现手性拆分的关键因素。

另一个影响拆分的重要因素是的手性选择剂浓度，只有达到一定的浓度才能发挥其手性拆分作用。

4.流动相的组成：超临界流体色谱中多以CO2为流动相，其次是正戊烷等一些低碳烃及衍生物。

而加入手性反离子后，离子型化合物与手性反离子形成非离子型的离子对复合物，可被CO2洗脱。

离子对超临界流体色谱也可以在非手性柱上得以应用。

流动相中有机改性剂的浓度越大，组分的容量因子越小。

改性剂极性小，容量因子和选择性增大。

在改性剂中加入水可以增加选择性和柱效，而且可以在较短时间内获得相同的分离效果。

5.缓冲液的浓度：缓冲溶液浓度直接影响离子强度和电渗流。

综述收稿日期:2001-10-20;修回日期:2002-02-10作者简介:崔颖(1975—),女,籍贯河北,讲师,硕士学位,主要从事心血管药物的研究。

高效液相手性固定相环糊精及其衍生物High 2performance Liquid Chromatography Chiral Stationary Phase 2cyclodextrin and its derivatives崔颖,张莉,张喜云,刘启斌(武警医学院药剂教研室,天津300162)【关键词】　高效液相;手性固定相;环糊精【文章编号】　100825041(2003)0120067202　【中图分类号】　R91411　【文献标识码】　A1　前言对映异构体具有相同的物理和化学性质。

但在生物系统中由于酶、受体和载体蛋白的相互作用不同,对映异构体可能具有完全不同的行为,这会造成对映异构体生物活性的明显差异,以及其在分布、代谢和排泄方面的差异。

更有甚者,两者可表现不同的药理作用。

如治疗心率失常的药物索他洛尔,进一步的分离表明,其L 构型能够阻断β2受体,而其D 构型为钾通道阻滞剂,能够延长心肌细胞的动作电位时程(APD )。

所以,对于手性药物或代谢产物,若能够区分它们的立体化学形式,将是非常有用的。

采用HPLC 法拆分对映异构体的方法分为:间接法和直接法。

间接法使用常规固定相的非手性固定相,用适当的单一对映异构体形式将分析物衍生化,而后对得到的非对映异构体进行拆分。

直接法同样是建立在非对映异构体能量差异的基础上。

但在这种情况下,非对映异构体的形成只是瞬间状态,而不是形成化学键。

同样需要一种单一对映体的手性选择物,但在直接法中,它构成了色谱系统的一部分。

将选择物固定在色谱柱的载体上,形成手性固定相;或者将手性添加剂加入到流动相中,同时使用常规的非手性固定相。

随着多种手性固定相的商品化,手性固定相的研制与开发受到包括药学在内的多学科的关注。

近十年来,已有80多种HPLC 手性固定相上市,按其结构可分为:蛋白质类手性固定相、刷型手性固定相、环糊精手性固定相和多糖型手性固定相。

手性固定相手性HPLC中，手性固定相是实现对映体拆分的基础，并有多种类型。

手性固定相可以根据其化学类型分类为：①“刷型”手性固定相；②手性聚合物固定相；③环糊精类手性固定相；④大环抗生素手性固定相；⑤蛋白质手性固定相；⑥配体交换手性固定相；⑦冠醚手性固定相等。

手性固定相也可以根据它们与被拆分的对映异构体间的作用机制进行分类：第一类是通过氢键、π—π或偶极吸引等相互作用与对映异构体形成配合物进行拆分的手性固定相，N—硝基苯甲酰基氨基酸或N—萘基氨基酸酯手性固定相属于该类；第二类是通过吸引和包合作，用进行拆分的手性固定相，纤维素衍生物手性固定相大都属于该类；第三类是具有手性空穴的手性固定相，对映异构体进入手性空穴后形成包合配合物被拆分，这类手性固定相主要为环糊精，冠醚手性固定相和螺旋型聚合物(如三苯甲基丁烯酸酯)也属于该类；第四类是通过对映异构金属配合物进行拆分的手性固定相，也称为手性配体交换色谱(chiral ligand exchange chromatography,CLEC)；第五类是通过疏水和极性相互作用进行手性拆分的蛋白质手性固定相。

手性固定相的分类手性固定相按其分离机理分为以下几类：含有手性空腔的手性固定相：其中包括衍生化纤维素手性固定相、环糊精手性固定相、冠醚手性固定相、合成手性聚合物、手性印迹凝胶相。

