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ctab提取方法

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ctab提取方法

CTAB提取法在生物实验里可算是个小明星呢🧐。

CTAB是十六烷基三甲基溴化铵的简称啦。这个提取方法主要是用来提取植物或者微生物的DNA。一般来说，我们得先把要提取的材料准备好。比如说植物的叶片，要选那种新鲜的、没有病虫害的。要是微生物呢，就得让它们处在合适的生长状态。

然后就开始提取的步骤啦。先把材料弄碎，可以用研磨棒或者小粉碎机之类的。就像把它们变成小渣渣一样，这样才能让细胞都破裂，把里面的DNA释放出来呀。接着呢，把弄碎的材料放到含有CTAB的提取缓冲液里。这个缓冲液就像一个魔法药水🧐，CTAB在里面就开始发挥它的神奇作用啦。它可以把细胞里的各种成分分开，让DNA乖乖地和其他东西分开来。

在这个过程中呢，温度也很重要哦。一般要在60 - 65℃的水浴锅里放一会儿。这个温度就像是给这个魔法反应加把火，让CTAB更好地工作。等从水浴锅里拿出来后，就可以进行离心啦。离心就像是一场小旋风，把不同的成分按照重量的不同分离开来。

之后呢，取上清液，再加入一些有机溶剂，像氯仿 - 异戊醇之类的。这一步就像是再给那些杂质来一次大扫除，让DNA变得更纯净。再离心一次，又取上清液。

最后呢，加入异丙醇或者乙醇，DNA就会像小雪花一样慢慢析出来啦。然后用小玻璃棒把DNA挑出来或者离心收集起来就好啦。

不过要注意哦，这个过程中的每一步都要很小心呢。就像照顾小宝贝一样，稍微有点差错，可能提取出来的DNA质量就不好啦。CTAB提取法虽然有点小复杂，但是只要按照步骤来，就能顺利得到我们想要的DNA啦。😘。

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SDS-CTAB改进方法提取细菌基因组DNA

SDS-CTAB改进方法提取细菌基因组DNA

参考《分子微生物生态学手册2004年第二版》由德国国家生物技术研究中心所撰 丁雄（Seandung）编译

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改进SDS-CTAB方法提取细菌基因组DNA

（经济型实验室专用，可修改适合特定菌种）

具体步骤：

（1）将待检测菌株接种于3 mL LB或BHI培养基中，37℃培养过夜；

注：以生长至对数期的细菌为最佳提取对象，因为过对数期时培养基中会积聚过度的核酸酶

降解DNA。

（2）取1.5 mL上述菌液于2 mL离心管，10,000~15,000 rpm，离心10~15 min，去

上清（若所得菌体过少可重复此步骤一次）；

注：对于接种于琼脂培养基的细菌，应先对其进行预处理以洗掉琼脂然后再离心，而且考虑

到革兰氏阴性菌一碰到此类螯合剂就会发生细胞溶解，因此所用细菌洗涤液中不得含有

EDTA。离心倒去上清液后，可用纸巾擦拭管壁边缘残留液体。离心后菌体的湿重最好为0.1

g左右。附（细菌洗涤液配方）：0.4 M NaCI, 50 mM Tris-HCI (pH 8.0), 50 mM MgS0

4,用无菌

去离子水配制。

（3）加入564 µL TE缓冲液（pH 8.0）重悬菌体（可使用无菌牙签充分混合菌体使其

完全重悬）。

注：对于革兰氏阳性菌，此步中细胞悬液还得加入约10 µg的溶菌酶（结晶状最佳），此时不得涡旋！上下颠倒离心管几次使其混合均匀，然后37℃放置10~60 min。!溶菌酶必须在

蛋白酶K和SDS之前!

