CTAB法提取DNA简要步骤

提取DNA：CTAB法

预先准备：黄枪头、蓝枪头（最好剪去头部），小研钵，2ml离心管，液氮

药品：CTAB、β-巯基乙醇、RNA消化酶、冰冻酒精、NaAc

1 取叶片于研磨中，在磨好的样品中加入1-2ml CTAB，20-40ul的β-巯基乙醇,等溶化成稀糊状态时倒入2ml离心管。

2 加入1-2ul RNA 消化酶-----可不加

3 放入65℃水浴锅加热30min,每隔五分钟上下颠倒几次

4 离心15min 12000r 温度无要求；

5 取上清夜800-1000ul；加入等体积 24：1的三氯甲烷：异戊醇和苯酚(未加) 上下颠倒3-5min；离心10min 12000r

6 取上清液800-1000ul；再加入等体积24：1的三氯甲烷溶液，上下颠倒3-5min；离心10min 12000r

7 取上清液600-800ul；加入1/10上清液体积的 3M NaAc之后上下颠倒3-5min 一般加入70ul左右的3M NaAc

8 先静置3-5min，后加冰冻酒精，加满为止，摇晃3-5min

9 放在-20℃冰箱过夜（静置12小时）

10弃掉上层液体，加入1ml 的70%酒精，摇晃3-5min，

11离心5min 12000r,去掉上清液，再加1ml的70%酒精，摇晃3-5min，

12离心5min 12000r去掉上清液，尽量把离心管内的残留液吸干

13放入超净工作台风干；加入70-100ul的灭菌水

1、液氮研磨1 g左右的幼芽成粉末状, 取0.4g左右置于2mL离心管中,

加入1mL提取缓冲液(0.4mol /L葡萄糖、3%可溶性PVP、10mmol /L β

-巯基乙醇), 悬浮并混匀后4℃下10000 g离心10min (Eppendorf

5180R)；

2、弃去上清液后重新加入1mL提取缓冲液悬浮沉淀, 以同样条件离心10min, 弃去上清液；

3、加入0.7 mL经65℃预热的裂解缓冲液(100mmol /L Tris HC l, pH 8.0,

20 mmol/L EDTA, 1.4 mol/L NaC l, 1.5% SDS), 65℃温浴40 min,

不时轻轻摇动。从水浴中取出, 冷却后加入0.8 mL氯仿抽提溶液(氯仿∶异戊醇∶乙醇=80∶4∶16), 轻轻颠倒混匀, 室温下静置10m in,

4℃下10000 g离心10min；

4、小心地将上清液移入新的2mL离心管中,加入等体积的异丙醇, 混匀,

室温放置30min, 此时出现絮状DNA。小心吸出(或离心) 絮团状DNA,

用70%的乙醇溶液洗涤两遍, 晾干后加入1mL TE (10mmol/L Tris HC l,

1mmol/L EDTA, pH8.0) 溶液, 溶解DNA；

5、再用氯仿(氯仿∶异戊醇=24∶1) 抽提2遍, 离心条件同上。小心吸取上清液约0.6mL, 加入0.06mL的5mol /L的醋酸胺溶液, 混匀后加入1.3mL的冰冷的无水乙醇, 颠倒混匀后置于- 20℃冰箱1 h。取出后在4℃下10 000 g离心10m in, 获得DNA 沉淀物, 用70%的乙醇洗沉淀2次； 6、超净工作台上吹干后, 用0.5mL TE溶液溶解。用1.0%的琼脂糖凝胶检测DNA的完整性, 用核酸蛋白测定仪(Eppendorf BioPhotometer) 检测DNA的浓度。

- 1 - ctab法提取dna流程

CTAB法是一种有效的提取植物组织DNA的方法，它基于离子型表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)的使用。此方法在提取高品质、高纯度DNA方面非常有效，并且适用于多种植物组织类型。

以下是CTAB法提取DNA的步骤：

1. 收集样品并切碎：将植物材料收集并切碎成小片或粉末。最好在样品收集后立即进行，以确保样品的DNA质量。

2. 前处理：将样品加入含有CTAB溶液的离心管中，然后添加蛋白酶K、DTT和PEG。该混合物将帮助去除植物样品中的蛋白质和碳水化合物。

3. 离心：将离心管放入离心机中，在高速离心下离心5-10分钟，以分离出DNA和其他细胞残留物。

4. 加入异丙醇：将异丙醇加入混合物中，沉淀DNA。

5. 洗涤：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀，去除杂质。

6. 溶解：将DNA沉淀用TE缓冲液溶解，保存在冰箱中。

以上是CTAB法提取DNA的基本步骤。使用这种方法提取的DNA可以用于PCR扩增、测序和其他分子生物学实验。

需要注意的是，使用CTAB法提取DNA时，最好在实验室的无尘环境中操作，并使用无菌器材和试剂。此外，为了确保DNA的质量和完整性，最好避免反复冻融DNA样品。

ctab法提取dna的原理

CTAB法（Cetyltrimethylammonium Bromide）是一种常用于提取DNA的方法，原理是利用CTAB结合DNA形成稳定的DNA-CTAB复合物。与DNA相结合的CTAB可以将其他细胞组分如蛋白质和RNA等溶解。下面将介绍CTAB法的操作步骤：

1. 准备样品：将待提取DNA的生物材料如植物叶片或动物组织切碎，并放入离心管中。

2. 加入CTAB溶液：向离心管中加入含有CTAB的提取缓冲液，CTAB会结合DNA并分离细胞组分。

3. 细胞破碎：将离心管置于60-65°C的水浴中，短暂加热使细胞完全破碎。

4. 酚/氯仿提取：加入等体积的酚/氯仿混合液，轻轻摇匀并离心。这一步可以将DNA从细胞残渣和其他溶解物中提取出来。

5. DNA沉淀：将上清液转移到新的离心管中，加入等体积的异丙醇，再次轻轻摇匀。在冰上静置几分钟后离心，可使DNA沉淀到离心管底部。

6. 溶解DNA：倒掉上清液，加入70%乙醇洗涤DNA沉淀，离心去除乙醇。再次离心后，将残留的乙醇洗涤液倒掉，将离心管倒置在纸巾上，将DNA自然风干。

通过以上步骤，利用CTAB法可以提取到高质量的DNA样品。此方法的优势在于CTAB的高度阳离子性可以有效溶解其他细胞组分，而不影响DNA的稳定性。同时，CTAB法适用于不同种类的生物材料，如植物，微生物和动物组织等。