纤维素是纯天然高聚物，具有高度有序螺旋状结构。

这种结构可对对映体有一定的识别作用。

将其羟基衍生化后，降低了它的极性，增加了手性固定相与被拆分分子的作用点处的空间位阻，从而改善了它的色谱行为和选择性。

将纤维素衍生化后涂覆或键合于硅胶微球上，增加其机械稳定性。

目前大赛路公司（Daicel）的手性固定相制备技术很成熟。

它现有的商品柱及其性质见下表：其中O系列的都是涂覆型手性固定相；I系列的都是键合型手性固定相。

环糊精为D-吡喃葡萄糖单元以α-1,4-糖苷键相互结合互为椅式构象的环状低聚糖，通常含有6~12个吡喃葡萄糖单元，其中有实用意义的是含有6、7、8个单元的α-CD, β-CD, γ-CD。

手性化合物的拆分技术研究进展摘要本文综述了分离外消旋体的几种主要拆分方法的优缺点及其应用情况。

分别有：化学拆分法、膜拆分法、色谱拆分法以及毛细管电泳拆分法。

关键词：手性物；拆分；外消旋体Technical Progress of Chiral SeparationAbstractThis article reviews separation methods of chiral which include chemical，membranous，chromatographic and electrophoretic methods．Key words：chiral compounds；chiral separation；raceme目前获得手性物的主要方法还是通过拆分外消旋体。

早期的拆分方法主要有机械拆分，结晶拆分以及手性溶剂结晶拆分。

这三种方法都是利用外消旋混合物的两种对应体结晶性能不一样的特点进行分离。

已经有较成熟工业应用，但一次性收率较差，在此不做赘述还是本文综述了今年来手性拆分方法中使用较多的化学拆分法、膜拆分、色谱拆分以及毛细管电泳拆分四种拆分技术。

1化学拆分[1]1.1生成非对映体拆分此方法是利用外消旋混合物与手性试剂反应后生成有不同性质的非対映体，从而利用生成物的不同物理性质（溶解度、蒸汽压、结晶速率等）将其分离，再将分离后的物质分别还原成之前的対映体。

还可以使用拆分剂家族代替单一拆分剂进行拆分，所谓拆分剂家族是指有类似结构的2~3个手性剂拆分剂。

组合拆分提高了产品收率和纯度。

1998年Hulsho F L A等人[2]就使用一定量的（S,S）酒石酸衍生物的拆分剂家族拆分3-（1,4-亚乙基哌啶基）苯甲酸酯和3,4-二笨基四氢吡咯，经过一定处理后，两种対映体的纯度（ee值）分别达到了99%和98%。

如果拆分剂不能和対映体反应，就可以利用拆分剂的空穴与两种対映体之间形成氢键或者范德华力能力的不同，将一种対映体优先包裹以达到分离的目的。

手性色谱柱知识介绍手性色谱柱（Chiral HPLC Columns）是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phases）。

通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体拆分的目的。

要实现手性识别，手性化合物分子与手性固定相之间至少存在三种相互作用。

这种相互作用包括氢键、偶级-偶级作用、π-π作用、静电作用、疏水作用或空间作用。

手性分离效果是多种相互作用共同作用的结果。

这些相互作用通过影响包埋复合物的形成，特殊位点与分析物的键合等而改变手性分离结果。

由于这种作用力较微弱，因此需要仔细调节、优化流动相和温度以达到最佳分离效果。

在手性拆分中，温度的影响是很显著的。

低温增加手性识别能力，但可能引起色谱峰变宽而导致分离变差。

因此确定手性分析方法过程中要考虑柱温的影响，确定最优柱温。

迄今为止，尚没有一种类似十八烷基键合硅胶（ODS）柱的普遍适用的手性柱。

不同化学性质的异构体不得不采用不同类型的手性柱，而市售的手性色谱柱通常价格昂贵，因此如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。

根据手性固定相和溶剂的相互作用机制，Irving Wainer首次提出了手性色谱柱的分类体系[1]：第1类：通过氢键、π-π作用、偶级-偶级作用形成复合物。

第2类：既有类型1中的相互作用，又存在包埋复合物。

此类手性色谱柱中典型的是由纤维素及其衍生物制成的手性色谱柱。

第3类：基于溶剂进入手性空穴形成包埋复合物。

这类手性色谱柱中最典型的是由Armstrong 教授开发的环糊精型手性柱[2]，另外冠醚型手性柱和螺旋型聚合物，如聚（苯基甲基甲基丙烯酸酯）形成的手性色谱柱也属于此类。

第4类：基于形成非对映体的金属络合物，是由Davankov开发的手性分离技术，也称为手性配位交换色谱（CLEC）[3]。

第5类：蛋白质型手性色谱柱。

手性分离是基于疏水相互作用和极性相互作用实现。