（4）加入30 µL 10%~20% SDS和6 µL蛋白酶K（10 mg/mL），混合均匀、不得涡

旋，置于37℃（可用金属浴）条件反应1~2h，使悬液相对清澈有粘性为止。

（5）加入100 µL 5M NaCl，混合均匀、不得涡旋，65℃反应2 min。然后，加入80 µL

CTAB/NaCl，混合均匀、不得涡旋， 65℃反应10 min。

注：在加入CTAB/NaCl之前,必须用5M NaCl充分混匀裂解产物，且CTAB/NaCl溶液加之

CTAB方法提取RNA

CTAB方法提取RNA

CTAB方法提取RNA

叶片RNA的提取

（1）取叶片材料两克，液氮中研磨成细粉末。

（2）每管加入10ml65℃预热的CTAB提取液和500lβ-巯基乙醇，剧烈涡旋匀浆，65℃水浴温育30min。

（3）每管加入10ml氯仿：异戊醇（24：1），涡旋混匀，冰浴10min。4℃，12000rpm离心10min。

（4）取上清，加入1∕3体积的8MLiCl和500lβ-巯基乙醇，-20℃沉淀过夜。

（5）4℃，12000rpm离心20min。

（6）弃上清，沉淀用4ml异硫氰酸胍变性液溶解，加入120lβ-巯基乙醇和880l2MNaAc(pH4.0),混匀后加入5ml的酚：氯仿：异戊醇（25：24：

1），涡旋混匀，冰浴5min。4℃，12000rpm离心10min。

（7）取上清，加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），涡旋混匀，冰浴5min。4℃，12000rpm离心10min。

（8）取上清，加入等体积氯仿：异戊醇（24：1），涡旋混匀，冰浴5min。4℃，12000rpm离心10min。

（9）取上清，加入1∕10体积的3MNaAc(pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇，-20℃放置过夜。 （10）4℃，14000rpm离心20min。弃上清，沉淀用预冷的75%乙醇漂洗2次，每次洗涤后，14000rpm离心10min，弃上清。冰上干燥RNA沉淀。

（11）加入100lRNae-free-ddH2O溶解沉淀。取10l稀释200倍检测UV

λ230、260、280下的OD值，检测RNA样品的纯度与浓度。取5μg进行RNA样品的电泳检测（电泳见图1.1），以检测rRNA的完整性，其余样品加入3倍体积的无水乙醇于－70℃下保存。

CTAB法提取动物DNA

CTAB法提取动物DNA

赵瑞杰　严海燕　谭艳平　王朝元　林爱华　

（中南民族大学生命科学院，湖北武汉４５００７５）　厂＿］　董　

摘要：针对实际操作中常用的动物基因组ＤＮＡ提取方法所面临的一些不足，对ＣＴＡＢ法进行改进，将其运用于动物基因　

组ＤＮＡ的提取。结果表明，改进后的ＣＴＡＢ法具有时间短、质量高、成本低的优点，与实验教学中植物ＤＮＡ和ＲＮＡ提取的方　

法相一致，使分子生物学教学用品一体化，价格低廉化，效果改进，是一个不仅可以用于研究，也可以大规模用于实验　

教学的好方法。　关键词：ＤＮＡ提取，ＣＴＡＢ法，动物基因组　

ＤＯＩ：１　０．；５９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１　６７１—６５９６．２０１　１．２１．００４　

Ａｎｉｍａｌ　ＤＮＡ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　Ｃ１＝ＡＢ　Ｍｅｔｈｏｄ　ＺＨＡＯ　Ｒｕｉ．ｉｉｅ，ＹＡＮ　Ｈａｉ．ｙａｎ，１＝ｃ　Ｎ　Ｙ＿ａｎ．ｐｉｎｇ，、）ｌ　ＮＧ　Ｃａｏ．ｙｕａｎ，ＬＩＮ　Ａｉ．ｈｕａ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｏｕｔｈ．ｃｅｎｔｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ　ｆｏｒ　Ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ，Ｗ＿ｕｈａｎ，Ｈｕｂｅｉ　４３００７３）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＤＨｅ　ｔｏ　ｓｏｍｅ　ｄｅｆｅｃｔｓ　ｅｘｉｓｔｅｄ　ｉｎ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｒｏｍ　ａｎｉｍａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｒｏｕｔｉｎｅ　ｌａｂ　ｗｏｒｋ．ａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ＣＴＡＢ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ａｎｉｍａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｄ　ｐｒｉｖｉｌｅｇｅｓ　ｏｆ　ｓｈｏｒｔ　ｔｉｍｅ　ｓｐａｎ，ｈｉｇｈｅｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｆ　ＤＮＡ　ｐｒｏｄｕｃｔ，ｌｏｗ　ｃｏｓｔ，ａｎｄ　ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ　ｆｏｒ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ｌａｂ　ｔｅａｃｈｉｎｇ．ｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｌｓｏ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ＤＮＡ　ａｎｄ　ＲＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｐｌａｎｔ．ｍａｋｉｎｇ　ｉｔ　ａ　ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｌａｂ　ｔｅａｃｈｉｎｇ．Ａｎｄ　ｔｈｕｓ．ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｎｏｔ　ｏｎｌｙ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｂｕｔ　ａｌｓｏ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｌａｒｇｅ　ｓｃａｌｅ　ｌａｂ　ｔｅａｃｈｉｎｇ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＤＮＡ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ；ＣＴＡＢ　ｍｅｔｈｏｄ；Ａｎｉｍａｌ　ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　

改良的CTAB法提取霉菌DNA

改良的CTAB法提取霉菌DNA

前言：今天终于把一株黑曲霉DNA提取出来了，由于实验室条件简陋，购买试剂盒不划算，只好发挥实验室一切能用到的方法：冰冻、水煮、微波、超声波、溶菌酶解，等等效果都不佳，无奈，这次结合几种方法在一起，虽然有点麻烦，但是效果还可以，用来扩增16S没有一点问题，提取霉菌DNA只是雕虫小技，在此献丑了。

改良的CTAB法提取霉菌DNA

1、PDA液体培养基，32℃过夜培养菌体，取1ml菌液于1.5ml 离心管，8000rpm离心3min，去上清，再取1ml 1倍PBS漂洗，去上清，吸干水分，65℃烘箱中烘约30min，至半干燥

2、液氮充分研磨后， 加入0.3 ml 3% CTAB提取缓冲液；

3、65℃水浴45 min，取上清转到离心管中， 加入40 μl 1 mg/ml蛋白酶K，15ul 10mg/ml 溶菌酶，

37℃水浴30min；

4、 加入350 μl Tris饱和酚， 摇匀， 13000 r/min离心10min；

5、取上清， 加入等体积的氯仿/异戊醇， 摇匀，13000 r/min离心10 min；

6、1/10体积3M醋酸，等体积异丙醇沉淀1h

7、离心，弃上清，70%酒精洗涤1-2次。

8、弃上清，晾干后用ddH2ORanase水溶解。

附效果：

左边：DNA扩增16SrDNA 中间：Marker 2000bp-100bp 右边：DNA效果图

参考：1、吴发红， 黄东益， 黄小龙等，几种真菌DNA提取方法的比较 ，中国农学通报 2009

2、scau 农学院分子遗传实验室历届研究生内部资料。

后记：参考吴等人的方法，其步骤更为复杂，要用到大离心管，小量抽提DNA不太可取，若小量抽提用他们的方法，结果是没有DNA.故此我做了两点改变：1、65℃水浴后，直接加酶，37℃温浴，时间可以不变，2、第一次氯仿：异戊醇抽提后，直接用异丙醇沉淀，酒精洗涤。省时，且能保证DNA的量。 另外我多了溶菌酶，没做对照，也不知道有没有起作用，如果实验室没有条件，也可以不加试试。其实很多方法都能提取到霉菌DNA，关键还是要根据自己实验室的条件，做适当的调整。